Summary
arteriyel denüdasyon yaralanmasının ardından yeniden endotelizas- hücresel ve moleküler mekanizmaların anlaşılması trombozu ve arterlerin restenoz önlemede büyük önem taşımaktadır. Burada İnfrarenal abdominal aorta tekrarlanabilir arter denüdasyon yaralanması için bir protokol açıklar. prosedür fare modelleri kullanılarak endotel rejenerasyon düzenleyen altında yatan mekanizmaları araştırmak için geliştirilmiştir.
Abstract
Perkütan vasküler girişimler eşit sonradan tromboz ve restenoz yol arter denüdasyon yaralanmalara neden. Bu komplikasyonlar yara kenarlarından içinde yeniden endotelizas- içinde bozuklukları isnat edilebilir. Yine, yeniden endotelizas- hücresel ve moleküler mekanizmalar tanımlanmalıdır kalır. arteriyel soyulmasından sonra yeniden endothelialization incelemek için birçok hayvan modeli mevcut iken, birkaç nedeniyle cerrahi sınırlamalar fare yapılmaktadır. Bu transgenik fare hatları yararlanmak ve yeniden endotelizas- sürecine belirli genlerin katkısını araştırmak için fırsat zayıflatmaktadır. Burada, dış vasküler sıkma kullanarak infrarenal abdominal aorta arteriyel denüdasyon yaralanma yüksek tekrarlanabilir fare modeli oluşturmak için bir adım-adım protokol mevcut. fibrinojen ve β-katenin için yaralı aorta İmmünositokimyasal boyama yanlısı bir trombotik yüzeyi maruz kalma göstermeksırasıyla, Endotelli sınır d. Burada sunulan yöntem, transgenik fare modellerinde arteriyel denüdasyon yaralanma heybetli için benzersiz pratik bir araç yaratmak, hız, mükemmel genel sağkalım oranı ve görece teknik kolaylığı gibi avantajları vardır. Bu yöntemi kullanarak, araştırmacılar, normal ya da patolojik koşullar altında yeniden endotelizasyon mekanizmalarını aydınlatmak olabilir.
Introduction
Tromboz ve restenoz gibi endovasküler balon anjiyoplasti ve stent 1,2 olarak perkütan vasküler müdahaleler, uygulanan hastalarda ciddi erken ve geç komplikasyonlar vardır. Çeşitli stratejiler Bu komplikasyonları, özellikle ikili antiplatelet tedavi ve ilaç salınımlı stent ele istihdam edilmiştir. Ancak, küçük odak tromboz ve restenoz, endotel hücre kapsama (denüdasyon) yani kaybının altında yatan neden konulmuş. Denüdasyon yaralanması nedeniyle kan damarı duvarına mekanik travmaya girişimsel işlemler kaçınılmaz bir sonucudur. Bu mekanik travma kan 3 dolaşımdaki hasar ve bazal membran ve vasküler düz kas koruyucu endotel tabakası ve maruziyet kaldırılmasına neden olabilir. Bu alanlarda, endotel hücrelerin kaybı sadece trombosit yapışması ve daha sonra tromboz teşvik eden bir ön-trombotik ve pro-inflamatuar ortamını oluşturan, amaLSO göç ve neointimal kalınlaşması ve restenoz 4'te elde edilen, vasküler düz kas hücrelerinin proliferasyonunu uyarır. Bu komplikasyonlar ve bunların ilişkili tedaviler, insan sağlığını etkileyen önemli morbidite, en önemlisi tekrarlayan iskemik hastalık ve kanama olaylara yol açar.
Yeniden endotelizas- yara kenarlarından soyulmuş yaralanma trombozu ve restenoz 5 önlemede büyük önem taşımaktadır. Stent kapsama 6,7 struts ile Otopsi sonuçları ve hayvan modelleri etkin tromboz azaltılmış oranları göstermiştir. İlaç salınımlı stentler, düz kas proliferasyonu ve neointimal hiperplazi inhibe ederek restenoz oranlarını azaltmak arteriyel yeniden endotelizas- önemli bozuklukları ve geç tromboz 3 artan oranlarda neden için tasarlanmış. Ne yazık ki, yeniden endotelizas- mekanizmaları anlamak büyük ölçüde ap eksikliği ile sınırlı yavaş bir süreç olmuşturpropriate hayvan modelleri 8.
Arteryel harabiyeti takip endotel hücreleri, vasküler düz kas hücrelerinin rolleri anlamak için çeşitli hayvan modelleri 7,9,10 oluşturulmuştur. Sıçan karotis arter balon yaralanma modeli en iyi karakterize ve brüt hücresel ve moleküler düzeyde 11'de denüdasyon yaralanma etkilerini incelemek için istihdam edilmiştir. Bununla birlikte, mükemmel sağkalım oranları ile arteriyel denüdasyon yaralanma yüksek tekrarlanabilir fare modeli eksik ve çok daha iyi çoklu ortamlarda vasküler rejenerasyon aydınlatmak için kullanılabilir çoklu transgenik hatları yararlanmak için gereklidir.
Bu yazıda, tekrarlanabilir ve gerçekleştirmek için basit arter yaranın sıyrılmasından bir fare modeli sunar. yaklaşım, birkaç transgenik hatlarının minimal morbidite ve mortalite göstermiştir. Çünkü genetik olarak tadil edilmiş hücre soylarının, geniş sayıda, bu model için kullanılabilecektirdenüdasyon yaralanma sonrası yeniden endothelialization altında yatan moleküler mekanizmaları aydınlatmak.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
NOT: Bu protokol, California Los Angeles Üniversitesi Hayvan Araştırmaları Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. Ameliyat öncesi hazırlık ve Anestezi
- prosedür boyunca steril tekniği gözlemlemek için emin olun.
- Bir buharlı otoklav kullanarak tüm cerrahi malzemeleri sterilize edin.
- cerrahi işlem sırasında görünüm için stereomicroscope altında uygun bir sıcaklıkta (37 ° C) ve yere sıcak böylece öncesinde anestezi indüksiyon ısıtmalı kemirgen cerrahi platformda açın.
- anestezi indüksiyonu odasında fare koyun ve 1 L / dakikalık bir akış oranında% 4 izofluran ile neden olur.
- Dikkatle indüksiyon sırasında fare solunum hızı ve ayak tabanı deri rengi izler.
- Solunum hızının yavaşlaması sonra, indüksiyon odasında fare kaldırmak ve% 2.5 ayrı roket ucu konisi ve bakım izofluran konsantrasyonunda yüz ile cerrahi hazırlanması için ısıtılmış pad üzerinde yerleştirin.
- anestezik yeterliliğini değerlendirmek için ayak tutam gerçekleştirin.
- kornealar oftalmik merhem sürün ve (5 mg / kg) deri altından preoperatif Karprofen yönetmek.
- Yeri fare yatar ve kullanım makasları karın saç kaldırmak için.
- Steril gazlı bez ile uygulanan üç povidon iyot alternatif scrubs ve% 70 izopropil alkol ile cerrahi alan hazırlayın.
- Fare imlecini roket ucu konisi içinde yüz ile ısıtılan kemirgen cerrahi platformda yatar ve tüm ekstremitelerde güvenliğini sağlamak ve karın stereomikroskopta görünür şekilde dikkatlice pozisyon fare.
- Hazırlanan cerrahi alanında her bir kenarı boyunca, steril, yapışkan pansuman yerleştirin.
- spontan solunumda korurken ameliyat sırasında yeterli anestezi korumak için izofluran konsantrasyonu titre edilir.
2. İnfrarenal Aort Sıkma
- Bir neşter kullanılarak approximatel başlangıç karın orta hat aşağı 3 cm'lik kesi yapmakkılıç şeklinde bir süreç aşağı Y 0.5 cm.
- Yavaşça forseps ile cildi geri çekin ve ince bağ dokusu kesmek için ince makas kullanarak karın duvarı uzak cildi incelemek.
- kas duvarına% 0.5 bupivakain 0.05-0.1 ml uygulayın ve karın organları açığa çıkarmak için karın duvarı içine 2 cm kesi yapmak.
- kanama karın duvarı boyunca ortaya çıkarsa, bir pamuk uçlu bir aplikatör ile hafif basınç uygulayın.
- Yavaşça tuzlu batırılmış pamuk uçlu aplikatörler kullanarak bağırsakları kaldırın.
NOT: karın boşluğuna dışında sıcak, steril serum fizyolojik batırılmış gazlı sünger jejunal ve ileal arterler ve yere künt travma önlemek için dikkatli olun.- Nem kaybını önlemek için başka bir sıcak, steril tuzlu batırılmış gazlı sünger ile bağırsakları örtün.
- rektum lateralize ve retroperitonu maruz retractor yerleştirin.
- retroperitone görselleştirme için gerekli küçük gazlı bez yerleştirinum kullanılan numara takip.
- sağ böbreğin alt kutbunda seviyesinde, aorta bir retroperitonotomy yanal yapmak için keskin diseksiyon forseps kullanabilir.
NOT: inferior vena kava veya çevredeki damarlara zarar vermemek için dikkatli olun.- Açık açık aort kapalı retroperitoneal doku teşrih dikkatli olmak inferior vena kava veya çevredeki damarsal delikli değil.
- en az 1 dakika, ya da diğer belirli bir süre için aorta üzerinde damar kelepçe yerleştirin ve görsel uzak aort pulsatilitesini eksikliği gözlemleyerek tıkanıklığı doğrulayın.
- vasküler kelepçe çıkarın ve hemostaz doğrulayın. Hemostaz elde etti ve kan aktif ekstravazasyon görüldüğü zaman sağlanır.
- karın boşluğuna 0.5 ml tuzlu su ekleyerek ve tuzlu giderek kanlı olursa değerlendirerek ekstravazasyonu onaylayın. Bu davayı ise, 1 dakika sağlamak için tuzlu batırılmış aplikatör kullanarak hafif bir basınç uygulayınHemostaz.
- Retroperitonda görselleştirme yardımcı ve karın içine yerinde bağırsakları yerine yerleştirilen herhangi bir gazlı bez çıkarın.
- önceden ısıtılmış steril serum fizyolojik ile karın boşluğu sulamak.
Laparoskopi ve Cilt 3. Kapanış
- 5-0 örgülü, emilebilir çalışan tek sütür kullanılarak karın duvarı kas tabakası kapatın.
- yara klipleriyle akabinde 1-3 polimer yapıştırıcı damlaları ve yakın cilt yapıştırıcı ayarlandıktan sonra.
4. Kurtarma ve Postoperatif Değerlendirme
- Kafesin kat yiyecek ve su ile bir ısıtma yastığı bir kurtarma kafes fare aktarın.
- Yakından solunum sıkıntısı belirtileri için fare izleyin. Kurum kurallarına göre ameliyat sonrası 48 saat süreyle günlük karprofen (5 mg / kg) yönetmek.
- sternal recum korumak için yeterli bilinci yerine kadar gözetimsiz bir hayvan bırakmayınBency.
- Yiyecek ve su ile normal bir kafes fare dönün.
- Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir hayvan iade etmeyin.
- dehisens için bir günlük bazda yara değerlendirmek ve günde 14 klipsleri çıkarın.
5. Aort Diseksiyon ve boyanması
- denüdasyon yaralanmasının ardından ilgi belirli bir zaman noktasında dayalı kurban için seçin fareler.
- Izofluran teneffüs yoluyla fareler kurban hemen vasküler düz kas gevşemesi için 5 mg metakolin klorid ile enjekte edilir.
- Solunum durması, kornea refleksi ve hareket eksikliğine ölüm teyidi üzerine, 10 dakika boyunca, sol kalp kapakçığına ile 100 mmHg bir perfüzyon basıncına fosfat tamponlu tuzlu su içinde% 4 paraformaldehit ile perfüze.
- dikkatle bozulmamış abdominal aorta ayırmak için diseksiyon stereomikroskopta kullanınçevresindeki dokular.
- iliak çatallanma renal arter ve kaudal için aort rostral transect ve dorsal yüzeyi boyunca uzunlamasına bir kesi ile açılır.
- en az 2 saat için sabitleme için lümen yüzü 35 mm silikon kaplı tabak ama en fazla 12 saat düz aort sabitleyin. Daha sonra, doku ya da kesit gömülü veya yüz tüm montaj immünsitokimya tr kullanılabilir.
- Dağı konfokal mikroskopi için cam slaytlar lamel karşı karşıya lümen tarafı aorta boyandı.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Seksen beş fareler infrarenal abdominal aort klemp için bu raporda açıklanan sağkalım cerrahi tekniğin uğramıştır. genel sağkalım oranı% 85.9 idi. Operatif komplikasyonlar bağırsak kanama ve büyük damar perforasyonu,% 5.9 ve% 3.5 mortalite ile sonuçlanan sırasıyla (Tablo 1) dahil. anestezi kurtarma sonra, fareler normal yürümek ve alt ekstremite iskemik yaralanma belirtileri gösteriyor. Kilo kaybı veya iştahsızlık not edildi.
(A) olmadan ve (B) aort klemp ile stereomicroscope altında laparotomi ve retroperitoneal diseksiyonu aşağıdaki İnfrarenal abdominal aorta Şekil 1A ve 1B gösterisi görüntüler. Gösterildiği gibi, aort genişliği boyunca denüdasyonu sağlamak için bütünüyle aort genişliği kelepçe için hayati öneme sahiptir. Bizim protokol bulduğu keskin viraj Schwartz Mikro Serre kullanarak1.75 mm ve 'güçlü' kelepçe basının bir çene genişliği ile para cezaları asgari kelepçe zamanla aort genişliği boyunca büyük sürekli yara üretti. Bununla birlikte, diğer mengeneler değişken yaralanma boyutları (Şekil 1C) ile birkaç oklüzyon zaman aralıklarında test edilmiştir. sunulan sonuçlar geri kalanı yukarıda sözü edilen kelepçe kullanılarak üretilmiştir.
aort histolojik olarak değerlendirilmesi, H & E boyama ile gösterildiği gibi altta yatan düz kas hücresi tabakası orta hasar endotelinde tam denüdasyonu göstermektedir. Endotel soyulmasından, ancak farklı derecelerde (Şekil 2), 10 saniye ve 10 dakika hem de meydana gelir. tam arteriyel soyulma için gerekli uygun aort sıkıştırma zaman aralığını belirlemek için, fareler, 10 saniye, 1 dakika ve 10 dakika süre ile sıkıştırma yapıldı ve yukarıda protokolde tarif edildiği gibi derhal analiz için kurban edilmiştir. aresoyulma bir kelepçe zamanlamaları (Şekil 3) ile birlikte arttığı görüldü. 10 saniye, yaklaşık 0.75 mm2 arasında bir tam olmayan ve düzensiz yaranın sıyrılmasından fibrinojeni yaranın sıyrılmasından için bir marker olarak işlev görür yama fibrinojen boyama ile tespit edilmiştir. Aort sıkma On dakika bacak iskemi ve reperfüzyon yaralanması için yüksek bir risk olarak kabul edildi, yaklaşık 1.2 ila 2 mm arasında, tamamen arındırılır endotel alanı, sıkıştırma zamanı, ancak bu miktarda üretilir. Bu nedenle, biz iskemik yaralanma bulgusu olmayan yakın tam arteriyel denüdasyon yaralanmaya neden için, ortalama soyulma bir 0.88 mm 2 alanda üretilen yeterli aort klemp, 1 dakika sayılır.
Aort sıkma 1 dakika ile yaranın sıyrılmasından ölçüde 600 mikron çapa ve soyulma 0.88 mm2 alan üreten, çok yeniden üretilebilir (Şekiller 3 ve 4).fibrinojen boyama yoğunluğu daha sonraki zaman noktalarında, orijinal hasarı tespit etmek için yeterlidir. 4 yüksek ölçüde tekrarlanabilir yaralanma yaratmak 24 saat önce kurban kıskaç aort 1 dakika uygulanan üç farelerin fibrinojen boyanma göstermektedir. Altı aorta yaralanması 24 saat sonra boyama fibrinojen ölçümü (0.14 p =) yaralanmadan hemen sonra not yaklaşık 0.88 mm2 yaralanma istatistiksel olarak benzer 0.81 mm2 (Şekil 5A) vardır. Yaralanmamış endotel karşılaştırıldığında, denüdasyon yaralanması (Şekil 5B) içine yeniden endothelialization, fibrinojen boyama örten işaretleme ile endotel hücreleri göç yaralanma gösterileri sonrasında yara marjı 24 saat. Ortalama olarak, 0.88 ila 2 mm yaranın sıyrılmasından tam bir yeniden endotelizasyon yaklaşık olarak 3 gün. Bununla birlikte, bu yaklaşım, daha büyük denüdasyon yaralanmaları üretmek için adapte edilebilir aldı. birden çok kez, her birini kavramak1 dakika boyunca, rostral gelen infrarenal aorta boyunca kaudal bir 3.7 mm 2 denüdasyon yaralanması üretti. Ayrıca bu yaklaşım zarar tunika medya olsa da, biz kelepçe yaralanması sonucu abdominal aorta diseksiyonu gözlenen hiç.
Bu protokol, İnfrarenal abdominal aort sıkıştırma güvenli bir atardamar yaranın sıyrılmasından oluşturma ve endotel rejenerasyonu için ölçülmesi için bir murin modelinde gerçekleştirilebilir göstermektedir.
Şekil 1:. İnfrarenal Abdominal Aort İzole İzole infrarenal abdominal aort (A) olmadan ve bir damar kelepçe (B) ile gösterilir. Çeşitli boylarda ve kelepçe basın gücü Çeşitli kelepçeler tutarlı yaralanma (C) sunmaktadır birini seçmek için kullanıldı. Schwartz Micro Serrefine (ok) büyük sürekli yara üretti. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 2: a. Hasarlı olmayan farelerde infrarenal abdominal aort bölüm (A) 'nın endotelyal soyulma H & E boyama Etkinliği 10 sn (B) ve aort klemp (C) 10 dakika sonra. çekirdek boyanma olmaması ile doğrulanabilir gibi vasküler sıkma tamamen endotel tabakası Köreltir. Ayrıca düz kas hücre çekirdeğinin zarar tunika media zarar gösterir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 3:. Kelepçe Time İlişki Süresi Yara İnfrarenal abdominal aort sıkma 10 sn, 1 dakika ve 10 dakika süreyle yapıldı. Hemen yaralanmasından sonra, immünsitokimya bir yalan cerrahisi ve gösterilen (A) ve daha yüksek çözünürlükte (B) bu zaman noktaları için yüz tr yapıldı. (Mor) Fibrinojen yaralanma alanı tanımlar. β-katenin (kırmızı) endotel sınırlarını tanımlar. Yıldız (*) kelepçe uygulama alanı işaretler. β-katenin yokluğu yaralanma bölgesinde endotel hücrelerinin eksikliği anlamına gelir. (C), sıkıştırma süresini arttırmak (her zaman noktası için n = 2) çıplak hale getirme alanı artar göstermek için yaranın sıyrılmasından alanının bir göstergesi olarak fibrinojen boyama kullanır. Hata çubukları standart sapmayı temsil etmektedir. H tıklayınızere bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için.
Şekil 4:. 1 dakika aort klemp aşağıdaki Yaralanma Alan Yirmi dört saat tanımlanması, aort disseke ve tunika intima maruz kesildi. % 4 paraformaldehid içinde tespit edildikten sonra, immünositokimya cepheden uygulandı. Fibrinojen (mor) yaralanma alanını tanımlar (A). Yara marjı (B) ve gösterilen yara (C) içinde yüksek büyütme. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 5: denudation tekrarlanabilirliğiYaralanma ve Yeniden endotelizas- tanımlanması. Yirmi dört saat yaralanmasından sonra, aort cepheden belirtilen ve hastaya immünsitokimya olarak disseke edildi. Yaranın sıyrılmasından için bir marker olarak fıbrinojen kullanarak, yüksek oranda tekrarlanabilir yaralanma 0.81 ila 2 mm arasında bir ortalama denüdasyon alanı (A) 'da görülmektedir (n = 6). Daha yüksek çözünürlüklü görüntüler gösteriyor ki yara marjı sergiler fibrinojen boyama ve yaralanmamış endoteli (C) ile karşılaştırıldığında göç endotel hücreleri (oklar, mor boyama) (B). Hata çubukları standart sapmayı temsil etmektedir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Tablo 1:. 85 farelerin operatif ve postoperatif mortalite toplam underw85.9% bir hayatta kalma oranı ile ent sağkalım infrafrenal abdominal aort sıkma. Sekiz fareler (% 9.4) nedeniyle bağırsak kanama veya büyük damar perforasyon için ameliyat hayatta değildi. Dört fare postoperatif öldü.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Nedeniyle böyle bir balon anjiyoplasti ve stent damar olarak girişimsel, arteryel denüdasyon yaralanması, erken ve geç vasküler tromboz ve restenoz neden ve tekrarlayan iskemik olaylar 3,12 katkıda bulunur. İlginçtir, cerrahi damar sıkma da perkütan olsun veya 13 açık, herhangi bir damar prosedürü uygulanan hastaların sorunun kapsamını genişleterek, arteriyel soyulma nedeni olarak suçlanmıştır. bozulmuş yeniden endotelizasyonunun tromboz ve restenoz oldukça tanınan nedeni olmakla birlikte, yeniden endothelialization çevreleyen moleküler mekanizmalar aydınlatmak için zor olmuştur. Hayvan modelleri arter denüdasyon yaralanmasının ardından yeniden endotelizas- daha anlayış kazanmak için bir zorunluluk haline gelmiştir.
Hayvan modelleri, mevcut arter yaranın sıyrılmasından hücresel ve moleküler etkilerini incelemek için domuz, tavşan, kemirgen 7,9-11, bunları içerirler. kemirgen models sık sıçan karotis arter balon yaralanma modeli, kablolu fare yaralanma modeli ve sıçan ve fare ligasyonu modelleri 14,15 dahil kullanılır. Sıçan karotis arter balon yaralanma modeli en iyi karakterize ve en sık kullanılan, farelerde Lindner tarafından açıklanan karotis yaralanma prosedürleri transgenik suşları 16,17 kullanma olanakları genişlemektedir iken. Genetiği değiştirilmiş fare modelleri farmakolojik inhibitörleri ile ilgili potansiyel hedef dışı etkileri ve özgüllük konularında insidansını azalmış ve belirli ilgi elemanlarının doku spesifik ve koşullu ablasyon izin verebilir. Yine de, fare karotid yaralanma son derece zorlu ve uygulanması zordur.
Burada açıklanan İnfrarenal abdominal aortun sıçangil arter denüdasyon modeli açısından daha kolay olan ve in vivo olarak büyük çaplı arter yeniden endotelizasyon çalışmaları sağlar. Ameliyatlar kabul edilebilir bir sur sergiledi85.9% ve survival oranı. Yara uzunlukta kelepçe çene boyut kelepçe pres gücü ve zaman damar kelepçesi damar tıkanması, bir uzunluğuna bağlıdır. Bu model son derece tekrarlanabilir bir 0.88 mm 2 denüdasyon yaralanma üretmek için 1 dakika boyunca 10 x 1.75 mm çene boyutu ve 'güçlü' kelepçe basın kullanır. yara uzunluğu değişkenlik farklı çene ölçüleri ve damar tıkanıklığının uzunluğuna gözlenmiştir. Buna ek olarak, soyulma alan seri rostral gelen kaudal infrarenal abdominal aorta sıkma açılabilir. Bunun gibi, bu model kişinin çalışma amaçları uyacak şekilde manipüle edilebilir denüdasyon yaralanma boyutu çok yönlülük sunuyor.
yaralanmasından sonra yaralanma ve endotelyal kapak oranlarının ölçüde değerlendirmek için, immünositokimya endotel hücre çekirdekleri ve t tespit fibrine tespit etmek endotel hücre kavşaklar ERG tespit etmek β-katenin karşı ortaya çıkan antikorlar ile çeşitli zaman noktalarında gerçekleştirildiO bölgeyi yaralandı. yeniden endotelizasyon meydana gibi, fibrinojen boyama yeniden endotelizasyon ölçüde karşılaştırıldığında orjinal hasarı tespit etmek için kullanıldı. fibrinojen, güçlü boyama anlamlı endotelin yeniden büyüme sonrası azaltılmış olsa da, yeterli yoğunlukta hatta en az 4 gün sonra ameliyat sonrası ilk hasarı tespit etmek kalır.
Bu model, sınırlama olmadan değildir. Herhangi bir hayvan modeli olduğu gibi, kemirgen cerrahi iyi bir cerrahi teknik gerektirir ve bir öğrenme eğrisi gerektirir. diseksiyon kontrol etmek bazen imkansız bakım yapılmaz ise Fareler hızla damar perforasyonu yenik düşer. operatif en sık ölüm nedenleri sırasıyla% 5.9 ve% 3.5, intestinal kanama ve büyük damar perforasyonu dahil. Ancak, dikkatli diseksiyon ile, kanama nadirdir ve kan kaybı genellikle bizim deneyim aşağıda 0.1 ml tutulabilir. aort ve uygun kelepçenin ek olarak, yeterli bir diseksiyonYerleşim bir tekrarlanabilir yaralanma ayrılmaz bir parçasıdır. Distal aort pulsatiliteyi inceleyerek aorta tüm retroperitoneal doku yapışık kaldırarak, tam aort tıkanıklığı teyit etmek için kullanılabileceği gibi temiz, kesintisiz yaranın elde etmek için hayati önem taşımaktadır. Daha önce belirtildiği gibi, tunika medya hasar aort kelepçeleme bu yönteme not edilir. Ancak, medial düz kas ölüm sonraki neointimal hiperplazi 18 uzun süreli veya kronik damar nedeniyle stent implantasyonu genişleme ve sonuçların iyi bilinen bir sonucudur. Bizim model medial hasar hiçbir ameliyat sonrası ölüm varsa ve bu fareler postoperatif 2 aya kadar hayatta olduğu gibi, patolojik sekeller görünmüyor.
Biz iyi sağkalım oranları ile tekrarlanabilir infrarenal abdominal aortun arter denüdasyon yaralanma yönlü fare modeli sunuyoruz. Bu model transgenik fare modelleri ile çok sayıda arteryel yaralanma incelemek için bir ihtiyaç doldurur. Evlat edinme oBu fare modeli K normal ve patolojik koşullar altında yeniden endotelizasyon moleküler mekanizmaları aydınlatmak için kullanılabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Acknowledgments
Bu çalışma MLIA Sağlık (HL130290) Ulusal Enstitüleri Eli ve Rejeneratif Tıp Edythe Geniş Merkezi'nden hibe ile desteklenen ve ASS ve AIM, Philip J. Whitcome Bursu AIM için UCLA Eğitim Programı'nda Kök Hücre Araştırmaları ve oldu.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zeiss Discovery.V12 Stereomicroscope | Zeiss | 495037-9904-000 | |
| Rodent Heated Surgical Platform | Protech International | RES4000 | Heated platform for body temperature maintenance with nosecone for anesthestic maintenance and on which surgical procedure is performed |
| Isoflurane | Henry Schein | 50033 | 4% Induction; 2.5% Maintenance |
| Isoflurane Vaporizer | Summit Medical Equipment | 470062 | |
| Stryker T/Pump Warm Water Recirculator | Kent Scientific | TP-700 | |
| Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Carprieve (Carprofen) | Norbrook Laboratories | NDC 55529-131-01 | |
| Oster™ A5 Professional Animal Clipper | M.Schneider & Sons Inc. | 78005010 | Use with animal clipper size 40 |
| Adjustable Wire Retractor | Fine Science Tools | 17004-05 | |
| Schwartz Micro Serrefines - Sharp Bend | Fine Science Tools | 18052-03 | |
| Surgical Instruments | Fine Science Tools | sharp dissecting forceps, blunt forceps, fine scissors, spring scissors, hemostat | |
| 0.5% Marcaine | Hospira | 0409-1610-50 | |
| 5-0 Suture, Vicryl | Fisher Scientific | NC0189890 | tapered needle |
| Vetbond | Fisher Scientific | NC0304169 | |
| Falcon® 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish | Corning | 351008 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | 3097358-1004 | |
| Dissecting pins | Fisher Scientific | NC9681411 |
References
- Farooq, V., Gogas, B. D., Serruys, P. W. Restenosis: delineating the numerous causes of drug-eluting stent restenosis. Circ Cardiovasc Interv. 4, 195-205 (2011).
- Tada, T., et al. Risk of stent thrombosis among bare-metal stents, first-generation drug-eluting stents, and second-generation drug-eluting stents: results from a registry of 18,334 patients. JACC Cardiovasc Interv. 6, 1267-1274 (2013).
- Otsuka, F., et al. The importance of the endothelium in atherothrombosis and coronary stenting. Nat Rev Cardiol. 9, 439-453 (2012).
- Kipshidze, N., et al. Role of the endothelium in modulating neointimal formation: vasculoprotective approaches to attenuate restenosis after percutaneous coronary interventions. J Am Coll Cardiol. 44, 733-739 (2004).
- Finn, A. V., et al. Pathological correlates of late drug-eluting stent thrombosis: strut coverage as a marker of endothelialization. Circulation. 115, 2435-2441 (2007).
- Joner, M., et al. Pathology of drug-eluting stents in humans: delayed healing and late thrombotic risk. J Am Coll Cardiol. 48, 193-202 (2006).
- Joner, M., et al. Endothelial cell recovery between comparator polymer-based drug-eluting stents. J Am Coll Cardiol. 52, 333-342 (2008).
- McDonald, A. I., Iruela-Arispe, M. L. Healing arterial ulcers: Endothelial lining regeneration upon vascular denudation injury. Vascul Pharmacol. 72, 9-15 (2015).
- Fingerle, J., Tina Au, Y. P., Clowes, A. W., Reidy, M. A. Intimal Lesion Formation in Rat Carotid Arteries after Endothelial Denudation in Absence of Medial Injury. Arteriosclerosis. 10, 1082-1087 (1990).
- Granada, J. F., et al. Vascular response to zotarolimus-coated balloons in injured superficial femoral arteries of the familial hypercholesterolemic Swine. Circ Cardiovasc Interv. 4, 447-455 (2011).
- Tulis, D. A. Rat carotid artery balloon injury model. Methods Mol Med. 139, 1-30 (2007).
- Bavry, A. A., Bhatt, D. L. Appropriate use of drug-eluting stents: balancing the reduction in restenosis with the concern of late thrombosis. Lancet (London, England). 371, 2134-2143 (2008).
- Gucu, A., et al. Effects of temporary vascular occluder poloxamer 407 Gel on the endothelium. J Cardiothorac Surg. 8, (2013).
- Holt, A. W., Tulis, D. A. Experimental Rat and Mouse Carotid Artery Surgery: Injury & Remodeling Studies. ISRN Minim Invasive Surg. 2013, (2013).
- Nam, D., et al. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297, 1535-1543 (2009).
- Lindner, V., Fingler, J., Reidy, M. A. Mouse Model of Arterial Injury. Circ Res. 73, 792-796 (1993).
- Kumar, A., Lindner, V. Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 17, 2238-2244 (1997).
- Hehrlein, C., Weinschenk, I., Metz, J. Long period of balloon inflation and the implantation of stents potentiate smooth muscle cell death. Possible role of chronic vascular injury in restenosis. Int J Cardiovasc Intervent. 2, 21-26 (1999).
