Summary
La comprensione dei meccanismi cellulari e molecolari di ri-endothelialization a seguito di infortunio denudazione arteriosa è di fondamentale importanza nella prevenzione della trombosi e ristenosi delle arterie. Qui si descrive un protocollo per riproducibili lesione arteriosa denudazione dell'aorta addominale sottorenale. La procedura è stata sviluppata per studiare i meccanismi di base che regolano la rigenerazione endoteliale utilizzando modelli murini.
Abstract
interventi vascolari percutanei uniformemente provocano lesioni arteriose denudazione che poi portano alla trombosi e ristenosi. Queste complicazioni possono essere attribuiti a menomazioni a ri-endothelialization entro i margini della ferita. Tuttavia, i meccanismi cellulari e molecolari di ri-endothelialization restano da definire. Mentre diversi modelli animali per studiare ri-endothelialization dopo arteriosa denudazione sono disponibili, alcuni sono eseguiti nel topo a causa delle limitazioni chirurgici. Ciò compromette la possibilità di sfruttare linee di topi transgenici e indagare il contributo di geni specifici per il processo di ri-endotelizzazione. Qui, vi presentiamo un protocollo step-by-step per la creazione di un modello murino altamente riproducibile di lesioni arteriose denudazione in aorta addominale sottorenale con bloccaggio vascolare esterna. colorazione immunocitochimica di aorte feriti per il fibrinogeno e la β-catenina dimostrare l'esposizione di una superficie pro-tromboticad il confine di endotelio intatto, rispettivamente. Il metodo qui presentato ha i vantaggi di velocità, eccellente tasso di sopravvivenza globale, e la relativa facilità tecnica, creando un attrezzo unicamente pratico per imporre lesioni denudazione arteriosa in modelli di topi transgenici. Utilizzando questo metodo, gli investigatori possono chiarire i meccanismi di ri-endothelialization in condizioni normali o patologiche.
Introduction
Trombosi e restenosi sono gravi complicanze precoci e tardive nei pazienti che si sottopongono a interventi vascolari percutanee, come l'angioplastica e stenting endovascolare 1,2. Diverse strategie sono state impiegate per affrontare queste complicazioni, la terapia antipiastrinica particolare duale e stent medicati. Tuttavia, scarsa attenzione è stata posta sulla causa di fondo di trombosi e di restenosi, cioè la perdita di copertura delle cellule endoteliali (denudazione). lesioni denudazione è una conseguenza inevitabile delle procedure interventistiche a causa di un trauma meccanico alla parete dei vasi sanguigni. Questo trauma meccanico può causare danni e rimozione dello strato endoteliale protettivo ed esposizione della membrana basale e della muscolatura liscia vascolare al sangue circolante 3. La perdita di cellule endoteliali in queste aree crea un ambiente pro-trombotici e pro-infiammatorio che non solo promuove l'adesione piastrinica e la successiva trombosi, maLSO stimola la migrazione e la proliferazione delle cellule muscolari lisce vascolari con conseguente neointimale ispessimento e restenosi 4. Queste complicazioni, e le loro terapie associate, portano a una significativa morbidità, malattia ischemica in particolare ricorrenti e gli eventi emorragici impatto sulla salute umana.
Re-endotelializzazione della lesione denudato dai margini della ferita è di fondamentale importanza nella prevenzione della trombosi e ristenosi 5. Risultati dell'autopsia e modelli animali hanno dimostrato efficace aliquote ridotte di trombosi dello stent con una copertura di puntoni 6,7. Stent medicati, concepiti per ridurre i tassi di ristenosi inibendo la proliferazione liscio muscolare e neointimale, provocare disturbi significativi nella arteriosa ri-endotelizzazione e aumento dei tassi di trombosi tardiva 3. Purtroppo, la comprensione dei meccanismi di ri-endotelizzazione è un processo lento, ampiamente limitata dalla mancanza di apmodelli animali propriate 8.
Diversi modelli animali per comprendere i ruoli di cellule endoteliali e cellule muscolari lisce vascolari seguenti lesione arteriosa sono stati creati 7,9,10. Il palloncino dell'arteria carotide modello di lesione del ratto è la migliore caratterizzato ed è stato impiegato per studiare gli effetti di lesioni denudazione a livello lordo, cellulare e molecolare 11. Tuttavia, un modello murino altamente riproducibile di lesioni denudazione arteriosa con tassi di sopravvivenza eccellenti manca e tanto necessaria per sfruttare più linee transgeniche a disposizione per chiarire meglio la rigenerazione vascolare in più impostazioni.
Questo manoscritto presenta un modello murino di arteriosa lesioni denudazione che è riproducibile e semplice da eseguire. L'approccio ha mostrato morbilità e mortalità minima in diverse linee transgeniche. Grazie all'ampia numero di linee murine geneticamente modificati, questo modello può essere utilizzato perchiarire i meccanismi molecolari alla base ri-endothelialization dopo l'infortunio denudazione.
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Protocol
NOTA: Questo protocollo è stato approvato dal Comitato di ricerca degli animali presso l'Università della California di Los Angeles.
1. preoperatoria Preparazione e Anestesia
- Assicurarsi di osservare una tecnica sterile durante tutta la procedura.
- Sterilizzare tutte le forniture chirurgiche in autoclave a vapore.
- Attiva riscaldata roditore piattaforma chirurgica prima dell'induzione anestetica affinché possa riscaldare a temperatura adeguata (37 ° C) e posto sotto stereomicroscopio per la visualizzazione durante la procedura chirurgica.
- Posizionare il mouse nella camera di induzione di anestesia e indurre con 4% isoflurano ad una portata di 1 l / min.
- Monitorare attentamente il tasso e la zampa respiratoria colore della pelle di topo durante l'induzione.
- Dopo il rallentamento della frequenza respiratoria, rimuovere il mouse dalla camera di induzione e posizionare sul pad riscaldato per la preparazione chirurgica con la faccia in nosecone e manutenzione concentrazione isoflurano separata del 2,5%.
- Eseguire punta pizzico di valutare l'adeguatezza di anestetico.
- Applicare una pomata oftalmica per le cornee e amministrare carprofen preoperatorio (5 mg / kg) per via sottocutanea.
- Luogo del mouse tagliaunghie supina e utilizzare per rimuovere i capelli da addome.
- Preparare l'area chirurgica con tre scrub alternati di povidone iodio e il 70% di alcool isopropilico applicato con garze sterili.
- Posto in posizione supina del mouse su riscaldata piattaforma chirurgica roditore con la faccia in dell'ogiva e garantire tutte le estremità e con attenzione il mouse posizione tale che l'addome è visibile con lo stereomicroscopio.
- Mettere sterili, medicazioni adesive lungo i bordi del campo operatorio preparata.
- Titolare concentrazione isoflurano per mantenere un'adeguata anestesia durante l'intervento chirurgico, pur mantenendo respirazione spontanea.
2. infrarenale aortica bloccaggio
- Fare un 3 centimetri un'incisione lungo la linea mediana dell'addome con un bisturi, a partire approximately 0,5 cm inferiore al processo xifoideo.
- Delicatamente ritrarre la pelle con una pinza e sezionare la pelle di distanza dalla parete addominale con le forbici sottili per tagliare il tessuto connettivo multa.
- Applicare 0,05-0,1 ml di bupivacaina 0,5% alla parete muscolare ed effettuare un'incisione di 2 cm nella parete addominale per esporre gli organi addominali.
- Se l'emorragia si verifica lungo la parete addominale, applicare una leggera pressione con un applicatore con punta di cotone.
- Sollevare delicatamente l'intestino utilizzando applicatori con punta in cotone imbevuto di soluzione salina.
NOTA: Fare attenzione a non trauma contusivo al digiuno e le arterie ileale e posto in una calda, soluzione salina sterile imbevuta garza idrofila di fuori della cavità addominale.- Coprire l'intestino con un altro caldo, soluzione salina sterile garza imbevuta di spugna per evitare la perdita di umidità.
- Posizionare un divaricatore per lateralizzano retto ed esporre il retroperitoneo.
- Mettere piccole garze come necessario per la visualizzazione di retroperitoneum tenere traccia del numero utilizzato.
- A livello del polo inferiore del rene destro, utilizzare dissettore taglienti per effettuare una retroperitonotomy lateralmente all'aorta.
NOTA: Fare attenzione a non danneggiare la vena cava inferiore o vasi circostanti.- Senza mezzi termini sezionare il tessuto retroperitoneale fuori l'aorta facendo attenzione a non perforare la vena cava inferiore o vascolare circostante.
- Posizionare il morsetto vascolare sopra l'aorta per almeno 1 minuto, o altro periodo di tempo specificato, e verificare l'occlusione osservando visivamente mancanza di pulsatilità nell'aorta distale.
- Rimuovere il morsetto vascolare e verificare emostasi. L'emostasi è raggiunto e garantita quando non stravaso attivo di sangue è visto.
- Confermare stravaso con l'aggiunta di 0,5 ml di soluzione salina nella cavità addominale e valutare se la soluzione salina diventa sempre più tinto di sangue. Se questo è il caso, applicare una leggera pressione utilizzando l'applicatore imbevuta di soluzione salina per 1 min a garantireemostasi.
- Rimuovere eventuali garze disposte per aiutare nella visualizzazione del retroperitoneo e sostituire l'intestino in situ nell'addome.
- Irrigare la cavità addominale con soluzione fisiologica sterile pre-riscaldato.
3. Chiusura della laparotomia e della pelle
- Chiudere lo strato muscolare della parete addominale con un 5-0 intrecciata, assorbibile sutura singola esecuzione.
- Chiudere la pelle con 1-3 gocce di polimero adesivo e poi successivamente con clip ferita una volta che l'adesivo è impostato.
4. Recupero e valutazione postoperatoria
- Trasferire il mouse in una gabbia di recupero su una piastra elettrica con cibo e acqua sul pavimento della gabbia.
- Seguire da vicino il mouse per i segni di distress respiratorio. Somministrare Carprofen (5 mg / kg) al giorno per 48 ore dopo l'intervento secondo le linee guida dell'istituzione.
- Non lasciare un animale incustodito fino a quando non ha ripreso conoscenza sufficiente a mantenere recum sternaleBency.
- Ritorna il mouse per una gabbia normale con cibo e acqua.
- Non restituire un animale che ha subito un intervento chirurgico per la compagnia di altri animali fino alla completa guarigione.
- Valutare ferita su una base quotidiana per deiscenza e rimuovere clip sul post-operatorio giorno 14.
5. dissezione aortica e colorazione
- Selezionare topi per il sacrificio in base al punto di tempo specifico di interesse a seguito di infortunio denudazione.
- Sacrificio topi per inalazione isoflurano e immediatamente iniettare con 5 mg di cloruro di metacolina per causare vascolare rilassamento della muscolatura liscia.
- Alla conferma della morte per cessazione respiratoria, mancanza di riflesso corneale e mancanza di movimento, profumato con 4% paraformaldeide in tampone fosfato a una pressione di perfusione di 100 mmHg tramite il ventricolo sinistro del cuore per 10 min.
- Utilizzare uno stereomicroscopio dissezione per separare con attenzione l'aorta addominale intatto dali tessuti circostanti.
- Transetto rostrale dell'aorta alle arterie renali e caudale alla biforcazione iliaca e aperto attraverso una incisione longitudinale lungo la superficie dorsale.
- Pin l'aorta piatto su un piatto rivestito 35 millimetri silicone con il lato luminale per la fissazione per non meno di 2 ore, ma non più di 12 ore. Successivamente, il tessuto può essere sia incorporato per il sezionamento o utilizzato in en faccia tutto il montaggio immunocitochimica.
- Monte macchiato aorte con lato luminale di fronte al vetrino su vetrini per la microscopia confocale.
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Representative Results
Ottantacinque topi hanno subito la sopravvivenza tecnica chirurgica descritta in questo rapporto per infrarenale clampaggio aortico addominale. Il tasso di sopravvivenza globale è stata 85,9%. Complicazioni operative inclusi sanguinamento intestinale e ottimo perforazione del vaso, con conseguente mortalità 5,9% e 3,5% rispettivamente (Tabella 1). Dopo il recupero dall'anestesia, topi camminare normalmente e non mostrano segni di danno ischemico agli arti inferiori. Nessuna perdita di peso o la mancanza di appetito sono stati notati.
Figure 1A e 1B mostrano immagini dell'aorta addominale sottorenale seguenti laparotomia e la dissezione retroperitoneale allo stereomicroscopio senza (A) e con (B) clampaggio aortico. Come mostrato, è fondamentale per bloccare la larghezza aortica nella sua interezza per garantire denudazione lungo la larghezza della aorta. Il nostro protocollo ha trovato che l'uso di curva a gomito Schwartz Micro Serreammende con una larghezza ganasce di 1,75 mm e 'forte' premere clamp prodotto il più grande ferita continuo per tutta la larghezza dell'aorta tempo clamp minimo. Tuttavia, morse sono stati testati a vari intervalli di tempo occlusione con dimensioni pregiudizio variabili (Figura 1C). Il resto dei risultati presentati sono stati prodotti utilizzando il morsetto suddetto.
la valutazione istologica dell'aorta dimostra completo denudamento del rivestimento endoteliale con danni moderati allo strato sottostante cellule muscolari lisce come dimostrato dalla colorazione H & E. Denudation dell'endotelio avviene sia 10 sec e 10 min, anche se in misura diversa (Figura 2). Per determinare l'intervallo di tempo clampaggio aortico ottimale necessaria per la completa denudazione arteriosa, topi sottoposti serraggio per 10 sec, 1 min e 10 min e sono stati immediatamente sacrificati per l'analisi come descritto nel protocollo di cui sopra. l'AREuna di denudazione aumentata all'aumentare temporizzazioni morsetto (figura 3). A 10 secondi, un infortunio denudamento incompleta e frammentaria di circa 0,75 mm 2 è stato identificato da chiazze colorazione fibrinogeno, dove fibrinogeno serve come un marcatore per infortunio denudazione. Dieci minuti di clampaggio aortico hanno prodotto una superficie endoteliale completamente dissodata di circa 1,2 mm 2, ma questo lasso di tempo di serraggio è stato considerato ad alto rischio per l'ischemia e riperfusione. Come tale, abbiamo ritenuto 1 min di clampaggio aortico sufficiente, che ha prodotto una zona di 0,88 millimetri 2 di denudazione, in media, di provocare quasi completa lesione arteriosa denudazione senza evidenza di danno ischemico.
L'entità del danno denudazione con 1 min di clampaggio aortico è estremamente riproducibile, producendo un diametro di 600 micron e 0,88 millimetri 2 area di denudazione (figure 3 e 4). Ilintensità del fibrinogeno colorazione è sufficiente ad identificare la ferita originale in tempi successivi. La Figura 4 mostra fibrinogeno colorazione di tre topi sottoposti a 1 min di aortica serraggio 24 ore prima del sacrificio, creando una lesione altamente riproducibile. Misurazione del fibrinogeno colorazione 24 ore dopo la lesione di sei aorte è di circa 0,81 millimetri 2 (Figura 5A), statisticamente simile al pregiudizio 0,88 millimetri 2 osservato immediatamente dopo la lesione (p = 0,14). Rispetto al endotelio illeso, la ferita margine di 24 ore dopo gli spettacoli di lesioni migrazione delle cellule endoteliali con sovrastante fibrinogeno colorazione, la marcatura ri-endotelializzazione nella ferita denudazione (Figura 5B). In media, completa ri-endotelializzazione della lesione denudazione 0,88 millimetri 2 prese di circa 3 giorni. Tuttavia, questo approccio può essere ulteriormente adattato per produrre lesioni denudazione ancora più grandi. Bloccaggio più volte, ogniper 1 min, da rostrale caudale lungo sottorenale prodotto un pregiudizio denudazione 3,7 millimetri 2. Sebbene questo approccio danneggia anche la tunica media, non abbiamo mai osservato dissezione dell'aorta addominale a seguito della lesione morsetto.
Questo protocollo dimostra che infrarenale addominale clampaggio aortico può essere svolto in un modello murino ai fini della creazione di una lesione denudazione arterioso e misurando la rigenerazione endoteliale.
Figura 1:. Isolated infrarenale addominale dell'aorta addominale sottorenale Isolato aorta è mostrato senza (A) e (B) un morsetto vascolare. Diversi morsetti di varie lunghezze e premere morsetto forza sono stati usati per selezionare quello che offre pregiudizio consistente (C). La Schwartz Micro Serrefine (freccia) ha prodotto la più grande piaga continuo. Si prega di cliccare qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 2: Efficienza endoteliale Denudation H & E colorazione di una sezione dell'aorta addominale sottorenale in un mouse non danneggiato (A) e dopo 10 sec (B) e 10 min di clampaggio aortico (C).. Vascular bloccaggio denudes completamente lo strato endoteliale, come si può verificare per assenza di colorazione nuclei. Anche la perdita dei nuclei delle cellule muscolari lisce mostra danni alla tunica media. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 3:. Relazione tra morsetto tempo a ferire Lunghezza infrarenale clampaggio aortico addominale è stata eseguita per 10 sec, 1 min e 10 min. Immediatamente a seguito di infortunio, immunoistochimica è stata eseguita en face per un intervento chirurgico farsa e questi punti ora come mostrato (A) e con risoluzione più alta (B). Fibrinogeno (in viola) identifica l'area di lesioni. β-catenina (in rosso) identifica i confini endoteliali. L'asterisco (*) indica l'area di applicazione del morsetto. Assenza di β-catenina denota mancanza di cellule endoteliali nell'area della ferita. (C) utilizza fibrinogeno colorazione come marcatore di superficie lesioni denudamento dimostrare che aumentando il tempo di bloccaggio aumenta l'area denudazione (n = 2 per ogni punto di tempo). Barre di errore rappresentano la deviazione standard. Cliccate here per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 4:. L'identificazione della lesione Area Ventiquattro ore dopo il clampaggio aortico per 1 minuto, l'aorta è stato dissezionato e tagliato per esporre la tunica intima. Dopo la fissazione in paraformaldeide al 4%, immunoistochimica è stata eseguita en face. Fibrinogeno (in viola) identifica l'area di lesioni (A). Superiore di ingrandimento del margine della ferita (B) e all'interno della ferita (C) sono mostrati. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 5: riproducibilità di DenudationLesioni e identificazione di Re-endotelializzazione. Ventiquattro ore dopo un trauma, l'aorta è stato sezionato come immunocitochimica affermato ed ha subito en face. Utilizzando fibrinogeno come marcatore per lesioni denudazione, una lesione altamente riproducibile si osserva in (A) con superficie denudation medio di 0,81 mm 2 (n = 6). Immagini ad alta risoluzione mostrano che il margine della ferita mostre fibrinogeno colorazione e la migrazione delle cellule endoteliali (frecce, colorazione viola) (B) rispetto al endotelio indenne (C). Barre di errore rappresentano la deviazione standard. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Tabella 1:. Operativo e postoperatorio mortalità Un totale di 85 topi UNDERWent sopravvivenza infrafrenal clampaggio aortico addominale con un tasso di sopravvivenza del 85,9%. Otto topi (9,4%) non sono sopravvissuti un intervento chirurgico a causa di emorragia intestinale o grande perforazione del vaso. Quattro topi sono morti dopo l'intervento.
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Discussion
Arteriosa lesioni denudazione a causa di interventi percutanei, come l'angioplastica con palloncino e stent vascolare, provocare trombosi vascolare precoce e tardiva e la restenosi e contribuisce a eventi ischemici ricorrenti 3,12. È interessante notare che, bloccaggio vascolare chirurgica è stata anche coinvolta come causa di arteriosa denudazione, ampliando la portata del problema per i pazienti sottoposti a qualsiasi procedura vascolare, sia per via percutanea o aperti 13. Mentre compromessa ri-endotelizzazione è una causa abbastanza riconosciuta di trombosi e ristenosi, i meccanismi molecolari circostanti ri-endotelizzazione sono stati difficili da spiegare. I modelli animali sono diventati una necessità di acquisire una maggiore comprensione di ri-endotelializzazione dopo un trauma denudazione arteriosa.
Esistenti modelli animali per studiare gli effetti cellulari e molecolari delle lesioni denudazione arteriosa comprendono quelli nei suini, conigli e roditori 7,9-11. roditore models spesso utilizzati includono il modello di ratto carotide palloncino dell'arteria infortunio, il modello di danno del filo del mouse, e ratto e modelli di topo legatura 14,15. Mentre il palloncino dell'arteria carotide modello di lesione del ratto è la migliore caratterizzata e più comunemente utilizzati, le procedure di lesioni carotideo descritte da Lindner nei topi hanno ampliato le possibilità di utilizzo di ceppi transgenici 16,17. modelli murini geneticamente modificati diminuita l'incidenza dei potenziali effetti off-target e problemi di specificità connesse con gli inibitori farmacologici, e possono permettere per il tessuto-specifica e condizionato l'ablazione di elementi specifici di interesse. Tuttavia, lesioni carotideo nel topo è estremamente impegnativo e difficile da eseguire.
Il modello arteriosa denudazione murino dell'aorta addominale sottorenale qui descritto è relativamente facile da applicare e consente studi di ri-endotelizzazione di una grande arteria di calibro in vivo. Ambulatori mostrato un sur accettabiletasso vivenza del 85,9%. lunghezza della ferita dipende dalla dimensione morsetto mascella, la forza della pressa pinza, e tempo in cui la pinza vascolare è occlude il vaso. Questo modello utilizza una dimensione mm mascella 10 x 1,75 e 'forte' stampa morsetto per 1 min per produrre una lesione 0,88 millimetri 2 denudazione che è altamente riproducibile. La variabilità della lunghezza della ferita è stata osservata con diverse dimensioni della mascella e la lunghezza di occlusione del vaso. Inoltre, l'area di denudazione può essere espansa in serie bloccaggio dell'aorta addominale infrarenale da rostrale caudale. Come tale, questo modello offre la versatilità di denudamento dimensioni infortunio che può essere manipolato per adattare il proprio studio mira.
Per valutare l'entità del pregiudizio e endoteliali tassi di chiusura a seguito di infortunio, immunocitochimica è stata eseguita in vari momenti con anticorpi contro la β-catenina per identificare giunzioni cellulari endoteliali o ERG per identificare nuclei delle cellule endoteliali e fibrinogeno per identificare tha ferito zona. Come verificato ri-endotelizzazione, fibrinogeno colorazione è stato utilizzato per identificare la lesione originale rispetto al punto di re-endotelializzazione. Mentre la forte colorazione del fibrinogeno è significativamente attenuato dopo la ricrescita dell'endotelio, resta intensità sufficiente per identificare la lesione originaria anche dopo almeno 4 giorni dopo l'intervento chirurgico.
Questo modello non è senza limitazioni. Come con qualsiasi modello animale, la chirurgia murino richiede una buona tecnica chirurgica e comporta una curva di apprendimento. I topi può soccombere rapidamente alla perforazione peschereccio, se la dissezione non viene eseguita con cura, che a volte è impossibile da controllare. Le cause più comuni di morte operatoria inclusi emorragia intestinale e di grande perforazione del vaso, al 5,9% e 3,5%, rispettivamente. Tuttavia, con un'attenta dissezione, l'emorragia è rara e la perdita di sangue di solito può essere ridotto al di sotto di 0,1 ml nella nostra esperienza. Inoltre, un'adeguata dissezione dell'aorta e morsetto correttaposizionamento è solidale ad una lesione riproducibile. Esaminando distale pulsatilità aortica può essere usato per confermare occlusione completa dell'aorta, rimuovendo tutte aderenti tessuto retroperitoneale all'aorta è fondamentale per ottenere un ambiente pulito, ferita ininterrotta. Come accennato in precedenza, i danni alla tunica media è rilevato con questa procedura di clampaggio aortico. Tuttavia, mediale morte muscolatura liscia è una conseguenza ben noto di espansione prolungata o cronica vascolare causa di impianto di stent, e risultati nelle successive iperplasia neointimale 18. danni mediale nel nostro modello non sembra avere sequele patologiche, come abbiamo nessuna morte postoperatorio e questi topi sopravvissuti fino a 2 mesi dopo l'intervento.
Presentiamo un modello murino versatile di lesioni denudazione arteriosa dell'aorta addominale sottorenale che è riproducibile con buon tasso di sopravvivenza. Questo modello colma una necessità per lo studio delle lesioni arteriose con un gran numero di modelli di topi transgenici. L'adozione of questo modello murino può essere utilizzata per chiarire i meccanismi molecolari di ri-endotelizzazione in condizioni normali e patologiche.
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Acknowledgments
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dal Eli e Edythe Broad Centro di Medicina Rigenerativa e ricerca sulle cellule staminali al programma di formazione UCLA a ASS e AIM, Philip J. Whitcome Fellowship per mirare e National Institutes of Health (HL130290) per MLIA.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zeiss Discovery.V12 Stereomicroscope | Zeiss | 495037-9904-000 | |
| Rodent Heated Surgical Platform | Protech International | RES4000 | Heated platform for body temperature maintenance with nosecone for anesthestic maintenance and on which surgical procedure is performed |
| Isoflurane | Henry Schein | 50033 | 4% Induction; 2.5% Maintenance |
| Isoflurane Vaporizer | Summit Medical Equipment | 470062 | |
| Stryker T/Pump Warm Water Recirculator | Kent Scientific | TP-700 | |
| Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Carprieve (Carprofen) | Norbrook Laboratories | NDC 55529-131-01 | |
| Oster™ A5 Professional Animal Clipper | M.Schneider & Sons Inc. | 78005010 | Use with animal clipper size 40 |
| Adjustable Wire Retractor | Fine Science Tools | 17004-05 | |
| Schwartz Micro Serrefines - Sharp Bend | Fine Science Tools | 18052-03 | |
| Surgical Instruments | Fine Science Tools | sharp dissecting forceps, blunt forceps, fine scissors, spring scissors, hemostat | |
| 0.5% Marcaine | Hospira | 0409-1610-50 | |
| 5-0 Suture, Vicryl | Fisher Scientific | NC0189890 | tapered needle |
| Vetbond | Fisher Scientific | NC0304169 | |
| Falcon® 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish | Corning | 351008 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | 3097358-1004 | |
| Dissecting pins | Fisher Scientific | NC9681411 |
References
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