Summary
فهم الآليات الخلوية والجزيئية إعادة تبطنن التالية إصابة تعرية الشرايين هو من أهمية قصوى في منع تجلط الدم وعودة التضيق في الشرايين. نحن هنا وصف بروتوكول لاستنساخه إصابة الشرايين تعرية من الشريان الأورطي البطني infrarenal. وقد وضعت إجراءات للتحقيق في الآليات الكامنة التي تنظم تجديد البطانية باستخدام نماذج الماوس.
Abstract
التدخلات الأوعية الدموية عن طريق الجلد يؤدي بشكل موحد في إصابات تعرية الشرايين التي تؤدي بعد ذلك إلى تجلط الدم وعودة التضيق. ويمكن أن يعزى هذه المضاعفات إلى ضعف في إعادة تبطنن ضمن هامش الجرح. ومع ذلك لا تزال الآليات الخلوية والجزيئية لإعادة تبطنن إلى تعريف. في حين أن العديد من نماذج حيوانية لدراسة إعادة تبطنن بعد تعرية الشرايين المتاحة، يتم تنفيذ عدد قليل في الماوس بسبب القيود الجراحية. هذا يقوض فرصة لاستغلال خطوط الماوس المعدلة وراثيا وفحص مدى مساهمة الجينات المحددة لعملية إعادة تبطنن. هنا، نقدم بروتوكول خطوة بخطوة لإنشاء نموذج الفئران تكرار للغاية من إصابة الشرايين تعرية في الشريان الأورطي البطني infrarenal باستخدام لقط الأوعية الدموية الخارجي. تلطيخ Immunocytochemical من aortas الجرحى الفيبرينوجين وβ-كاتينين تثبت تعرض على سطح الموالية للالخثاريد حدود البطانة سليمة، على التوالي. الطريقة المعروضة هنا يحتوي على مزايا السرعة وممتازة معدل البقاء على قيد الحياة، وسهولة التقنية النسبية، وخلق أداة عملية فريدة لفرض إصابة تعرية الشرايين في نماذج الفئران المعدلة وراثيا. باستخدام هذه الطريقة، قد المحققين توضيح آليات إعادة تبطنن في ظل ظروف طبيعية أو مرضية.
Introduction
تجلط الدم وعودة التضيق مضاعفات المبكرة والمتأخرة خطيرة لدى المرضى الذين خضعوا لتدخلات الأوعية الدموية عن طريق الجلد، مثل قسطرة البالون اللف والدعامات 1،2. وقد استخدمت عدة استراتيجيات لمعالجة هذه المضاعفات، ولا سيما المزدوج علاج مضاد للصفيحات والدعامات يبلغ حجمه المخدرات. ومع ذلك، فقد تم التركيز بشكل كبير على السبب الكامن وراء تجلط الدم وعودة التضيق، وهي فقدان التغطية الخلايا البطانية (تعرية). إصابة التعرية هي نتيجة حتمية للإجراءات التدخلية بسبب الصدمة الميكانيكية لجدار الوعاء الدموي. هذه الصدمة الميكانيكية يمكن أن يؤدي إلى الأضرار وإزالة طبقة الخلايا البطانية وقائية وتعرض الغشاء القاعدي والعضلات الملساء الوعائية إلى تعميم الدم 3. فقدان الخلايا البطانية في هذه المناطق يخلق بيئة الموالية الجلطة والمؤيدة للالتهابات التي لا تعزز التصاق الصفائح الدموية وتخثر لاحق، ولكنيسوتو يحفز الهجرة وانتشار خلايا العضلات الملساء الوعائية مما أدى إلى سماكة neointimal وعودة التضيق 4. هذه المضاعفات، والعلاجات المرتبطة بها، يؤدي إلى اعتلال كبير، مرض نقص تروية الأكثر المتكررة خصوصا ونزيف الأحداث التي تؤثر على صحة الإنسان.
إعادة تبطنن الإصابة المعراة من هامش الجرح هو من أهمية قصوى في منع تجلط الدم وعودة التضيق 5. وقد أظهرت نتائج التشريح والنماذج الحيوانية بفعالية انخفاض معدلات الاصابة بتجلط مع تغطية الدعامات الدعامات 6،7. الدعامات يبلغ حجمه المخدرات، ابتكر لخفض معدلات عودة التضيق عن طريق تثبيط السلس انتشار العضلات وتضخم neointimal، تؤدي إلى ضعف في كبيرة في الشرايين إعادة تبطنن وتزايد معدلات أواخر تخثر 3. للأسف، كان فهم آليات لإعادة تبطنن-عملية بطيئة، محدودة إلى حد كبير بسبب عدم وجود أبنماذج حيوانية propriate 8.
تم إنشاء عدة نماذج حيوانية لفهم أدوار الخلايا البطانية وخلايا العضلات الملساء الوعائية عقب إصابة الشرايين 7،9،10. الفئران السباتي بالون الشريان نموذج الاصابة هو أفضل وصف واستخدمت لدراسة الآثار المترتبة على الإصابة تعرية على المستوى الإجمالي، الخلوية والجزيئية 11. ومع ذلك، وهذا نموذج الفئران تكرار للغاية الإصابة تعرية الشرايين مع بقاء معدلات ممتازة مفقود وتمس الحاجة إليها للاستفادة من خطوط المعدلة وراثيا متعددة متاحة لتوضيح أفضل تجديد الأوعية الدموية في أماكن متعددة.
تقدم هذه المخطوطة نموذج الفئران من الإصابة تعرية الشرايين التي هي قابلة للتكرار وبسيطة للأداء. وقد أظهرت نهج الحد الأدنى من معدلات الاعتلال والوفيات في العديد من خطوط المعدلة وراثيا. نظرا لوجود عدد واسع من خطوط الماوس المعدلة وراثيا، وهذا النموذج يمكن أن تستخدم لتوضيح الآليات الجزيئية الكامنة وراء إعادة تبطنن بعد إصابة تعرية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
ملاحظة: تمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل لجنة البحوث الحيوانية في جامعة كاليفورنيا في لوس انجليس.
1. إعداد قبل الجراحة والتخدير
- تأكد من مراقبة تقنية معقمة في جميع أنحاء الداخلي.
- تعقيم جميع المستلزمات الجراحية باستخدام الأوتوكلاف بخار.
- تشغيل منصة القوارض ساخنة جراحية قبل تحريض التخدير بحيث قد نستريح لدرجة حرارة مناسبة (37 درجة مئوية) ومكان تحت مجهر تشريحي لرؤية أثناء إجراء العمليات الجراحية.
- ضع الماوس في غرفة تحريض التخدير وحمل مع 4٪ الأيزوفلورين بمعدل تدفق من 1 لتر / دقيقة.
- بعناية مراقبة الجهاز التنفسي معدل وقاطع الطريق لون البشرة من الماوس خلال الاستقراء.
- بعد تباطؤ في معدل التنفس، وإزالة الماوس من غرفة الاستقراء ووضع على لوحة استعد لإعداد الجراحية وجهه في الرؤوس وصيانة تركيز الأيزوفلورين منفصل من 2.5٪.
- أداء قرصة اصبع القدم لتقييم كفاية مخدر.
- تطبيق مرهم للعين للالقرنيات وإدارة كاربروفين قبل الجراحة (5 ملغ / كلغ) تحت الجلد.
- مكان الماوس كليبرز مستلق واستخدام لإزالة الشعر من البطن.
- إعداد المنطقة الجراحية مع ثلاثة الدعك بالتناوب من اليود البوفيدون و 70٪ ايزوبروبيل تطبيقها مع قطع من الشاش المعقم.
- مكان مستلق الماوس على منصة القوارض ساخنة الجراحية وجهه في الرؤوس وتأمين جميع الأطراف وبعناية الماوس موقف مثل هذا البطن مرئيا مع مجهر تشريحي.
- وضع معقم، ضمادات لاصقة على طول كل حافة منطقة العمليات الجراحية المعدة.
- عاير تركيز الأيزوفلورين للحفاظ على التخدير الكافي أثناء الجراحة مع الحفاظ على التنفس العفوي.
2. Infrarenal الأورطي لقط
- جعل شق 3 سم أسفل خط الوسط من البطن باستخدام مشرط، بدءا approximatelذ 0.5 سم أقل شأنا من عملية الخنجري.
- سحب بلطف الجلد بالملقط وتشريح الجلد بعيدا عن جدار البطن باستخدام مقص غرامة لقطع النسيج الضام الجميلة.
- تطبيق 0،05-،1 مل من 0.5٪ بوبيفكين إلى الجدار العضلي وجعل شق 2 سم في جدار البطن لفضح أعضاء البطن.
- إذا كان النزيف يحدث على طول جدار البطن، وتطبيق ضغط لطيف مع قضيب من القطن ذات الرؤوس.
- رفع بلطف الأمعاء باستخدام أدوات تطبيقها ذات الرؤوس القطن غارقة في المياه المالحة.
ملاحظة: كن حذرا لتجنب صدمة حادة إلى صائمي والشرايين اللفائفية ومكان على الحارة، معقم المالحة غارقة الإسفنج الشاش خارج تجويف البطن.- تغطية الأمعاء مع دافئ، ملحي معقم الإسفنج الشاش غارقة آخر لتجنب فقدان الرطوبة.
- وضع ضام لlateralize المستقيم وفضح خلف البريتوان.
- ضع قطع من الشاش صغيرة عند الضرورة لرؤية retroperitoneأم تتبع عدد المستخدمة.
- على مستوى القطب السفلي للالكلية اليمنى، واستخدام ملقط تشريح حادة لجعل retroperitonotomy الأفقي إلى الشريان الأورطي.
ملاحظة: احرص على عدم جرح الوريد الأجوف السفلي أو الأوعية المحيطة بها.- بصراحة تشريح الأنسجة خلف الصفاق من الشريان الأبهر والحرص على عدم ثقب الوريد الأجوف السفلي أو الأوعية الدموية المحيطة.
- وضع المشبك الأوعية الدموية خلال الشريان الأورطي لا يقل عن 1 دقيقة، أو وقت محدد آخر، والتحقق من انسداد بملاحظة بصريا عدم وجود pulsatility في الشريان الأبهر القاصي.
- إزالة المشبك الأوعية الدموية والتحقق من الارقاء. ويتحقق الارقاء وضمان عندما ينظر أي تسرب نشط من الدم.
- تأكيد تسرب عن طريق إضافة 0.5 مل المالحة إلى تجويف البطن وتقييم إذا أصبحت مالحة على نحو متزايد المشوب الدم. إذا كان هذا هو الحال، وتطبيق ضغط لطيف باستخدام قضيب غارقة في المياه المالحة لمدة 1 دقيقة لضمانالارقاء.
- إزالة أي قطع من الشاش وضعت للمساعدة في التصور من خلف البريتوان واستبدال الأمعاء في الموقع في البطن.
- ري تجويف البطن باستخدام حرارة قبل ملحي معقم.
3. إغلاق البطن والجلد
- إغلاق البطن طبقة الجدار العضلي باستخدام 5-0 مضفر، امتصاص خياطة تشغيل واحدة.
- انهيار الجلد مع 1-3 قطرات من مادة لاصقة البوليمر وثم في وقت لاحق مع مقاطع الجرح مرة واحدة يتم تعيين لاصقة.
4. الإنعاش وتقييم ما بعد الجراحة
- نقل الماوس إلى قفص الانتعاش على وسادة التدفئة مع الغذاء والماء على أرضية القفص.
- تراقب عن كثب الماوس لعلامات الضائقة التنفسية. إدارة كاربروفين (5 ملغ / كغ) يوميا لمدة 48 ساعة بعد العمل الجراحي في المبادئ التوجيهية المؤسسة.
- لا تترك حيوان غير المراقب حتى استعاد وعيه كافية للحفاظ على recum القصيةbency.
- عودة الماوس إلى القفص العادي مع الغذاء والماء.
- لا عودة الحيوان الذي خضع لعملية جراحية للشركة من الحيوانات الأخرى حتى تعافى تماما.
- تقييم الجرح على أساس يومي لتفزر وإزالة مقاطع يوم بعد العملية الجراحية 14.
5. الأورطي تشريح وتلطيخ
- حدد الفئران للتضحية استنادا إلى نقطة زمنية محددة من الفائدة بعد إصابة تعرية.
- التضحية الفئران عن طريق الاستنشاق الأيزوفلورين وحقن فورا مع 5 ملغ كلوريد ميثاكولين أن يسبب الأوعية الدموية استرخاء العضلات الملساء.
- على تأكيد من الموت على يد وقف التنفس، عدم وجود رد فعل القرنية وقلة الحركة، يروي مع بارافورمالدهيد 4٪ في الفوسفات مخزنة المالحة في ضغط التروية من 100 مم زئبق عبر البطين الأيسر في القلب لمدة 10 دقيقة.
- استخدام مجهر تشريحي تشريح لفصل بعناية الشريان الأورطي البطني سليمة منالأنسجة المحيطة بها.
- القطع منقاري الأورطى إلى الشرايين الكلوية والذيلية إلى التشعب الحرقفي وفتحت عبر شق طولي على طول السطح الظهري.
- دبوس الشريان الأورطي شقة على طبق المغلفة 35 مم سيليكون مع الجانب اللمعية يصل لتثبيت لمدة لا تقل عن ساعة 2 ولكن ليس أكثر من 12 ساعة. وفي وقت لاحق، والأنسجة يمكن أن يكون إما جزءا لا يتجزأ من لباجتزاء أو استخدامها في حمام كامل الوجه جبل مناعية.
- جبل الملون aortas مع الجانب اللمعية التي تواجه ساترة على الشرائح الزجاجية للفحص المجهري متحد البؤر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
مرت خمسة وثمانين الفئران تقنية بقاء الجراحية المذكورة في هذا التقرير لinfrarenal لقط الأبهر البطني. وكان معدل البقاء على قيد الحياة 85.9٪. وتشمل المضاعفات المنطوق نزيف في الامعاء وثقب السفينة كبير، مما أدى إلى وفيات 5.9٪ و 3.5٪ على التوالي (الجدول 1). بعد الشفاء من التخدير، والفئران سيرا على الأقدام عادة وتظهر أي علامات على الإصابة الدماغية في الأطراف السفلية. ولم يلاحظ وجود نقص في الوزن أو فقدان الشهية.
الأرقام 1A وعرض 1B الصور من الشريان الأورطي البطني infrarenal التالية البطن وتشريح خلف الصفاق تحت مجهر تشريحي دون (A) ومع (ب) لقط الأبهر. كما هو مبين، فمن الأهمية بمكان لكبح عرض الأبهر في مجملها إلى ضمان تعرية على طول عرض الشريان الأورطي. العثور على بروتوكول لدينا أن استخدام منعطف حاد شوارتز مايكرو سيريغرامات مع عرض الفك من 1.75 ملم والقوي "الصحافة المشبك أنتجت أكبر الجرح المستمر عبر عرض كامل في الشريان الأورطي مع الوقت المشبك الحد الأدنى. ومع ذلك، تم اختبار المشابك الأخرى في عدة فترات زمنية انسداد مع أحجام إصابة متغير (الشكل 1C). وأنتجت ما تبقى من النتائج المعروضة باستخدام المشبك المذكورة أعلاه.
التقييم النسيجي من الشريان الأورطي يوضح تعرية كاملة من بطانة البطانية مع إتلاف معتدلة إلى طبقة الخلايا العضلية الملساء الأساسية كما يتبين من H & E تلطيخ. تعرية من البطانة يحدث في كل 10 ثانية و 10 دقيقة، وإن كان ذلك بدرجات مختلفة (الشكل 2). لتحديد الأمثل الأبهر الفاصل الزمني لقط اللازمة لتعرية الشرايين كاملة، خضعت الفئران لقط لمدة 10 ثانية، 1 دقيقة و 10 دقيقة وتمت التضحية فورا للتحليل كما هو موضح في البروتوكول أعلاه. لهيزيادة على من تعرية مع زيادة توقيت المشبك (الشكل 3). في 10 ثانية، وإصابة تعرية ناقصة وغير مكتملة من حوالي 0.75 مم 2 والتي حددها تلطيخ الفيبرينوجين غير مكتمل، حيث يخدم الفيبرينوجين كعلامة للإصابة تعرية. عشر دقائق من تحامل الأبهر أنتجت منطقة البطانية الجرداء تماما ما يقرب من 1.2 مم 2، ولكن هذا المقدار من الوقت للقط وتعتبر عالية المخاطر لنقص تروية الأطراف وإصابة ضخه. على هذا النحو، فإننا اعتبرت 1 دقيقة لقط الأبهر كافية، والتي أنتجت منطقة 0.88 مم 2 من تعرية في المتوسط، أن يؤدي في القريب كاملة إصابة الشرايين تعرية دون وجود أدلة من الإصابة الدماغية.
مدى إصابة تعرية مع 1 دقيقة لقط الأبهر هو تكرار للغاية، مما ينتج عنه قطرها 600 ميكرون و0.88 مم 2 مساحة تعرية (الشكلان 3 و 4). الشدة تلطيخ الفيبرينوجين كافية للتعرف على الإصابة الأصلية في نقطة زمنية لاحقة. ويبين الشكل 4 تلطيخ الفيبرينوجين من ثلاثة الفئران التي خضعت 1 دقيقة من الأبهر لقط 24 ساعة قبل للتضحية، وخلق اصابة استنساخه للغاية. قياس الفيبرينوجين تلطيخ 24 ساعة بعد إصابة ستة aortas ما يقرب من 0.81 مم 2 (الشكل 5A)، على غرار إحصائيا الى اصابة 0.88 مم 2 لاحظت على الفور بعد الإصابة (ع = 0.14). مقارنة البطانة لم يصب، الجرح هامش 24 ساعة بعد العروض إصابة الخلايا المهاجرة البطانية مع المغطي الفيبرينوجين تلطيخ، بمناسبة إعادة تبطنن-إلى إصابة تعرية (الشكل 5B). في المتوسط، أخذت كاملة إعادة تبطنن للإصابة تعرية 0.88 مم 2 ما يقرب من 3 أيام. ومع ذلك، فإن هذا النهج يمكن تكييفها كذلك لإنتاج إصابات تعرية أكبر من ذلك. تحامل عدة مرات، كللمدة 1 دقيقة، من منقاري إلى الذيلية على طول الشريان الأورطي infrarenal أنتج إصابة تعرية 3.7 مم 2. على الرغم من أن هذا النهج أيضا الأضرار وسائل الإعلام الغلالة، ونحن لم احظ تشريح الشريان الأورطي البطني نتيجة للإصابة المشبك.
يوضح هذا البروتوكول الذي infrarenal لقط الأبهر البطني يمكن إجراء بأمان في نموذج الفئران لأغراض خلق إصابة تعرية الشرياني وقياس تجديد البطانية.
الشكل 1: عزل Infrarenal البطن الأورطى هو مبين عزل الشريان الأورطي البطني infrarenal دون (A) ومع (ب) المشبك الأوعية الدموية. استخدمت عدة المشابك من مختلف الأطوال وقوة الصحافة المشبك لتحديد تلك التي تقدم إصابة متناسقة (C). وشوارتز هيئة التصنيع العسكري ريال عماني مليقط (السهم) أنتجت أكبر الجرح المستمر. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: كفاءة غشائي التعرية H & E تلطيخ من قسم الأبهر البطني infrarenal في الماوس غير المصابين (A) وبعد 10 ثانية (ب) و 10 دقيقة للقط الأبهر (C). الأوعية الدموية تحامل يجرد تماما الطبقة البطانية، كما يمكن التحقق من عدم وجود تلطيخ أنويتها. أيضا فقد نوى الخلايا العضلية الملساء تبين الأضرار التي لحقت سائل الإعلام الغلالة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
العمر = "1"> 
الشكل (3): علاقة المشبك الوقت إلى الجرح طول أجريت Infrarenal لقط الأبهر في البطن لمدة 10 ثانية، 1 دقيقة و 10 دقيقة. مباشرة بعد الإصابة، تم تنفيذ مناعية أون الوجه لعملية جراحية صورية وهذه النقاط الوقت كما هو مبين (A) وعلى دقة أعلى (B). الفيبرينوجين (باللون الأرجواني) يحدد منطقة الإصابة. β-كاتينين (باللون الأحمر) ويحدد حدود البطانية. العلامة النجمية (*) ترمز إلى مجال التطبيق المشبك. غياب β-كاتينين يدل على عدم وجود خلايا بطانة الأوعية الدموية في منطقة الإصابة. (ج) يستخدم الفيبرينوجين تلطيخ كعلامة من منطقة الإصابة تعرية لإظهار أن زيادة وقت التثبيت يزيد مساحة تعرية (ن = 2 لكل نقطة زمنية). أشرطة الخطأ تمثل الانحراف المعياري. الرجاء الضغط ساعةيحرث لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 4: تحديد ساعات الإصابات مساحة أربعة وعشرون التالية لقط الأبهر لمدة 1 دقيقة، تم تشريح الشريان الأورطي وقطع لفضح البطانية الغلالة. بعد تثبيت في 4٪ امتصاص العرق، تم إجراء مناعية أون الوجه. الفيبرينوجين (باللون الأرجواني) يحدد منطقة الإصابة (A). تضخم أعلى من هامش الجرح (B) وداخل الجرح (C) وترد. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 5: استنساخ من التعريةإصابة وتحديد إعادة تبطنن. أربع وعشرين ساعة بعد الاصابة، وكان تشريح الشريان الأورطي كما مناعية ذكر وخضع أون الوجه. باستخدام الفيبرينوجين كعلامة للإصابة تعرية، لوحظ إصابة استنساخه للغاية في الفقرة (أ) مع منطقة تعرية متوسط 0.81 ملم 2 (ن = 6). تظهر الصور عالية الدقة أن هامش الجرح المعارض الفيبرينوجين تلطيخ والهجرة الخلايا البطانية (الأسهم، وتلطيخ الأرجواني) (B) مقارنة مع البطانة لم يصب (C). أشرطة الخطأ تمثل الانحراف المعياري. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الجدول 1: المنطوق وبعد العملية الجراحية الوفيات ما مجموعه 85 الفئران underwالبقاء على قيد الحياة الأنف والحنجرة infrafrenal لقط الأبهر البطني مع معدل البقاء على قيد الحياة من 85.9٪. لم ثمانية الفئران (9.4٪) لا البقاء على قيد الحياة لعملية جراحية بسبب نزيف في الأمعاء أو ثقب سفينة كبيرة. مات أربعة من الفئران بعد العمل الجراحي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
إصابة تعرية الشرايين بسبب التدخلات عن طريق الجلد، مثل قسطرة البالون والدعامات الأوعية الدموية، يؤدي إلى تخثر الأوعية الدموية المبكرة والمتأخرة وعودة التضيق ويسهم في الأحداث الدماغية المتكررة 3،12. ومن المثير للاهتمام، كما تورطت لقط الأوعية الدموية الجراحية كسبب للتعرية الشرايين، وتوسيع نطاق المشكلة إلى المرضى الذين يخضعون أي إجراء الأوعية الدموية، سواء عن طريق الجلد أو فتح 13. في حين ضعف إعادة تبطنن-هو سبب المعترف بها إلى حد ما من تجلط الدم وعودة التضيق، كانت الآليات الجزيئية المحيطة إعادة تبطنن-من الصعب توضيح. أصبحت نماذج حيوانية ضرورة للحصول على مزيد من الفهم لإعادة تبطنن التالية إصابة تعرية الشرايين.
النماذج الحيوانية الموجودة لدراسة آثار الخلوية والجزيئية للإصابة تعرية الشرايين تشمل تلك في الخنازير والأرانب والقوارض 7،9-11. القوارض وزارة الدفاعإلس كثيرا المستخدمة في ذلك الفئران السباتي بالون الشريان نموذج الإصابة، نموذج إصابة سلك الماوس، والفئران ونماذج الماوس ربط 14،15. في حين أن الفئران السباتي بالون الشريان نموذج الاصابة هو أفضل وصف والأكثر شيوعا، والإجراءات إصابة الشريان السباتي عن طريق يندنر وصفها في الفئران وسعت إمكانيات استخدام السلالات المعدلة وراثيا 16،17. انخفضت نماذج الماوس المعدلة وراثيا الإصابة المحتملة الآثار بعيدا عن الهدف وقضايا خصوصية ترتبط مع مثبطات الدوائية، ويمكن أن تسمح لأنسجة محددة ومشروطة الاجتثاث من عناصر محددة من الفائدة. ومع ذلك، وإصابة الشريان السباتي في الماوس هي صعبة وصعبة للغاية لأداء.
نموذج الشرايين تعرية الفئران من الشريان الأورطي البطني infrarenal الموصوفة هنا من السهل نسبيا لتطبيق وتمكن دراسات من إعادة تبطنن من شريان العيار الثقيل في الجسم الحي. عرضت عملية جراحية لسور مقبولمعدل vival من 85.9٪. طول الجرح يعتمد على البعد المشبك الفك، قوة الصحافة المشبك، وطول الفترة الزمنية المشبك الأوعية الدموية والاغلاق السفينة. يستخدم هذا النموذج على 10 × 1.75 ملم البعد الفك والقوي "الصحافة المشبك لمدة 1 دقيقة لإنتاج إصابة 0.88 مم 2 تعرية هذا هو تكرار للغاية. وقد لوحظ التغير في طول الجرح مع أبعاد الفك مختلفة وطول انسداد الأوعية. وبالإضافة إلى ذلك، مجال تعرية يمكن توسيع تحامل متسلسل الشريان الأورطي البطني infrarenal من منقاري إلى الذيلية. على هذا النحو، وهذا النموذج يقدم براعة في حجم الإصابة تعرية التي يمكن التلاعب بها لتناسب وتهدف الدراسة المرء.
لتقييم مدى الأضرار والبطانية معدلات الإغلاق بعد الاصابة، وكان أداؤها مناعية عند نقاط زمنية مختلفة مع الأجسام المضادة التي أثيرت ضد β-كاتينين لتحديد التقاطعات الخلايا البطانية أو أرج لتحديد نوى الخلايا البطانية والفيبرينوجين إلى تحديد رتعرض لإصابة المنطقة. كما وقعت إعادة تبطنن، وقد استخدم تلطيخ الفيزيولوجية للتعرف على الإصابة الأصلية في مقارنة إلى حد إعادة تبطنن. في حين أن تلطيخ قوية من الفيبرينوجين والموهن بشكل ملحوظ بعد إعادة نمو البطانة، لا يزال هناك كثافة كافية للتعرف على الإصابة الأصلية حتى بعد مرور 4 أيام على الأقل بعد الجراحة.
هذا النموذج ليس دون قيود. كما هو الحال مع أي نموذج حيواني، جراحة الفئران تتطلب تقنية جراحية جيدة وينطوي على منحنى التعلم. الفئران يصبح فريسة بسرعة إلى ثقب السفينة إذا لم يتم تنفيذ تشريح بعناية، وهو أمر مستحيل أحيانا للسيطرة. وتشمل الأسباب الأكثر شيوعا للوفاة المنطوق نزيف الأمعاء وانثقاب سفينة كبيرة، وعند 5.9٪ و 3.5٪ على التوالي. ومع ذلك، مع تشريح دقيق، ونزيف أمر نادر الحدوث ويمكن عادة فقدان الدم أن تبقى إلى أقل من 0.1 مل في تجربتنا. وبالإضافة إلى ذلك، تشريح كافية من الشريان الأورطي والمشبك الصحيحوضع جزء لا يتجزأ من اصابة في استنساخه. أثناء فحص pulsatility الأبهر القاصي يمكن أن تستخدم لتأكيد انسداد الشريان الأبهر الكامل، وإزالة جميع الأنسجة تمسكا خلف الصفاق إلى الشريان الأورطي هو أمر حيوي للحصول على، الجرح دون انقطاع نظيفة. كما ذكر سابقا، يلاحظ الضرر إلى وسائل الإعلام الغلالة مع هذا الإجراء لقط الأبهر. ومع ذلك، وسطي وفاة العضلات الملساء هو نتيجة معروفة للتوسع لفترات طويلة أو المزمن في الأوعية الدموية بسبب زرع الدعامة، والنتائج في تضخم neointimal لاحق 18. لا يظهر الضرر وسطي في نموذجنا أن يكون عقابيل مرضية، وليس لدينا أي الموت بعد العملية الجراحية، وقد نجا من هذه الفئران لتصل إلى 2 أشهر بعد العمل الجراحي.
نقدم نموذج الفئران تنوعا من الإصابة تعرية الشرايين من الشريان الأورطي البطني infrarenal التي هي قابلة للتكرار مع بقاء معدلات جيدة. هذا النموذج يسد حاجة لدراسة إصابة الشرايين مع العديد من نماذج الماوس المعدلة وراثيا. اعتماد سو هذا نموذج الفئران يمكن أن تستخدم لتوضيح الآليات الجزيئية لإعادة تبطنن في ظل ظروف طبيعية ومرضية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
Acknowledgments
وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من ايلي ومركز اسع Edythe الطب التجديدي وأبحاث الخلايا الجذعية في برنامج التدريب في جامعة كاليفورنيا إلى ASS و AIM، فيليب ج Whitcome زمالة إلى الهدف، والمعاهد الوطنية للصحة (HL130290) إلى MLIA.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zeiss Discovery.V12 Stereomicroscope | Zeiss | 495037-9904-000 | |
| Rodent Heated Surgical Platform | Protech International | RES4000 | Heated platform for body temperature maintenance with nosecone for anesthestic maintenance and on which surgical procedure is performed |
| Isoflurane | Henry Schein | 50033 | 4% Induction; 2.5% Maintenance |
| Isoflurane Vaporizer | Summit Medical Equipment | 470062 | |
| Stryker T/Pump Warm Water Recirculator | Kent Scientific | TP-700 | |
| Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Carprieve (Carprofen) | Norbrook Laboratories | NDC 55529-131-01 | |
| Oster™ A5 Professional Animal Clipper | M.Schneider & Sons Inc. | 78005010 | Use with animal clipper size 40 |
| Adjustable Wire Retractor | Fine Science Tools | 17004-05 | |
| Schwartz Micro Serrefines - Sharp Bend | Fine Science Tools | 18052-03 | |
| Surgical Instruments | Fine Science Tools | sharp dissecting forceps, blunt forceps, fine scissors, spring scissors, hemostat | |
| 0.5% Marcaine | Hospira | 0409-1610-50 | |
| 5-0 Suture, Vicryl | Fisher Scientific | NC0189890 | tapered needle |
| Vetbond | Fisher Scientific | NC0304169 | |
| Falcon® 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish | Corning | 351008 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | 3097358-1004 | |
| Dissecting pins | Fisher Scientific | NC9681411 |
References
- Farooq, V., Gogas, B. D., Serruys, P. W. Restenosis: delineating the numerous causes of drug-eluting stent restenosis. Circ Cardiovasc Interv. 4, 195-205 (2011).
- Tada, T., et al. Risk of stent thrombosis among bare-metal stents, first-generation drug-eluting stents, and second-generation drug-eluting stents: results from a registry of 18,334 patients. JACC Cardiovasc Interv. 6, 1267-1274 (2013).
- Otsuka, F., et al. The importance of the endothelium in atherothrombosis and coronary stenting. Nat Rev Cardiol. 9, 439-453 (2012).
- Kipshidze, N., et al. Role of the endothelium in modulating neointimal formation: vasculoprotective approaches to attenuate restenosis after percutaneous coronary interventions. J Am Coll Cardiol. 44, 733-739 (2004).
- Finn, A. V., et al. Pathological correlates of late drug-eluting stent thrombosis: strut coverage as a marker of endothelialization. Circulation. 115, 2435-2441 (2007).
- Joner, M., et al. Pathology of drug-eluting stents in humans: delayed healing and late thrombotic risk. J Am Coll Cardiol. 48, 193-202 (2006).
- Joner, M., et al. Endothelial cell recovery between comparator polymer-based drug-eluting stents. J Am Coll Cardiol. 52, 333-342 (2008).
- McDonald, A. I., Iruela-Arispe, M. L. Healing arterial ulcers: Endothelial lining regeneration upon vascular denudation injury. Vascul Pharmacol. 72, 9-15 (2015).
- Fingerle, J., Tina Au, Y. P., Clowes, A. W., Reidy, M. A. Intimal Lesion Formation in Rat Carotid Arteries after Endothelial Denudation in Absence of Medial Injury. Arteriosclerosis. 10, 1082-1087 (1990).
- Granada, J. F., et al. Vascular response to zotarolimus-coated balloons in injured superficial femoral arteries of the familial hypercholesterolemic Swine. Circ Cardiovasc Interv. 4, 447-455 (2011).
- Tulis, D. A. Rat carotid artery balloon injury model. Methods Mol Med. 139, 1-30 (2007).
- Bavry, A. A., Bhatt, D. L. Appropriate use of drug-eluting stents: balancing the reduction in restenosis with the concern of late thrombosis. Lancet (London, England). 371, 2134-2143 (2008).
- Gucu, A., et al. Effects of temporary vascular occluder poloxamer 407 Gel on the endothelium. J Cardiothorac Surg. 8, (2013).
- Holt, A. W., Tulis, D. A. Experimental Rat and Mouse Carotid Artery Surgery: Injury & Remodeling Studies. ISRN Minim Invasive Surg. 2013, (2013).
- Nam, D., et al. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297, 1535-1543 (2009).
- Lindner, V., Fingler, J., Reidy, M. A. Mouse Model of Arterial Injury. Circ Res. 73, 792-796 (1993).
- Kumar, A., Lindner, V. Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 17, 2238-2244 (1997).
- Hehrlein, C., Weinschenk, I., Metz, J. Long period of balloon inflation and the implantation of stents potentiate smooth muscle cell death. Possible role of chronic vascular injury in restenosis. Int J Cardiovasc Intervent. 2, 21-26 (1999).
