Summary
Het begrijpen van de cellulaire en moleculaire mechanismen van re-endothelialisatie na arteriële ontbloting letsel is van het grootste belang bij het voorkomen van trombose en restenose van slagaders. Hier beschrijven we een protocol voor reproduceerbare arteriële erosie letsel van de infrarenale abdominale aorta. De procedure werd ontwikkeld om de onderliggende mechanismen die endotheliale regeneratie met behulp van muismodellen te regelen onderzoeken.
Abstract
Percutane vasculaire interventies uniform resulteren in arteriële denudatie verwondingen die vervolgens leiden tot trombose en restenose. Deze complicaties kunnen worden toegeschreven aan beperkingen in re-endothelialisatie in de wondranden. Toch is de cellulaire en moleculaire mechanismen van re-endothelialisatie nog moeten worden vastgesteld. Terwijl verschillende diermodellen re-endothelialisatie te bestuderen na arteriële denudatie worden geboden, die weinig uitgevoerd bij muizen door chirurgische beperkingen. Hierdoor de mogelijkheid om transgene muizenlijnen benutten en onderzoek de bijdrage van specifieke genen voor het proces van re-endothelialisatie. Hier presenteren we een stap-voor-stap protocol waardoor een sterk reproduceerbaar muizenmodel van arteriële schade erosie in de infrarenale abdominale aorta via externe vasculaire klemmen. Immunocytochemische kleuring van beschadigde aorta voor fibrinogeen en β-catenine tonen de blootstelling van een pro-trombotische oppervlak eend de rand van intact endotheel, respectievelijk. De hier gepresenteerde methode heeft de voordelen van snelheid, uitstekende algemene overleving, en de relatieve technische gemak, het creëren van een unieke praktisch hulpmiddel voor het opleggen van arteriële denudation letsel in transgene muismodellen. Met behulp van deze werkwijze kunnen de onderzoekers de mechanismen van re-endothelialisatie toe te lichten onder normale of pathologische omstandigheden.
Introduction
Trombose en restenose ernstige vroege en late complicaties bij patiënten die een percutane vasculaire interventies, zoals endovasculaire ballondilatatie en stenting 1,2 ondergaan. Verschillende strategieën zijn gebruikt om deze complicaties, in het bijzonder dual antiplatelet therapie en drug-eluting stents aan te pakken. Echter weinig nadruk gelegd op de onderliggende oorzaak van trombose en restenose, te weten het verlies van endotheelcellen dekking (denudatie). Erosie schade is een onvermijdelijk gevolg van interventionele procedures door mechanische trauma aan de vaatwand. Deze mechanische trauma kan beschadigen en verwijdering van de beschermende laag en endotheliale blootstelling van het basale membraan en vasculaire gladde spier bloedcirculatie 3. Het verlies van endotheelcellen in deze gebieden wordt een pro-trombotische en pro-inflammatoire omgeving die niet alleen bevordert bloedplaatjesadhesie en daaropvolgende trombose, maarlso stimuleert de migratie en proliferatie van vasculaire gladde spiercellen resulteert in neo-intimale verdikking en restenose 4. Deze complicaties, en de bijbehorende therapieën, leiden tot significante morbiditeit, met name terugkerende ischemische ziekte en bloeden gebeurtenissen die van invloed gezondheid van de mens.
Re-endothelialisatie van de ontblote letsel uit de wond marge is van het grootste belang bij het voorkomen van trombose en restenose 5. Autopsie resultaten en diermodellen hebben aangetoond effectief gereduceerd tarief van trombose met een dekking van stent stutten 6,7. Drug-eluting stents, bedacht om de tarieven van restenose te verminderen door het remmen van de proliferatie van gladde spieren en neointima hyperplasie, leiden tot aanzienlijke beperkingen van de arteriële re-endothelialisatie en het verhogen van de tarieven van de late trombose 3. Helaas, het begrijpen van de mechanismen die opnieuw endotheel is een langzaam proces, grotendeels beperkt door het gebrek aan ap geweestpropriate diermodellen 8.
Verschillende diermodellen voor het begrijpen van de rol van endotheelcellen en vasculaire gladde spiercellen na arteriële verwonding zijn gemaakt 7,9,10. De ratten halsslagader ballonletsel model is het beste gekarakteriseerd en werd toegepast om de effecten van erosie schade aan het grove, cellulair en moleculair niveau 11 bestuderen. Niettemin een zeer reproduceerbare murine model van arteriële verwonding erosie uitstekende overleving ontbreekt en veelgevraagde gebruik maken van meerdere transgene lijnen waarover vasculaire regeneratie betere opheldering worden in verschillende situaties.
Het manuscript geeft een murine model van arteriële verwonding erosie die reproduceerbaar en eenvoudig uit te voeren. De aanpak bleek minimale morbiditeit en mortaliteit bij verschillende transgene lijnen. Vanwege het brede aantal genetisch gemodificeerde muizenlijnen kan dit model worden gebruikt omophelderen van de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan re-endothelialisatie na ontbloting letsel.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
NB: Dit protocol is door het Comité Animal Research aan de Universiteit van Californië in Los Angeles is goedgekeurd.
1. Preoperatieve Voorbereiding en Anesthesie
- Zorg ervoor dat u een steriele techniek gedurende de hele procedure.
- Steriliseer alle chirurgische materialen met behulp van een stoom autoclaaf.
- Schakel verwarmde knaagdier chirurgische platform vóór anesthetische inductie opdat het opwarmen tot geschikte temperatuur (37 ° C) en plaats onder de stereomicroscoop voor visualisatie chirurgische procedure.
- Plaats de muis in de anesthesie inductie kamer en induceren met 4% isofluraan bij een debiet van 1 l / min.
- nauwlettend de ademfrequentie en voetzool huidskleur van de muis tijdens de inductie.
- Na het vertragen van de ademhaling, verwijder de muis van de inductie kamer en plaats op verwarmde pad voor chirurgische preparaat met gezicht in afzonderlijke neuskegel en onderhoud isofluraan concentratie van 2,5%.
- Voer teen knijpen om toereikendheid van verdoving te beoordelen.
- Toepassing oogzalf om de hoornvliezen en te beheren preoperatieve carprofen (5 mg / kg) subcutaan.
- Plaats de muis in rugligging en het gebruik clippers om haar van de buik te verwijderen.
- Bereid de chirurgische gebied met drie afwisselende scrubs van povidonjodium en 70% isopropylalcohol aangebracht met steriele gaasjes.
- Plaats de muis in rugligging op verwarmde knaagdier chirurgische platform met gezicht in neuskegel en veilige opslag van alle ledematen en zorgvuldig positie muis, zodat de buik zichtbaar is met de stereomicroscoop.
- Plaats steriele, hechtpleisters langs elke rand van de bereide operatiegebied.
- Titreer isofluraan concentratie adequate anesthesie te behouden tijdens de operatie met behoud van spontane ademhaling.
2. infrarenale aorta Spannen
- Maak een incisie van 3 cm beneden de middellijn van de buik met behulp van een scalpel, beginnend approximately 0,5 cm inferieur aan de processus xiphoideus.
- Zachtjes trekken de huid met een tang en ontleden de huid weg van de buikwand met behulp van fijne schaar om de fijne bindweefsel te snijden.
- Toepassen 0,05-0,1 ml 0,5% bupivacaïne de spierwand en een 2 cm incisie in de buikwand om de buikorganen bloot.
- Als bloeden optreedt langs buikwand, druk zachtjes met een wattenstaafje.
- Til de darmen met behulp van een zoutoplossing gedrenkte wattenstaafje applicators.
LET OP: Wees voorzichtig om stomp trauma aan de jejunale en ileale slagaders en plek te vermijden op een warme, steriele zoutoplossing gedrenkt gaasje spons buiten de buikholte.- Bedek de darmen met een ander warm, steriele zoutoplossing gedrenkt gaasje spons om vochtverlies te voorkomen.
- Plaats een oprolmechanisme aan het rectum lateralize en bloot de retroperitoneum.
- Plaats kleine gaasjes als nodig is voor visualisatie van retroperitoneum het bijhouden van het aantal gebruikte.
- Op het niveau van de onderste pool van de rechter nier, scherpe ontleden tang om een retroperitonotomy lateraal van de aorta maken.
LET OP: Wees voorzichtig met de vena cava inferior of de omliggende schepen niet te verwonden.- Botweg ontleden retroperitoneale weefsel van de aorta zorg dat u de inferieure vena cava of de omliggende vaatstelsel perforeren.
- Plaats de vasculaire klem via aorta gedurende ten minste 1 min, of andere bepaalde tijd, en controleert occlusie door visueel observeren gebrek aan pulsatiliteit in distale aorta.
- Verwijder de vasculaire klem en controleer hemostase. Hemostase wordt bereikt en gewaarborgd als er geen actieve bloeduitstorting wordt gezien.
- Bevestig extravasatie door het toevoegen van 0,5 ml zoutoplossing in de buikholte en beoordelen of het zoute steeds bloederig. Als dit het geval is, druk zachtjes met de zoutoplossing geweekte applicator gedurende 1 min te zorgenhemostase.
- Verwijder eventuele gaasjes geplaatst om te helpen bij visualisatie van retroperitoneum en darmen in situ te vervangen in de buik.
- Irrigeren de buikholte met behulp van voorverwarmde steriele zoutoplossing.
3. Sluiting van Laparotomie en Skin
- Sluit de buikwand spierlaag met een 5-0 gevlochten absorbeerbaar één doorlopende draad.
- Nauw huid met 1-3 druppels polymeerlijm en dan vervolgens met wondklemmen nadat de lijm is ingesteld.
4. Herstel en Postoperatieve Assessment
- Breng de muis een herstelkooi op een verwarmingselement met voedsel en water op de vloer van de kooi.
- Nauwlettend toezien op de muis op tekenen van ademnood. Dien carprofen (5 mg / kg) per dag gedurende 48 uur postoperatief richtlijnen per orgaan.
- Heeft een dier niet onbeheerd achter te laten tot het voldoende bewustzijn heeft herwonnen aan borstbeen recum behoudenBency.
- Zet de muis op een normale kooi met voedsel en water.
- Heeft een dier dat een operatie heeft ondergaan om het gezelschap van andere dieren tot volledig hersteld niet meer terug.
- Assess wond op een dagelijkse basis voor dehiscence en verwijder clips op postoperatieve dag 14.
5. Aorta Dissection en kleuring
- Selecteer muizen om te offeren op basis van de specifieke tijd point of interest na ontbloting letsel.
- Offer muizen via isofluraan inademing en direct injecteren met 5 mg methacholine chloride vasculaire relaxatie van gladde spieren veroorzaken.
- Na bevestiging van overlijden door respiratoire ophouden, gebrek aan corneareflex en gebrek aan beweging, perfuseren met 4% paraformaldehyde in fosfaatgebufferde zoutoplossing bij een perfusiedruk van 100 mmHg via de linker hartkamer voor 10 min.
- Gebruik een stereomicroscoop ontleden zorgvuldig scheiden van intacte abdominale aortade omliggende weefsels.
- Doorsnijden de aorta rostraal van de nierslagaders en caudaal van de iliacale bifurcatie en geopend via een longitudinale incisie langs het dorsale oppervlak.
- Speld de aorta plat op een 35 mm siliconen gecoate schaal met de luminale kant naar boven voor bevestiging voor niet minder dan 2 uur maar niet meer dan 12 uur. Vervolgens kan het weefsel ofwel worden ingebed voor het snijden of gebruikt en face whole-mount immunocytochemie.
- Mount gekleurd aorta met luminale zijde van de dekglaasje op glasplaatjes voor confocale microscopie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vijfentachtig muizen hebben het overleven chirurgische techniek in dit rapport voor infrarenale abdominale aorta vastklemmen beschreven ondergaan. De totale overleving bedroeg 85,9%. Operatieve complicaties opgenomen intestinaal bloeden en grote vat perforatie, waardoor 5,9% en 3,5% respectievelijk sterfte (Tabel 1). Na het herstel van de anesthesie, muizen normaal lopen en vertonen geen tekenen van ischemische schade aan de onderste ledematen. Geen gewichtsverlies of gebrek aan eetlust geconstateerd.
Figuren 1A en 1B tonen beelden van de infrarenale abdominale aorta na laparotomie en retroperitoneale ontleding onder de stereomicroscoop zonder (A) en (B) aorta klemmen. Zoals getoond, is het essentieel om de aorta breedte in zijn geheel knevel erosie zorgen over de breedte van de aorta. Ons protocol gevonden dat het gebruik van scherpe bocht Schwartz Micro Serreboeten met een kaak breedte van 1,75 mm en "sterke" klem druk produceerde de grootste samenhangende wond over de gehele breedte van de aorta met minimale klem tijd. Er werden echter andere klemmen getest op verschillende occlusie tijdsintervallen met een variabele letsel maten (figuur 1C). De rest van de resultaten die werden gemaakt met de hierboven genoemde klem.
Histologische evaluatie van de aorta toont volledige erosie van de endotheliale voering met matige schade aan de onderliggende gladde spiercellen laag zoals blijkt uit H & E kleuring. Denudatie van het endotheel optreedt bij zowel 10 sec en 10 min, zij het in verschillende mate (figuur 2). De optimale aorta klem- tijdsinterval nodig is voor volledige arteriële denudatie bepalen muizen ondergingen klemmen voor 10 sec, 1 min en 10 min en werden onmiddellijk opgeofferd voor analyse zoals beschreven in de bovenstaande protocol. het zijneen van erosie toe met toenemende klem timings (figuur 3). Op 10 sec, onvolledige en fragmentarische denudation letsel van ongeveer 0,75 mm 2 werd geïdentificeerd door kleuring fragmentarisch fibrinogeen, waarbij fibrinogeen dient als een marker voor denudatie letsel. Tien minuten van de aorta vastklemmen produceerde een volledig Denuded endotheliale oppervlakte van ongeveer 1,2 mm 2, maar dit bedrag van de tijd van het klemmende werd beschouwd als een hoog risico op ischemie en reperfusie letsel. Als zodanig aangemerkt we 1 min van aorta klemming voldoende, dat een 0,88 mm 2 gebied van erosie gemiddeld geproduceerd, om te resulteren in de buurt van volledige arteriële erosie letsel zonder aanwijzingen van ischemische letsel.
De mate van erosie schade met 1 min aorta klemming is zeer reproduceerbaar, wat een 600 urn diameter en 0,88 mm 2 gebied van erosie (figuren 3 en 4). Deintensiteit van fibrinogeen kleuring voldoende is om het oorspronkelijke letsel op latere tijdstippen te identificeren. Figuur 4 toont fibrinogeen kleuring van drie muizen die 1 min aorta klemmen 24 uur voorafgaand aan offeren ondergaan, waardoor een zeer reproduceerbare letsel. Meting van de fibrinogeen kleuring 24 uur na verwonding zes aorta ongeveer 0,81 mm 2 (figuur 5A), statistisch vergelijkbaar met de 0,88 mm 2 schade opgemerkt onmiddellijk na verwonding (p = 0,14). In vergelijking met ongedeerd endotheel, de wond marge 24 uur na verwonding shows migreren endotheelcellen met bovenliggende fibrinogeen kleuring, markering re-endothelialisatie in de erosie schade (Figuur 5B). Gemiddeld complete re-endothelialisatie van 0,88 mm 2 erosie verwonding duurde ongeveer 3 dagen. Deze benadering kan verder aangepast om nog grotere erosie verwondingen veroorzaken. Clamping meerdere keren pergedurende 1 min, rostraal van caudale langs de infrarenale aorta produceerde een 3,7 mm 2 denudatie letsel. Hoewel deze benadering ook schade aan de tunica media, hebben we nooit waargenomen ontleding van de abdominale aorta ten gevolge van de klem schade.
Dit protocol toont aan dat infrarenale abdominale aorta klemming veilig kan worden uitgevoerd in een muizenmodel met het oog op het creëren van een arteriële letsel en erosie meten endotheliale regeneratie.
Figuur 1:. Geïsoleerd infrarenale abdominale aorta Geisoleerd infrarenale abdominale aorta wordt getoond zonder (A) en (B) een vasculaire klem. Verscheidene klemmen van verschillende lengtes en clamp druk sterkte werden gebruikt om degene die consistent schade (C) heeft selecteren. De Schwartz Micro Serrefine (pijl) produceerde de grootste aaneengesloten wond. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: Efficiëntie van blootleggen van endotheelweefsel H & E kleuring van een infrarenale aorta gedeelte buik in een niet-verwonde muis (A) en na 10 sec (B) en 10 min aorta klemmen (C).. Vasculaire klemmen volledig denudes de endotheliale laag, zoals kan worden geverifieerd door afwezigheid van kernen kleuring. Ook het verlies van gladde spiercellen kernen toont schade aan de tunica media. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3:. De relatie tussen Clamp Time to Lengte Wound infrarenale abdominale aorta vastklemmen werd uitgevoerd gedurende 10 sec, 1 min en 10 min. Onmiddellijk na verwonding werd immunocytochemie uitgevoerd en gezicht voor een schijnvertoning operatie en deze tijdstippen zoals aangegeven (A) en met een hogere resolutie (B). Fibrinogeen (in het paars) identificeert het gebied van de schade. β-catenine (in het rood) identificeert endotheliale grenzen. Het sterretje (*) markeert de klem toepassingsgebied. Aangezien β-catenine geeft weinig endotheelcellen op het gebied van schade. (C) gebruikt fibrinogeen kleuring als marker van erosie schade vlak voor tonen dat het verhogen klemmen doorlooptijd van erosie gebied (n = 2 voor elk tijdstip). Fout balken geven de standaarddeviatie. Klik here om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4:. Identificatie van de Injury Area Vierentwintig uur na aortale klemmen voor 1 minuut, werd de aorta ontleed en gesneden om de tunica intima bloot. Na fixatie in 4% paraformaldehyde, werd immunocytochemie uitgevoerd en gezicht. Fibrinogeen (in het paars) identificeert het gebied van letsel (A). Hogere vergroting van de wond marge (B) en in de wond (C) getoond. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 5: reproduceerbaarheid van ontbossing en erosieSchade en Identificatie van Re-endothelialisatie. Vierentwintig uur na letsel, werd de aorta ontleed zoals vermeld en onderging immunocytochemie en gezicht. Gebruik fibrinogeen als marker voor denudatie letsel wordt zeer reproduceerbare letsel waargenomen in (A) met een gemiddelde denudation gebied van 0,81 mm 2 (n = 6). Hogere resolutie beelden tonen dat de wondrand vertoont fibrinogeen kleuring en migrerende endotheelcellen (pijlen, paarse kleuring) (B) in vergelijking met niet-beschadigde endotheel (C). Fout balken geven de standaarddeviatie. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Tabel 1:. Operative en postoperatieve mortaliteit Een totaal van 85 muizen underwent survival infrafrenal abdominale aorta klemmen met een overlevingskans van 85,9%. Acht muizen (9,4%) heeft geen operatie te overleven als gevolg van intestinale bloeding of een groot schip perforatie. Vier muizen stierven postoperatief.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Arteriële erosie letsel door percutane interventies zoals ballonangioplastiek en vasculaire stents, resulteren in een vroege en late vasculaire trombose en restenose en draagt bij aan recidiverende ischemische gebeurtenissen 3,12. Interessant is vasculaire chirurgische klemming ook geïmpliceerd als een oorzaak van arteriële erosie, uitbreiding van de omvang van het probleem aan patiënten elke vasculaire procedure ondergaat, of percutaan of 13 geopend. Terwijl een verminderde re-endothelialisatie is een vrij erkende oorzaak van trombose en restenose, hebben de moleculaire mechanismen rond re-endothelialisatie moeilijk te helderen geweest. Diermodellen noodzakelijk om verder begrip van re-endothelialisatie na arteriële verwonding blootleggen verkrijgen geworden.
Bestaande diermodellen om de cellulaire en moleculaire effecten van erosie arteriële verwonding bestuderen omvatten die bij varkens, konijnen en knaagdieren 7,9-11. knaagdier models vaak gebruikte onder meer de rat halsslagader ballon letsel model, de muis draad letsel model, en ratten en muizen ligatie modellen 14,15. Terwijl de rat halsslagader ballon letsel model is de beste gekarakteriseerd en meest gebruikte, de procedures carotis letsel door Lindner beschreven in muizen hebben de mogelijkheden van het gebruik van transgene stammen 16,17 verbreed. Genetisch gemodificeerde muismodellen verminderde de incidentie van potentiële off-target effecten en specificiteit kwesties in verband met farmacologische remmers, en kunnen zorgen voor weefsel-specifieke en voorwaardelijke ablatie van specifieke elementen van belang. Niettemin carotis letsel bij muizen is zeer uitdagend en moeilijk uit te voeren.
De murine model arteriële erosie van de infrarenale abdominale aorta beschreven is relatief eenvoudig aan te brengen en maakt studies van re-endothelialisatie van een groot kaliber slagader in vivo. Operaties vertoonde een aanvaardbare surVival tarief van 85,9%. Gewonden lengte is afhankelijk van de klem kaak dimensie sterkte van de klem pers, en hoelang de vasculaire klem afsluiten van het vat. Dit model maakt gebruik van een 10 x 1,75 mm kaak dimensie en de 'sterke' klem pers voor 1 min tot een 0,88 mm 2 erosie letsel dat is zeer reproduceerbaar te produceren. Variabiliteit in wond lengte werd waargenomen met verschillende kaak afmetingen en de lengte van het schip occlusie. Bovendien kan het gebied van erosie worden uitgebreid door serieel klemmen van de infrarenale abdominale aorta van rostraal van caudale. Als zodanig is dit model biedt veelzijdigheid in denudatie letsel grootte die kunnen worden gemanipuleerd om te passen iemands studie beoogt.
Om schade te bepalen en endotheliale afsluiting tarieven na verwonding te beoordelen, werd immunocytochemie uitgevoerd op verschillende tijdstippen met antilichamen opgewekt tegen β-catenine endotheliale cel contacten of ERG identificeren endotheliale celkernen en fibrinogeen te identificeren t identificerenhij gewond omgeving. Als opnieuw endothelialisatie plaatsvond, werd fibrinogeen kleuring gebruikt om het oorspronkelijke letsel te identificeren in vergelijking met de mate van re-endothelialisatie. Terwijl de sterke kleuring van fibrinogeen aanzienlijk verzwakt na hergroei van endotheel blijft er voldoende intensiteit om het oorspronkelijke letsel, zelfs na ten minste 4 dagen na de operatie te identificeren.
Dit model is niet zonder beperkingen. Zoals bij elk dier model, muizen een operatie vereist een goede chirurgische techniek en brengt een leercurve. Muizen kunnen snel bezwijken verblijf perforatie als dissectie niet uitgevoerd met zorg, die soms onmogelijk te controleren. De meest voorkomende oorzaken van operatieve dood opgenomen intestinale bloeding en grote schip perforatie, op 5,9% en 3,5% respectievelijk. Echter, met zorgvuldige dissectie, bloeding is zeldzaam en bloedverlies meestal tot onder 0,1 ml in onze ervaring bewaard. Bovendien adequate dissectie van de aorta en de juiste klemplaatsing is een integraal onderdeel van een reproduceerbare letsel. Terwijl behandeling distale aorta pulsatility kan worden gebruikt om volledige occlusie aorta bevestigen en het verwijderen van retroperitoneale weefsel aanhanger van de aorta is essentieel voor het verkrijgen van een schone, ononderbroken wond. Zoals eerder vermeld, wordt beschadiging van de tunica media opgemerkt deze procedure aorta klemmen. Echter, mediale gladde spier dood is een bekend gevolg van langdurige of chronische vasculaire uitzetting door stentimplantatie en leidt daaropvolgende neo-intimale hyperplasie 18. Mediale schade in ons model lijkt geen pathologische gevolgen hebben, omdat we geen postoperatief overlijden en deze muizen hebben overleefd tot 2 maanden na de operatie.
We presenteren een veelzijdig muizenmodel van arteriële erosie schade van de infrarenale abdominale aorta die reproduceerbaar met goede overlevingskansen. Dit model voorziet in een behoefte voor het bestuderen arteriële verwonding met een veelheid van transgene muismodellen. adoptie of dit muizenmodel kan worden gebruikt om de moleculaire mechanismen van re-endothelialisatie in normale en pathologische omstandigheden helderen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
Dit werk werd ondersteund door subsidies van de Eli en Edythe Broad Center van Regenerative Medicine en Stem Cell Research bij UCLA Training Program aan ASS en AIM, Philip J. Whitcome Fellowship om te richten, en de National Institutes of Health (HL130290) naar MLIA.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zeiss Discovery.V12 Stereomicroscope | Zeiss | 495037-9904-000 | |
| Rodent Heated Surgical Platform | Protech International | RES4000 | Heated platform for body temperature maintenance with nosecone for anesthestic maintenance and on which surgical procedure is performed |
| Isoflurane | Henry Schein | 50033 | 4% Induction; 2.5% Maintenance |
| Isoflurane Vaporizer | Summit Medical Equipment | 470062 | |
| Stryker T/Pump Warm Water Recirculator | Kent Scientific | TP-700 | |
| Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Carprieve (Carprofen) | Norbrook Laboratories | NDC 55529-131-01 | |
| Oster™ A5 Professional Animal Clipper | M.Schneider & Sons Inc. | 78005010 | Use with animal clipper size 40 |
| Adjustable Wire Retractor | Fine Science Tools | 17004-05 | |
| Schwartz Micro Serrefines - Sharp Bend | Fine Science Tools | 18052-03 | |
| Surgical Instruments | Fine Science Tools | sharp dissecting forceps, blunt forceps, fine scissors, spring scissors, hemostat | |
| 0.5% Marcaine | Hospira | 0409-1610-50 | |
| 5-0 Suture, Vicryl | Fisher Scientific | NC0189890 | tapered needle |
| Vetbond | Fisher Scientific | NC0304169 | |
| Falcon® 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish | Corning | 351008 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | 3097358-1004 | |
| Dissecting pins | Fisher Scientific | NC9681411 |
References
- Farooq, V., Gogas, B. D., Serruys, P. W. Restenosis: delineating the numerous causes of drug-eluting stent restenosis. Circ Cardiovasc Interv. 4, 195-205 (2011).
- Tada, T., et al. Risk of stent thrombosis among bare-metal stents, first-generation drug-eluting stents, and second-generation drug-eluting stents: results from a registry of 18,334 patients. JACC Cardiovasc Interv. 6, 1267-1274 (2013).
- Otsuka, F., et al. The importance of the endothelium in atherothrombosis and coronary stenting. Nat Rev Cardiol. 9, 439-453 (2012).
- Kipshidze, N., et al. Role of the endothelium in modulating neointimal formation: vasculoprotective approaches to attenuate restenosis after percutaneous coronary interventions. J Am Coll Cardiol. 44, 733-739 (2004).
- Finn, A. V., et al. Pathological correlates of late drug-eluting stent thrombosis: strut coverage as a marker of endothelialization. Circulation. 115, 2435-2441 (2007).
- Joner, M., et al. Pathology of drug-eluting stents in humans: delayed healing and late thrombotic risk. J Am Coll Cardiol. 48, 193-202 (2006).
- Joner, M., et al. Endothelial cell recovery between comparator polymer-based drug-eluting stents. J Am Coll Cardiol. 52, 333-342 (2008).
- McDonald, A. I., Iruela-Arispe, M. L. Healing arterial ulcers: Endothelial lining regeneration upon vascular denudation injury. Vascul Pharmacol. 72, 9-15 (2015).
- Fingerle, J., Tina Au, Y. P., Clowes, A. W., Reidy, M. A. Intimal Lesion Formation in Rat Carotid Arteries after Endothelial Denudation in Absence of Medial Injury. Arteriosclerosis. 10, 1082-1087 (1990).
- Granada, J. F., et al. Vascular response to zotarolimus-coated balloons in injured superficial femoral arteries of the familial hypercholesterolemic Swine. Circ Cardiovasc Interv. 4, 447-455 (2011).
- Tulis, D. A. Rat carotid artery balloon injury model. Methods Mol Med. 139, 1-30 (2007).
- Bavry, A. A., Bhatt, D. L. Appropriate use of drug-eluting stents: balancing the reduction in restenosis with the concern of late thrombosis. Lancet (London, England). 371, 2134-2143 (2008).
- Gucu, A., et al. Effects of temporary vascular occluder poloxamer 407 Gel on the endothelium. J Cardiothorac Surg. 8, (2013).
- Holt, A. W., Tulis, D. A. Experimental Rat and Mouse Carotid Artery Surgery: Injury & Remodeling Studies. ISRN Minim Invasive Surg. 2013, (2013).
- Nam, D., et al. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297, 1535-1543 (2009).
- Lindner, V., Fingler, J., Reidy, M. A. Mouse Model of Arterial Injury. Circ Res. 73, 792-796 (1993).
- Kumar, A., Lindner, V. Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 17, 2238-2244 (1997).
- Hehrlein, C., Weinschenk, I., Metz, J. Long period of balloon inflation and the implantation of stents potentiate smooth muscle cell death. Possible role of chronic vascular injury in restenosis. Int J Cardiovasc Intervent. 2, 21-26 (1999).
