Summary
Forstå cellulære og molekylære mekanismer for re-endotelialisering følgende arteriell denudasjon skade er av avgjørende betydning for å forebygge trombose og restenose av arterier. Her beskriver vi en protokoll for reproduserbar arteriell denudasjon skade av infrarenale bukaorta. Prosedyren ble utviklet for å undersøke de underliggende mekanismene som regulerer endothelial regenerering ved hjelp av musemodeller.
Abstract
Perkutane vaskulære intervensjoner jevnt resultere i arteriell denudasjon skader som senere fører til trombose og restenose. Disse komplikasjonene kan tilskrives svekkelser i re-endotelialisering innenfor sårkantene. Likevel, de cellulære og molekylære mekanismer for re-endotelialisering gjenstår å bli definert. Mens flere dyremodeller for å studere re-endotelialisering etter arteriell denudasjon er tilgjengelige, vil få utført i mus på grunn av operasjonsbegrensninger. Dette svekker muligheten til å utnytte transgene mus linjer og undersøke bidraget av spesifikke gener i ferd med å re-endotelialisering. Her presenterer vi en steg-for-steg-protokollen for å skape en svært reproduserbar murine modell av arteriell denudasjon skade i infrarenale bukaorta bruker ekstern vaskulær klem. Immunocytokjemisk farging av skadde Aorta for fibrinogen og β-catenin demonstrere eksponering av et pro-trombotisk overflaten end grensen av intakt endotel, respektivt. Metoden som presenteres her har fordeler av hastighet, utmerket total overlevelsesrate, og relativ teknisk letthet, og skaper et unikt praktisk verktøy for å pålegge arteriell denudasjon skade i transgene musemodeller. Ved hjelp av denne metoden, kan etterforskerne belyse mekanismene for re-endotelialisering under normale eller patologiske tilstander.
Introduction
Trombose og restenose er alvorlige tidlige og sene komplikasjoner hos pasienter som gjennomgår perkutane vaskulære intervensjoner, for eksempel endovaskulær ballong angioplastikk og stenting 1,2. Flere strategier er ansatt for å håndtere disse komplikasjonene, særlig dobbel platehemmende behandling og medikamentavgivende stenter. Imidlertid har liten fokus vært plassert på den underliggende årsaken til trombose og restenose, nemlig tapet av endotelial celledekning (denudasjon). Denudasjon skade er en uunngåelig konsekvens av intervensjonsprosedyrer som følge av mekanisk skade på karveggen. Denne mekaniske traumer kan føre til skade og fjernelse av den beskyttende endotel-lag og eksponering av basalmembran og vaskulær glatt muskulatur til sirkulerende blod tre. Tapet av endoteliale celler i disse områdene danner et pro-trombotiske og pro-inflammatorisk miljø som ikke bare fremmer blodplateadhesjon og etterfølgende trombose, men enLSO stimulerer migrering og proliferasjon av vaskulære glatte muskelceller som resulterer i neointimal fortykning og restenose 4. Disse komplikasjoner, og tilhørende terapier, føre til betydelig sykelighet, særlig tilbakevendende iskemisk sykdom og blødninger som påvirker menneskers helse.
Re-endotelialisering av avdekt skade fra sårkantene er av avgjørende betydning for å forebygge trombose og restenose 5. Obduksjonsresultatene og dyremodeller har effektivt demonstrert reduserte priser på trombose med dekning av stent struts 6,7. Medikamentstent, utviklet for å redusere forekomsten av restenose ved å hemme glatt muskel spredning og neointimal hyperplasi, resultere i betydelige svekkelser i arteriell re-endotelialisering og økende forekomst av sen trombose tre. Dessverre er å forstå mekanismene for re-endotelialisering har vært en langsom prosess, i stor grad begrenset av mangelen på apsiktsdyremodeller 8.
Flere dyremodeller for å forstå rollene til endotelceller og vaskulære glatte muskelceller følgende arteriell skade har blitt opprettet 7,9,10. Rottehalspulsåren ballong skade modellen er best preget og har vært ansatt for å studere effekter av denudasjon skade på brutto, cellulært og molekylært nivå 11. Likevel mangler en svært reproduserbar murine modell av arteriell denudasjon skade med gode overlevelsesrate og mye nødvendig å dra nytte av flere transgene linjer tilgjengelig for å bedre belyse vaskulær regenerasjon i flere innstillinger.
Dette manuskriptet presenterer en murine modell av arteriell denudasjon skade som er reproduserbar og enkel å utføre. Tilnærmingen har vist minimal sykelighet og dødelighet i flere transgene linjer. På grunn av den brede antall genetisk modifiserte mus linjer, kan denne modellen benyttes for åbelyse de molekylære mekanismene bak re-endotelialisering etter denudasjon skade.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
MERK: Denne protokollen er godkjent av forsøksdyrutvalget ved Universitetet i California Los Angeles.
1. Preoperativ forberedelse og anestesi
- Sørg for å observere steril teknikk gjennom hele prosedyren.
- Steriliser alle kirurgiske forsyninger ved hjelp av en damp autoklav.
- Slå på oppvarmede gnager kirurgisk plattformen før bedøvelse induksjon, slik at den kan oppvarmes til passende temperatur (37 ° C) og anbring under stereomikroskop for visualisering under kirurgiske prosedyren.
- Plassere musen i anestesi induksjonskammeret og fremkall med 4% isofluran ved en strømningshastighet på 1 l / min.
- Følg nøye med lufthastighet og fotbladet hudfarge av mus under induksjon.
- Etter bremse av respirasjonsfrekvens, fjerne musen fra induksjonskammeret og legg på varme pad for kirurgisk forberedelse med ansiktet i separate nosecone og vedlikehold isofluran konsentrasjon på 2,5%.
- Utfør tå klype for å vurdere tilstrekkeligheten av bedøvelse.
- Påfør ophthalmic salve til hornhinner og administrere preoperativ carprofen (5 mg / kg) subkutant.
- Plasser muse liggende og bruke clippers å fjerne hår fra magen.
- Forbered kirurgiske området med tre alternerende skrubb av povidon jod og 70% isopropylalkohol påført med sterile gasbind pads.
- Plasser musen liggende på oppvarmet gnager kirurgisk plattform med ansiktet i nosecone og sikre alle ekstremiteter og nøye posisjon musen slik at magen er synlig med det stereo.
- Plasser sterile, selvklebende bandasjer langs hver kant av den fremstilte kirurgiske området.
- Titrere isofluran konsentrasjon til å opprettholde tilstrekkelig anestesi under operasjonen og samtidig opprettholde spontane respirasjon.
2. infrarenale aorta Klem
- Lag en 3 cm snitt på midtlinjen av magen ved hjelp av en skalpell, som starter approximately 0,5 cm dårligere enn xiphoid prosessen.
- Forsiktig trekke huden med pinsett og dissekere huden vekk fra bukveggen hjelp av gode saks for å klippe den fine bindevev.
- Påfør 0,05-0,1 ml 0,5% bupivakain til muskelen veggen og gjøre en 2 cm snitt i bukveggen for å avdekke abdominal organer.
- Hvis blødningen oppstår langs bukveggen, trykk forsiktig med en bomulls-tipped applikator.
- Løft forsiktig tarmen ved hjelp av saltvann-gjennomvåt bomull-tipped applikatorer.
MERK: Vær forsiktig for å unngå sløv traumer til jejunal og ileale arterier og legg på en varm, sterilt saltvann gjennomvåt gasbind svamp utenfor bukhulen.- Dekk tarmen med en annen varm, sterilt saltvann gjennomvåt gasbind svamp for å unngå tap av fuktighet.
- Plasser en retractor til lateralize rektum og utsett retroperitoneum.
- Plasser små gasbind pads som er nødvendig for visualisering av retroperitoneum å holde rede på antall brukt.
- Ved nivået for den nedre pol av høyre nyre, bruk skarpe dissecting tang for å lage en retroperitonotomy sideveis til aorta.
MERK: Vær forsiktig så du ikke skader inferior vena cava eller omkringliggende fartøy.- Rett ut dissekere retroperitoneal vev av aorta være forsiktig med å perforere inferior vena cava eller omkringliggende blodkar.
- Plasser den vaskulære klemme over aorta i minst 1 min, eller annen spesifisert tid, og verifisere okklusjon ved visuelt å observere mangel på pulsatility i distale aorta.
- Fjern vaskulære klemmen og verifisere hemostase. Hemostase er oppnådd og sikret når ingen aktiv bloduttredelse av blod er sett.
- Bekreft bloduttredelse ved å tilsette 0,5 ml saltvann inn i bukhulen og vurdere om saltvann blir stadig mer blod-farget. Dersom dette er tilfelle, trykk forsiktig med saltvann-fuktet applikator i 1 min for å sikrehemostase.
- Fjern eventuelle gasbind pads plassert til hjelp i visualisering av retroperitoneum og erstatte tarmen i situ i magen.
- Skyll bukhulen ved hjelp forvarmes sterilt saltvann.
3. Nedleggelse av Laparotomi og Skin
- Lukk bukveggen muskelen laget ved hjelp av en 5-0 flettet, absorberbare stående kjøring sutur.
- Tett hud med 1-3 dråper av polymerklebemiddel og deretter senere med sår klemmene når klebemiddelet er aktivert.
4. Recovery og Postoperativ Assessment
- Overfør mus til et gjenvinnings buret på en varmepute med mat og vann på gulvet i buret.
- Følge nøye med musen for tegn på åndenød. Administrer carprofen (5 mg / kg) daglig i 48 timer postoperativt per institusjonens retningslinjer.
- Ikke la et dyr uten tilsyn før det har gjenvunnet nok bevissthet til å opprettholde sternal recumBency.
- Returner musen til en normal bur med mat og vann.
- Ikke returner et dyr som har gjennomgått kirurgi i selskap med andre dyr før fullt restituert.
- Vurdere sår på daglig basis for dehiscence og fjerne klippene på postoperativ dag 14.
5. aortic Disseksjon og farging
- Velg mus for ofre basert på den spesifikke tidspunkt av interesse å følge denudasjon skade.
- Sacrifice mus via isofluran innånding og umiddelbart injisere med 5 mg metakolin klorid å forårsake vaskulær glatt muskelavslapning.
- Ved bekreftelse av død ved respiratoriske opphør, manglende korneal refleks og mangel på bevegelse, perfuse med 4% paraformaldehyd i fosfat-bufret saltløsning ved en perfusjonstrykk på 100 mm Hg via det venstre hjertekammer etter 10 min.
- Bruk en dissekere stereo å nøye skille intakt abdominal aorta fradet omgivende vev.
- Transektet aorta rostral til nyrearteriene og hale til hoftedelinger og åpnet via en langsgående snitt langs ryggflaten.
- Pin aorta flate på en 35 mm silikonbelagt tallerken med den luminale siden opp for fiksering i ikke mindre enn to timer, men ikke mer enn 12 timer. Deretter kan vevet enten innebygd for seksjonering eller brukes i en face hel-mount immunocytochemistry.
- Mount farget Aorta med luminal side som vender mot dekkglass på objektglass for konfokalmikroskopi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Åttifem mus har gjennomgått overlevelsen kirurgiske teknikken som er beskrevet i denne rapporten for infrarenale abdominale aorta klem. Den totale overlevelsen var 85,9%. Operative komplikasjoner inkludert intestinal blødning og store kar perforering, noe som resulterer i 5,9% og 3,5% dødelighet henholdsvis (tabell 1). Etter utvinning fra anestesi, mus gå normalt og viser ingen tegn på iskemisk skade på dårligere lemmer. Ingen vekttap eller manglende appetitt ble notert.
Figurene 1A og 1B viser bilder av den infrarenale abdominale aorta etter laparotomi og retroperitoneal disseksjon under stereomikroskop uten (A) og med (B) aortisk klemming. Som vist, er det viktig å klemme aorta bredde i sin helhet for å sikre denudasjon langs bredden av aorta. Vår protokollen fant at bruk av skarp sving Schwartz Micro Serrefinstoff med en kjeve bredde på 1,75 mm og «sterk» klemme presse produserte den største sammenhengende såret over hele bredden av aorta med minimal klemme tid. Imidlertid ble klemme testet ved flere okklusjon tidsintervaller med varierende skade størrelser (figur 1C). Resten av resultatene presentert ble fremstilt ved bruk av ovennevnte klemme.
Histologisk evaluering av aorta demonstrerer fullstendig denudasjon av den endoteliale foring med moderat skade på det underliggende lag av glatte muskelceller som vist ved H & E farging. Denudasjon av endotelet skjer ved både 10 sek og 10 min, men i forskjellig grad (figur 2). For å bestemme den optimale aorta klemtidsintervall som kreves for fullstendig arteriell denudasjon, mus gikk klem i 10 sek, 1 min og 10 min og ble umiddelbart avlivet for analyse som beskrevet i den ovennevnte protokoll. Åreen av denudasjon økte med økende klem tidspunkter (figur 3). På 10 sek, en ufullstendig og ujevn denudasjon skade på omtrent 0,75 mm 2 ble identifisert ved usammenhengende fibrinogen-farging, hvor fibrinogen tjener som en markør for denudasjon skade. Ti minutter av aorta klem produsert en helt ribbet endothelial område på ca 1,2 mm 2, men denne tid av klem ble ansett høy risiko for lem iskemi og reperfusjon skade. Som sådan, anses vi 1 min av aorta klem tilstrekkelig, noe som ga en 0.88 mm 2 område av denudasjon i snitt, for å resultere i nær komplett arteriell skade denudasjon uten tegn på iskemisk skade.
Graden av skade denudasjon med 1 min av aorta klem er meget reproduserbar, produsere en 600 um diameter og 0,88 mm 2 område av denudasjon (figur 3 og 4). DeIntensiteten av fibrinogen farging er tilstrekkelig til å identifisere den opprinnelige skade ved senere tidspunkter. Figur 4 viser fibrinogen farging av tre mus som gjennomgikk en min av aorta klem 24 timer før avlivelse, skaper en meget reproduserbar skade. Måling av fibrinogen flekker 24 timer etter skade på seks Aorta er omtrent 0,81 mm 2 (figur 5A), statistisk lik 0,88 mm 2 skade bemerkes umiddelbart etter skade (p = 0,14). Sammenlignet med uskadd endotelet, såret margin 24 timer etter skaden viser trekkende endotelceller med overliggende fibrinogen farging, merking re-endotelialisering inn i denudasjon skade (figur 5B). I gjennomsnitt, fullstendig re-endotelialisering av 0,88 mm 2 denudasjon skade tok omtrent 3 dager. Men denne metoden kan videre tilpasses for å produsere enda større denudasjon skader. Fastklemming flere ganger, hveri 1 min, fra rostralt til kaudal langs den infrarenale aorta produserte en 3,7 mm 2 denudasjon skade. Selv om denne tilnærmingen også skader tunica media, har vi aldri sett disseksjon av abdominal aorta som følge av klemskader.
Denne protokollen viser at infrarenale abdominale aorta klem kan trygt utføres i en murin modell for det formål å skape en arteriell denudasjon skade og måling av endotelial regenerering.
Fig. 1: Isolert infrarenale abdominale aorta isolert infrarenale abdominale aorta er vist uten (A) og med (B) en vaskulær klemme. Flere klemmer av ulike lengder og klemme trykk styrke ble brukt til å velge den som tilbyr konsekvent skade (C). The Schwartz Micro Serrefine (pil) produserte de største sammenhengende såret. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: Effektiviteten av avdekning av endothelceller H & E farging av en infrarenale abdominale aorta avsnitt i en ikke-skadede mus (A) og etter 10 sek (B) og 10 min av aortisk klemming (C).. Vaskulær klem helt denudes endothelial lag, som kan bekreftes ved fravær av kjerner farging. Også tap av glatte muskelcellekjerner viser skader på tunica media. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3:. Forholdet mellom Clamp Tid til Wound Lengde infrarenale abdominale aorta klem ble utført i 10 sek, 1 min og 10 min. Umiddelbart etter skade, ble immunocytochemistry utført en face for en humbug kirurgi og disse tidspunkter som vist (A) og med høyere oppløsning (B). Fibrinogen (i lilla) viser til området for skade. β-catenin (i rødt) identifiserer endotelceller grenser. Stjernen (*) markerer det klemmen bruksområde. Fravær av β-catenin betegner mangel på endotelceller i området for skade. (C) bruker fibrinogen flekker som en markør for denudasjon skade område for å vise at økende klem tid øker denudasjon område (n = 2 for hvert tidspunkt). Feilfelt representerer standardavvik. Vennligst klikk here for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4:. Identifikasjon av skaden området Tjuefire timer etter aortic klem i 1 minutt, ble aorta dissekert og kuttet for å avsløre tunica intima. Etter fiksering i 4% paraformaldehyde, ble immunocytochemistry utført en face. Fibrinogen (i lilla) viser til området for skade (A). Høyere forstørrelse av såret margin (B) og innen såret (C) vises. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5: Reproduserbarhet av denudasjonSkade og identifikasjon av Re-endotelialisering. Tjuefire timers etter skade, ble aorta dissekert som nevnt og gjennomgikk immunocytochemistry en face. Ved hjelp av fibrinogen som en markør for denudasjon skade, er en meget reproduserbar skade observert i (A) med en midlere denudasjon areal på 0,81 mm 2 (n = 6). Høyere oppløsning viser at såret margin utstillinger fibrinogen farging og trekkende endotelceller (piler, lilla flekker) (B) sammenlignet med uskadd endotelet (C). Feilfelt representerer standardavvik. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Tabell 1:. Operativ og Postoperativ dødelighet totalt 85 mus underwent overlevelse infrafrenal abdominal aortic klem med en overlevelse på 85,9%. Åtte mus (9,4%) overlevde ikke operasjonen på grunn av tarmblødning eller stor kar perforering. Fire mus døde postoperativt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Arteriell denudasjon skade på grunn av perkutane intervensjoner, for eksempel ballong angioplastikk og vaskulær stenting, resultere i tidlig og sen vaskulær trombose og restenose og bidrar til tilbakevendende iskemi 3,12. Interessant nok har kirurgisk vaskulær klem også vært innblandet som en årsak til arteriell denudasjon, utvide omfanget av problemet til pasienter som gjennomgår alle vaskulære prosedyre, enten perkutan eller åpen 13. Mens svekket re-endotelialisering er en forholdsvis anerkjent årsak til trombose og restenose, har de molekylære mekanismene som omgir re-endotelialisering vært vanskelig å belyse. Dyremodeller har blitt en nødvendighet for å få ytterligere forståelse av re-endotelialisering følgende arteriell denudasjon skade.
Eksisterende dyremodeller for å studere cellulære og molekylære effekter av arteriell denudasjon skader inkludere disse i svin, kanin og gnager 7,9-11. gnagere models hyppig brukt omfatte rottehalspulsåren ballong skade modell, musen ledningen skaden modell, og rotte og mus ligation modeller 14,15. Mens rottehalspulsåren ballongskade-modellen er den best karakteriserte og mest brukt, har carotis skadefremgangsmåtene beskrevet av Lindner i mus utvidet mulighetene for å bruke transgene stammer 16,17. Genmodifiserte musemodeller redusert forekomst av potensielle off-target effekter og spesifisitet problemstillinger knyttet til farmakologiske hemmere, og kan gi rom for vev-spesifikke og betinget ablasjon av spesifikke elementer av interesse. Likevel er carotis skader i mus ekstremt utfordrende og vanskelig å utføre.
Den murine arterielle denudasjon modell av den infrarenale abdominale aorta som beskrives her er forholdsvis lett å anvende og gjør det mulig for studier av re-endotelialisering av et stort kaliber arterien in vivo. Operasjoner utstilt en akseptabel surVival sats på 85,9%. Viklet lengde er avhengig av klemmen kjeve dimensjon, styrken av klemmepresse, og hvor lenge den vaskulære klemmen okkludering av fartøyet. Denne modellen benytter et 10 x 1,75 mm kjeve dimensjon og "sterk" klemme trykk i 1 min for å produsere en 0,88 mm 2 denudasjon skade som er reproduserbar. Variasjon i såret lengde ble observert med ulike kjeve dimensjoner og lengden på fartøyet okklusjon. I tillegg kan det området av denudasjon utvides ved serielt å klemme den infrarenale abdominale aorta fra rostralt til caudal. Som sådan, tilbyr denne modellen allsidighet i denudasjon skade størrelse som kan bli manipulert til å passe en studie som mål.
For å vurdere graden av skade og endoteliale nedleggelse priser etter skade, ble immunocytokjemi utført ved forskjellige tidspunkter med antistoffer dannet mot β-catenin for å identifisere endotelcelle veikryss eller ERG for å identifisere endoteliale cellekjerner og fibrinogen for å identifisere than skadet område. Som re-endotelialisering oppsto, ble fibrinogen farging brukt til å identifisere den opprinnelige skade i forhold til den grad av re-endotelialisering. Mens den sterke farging av fibrinogen blir betydelig dempet etter gjenvekst av endotelet, der gjenstår tilstrekkelig intensitet til å identifisere den opprinnelige skade selv etter minst 4 dager etter operasjonen.
Denne modellen er ikke uten begrensninger. Som med alle dyr modell, krever murine kirurgi god kirurgisk teknikk og innebærer en læringskurve. Mus kan fort gi etter for fartøy perforering om disseksjon ikke utføres med forsiktighet, som er noen ganger umulig å kontrollere. De vanligste årsakene til operativ døds inkludert intestinal blødning og store fartøy perforering, på 5,9% og 3,5%, henholdsvis. Men med forsiktig disseksjon, er blødning sjeldne og blodtap kan vanligvis holdes på under 0,1 ml i vår erfaring. I tillegg er tilstrekkelig disseksjon av aorta og riktig klemmeplassering er integrert i en reproduserbar skade. Mens undersøke distale aorta pulsatility kan anvendes for å bekrefte fullstendig aorta-okklusjon, å fjerne all retroperitonealt vev adherent til aorta er avgjørende for å oppnå en ren, uavbrutt sår. Som nevnt tidligere, er skade på tunica media observert med denne fremgangsmåten i aorta fastspenning. Imidlertid er mediale glattmuskel død et velkjent følge av langvarig eller kronisk vaskulær utvidelse på grunn av stent, og resulterer i påfølgende neointimal hyperplasi 18. Medial skader i vår modell ser ikke ut til å ha patologisk følgetilstander, som vi har ingen postoperative dødsfall og disse musene har overlevd opp til 2 måneder etter operasjonen.
Vi presenterer et allsidig murine modell av arteriell denudasjon skade av infrarenale bukaorta som er reproduserbar med gode overlevelse. Denne modellen fyller et behov for å studere arteriell skade med et mangfold av transgene musemodeller. adopsjon of dette murine modellen kan brukes til å belyse de molekylære mekanismer for re-endotelialisering under normale og patologiske forhold.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noe å avsløre.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet med tilskudd fra Eli og Edythe Bred Center of Regenerative Medicine og stamcelleforskning ved UCLA Training Program for å ASS og AIM, Philip J. Whitcome Fellowship til AIM, og National Institutes of Health (HL130290) til MLIA.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zeiss Discovery.V12 Stereomicroscope | Zeiss | 495037-9904-000 | |
| Rodent Heated Surgical Platform | Protech International | RES4000 | Heated platform for body temperature maintenance with nosecone for anesthestic maintenance and on which surgical procedure is performed |
| Isoflurane | Henry Schein | 50033 | 4% Induction; 2.5% Maintenance |
| Isoflurane Vaporizer | Summit Medical Equipment | 470062 | |
| Stryker T/Pump Warm Water Recirculator | Kent Scientific | TP-700 | |
| Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Carprieve (Carprofen) | Norbrook Laboratories | NDC 55529-131-01 | |
| Oster™ A5 Professional Animal Clipper | M.Schneider & Sons Inc. | 78005010 | Use with animal clipper size 40 |
| Adjustable Wire Retractor | Fine Science Tools | 17004-05 | |
| Schwartz Micro Serrefines - Sharp Bend | Fine Science Tools | 18052-03 | |
| Surgical Instruments | Fine Science Tools | sharp dissecting forceps, blunt forceps, fine scissors, spring scissors, hemostat | |
| 0.5% Marcaine | Hospira | 0409-1610-50 | |
| 5-0 Suture, Vicryl | Fisher Scientific | NC0189890 | tapered needle |
| Vetbond | Fisher Scientific | NC0304169 | |
| Falcon® 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish | Corning | 351008 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | 3097358-1004 | |
| Dissecting pins | Fisher Scientific | NC9681411 |
References
- Farooq, V., Gogas, B. D., Serruys, P. W. Restenosis: delineating the numerous causes of drug-eluting stent restenosis. Circ Cardiovasc Interv. 4, 195-205 (2011).
- Tada, T., et al. Risk of stent thrombosis among bare-metal stents, first-generation drug-eluting stents, and second-generation drug-eluting stents: results from a registry of 18,334 patients. JACC Cardiovasc Interv. 6, 1267-1274 (2013).
- Otsuka, F., et al. The importance of the endothelium in atherothrombosis and coronary stenting. Nat Rev Cardiol. 9, 439-453 (2012).
- Kipshidze, N., et al. Role of the endothelium in modulating neointimal formation: vasculoprotective approaches to attenuate restenosis after percutaneous coronary interventions. J Am Coll Cardiol. 44, 733-739 (2004).
- Finn, A. V., et al. Pathological correlates of late drug-eluting stent thrombosis: strut coverage as a marker of endothelialization. Circulation. 115, 2435-2441 (2007).
- Joner, M., et al. Pathology of drug-eluting stents in humans: delayed healing and late thrombotic risk. J Am Coll Cardiol. 48, 193-202 (2006).
- Joner, M., et al. Endothelial cell recovery between comparator polymer-based drug-eluting stents. J Am Coll Cardiol. 52, 333-342 (2008).
- McDonald, A. I., Iruela-Arispe, M. L. Healing arterial ulcers: Endothelial lining regeneration upon vascular denudation injury. Vascul Pharmacol. 72, 9-15 (2015).
- Fingerle, J., Tina Au, Y. P., Clowes, A. W., Reidy, M. A. Intimal Lesion Formation in Rat Carotid Arteries after Endothelial Denudation in Absence of Medial Injury. Arteriosclerosis. 10, 1082-1087 (1990).
- Granada, J. F., et al. Vascular response to zotarolimus-coated balloons in injured superficial femoral arteries of the familial hypercholesterolemic Swine. Circ Cardiovasc Interv. 4, 447-455 (2011).
- Tulis, D. A. Rat carotid artery balloon injury model. Methods Mol Med. 139, 1-30 (2007).
- Bavry, A. A., Bhatt, D. L. Appropriate use of drug-eluting stents: balancing the reduction in restenosis with the concern of late thrombosis. Lancet (London, England). 371, 2134-2143 (2008).
- Gucu, A., et al. Effects of temporary vascular occluder poloxamer 407 Gel on the endothelium. J Cardiothorac Surg. 8, (2013).
- Holt, A. W., Tulis, D. A. Experimental Rat and Mouse Carotid Artery Surgery: Injury & Remodeling Studies. ISRN Minim Invasive Surg. 2013, (2013).
- Nam, D., et al. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297, 1535-1543 (2009).
- Lindner, V., Fingler, J., Reidy, M. A. Mouse Model of Arterial Injury. Circ Res. 73, 792-796 (1993).
- Kumar, A., Lindner, V. Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 17, 2238-2244 (1997).
- Hehrlein, C., Weinschenk, I., Metz, J. Long period of balloon inflation and the implantation of stents potentiate smooth muscle cell death. Possible role of chronic vascular injury in restenosis. Int J Cardiovasc Intervent. 2, 21-26 (1999).
