हम फेरिक क्लोराइड (FeCl 3) मन्या और mesenteric धमनी पर प्रेरित घनास्त्रता मॉडल की एक परिष्कृत प्रक्रिया के रूप में अच्छी तरह से नस, कुशलता विशेषता intravital माइक्रोस्कोपी का उपयोग thrombi गठन अंतरोधी करने के लिए समय की निगरानी के लिए रिपोर्ट।
Arterial thrombosis (blood clot) is a common complication of many systemic diseases associated with chronic inflammation, including atherosclerosis, diabetes, obesity, cancer and chronic autoimmune rheumatologic disorders. Thrombi are the cause of most heart attacks, strokes and extremity loss, making thrombosis an extremely important public health problem. Since these thrombi stem from inappropriate platelet activation and subsequent coagulation, targeting these systems therapeutically has important clinical significance for developing safer treatments. Due to the complexities of the hemostatic system, in vitro experiments cannot replicate the blood-to-vessel wall interactions; therefore, in vivo studies are critical to understand pathological mechanisms of thrombus formation. To this end, various thrombosis models have been developed in mice. Among them, ferric chloride (FeCl3) induced vascular injury is a widely used model of occlusive thrombosis that reports platelet activation and aggregation in the context of an aseptic closed vascular system. This model is based on redox-induced endothelial cell injury, which is simple and sensitive to both anticoagulant and anti-platelets drugs. The time required for the development of a thrombus that occludes blood flow gives a quantitative measure of vascular injury, platelet activation and aggregation that is relevant to thrombotic diseases. We have significantly refined this FeCl3-induced vascular thrombosis model, which makes the data highly reproducible with minimal variation. Here we describe the model and present representative data from several experimental set-ups that demonstrate the utility of this model in thrombosis research.
धमनी घनास्त्रता (खून का थक्का) कई प्रणालीगत जीर्ण सूजन, atherosclerosis, मधुमेह, मोटापा, कैंसर और क्रोनिक स्व-प्रतिरक्षित rheumatologic विकारों सहित के साथ जुड़े रोगों की एक आम समस्या है। Thrombi कि अनुचित प्लेटलेट सक्रियण, एकत्रीकरण और बाद coagulatory तंत्र से धमनी संचलन स्टेम में पाए जाते हैं, और दिल के दौरे, स्ट्रोक और सिरा नुकसान में फंसा रहे हैं। पोत दीवार एक जटिल प्रणाली है कि अनेक प्रकार की कोशिकाओं में शामिल हैं और कतरनी तनाव सहित बाह्य कारकों में से एक भीड़ से प्रभावित है, पोत दीवार में रक्त कोशिकाओं, हार्मोन और साइटोकिन्स, साथ ही एंटीऑक्सीडेंट प्रोटीन की अभिव्यक्ति घूम रहा है। इन विट्रो प्रयोगों नकल नहीं कर सकते इस जटिल पर्यावरण और पशु मॉडल का उपयोग vivo अध्ययन में इसलिए थ्रोम्बोटिक विकारों में शामिल तंत्र की बेहतर समझ के लिए अनुमति देने के लिए महत्वपूर्ण हैं।
चूहे सिम है दिखाया गया हैघनास्त्रता, atherosclerosis, सूजन और मधुमेह 1,2 के संदर्भ में मनुष्य के लिए ilar तंत्र। इसके अलावा, ट्रांसजेनिक और पीटा चूहों एक जटिल शारीरिक या वैकृत वातावरण में विशिष्ट जीन उत्पादों के समारोह का परीक्षण करने के लिए बनाया जा सकता है। इस तरह के अध्ययन मानव विकृति की नकल और महत्वपूर्ण यंत्रवत नए रास्ते और चिकित्सा, की खोज से संबंधित जानकारी उपलब्ध करा सकता है और साथ ही थ्रोम्बोसिस पर दवा प्रभाव निस्र्पक में महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान करते हैं।
रोग धमनी thrombi subendothelial मैट्रिक्स 3,4 करने के लिए परत चोट या रोग और रक्त प्रवाह का जोखिम endothelial के कारण होते हैं। विभिन्न मॉडलों थ्रोम्बोसिस ऐसी यांत्रिक चोट, photoreactive यौगिक गुलाब बंगाल के ऑक्सीडेटिव चोट और लेजर चोट 5 के रूप में इस endothelial क्षति प्रेरित करने के लिए विकसित किया गया है। इस स्पेक्ट्रम में, फेरिक क्लोराइड (FeCl 3) प्रेरित संवहनी चोट घनास्त्रता की एक व्यापक रूप से इस्तेमाल मॉडल है। यह अभिकर्मक जबजहाजों के बाहरी पहलू के लिए आवेदन किया नाड़ी कोशिकाओं 6-8 oxidative नुकसान लाती है, प्लेटलेट्स और जमावट झरना के घटकों घूम से endothelial सेल संरक्षण के नुकसान के साथ। FeCl 3 मॉडल सरल और दोनों थक्कारोधी और विरोधी प्लेटलेट्स दवाओं के प्रति संवेदनशील है, और मन्या और ऊरु धमनियों, कंठ नसों, और mesenteric और cremasteric धमनियों और venules चूहों, चूहों, गिनी सूअरों और खरगोशों 6-15 में प्रदर्शन किया गया है।
इस मॉडल में एक औसत दर्जे का पैरामीटर चोट से गुजरे समय पोत रोड़ा, एक डॉपलर फ्लो मीटर के साथ या intravital माइक्रोस्कोपी 6,7,9 के साथ सीधे निगरानी में रक्त के प्रवाह को बंद करने के रूप में मापा पूरा करने के लिए है। 5 से 30 मिनट के बीच समय की एक सीमा C57BL6 चूहों 7-10,16 में अलग-अलग अध्ययनों में बताया गया है, सुझाव है कि FeCl 3 सांद्रता, संज्ञाहरण, शल्य चिकित्सा तकनीक, माउस उम्र, जीनोमिक पृष्ठभूमि, ख को मापने की विधि के प्रकारlood प्रवाह, और अन्य पर्यावरण चर इस मॉडल में महत्वपूर्ण प्रभाव है। इस व्यापक परिवर्तनशीलता यह मुश्किल विभिन्न अनुसंधान समूहों से अध्ययनों की तुलना करने और सूक्ष्म अंतर का पता लगाने के लिए मुश्किल बना सकता है बनाता है।
एक दृष्टि में इस तरह के variabilities को कम करने और इन विवो मॉडल प्रणाली में एक समान रूप से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य स्थापित करने के साथ, हम FeCl 3 प्रेरित कैरोटिड धमनी मॉडल डेटा न्यूनतम भिन्नता 6-10,16-19 के साथ अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य बनाता है कि परिष्कृत किया है। इस पत्र में हम वर्णन है और कौशल का हिस्सा है और कई प्रतिनिधि प्रयोगात्मक उदाहरण है कि इस मॉडल से लाभ उठा सकते रिपोर्ट।
FeCl 3 प्रेरित मॉडल सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल घनास्त्रता मॉडल है, जो न केवल प्लेटलेट समारोह और घनास्त्रता 7,8,16,19,31-33 पर आनुवंशिक संशोधन के बारे में महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान कर सकते हैं में से एक है…
The authors have nothing to disclose.
This work was supported by the National Heart Lung and Blood Institute (NHLBI) of the National Institutes of Health under award numbers R01 HL121212 (PI: Sen Gupta), R01 HL129179 (PI: Sen Gupta, Co-I: Li) and R01 HL098217 (PI: Nieman). The content of this publication is solely the responsibility of the authors and does not necessarily represent the official views of the National Institutes of Health.
Surgical Scissors – Tungsten Carbide | Fine Science Tools | 14502-14 | cut and hold skin |
Micro-Adson Forceps – Serrated/Straight/12cm | Fine Science Tools | 11018-12 | cut and hold skin |
Metzenbaum Fino Scissors – Tungsten Carbide/Curved/Blunt-Blunt/14.5cm | Fine Science Tools | 14519-14 | to dissect and separate soft tissue |
Ultra Fine Hemostat – Smooth/Curved/12.5cm | Fine Science Tools | 13021-12 | to dissect and separate soft tissue |
Graefe Forceps – Serrated/Straight/10cm | Fine Science Tools | 11050-10 | to dissect and separate soft tissue |
Dumont #5 Fine Forceps – Biology Tips/Straight/Inox/11cm | Fine Science Tools | 11254-20 | Isolate vessel from surounding tissue |
Dumont #5XL Forceps – Standard Tips/Straight/Inox/15cm | Fine Science Tools | 11253-10 | Isolate vessel from surounding tissue |
Blunt Hook- 12cm/0.3mm Tip Diameter | Fine Science Tools | 10062-12 | Isolate vessel from surounding tissue |
Castroviejo Micro Needle Holders | Fine Science Tools | 12061-02 | Needle holders |
Suture Thread 4-0 | Fine Science Tools | 18020-40 | For fix the incisors to the plate |
Suture Thread 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 | For all surgery and ligation |
Kalt Suture Needles | Fine Science Tools | 12050-03 | |
rhodamine 6G | Sigma | 83697-1G | To lebel platelets |
FeCl3 (Anhydrous) | Sigma | 12321 | To induce vessel injury |
Papaverine hydrochloride | Sigma | P3510 | To inhibit gut peristalsis. |
Medline Surgical Instrument Sterilization Steam Autoclave Tapes | Medline | 111625 | To fix the mouse to the plate |
Fisherbrand™ Syringe Filters – Sterile 0.22µm | Fisher | 09-720-004 | For sterlization of solutions injected to mice |
Fisherbrand™ Syringe Filters – Sterile 0.45µm | Fisher | 09-719D | To filter the FeCl3 solution |
Sterile Alcohol Prep Pad | Fisher | 06-669-62 | To sterilize the surgical site |
Agarose | BioExpress | E-3120-500 | To make gel stage |
Leica DMLFS fluorescent microscope | Leica | Intravital microscope | |
GIBRALTAR Platform and X-Y Stage System | npi electronic GmbH | http://www.npielectronic.de/products/micropositioners/burleigh/gibraltar.html | |
Streampix version 3.17.2 software | NorPix | https://www.norpix.com/ |