Summary
La comprensión de los mecanismos celulares y moleculares de la re-endotelización después de una lesión arterial denudación es de suma importancia en la prevención de la trombosis y la reestenosis de las arterias. Aquí se describe un protocolo para la denudación lesiones arteriales reproducible de la aorta abdominal infrarrenal. El procedimiento fue desarrollado para investigar los mecanismos subyacentes que regulan la regeneración endotelial utilizando modelos de ratón.
Abstract
intervenciones vasculares percutáneos uniformemente resultan en lesiones arteriales de denudación que posteriormente conducen a la trombosis y restenosis. Estas complicaciones pueden atribuirse a deficiencias en la re-endotelización dentro de los márgenes de la herida. Sin embargo, los mecanismos celulares y moleculares de la re-endotelización aún no se han definido. Si bien varios modelos animales para el estudio de la re-endotelización después de la denudación arterial están disponibles, pocos se llevan a cabo en el ratón debido a las limitaciones quirúrgicas. Esto socava la oportunidad de explotar líneas de ratones transgénicos e investigar la contribución de los genes específicos para el proceso de re-endotelización. A continuación, presentamos un protocolo paso a paso para crear un modelo murino de lesión altamente reproducible denudación arterial en la aorta abdominal infrarrenal mediante fijación externa vascular. La tinción inmunocitoquímica de las aortas lesionados para el fibrinógeno y la β-catenina demostrar la exposición de una superficie de un pro-trombóticod la frontera del endotelio intacto, respectivamente. El método presentado aquí tiene las ventajas de velocidad, excelente tasa de supervivencia global, y la facilidad técnica relativa, la creación de una herramienta única práctico para la imposición de lesión arterial denudación en modelos de ratones transgénicos. Usando este método, los investigadores pueden dilucidar los mecanismos de re-endotelización en condiciones normales o patológicas.
Introduction
Trombosis y restenosis son graves complicaciones tempranas y tardías en los pacientes que se someten a intervenciones vasculares percutáneas, como la angioplastia con balón endovascular y la colocación de stents 1,2. Se han empleado varias estrategias para hacer frente a estas complicaciones, terapia antiplaquetaria dual y en particular stents liberadores de fármacos. Sin embargo, poca atención se ha colocado en la causa subyacente de la trombosis y la restenosis, es decir, la pérdida de la cobertura de células endoteliales (denudación). lesión Denudation es una consecuencia inevitable de los procedimientos de intervención, debido a trauma mecánico a la pared del vaso sanguíneo. Este trauma mecánico puede provocar daños y eliminación de la capa endotelial de protección y la exposición de la membrana basal y el músculo liso vascular de la sangre circulante 3. La pérdida de células endoteliales en estas áreas crea un ambiente pro-trombóticos y pro-inflamatoria que no sólo promueve la adhesión plaquetaria y subsiguiente trombosis, sino unalso estimula la migración y proliferación de células del músculo liso vascular que resulta en el engrosamiento de la neoíntima y reestenosis 4. Estas complicaciones, y sus terapias asociadas, conducen a una morbilidad significativa, enfermedad isquémica más notablemente recurrentes y episodios de sangrado que afectan la salud humana.
Re-endotelización de la lesión denudado de los márgenes de la herida es de suma importancia en la prevención de la trombosis y reestenosis 5. Resultados de la autopsia y modelos animales han demostrado efectivamente menores tasas de trombosis de stent con una cobertura de 6,7 puntales. Los stents liberadores de fármacos, concebidos para reducir las tasas de reestenosis mediante la inhibición de la proliferación del músculo liso y la hiperplasia neointimal, dar lugar a alteraciones significativas en la arteria re-endotelización y el aumento de las tasas de trombosis tardía 3. Desafortunadamente, la comprensión de los mecanismos de re-endotelización ha sido un proceso lento, en gran medida limitado por la falta de apmodelos animales apro- 8.
Varios modelos animales para la comprensión de las funciones de las células endoteliales y células del músculo liso vascular después de la lesión arterial se han creado 7,9,10. El modelo de lesión por balón de la arteria carótida de rata es el mejor caracterizado y se ha empleado para estudiar los efectos de la lesión de denudación en el nivel bruto, celular y molecular 11. Sin embargo, un modelo murino altamente reproducible de la denudación lesiones arteriales con excelentes tasas de supervivencia no está y muy necesaria para aprovechar las múltiples líneas transgénicas disponibles para elucidar mejor la regeneración vascular en múltiples configuraciones.
Este manuscrito presenta un modelo murino de lesión arterial denudación que es reproducible y fácil de realizar. El enfoque ha demostrado la morbilidad y la mortalidad mínima en varias líneas transgénicas. Debido a la amplia serie de líneas de ratones modificados genéticamente, este modelo se puede utilizar paradilucidar los mecanismos moleculares que subyacen a re-endotelización después de una lesión denudación.
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Protocol
NOTA: Este protocolo ha sido aprobado por el Comité de Investigación Animal de la Universidad de California en Los Ángeles.
1. Preparación preoperatoria y anestesia
- Asegúrese de observar una técnica estéril durante todo el procedimiento.
- Esterilizar todos los suministros quirúrgicos utilizando un autoclave de vapor.
- Encienda plataforma quirúrgica roedor calienta antes de la inducción de la anestesia de modo que pueda calentar a la temperatura apropiada (37 ° C) y se coloca bajo estereomicroscopio para la visualización durante el procedimiento quirúrgico.
- Coloque el ratón en la cámara de inducción de la anestesia e inducir con 4% de isoflurano a una velocidad de flujo de 1 L / min.
- Es importante vigilar cuidadosamente el tipo y color de la piel de la almohadilla plantar del ratón respiratoria durante la inducción.
- Después de disminución de la frecuencia respiratoria, retire el ratón desde la cámara de inducción y el lugar en el cojín calentado para la preparación quirúrgica con la cara en el cono de nariz y mantenimiento concentración de isoflurano separada del 2,5%.
- Realizar pizca dedo para asegurar la adecuación de la anestesia.
- Aplicar pomada oftálmica para las córneas y administrar carprofeno preoperatoria (5 mg / kg) por vía subcutánea.
- Lugar de cortar el ratón supina y su uso para eliminar el vello de abdomen.
- Preparar el área quirúrgica con tres friega alternantes de povidona yodada y 70% de alcohol isopropílico aplicado con gasas estériles.
- Supina lugar del ratón en la plataforma quirúrgica roedor se calienta con la cara en el cono de nariz y asegure todas las extremidades y cuidadosamente la posición del ratón de tal manera que el abdomen es visible con el microscopio estereoscópico.
- Colocar una gasa estéril, adhesivo a lo largo de cada borde del área quirúrgica preparada.
- Se valora la concentración de isoflurano para mantener la anestesia durante la cirugía adecuada, manteniendo la respiración espontánea.
2. pinzamiento aórtico infrarrenal
- Hacer un 3 cm incisión en la línea media del abdomen utilizando un bisturí, a partir approximately 0,5 cm por debajo del apéndice xifoides.
- retraer suavemente la piel con pinzas y diseccionar la piel de la pared abdominal usando tijeras finas para cortar el tejido conectivo fino.
- Aplicar 0,05-0,1 ml de bupivacaína al 0,5% a la pared muscular y hacer una incisión de 2 cm en la pared abdominal para exponer los órganos abdominales.
- Si se produce una hemorragia a lo largo de la pared abdominal, aplicar una presión suave con un aplicador con punta de algodón.
- levante suavemente los intestinos utilizando bastoncillos de algodón remojados en solución salina.
NOTA: Tenga cuidado de evitar un traumatismo directo en el yeyuno e íleon arterias y colocar en una solución salina esponja de gasa empapada caliente, estéril fuera de la cavidad abdominal.- Cubrir los intestinos con otra cálida, salina estéril esponja de gasa empapada para evitar la pérdida de humedad.
- Coloque un retractor para lateralizar el recto y exponer el retroperitoneo.
- Coloque pequeñas almohadillas de gasa, según sea necesario para la visualización de retroperitoneum hacer el seguimiento de la cantidad utilizada.
- A nivel del polo inferior del riñón derecho, el uso de fórceps de disección afilados para hacer una retroperitonotomy lateral a la aorta.
NOTA: Tenga cuidado de no lesionar la vena cava inferior o vasos circundantes.- Sin rodeos diseccionar el tejido retroperitoneal de la aorta teniendo cuidado de no perforar la vena cava inferior o la vasculatura circundante.
- Coloque la abrazadera vascular sobre la aorta durante al menos 1 min, u otro tiempo especificado, y verificar la oclusión observando visualmente la falta de pulsatilidad en la aorta distal.
- Retire la pinza vascular y verificar la hemostasia. La hemostasia se logra y se aseguró de que no se observa una extravasación activa de la sangre.
- Confirmar la extravasación mediante la adición de 0,5 ml de solución salina en la cavidad abdominal y evaluar si la solución salina vuelve cada vez más teñida de sangre. Si este es el caso, aplicar una presión suave con el aplicador empapada en solución salina durante 1 min para asegurarhemostasis.
- Retire cualquier gasas colocadas para ayudar en la visualización del retroperitoneo y reemplazar los intestinos in situ en el abdomen.
- Irrigar la cavidad abdominal con solución salina estéril pre-calentado.
3. El cierre de la laparotomía y la piel
- Cierre la capa muscular de la pared abdominal utilizando un 5-0 trenzada, absorbible sutura continua única.
- Cerrar la piel con 1-3 gotas de adhesivo de polímero y, posteriormente, con grapas para heridas una vez que se establece el adhesivo.
4. Recuperación y evaluación postoperatoria
- Transferir el ratón a una jaula de recuperación en una almohadilla de calefacción con agua y comida en el suelo de la jaula.
- Vigilar de cerca el ratón para detectar signos de dificultad respiratoria. Administrar carprofeno (5 mg / kg) diarios durante 48 horas después de la operación por directrices de la institución.
- No deje un animal sin vigilancia hasta que se haya recuperado el conocimiento suficiente para mantener Recum esternalBency.
- Vuelva a colocar el puntero del ratón a una jaula normal con comida y agua.
- No devuelva un animal que ha sido sometido a una cirugía para la compañía de otros animales hasta que esté completamente recuperado.
- Evaluar la herida sobre una base diaria para dehiscencia y eliminar clips en día postoperatorio 14.
5. La disección aórtica y tinción
- Seleccionar los ratones para el sacrificio basado en el punto de tiempo específico de interés después de una lesión denudación.
- Sacrificio ratones mediante inhalación de isoflurano y se inyecta inmediatamente con cloruro de metacolina 5 mg para causar relajación del músculo liso vascular.
- Tras la confirmación de la muerte por el cese respiratoria, la falta de reflejo corneal y la falta de movimiento, perfundir con 4% de paraformaldehído en solución salina tamponada de fosfato a una presión de perfusión de 100 mmHg a través del ventrículo izquierdo del corazón durante 10 min.
- Utilice un estereomicroscopio de disección para separar cuidadosamente la aorta abdominal intacta desdelos tejidos circundantes.
- Seccionar el rostral aorta a las arterias renales y caudal a la bifurcación ilíaca y se abrió mediante una incisión longitudinal a lo largo de la superficie dorsal.
- Pin de la aorta plana en un plato recubierto mm de silicona 35 con el lado luminal para la fijación por no menos de 2 horas pero no más de 12 hr. Posteriormente, el tejido puede ser embebido, ya sea para seccionar o utilizado en en toda la cara de montaje en inmunocitoquímica.
- Monte manchada con aortas lado luminal que enfrenta el cubreobjetos sobre el portaobjetos de vidrio para microscopía confocal.
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Representative Results
Ochenta y cinco ratones han sido sometidos a la técnica quirúrgica de supervivencia se describe en este informe para la sujeción de la aorta abdominal infrarrenal. La supervivencia global fue del 85,9%. Complicaciones operatorias incluyen sangrado intestinal y gran perforación del vaso, lo que resulta en 5,9% y 3,5% de mortalidad respectivamente (Tabla 1). Después de la recuperación de la anestesia, los ratones caminar normalmente y no muestran signos de lesión isquémica a las extremidades inferiores. No se observaron pérdida de peso o falta de apetito.
Las figuras 1A y 1B muestran imágenes de la aorta abdominal infrarrenal siguientes laparotomía y la disección retroperitoneal bajo el microscopio estereoscópico sin (A) y con (B) de fijación aórtica. Como se muestra, es de vital importancia para fijar la anchura de la aorta en su totalidad para asegurar la denudación a lo largo de la anchura de la aorta. Nuestro protocolo encontró que el uso de curva cerrada Schwartz Micro Serremultas con una anchura de mordaza de 1,75 mm y pulse abrazadera "fuerte" producen la mayor herida continua a través de toda la anchura de la aorta con un mínimo de tiempo de la abrazadera. Sin embargo, otras abrazaderas se ensayaron a varios intervalos de tiempo de oclusión con tamaños variables de lesiones (Figura 1C). El resto de los resultados presentados se produjeron utilizando la abrazadera mencionada.
La evaluación histológica de la aorta demuestra denudación completa del revestimiento endotelial con daño moderado a la capa de células de músculo liso subyacente como se demuestra por tinción con H & E. La denudación del endotelio se produce tanto a 10 seg y 10 min, aunque en diferentes grados (Figura 2). Para determinar el intervalo de tiempo pinzamiento aórtico óptima necesaria para la denudación arterial completa, los ratones se sometieron a fijación para 10 seg, 1 min y 10 min y se sacrificaron inmediatamente para el análisis como se describe en el protocolo anterior. el sonuna de denudación aumentó con el aumento de los tiempos de sujeción (Figura 3). En 10 segundos, una lesión denudación incompleta y desigual de aproximadamente 0,75 mm 2 se identificó mediante tinción con fibrinógeno irregular, en donde el fibrinógeno sirve como marcador de lesión denudación. Diez minutos de pinzamiento aórtico producen una zona endotelial completamente denudada de aproximadamente 1,2 mm 2, sin embargo esta cantidad de tiempo de sujeción que se consideran de alto riesgo de isquemia de las extremidades y la lesión por reperfusión. Como tal, hemos considerado 1 min de pinzamiento aórtico suficiente, lo que produce un área de 0,88 mm2 de denudación en promedio, para dar lugar a lesiones cerca de la denudación completa arterial sin evidencia de lesión isquémica.
La extensión de la lesión denudación con 1 min de pinzamiento aórtico es extremadamente reproducible, produciendo un diámetro 600 micras y 0,88 mm 2 área de denudación (Figuras 3 y 4). losintensidad de la tinción de fibrinógeno es suficiente para identificar la lesión original en puntos de tiempo posteriores. La figura 4 muestra la tinción de fibrinógeno de tres ratones que se sometieron a 1 min de la aorta de sujeción 24 horas antes del sacrificio, la creación de una lesión altamente reproducible. La medición de la tinción de fibrinógeno 24 hr después de la lesión de seis aortas es de aproximadamente 0,81 mm 2 (Figura 5A), estadísticamente similar a la lesión 0,88 mm 2 observado inmediatamente después de la lesión (p = 0,14). En comparación con el endotelio no lesionado, la herida margen de 24 horas después de la lesión muestra la migración de las células endoteliales con tinción recubre fibrinógeno, marcando re-endotelización en la lesión de denudación (Figura 5B). En promedio, completa re-endotelización de la lesión denudación 0,88 mm 2 tomó aproximadamente 3 días. Sin embargo, este enfoque puede ser adaptado adicionalmente para producir lesiones de denudación incluso más grandes. Apriete varias veces, cada unadurante 1 min, de rostral a caudal a lo largo de la aorta infrarrenal producido una lesión de denudación 3,7 mm 2. Aunque este enfoque también daña la túnica media, nunca hemos observado disección de la aorta abdominal, como resultado de la lesión de la abrazadera.
Este protocolo demuestra que infrarrenal pinzamiento aórtico abdominal puede realizarse con seguridad en un modelo murino para los fines de la creación de una lesión arterial denudación y la medición de la regeneración endotelial.
Figura 1:. Aislado abdominal infrarrenal de la aorta abdominal infrarrenal aorta aislada se muestra sin (A) y con (B) una pinza vascular. Varias pinzas de diferentes longitudes y pinza de prensa de fuerza se utilizan para seleccionar el que ofrece una lesión consistente (C). La Schwartz Micro Serrefine (flecha) produjo la mayor herida continua. Por favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: Eficiencia de Endotelial Denudación H & E tinción de una sección de la aorta abdominal infrarrenal en un ratón no lesionados (A) y después de 10 seg (B) y 10 min del pinzamiento aórtico (C).. Vascular sujeción despoja completamente la capa endotelial, como se puede verificar por la ausencia de tinción de los núcleos. También la pérdida de núcleos de células del músculo liso muestra daños en la túnica media. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3:. Relación de la abrazadera hora de la herida longitud de sujeción de la aorta abdominal infrarrenal se llevó a cabo durante 10 s, 1 min y 10 min. Inmediatamente después de la lesión, inmunocitoquímica se llevó a cabo en la cara para una cirugía simulada y estos puntos de tiempo como se muestra (A) y en una resolución más alta (B). El fibrinógeno (en púrpura) identifica el área de la lesión. β-catenina (en rojo) identifica las fronteras endoteliales. El asterisco (*) marca el área de aplicación de la abrazadera. La ausencia de β-catenina indica la falta de las células endoteliales en el área de la lesión. (C) utiliza la tinción de fibrinógeno como un marcador de zona de lesión denudación para demostrar que el aumento del tiempo de sujeción aumenta el área de la denudación (n = 2 para cada punto de tiempo). Las barras de error representan la desviación estándar. Por favor, haga clic hERE para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4:. Identificación de la lesión Area Veinticuatro horas después de pinzamiento aórtico durante 1 minuto, la aorta se disecó y se cortó para exponer la túnica íntima. Después de la fijación en paraformaldehído al 4%, inmunocitoquímica se realizó en face. El fibrinógeno (en púrpura) identifica el área de la lesión (A). Mayor aumento del margen de la herida (B) y dentro de la herida (C) se muestran. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 5: La reproducibilidad de DenudaciónLesiones e identificación de Re-endotelización. Veinticuatro horas después de la lesión, la aorta se disecó como inmunocitoquímica indicado y se sometieron en face. El uso de fibrinógeno como un marcador de la lesión de denudación, se observa una lesión altamente reproducible en (A) con un área de denudación media de 0,81 mm 2 (n = 6). Las imágenes de mayor resolución muestran que el margen de la herida tinción exposiciones fibrinógeno y la migración de las células endoteliales (flechas, de coloración púrpura) (B) en comparación con el endotelio no lesionado (C). Las barras de error representan la desviación estándar. Por favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Tabla 1:. La mortalidad operatoria y postoperatoria Un total de 85 ratones Underwla supervivencia ent infrafrenal pinzamiento aórtico abdominal con una tasa de supervivencia del 85,9%. Ocho ratones (9,4%) no sobrevivieron a la cirugía debido a una hemorragia intestinal o perforación de vasos grandes. Cuatro ratones murieron después de la operación.
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Discussion
Denudación lesiones arteriales debido a las intervenciones percutáneas, como la angioplastia con balón y colocación de stents vasculares, da lugar a trombosis y restenosis vascular temprana y tardía y contribuye a eventos isquémicos recurrentes 3,12. Curiosamente, fijación quirúrgica vascular también ha sido implicado como causa de la denudación arterial, la ampliación del alcance del problema de los pacientes sometidos a ningún procedimiento vascular, ya sea percutánea o abierta 13. Mientras alteración re-endotelización es una causa bastante reconocida de trombosis y restenosis, los mecanismos moleculares que rodean re-endotelización han sido difíciles de dilucidar. Los modelos animales se han convertido en una necesidad para lograr una mejor comprensión de la re-endotelización después de una lesión arterial denudación.
Existentes modelos animales para el estudio de los efectos celulares y moleculares de las lesiones arteriales denudación incluyen aquellos en los cerdos, conejos y roedores 7,9-11. mod roedoresels usados con frecuencia incluyen la arteria carótida de rata globo modelo de lesión, el modelo de lesión alambre de ratón, rata y ratón y modelos de ligación 14,15. Mientras que el modelo de lesión con balón de la arteria carótida de rata es el mejor caracterizado y utilizado más comúnmente, los procedimientos de lesión carotídea descritos por Lindner en ratones han ampliado las posibilidades de utilización de cepas transgénicas 16,17. modelos de ratones genéticamente modificados disminuyó la incidencia de los posibles efectos fuera de la meta y los problemas de especificidad asociados con los inhibidores farmacológicos, y pueden permitir el tejido-específica y condicional de ablación de elementos específicos de interés. Sin embargo, la lesión de la carótida en el ratón es extremadamente difícil y difícil de realizar.
El modelo murino denudación arterial de la aorta abdominal infrarrenal se describe aquí es relativamente fácil de aplicar y permite a los estudios de re-endotelización de una gran arteria de calibre in vivo. Cirugías mostró una aceptable surtasa de supervivencia del 85,9%. longitud de la herida depende de la dimensión de sujeción de la mandíbula, la fuerza de la prensa de sujeción, y la longitud de tiempo que la pinza vascular está ocluyendo el vaso. Este modelo utiliza una dimensión mm mandíbula 10 x 1,75 y prensa de sujeción "fuerte" de 1 min para producir una lesión de 0,88 mm 2 denudación que es altamente reproducible. La variabilidad en la longitud de la herida se observó con diferentes dimensiones de la mandíbula y la duración de la oclusión del vaso. Además, el área de denudación se puede ampliar mediante la sujeción en serie de la aorta abdominal infrarrenal de rostral a caudal. Como tal, este modelo ofrece versatilidad en tamaño lesión denudación que puede ser manipulada para adaptarse estudio uno de objetivos.
Para evaluar la extensión de las tasas de cierre de lesiones y endoteliales después de la lesión, inmunocitoquímica se llevó a cabo en varios puntos de tiempo con anticuerpos producidos contra β-catenina para identificar uniones de las células endoteliales o ERG para identificar núcleos de las células endoteliales y fibrinógeno para identificar tque se lesionó zona. Como ocurrió re-endotelización, se usó la tinción de fibrinógeno para identificar la lesión original en comparación con el grado de re-endotelización. Mientras que la fuerte tinción de fibrinógeno se atenúa significativamente después de nuevo crecimiento del endotelio, sigue existiendo la intensidad suficiente para identificar la lesión original incluso después de al menos 4 días después de la cirugía.
Este modelo no está exento de limitaciones. Al igual que con cualquier modelo animal, la cirugía murino requiere una buena técnica quirúrgica e implica una curva de aprendizaje. Los ratones pueden sucumbir rápidamente a perforación del vaso si la disección no se hace con cuidado, que a veces es imposible de controlar. Las causas más comunes de muerte operatoria incluyen hemorragia intestinal y gran perforación del vaso, en el 5,9% y 3,5%, respectivamente. Sin embargo, con una cuidadosa disección, hemorragia es rara y la pérdida de sangre por lo general se puede mantener por debajo de 0,1 ml en nuestra experiencia. Además, la disección adecuada de la aorta y la abrazadera adecuadacolocación es parte integral de una lesión reproducible. Si bien el examen de la pulsatilidad de la aorta distal se puede usar para confirmar la oclusión de la aorta completa, la eliminación de todo el tejido adherente retroperitoneal a la aorta es vital para la obtención de una herida limpia, sin interrupción. Como se mencionó anteriormente, el daño a la túnica media se observó con este procedimiento de pinzamiento aórtico. Sin embargo, la muerte medial del músculo liso es una consecuencia bien conocida de expansión prolongada o crónica vascular debido a la implantación del stent, y los resultados en la hiperplasia neointimal posterior 18. daños medial en nuestro modelo no parecen tener secuelas patológicas, ya que no tenemos la muerte postoperatoria y estos ratones han sobrevivido hasta 2 meses después de la operación.
Se presenta un modelo murino de lesión versátil denudación arterial de la aorta abdominal infrarrenal que es reproducible, con buenas tasas de supervivencia. Este modelo satisface una necesidad para el estudio de lesión arterial con una multitud de modelos de ratones transgénicos. adopción of este modelo murino se puede utilizar para elucidar los mecanismos moleculares de la re-endotelización en condiciones normales y patológicas.
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Disclosures
Los autores no tienen nada que revelar.
Acknowledgments
Este trabajo fue apoyado por becas de la Eli y Edythe Broad Center de Medicina Regenerativa e Investigación de Células Madre en el Programa de Formación de la UCLA para ASS y AIM, Philip J. Whitcome Beca para apuntar, y los Institutos Nacionales de Salud (HL130290) para MLIA.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zeiss Discovery.V12 Stereomicroscope | Zeiss | 495037-9904-000 | |
| Rodent Heated Surgical Platform | Protech International | RES4000 | Heated platform for body temperature maintenance with nosecone for anesthestic maintenance and on which surgical procedure is performed |
| Isoflurane | Henry Schein | 50033 | 4% Induction; 2.5% Maintenance |
| Isoflurane Vaporizer | Summit Medical Equipment | 470062 | |
| Stryker T/Pump Warm Water Recirculator | Kent Scientific | TP-700 | |
| Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Carprieve (Carprofen) | Norbrook Laboratories | NDC 55529-131-01 | |
| Oster™ A5 Professional Animal Clipper | M.Schneider & Sons Inc. | 78005010 | Use with animal clipper size 40 |
| Adjustable Wire Retractor | Fine Science Tools | 17004-05 | |
| Schwartz Micro Serrefines - Sharp Bend | Fine Science Tools | 18052-03 | |
| Surgical Instruments | Fine Science Tools | sharp dissecting forceps, blunt forceps, fine scissors, spring scissors, hemostat | |
| 0.5% Marcaine | Hospira | 0409-1610-50 | |
| 5-0 Suture, Vicryl | Fisher Scientific | NC0189890 | tapered needle |
| Vetbond | Fisher Scientific | NC0304169 | |
| Falcon® 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish | Corning | 351008 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | 3097358-1004 | |
| Dissecting pins | Fisher Scientific | NC9681411 |
References
- Farooq, V., Gogas, B. D., Serruys, P. W. Restenosis: delineating the numerous causes of drug-eluting stent restenosis. Circ Cardiovasc Interv. 4, 195-205 (2011).
- Tada, T., et al. Risk of stent thrombosis among bare-metal stents, first-generation drug-eluting stents, and second-generation drug-eluting stents: results from a registry of 18,334 patients. JACC Cardiovasc Interv. 6, 1267-1274 (2013).
- Otsuka, F., et al. The importance of the endothelium in atherothrombosis and coronary stenting. Nat Rev Cardiol. 9, 439-453 (2012).
- Kipshidze, N., et al. Role of the endothelium in modulating neointimal formation: vasculoprotective approaches to attenuate restenosis after percutaneous coronary interventions. J Am Coll Cardiol. 44, 733-739 (2004).
- Finn, A. V., et al. Pathological correlates of late drug-eluting stent thrombosis: strut coverage as a marker of endothelialization. Circulation. 115, 2435-2441 (2007).
- Joner, M., et al. Pathology of drug-eluting stents in humans: delayed healing and late thrombotic risk. J Am Coll Cardiol. 48, 193-202 (2006).
- Joner, M., et al. Endothelial cell recovery between comparator polymer-based drug-eluting stents. J Am Coll Cardiol. 52, 333-342 (2008).
- McDonald, A. I., Iruela-Arispe, M. L. Healing arterial ulcers: Endothelial lining regeneration upon vascular denudation injury. Vascul Pharmacol. 72, 9-15 (2015).
- Fingerle, J., Tina Au, Y. P., Clowes, A. W., Reidy, M. A. Intimal Lesion Formation in Rat Carotid Arteries after Endothelial Denudation in Absence of Medial Injury. Arteriosclerosis. 10, 1082-1087 (1990).
- Granada, J. F., et al. Vascular response to zotarolimus-coated balloons in injured superficial femoral arteries of the familial hypercholesterolemic Swine. Circ Cardiovasc Interv. 4, 447-455 (2011).
- Tulis, D. A. Rat carotid artery balloon injury model. Methods Mol Med. 139, 1-30 (2007).
- Bavry, A. A., Bhatt, D. L. Appropriate use of drug-eluting stents: balancing the reduction in restenosis with the concern of late thrombosis. Lancet (London, England). 371, 2134-2143 (2008).
- Gucu, A., et al. Effects of temporary vascular occluder poloxamer 407 Gel on the endothelium. J Cardiothorac Surg. 8, (2013).
- Holt, A. W., Tulis, D. A. Experimental Rat and Mouse Carotid Artery Surgery: Injury & Remodeling Studies. ISRN Minim Invasive Surg. 2013, (2013).
- Nam, D., et al. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297, 1535-1543 (2009).
- Lindner, V., Fingler, J., Reidy, M. A. Mouse Model of Arterial Injury. Circ Res. 73, 792-796 (1993).
- Kumar, A., Lindner, V. Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 17, 2238-2244 (1997).
- Hehrlein, C., Weinschenk, I., Metz, J. Long period of balloon inflation and the implantation of stents potentiate smooth muscle cell death. Possible role of chronic vascular injury in restenosis. Int J Cardiovasc Intervent. 2, 21-26 (1999).
