Summary
A compreensão dos mecanismos celulares e moleculares da re-endotelização após lesão desnudamento arterial é de suma importância na prevenção de trombose e restenose das artérias. Aqui nós descrevemos um protocolo de lesão desnudamento arterial reprodutível da aorta abdominal infra-renal. O procedimento foi desenvolvido para investigar os mecanismos subjacentes que regulam a regeneração endotelial usando modelos do rato.
Abstract
intervenções vasculares percutâneos uniformemente resultar em lesões denudação arteriais que, posteriormente, levar a trombose e restenose. Estas complicações podem ser atribuídos a deficiências no re-endotelização dentro das margens da ferida. No entanto, os mecanismos celulares e moleculares da re-endotelização continuam a ser definida. Enquanto vários modelos animais para estudar a re-endotelização após desnudação arterial estão disponíveis, alguns são realizadas no rato por causa das limitações cirúrgicos. Isso prejudica a oportunidade de explorar linhas de camundongos transgênicos e investigar a contribuição de genes específicos para o processo de re-endotelização. Aqui, apresentamos um protocolo passo-a-passo para a criação de um modelo murino altamente reprodutível de lesão desnudamento arterial na aorta abdominal infra usando clampeamento vascular externo. coloração imunocitoquímico de aortas feridos para fibrinogênio e β-catenina demonstrar a exposição de uma uma superfície pró-trombóticod fronteira do endotélio intacto, respectivamente. O método aqui apresentado tem as vantagens de velocidade, excelente taxa de sobrevivência global, e facilidade técnica relativa, a criação de uma ferramenta exclusivamente prático para a imposição de lesão desnudação arterial em modelos de ratinho transgénicos. Usando este método, os investigadores podem elucidar os mecanismos de re-endotelização em condições normais ou patológicas.
Introduction
Trombose e restenose são graves complicações precoces e tardias em pacientes que se submetem a intervenções vasculares percutâneos, como a angioplastia com balão endovascular e implante de stent 1,2. Várias estratégias têm sido empregadas para tratar estas complicações, terapia antiplaquetária dupla particular e stents farmacológicos. No entanto, pouca atenção tem sido colocada sobre a causa subjacente de trombose e restenose, ou seja, a perda de cobertura de célula endotelial (desnudação). lesão desnudamento é uma consequência inevitável de procedimentos de intervenção devido a trauma mecânico à parede do vaso sanguíneo. Este trauma mecânico pode resultar em danos e a remoção da camada protectora do endotélio e a exposição da membrana basal e do músculo liso vascular ao sangue que circula 3. A perda de células endoteliais nessas áreas cria um ambiente pró-trombóticos e pró-inflamatório que não apenas promove a aderência de plaquetas e trombose subsequente, mas umlso estimula a migração e proliferação de células musculares lisas vasculares, resultando no espessamento da neointima e reestenose 4. Estas complicações e suas terapias associadas, levar a morbidade significativa, doença isquêmica mais notavelmente recorrentes e eventos hemorrágicos que impactam a saúde humana.
Re-endotelização da lesão desnudada das margens da ferida é de suma importância na prevenção de trombose e reestenose 5. Os resultados da autópsia e modelos animais têm efetivamente demonstrado taxas reduzidas de trombose com a cobertura de stent struts 6,7. Os stents farmacológicos, concebido para diminuir as taxas de reestenose pela inibição da proliferação do músculo liso e hiperplasia neointimal, resultar em deficiências significativas no arterial re-endotelização e aumento das taxas de final de trombose 3. Infelizmente, a compreensão dos mecanismos de re-endotelização tem sido um processo lento, em grande parte limitada pela falta de APmodelos animais propriate 8.
Vários modelos animais para compreender os papéis das células endoteliais e células de músculo liso vascular após lesão arterial, foram criados 7,9,10. O modelo de lesão por balão da artéria carótida de rato é o melhor caracterizado e foi utilizado para estudar os efeitos da lesão desnudação no nível bruto, celular e molecular 11. No entanto, um modelo murino altamente reprodutível de lesão desnudamento arterial com taxas de sobrevivência excelentes está faltando e muito necessário para tirar proveito de múltiplas linhagens transgênicas disponíveis para melhor elucidar a regeneração vascular em várias configurações.
Este manuscrito apresenta um modelo murino de lesão desnudação arterial que é reprodutível e de simples execução. A abordagem mostrou morbidade e mortalidade mínima em várias linhagens transgênicas. Devido ao seu largo número de linhas de ratinhos geneticamente modificados, este modelo pode ser usado paraelucidar os mecanismos moleculares subjacentes à re-endotelização após a lesão desnudamento.
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Protocol
NOTA: Este protocolo foi aprovado pelo Comitê de Pesquisa em Animais da Universidade da Califórnia em Los Angeles.
1. Pré-operatório Preparação e Anestesia
- Certifique-se de observar uma técnica asséptica durante todo o procedimento.
- Esterilizar todos os suprimentos cirúrgicos, utilizando um autoclave a vapor.
- Ligue roedor plataforma cirúrgica aquecida antes da indução da anestesia de modo que ele pode aquecer até à temperatura adequada (37 ° C) e coloca-se sob microscópio estereoscópico para a visualização durante o procedimento cirúrgico.
- Colocar o rato na câmara da indução da anestesia e induzir com 4% de isoflurano a um caudal de 1 L / min.
- acompanhar atentamente a taxa e pata cor da pele respiratório de rato durante a indução.
- Após uma desaceleração da taxa respiratória, remova o rato da câmara de indução e coloque na almofada aquecida para a preparação cirúrgica, com rosto em concentração de isoflurano nosecone e manutenção separada de 2,5%.
- Execute toe pitada para avaliar a adequação de anestésico.
- Aplicar pomada oftálmica para as córneas e administrar carprofeno pré-operatória (5 mg / kg) por via subcutânea.
- Colocar o mouse supina e uso clippers para remover os pêlos do abdômen.
- Prepare a área cirúrgica com três esfrega alternadas de iodopovidona e álcool isopropílico a 70% aplicados com compressas de gaze estéreis.
- supina lugar do mouse no roedor plataforma cirúrgica aquecida com a cara no cone do nariz e proteger todas as extremidades e cuidadosamente rato posição tal que o abdome é visível com o microscópio estereoscópico.
- Coloque, pensos adesivos estéreis ao longo de cada borda da área cirúrgica preparada.
- Titular concentração de isoflurano para manter a anestesia adequada durante a cirurgia, mantendo respirações espontâneas.
2. Infrarrenal pinçamento aórtico
- Faça um 3 centímetros incisão abaixo da linha média do abdome utilizando um bisturi, começando approximately 0,5 cm inferior ao apêndice xifóide.
- Suavemente retrair a pele com pinças e dissecar a pele para longe da parede abdominal com uma tesoura fina para cortar o tecido conjuntivo fino.
- Aplicar 0,05-0,1 ml de 0,5% de bupivacaína a parede muscular e fazer incisão de 2 cm na parede abdominal para expor os órgãos abdominais.
- Se o sangramento ocorre ao longo da parede abdominal, aplique uma leve pressão com um aplicador com ponta de algodão.
- Levante cuidadosamente o intestino utilizando aplicadores com ponta de algodão embebido com solução salina.
NOTA: Tenha cuidado para evitar trauma contuso com o jejuno e íleo artérias e coloque em uma quente, solução salina estéril embebido gaze fora da cavidade abdominal.- Cobrir os intestinos com outra solução salina estéril esponja quente, gaze embebida para evitar a perda de umidade.
- Coloque um afastador de lateralização do reto e expor o retroperitônio.
- Coloque pequenas compressas de gaze, conforme necessário para a visualização de retroperitonehum manter o controle do número usado.
- Ao nível do pólo inferior do rim direito, utilizar uma pinça de dissecação afiadas para fazer uma retroperitonotomy lateral à aorta.
NOTA: Tenha cuidado para não ferir a veia cava inferior ou vasos circundantes.- Sem rodeios dissecar tecido retroperitoneal fora da aorta tendo o cuidado de não perfurar a veia cava inferior ou vasculatura circundante.
- Colocar o grampo vascular através da aorta durante pelo menos 1 minuto, ou outro período de tempo especificado, e verificar a oclusão observando visualmente a falta de pulsatilidade na aorta distai.
- Retire o grampo vascular e verificar hemostasia. Hemostasia é conseguida e assegurada quando há extravasamento ativo de sangue é visto.
- Confirmar o extravasamento através da adição de 0,5 ml de solução salina na cavidade abdominal e avaliar se a solução salina se torna cada vez tingido de sangue. Se este for o caso, aplica uma pressão suave usando o aplicador embebido em solução salina durante 1 min para assegurarhemostasia.
- Remova qualquer compressas de gaze colocados para ajudar na visualização do retroperitônio e substituir intestinos in situ no abdômen.
- Irrigar a cavidade abdominal com solução salina pré-aquecido estéril.
3. Encerramento da laparotomia e Pele
- Feche a camada muscular da parede abdominal usando um 5-0 trançado, absorvíveis sutura única corrida.
- Fechar pele com 1-3 gotas de adesivo de polímero e então subsequentemente com grampos de feridas, uma vez que o adesivo é definido.
4. Recuperação e avaliação pós-operatória
- Transferir o rato para uma gaiola de recuperação numa almofada de aquecimento com comida e água no chão da gaiola.
- acompanhar de perto o mouse para sinais de desconforto respiratório. Administrar carprofeno (5 mg / kg) por dia, durante 48 horas no pós-operatório acordo com as diretrizes da instituição.
- Não deixe um animal sem supervisão até que tenha recuperado a consciência suficiente para manter recum esternalBency.
- Devolver o mouse para uma gaiola normal com comida e água.
- Não devolva um animal que foi submetido a uma cirurgia para a companhia de outros animais até que esteja totalmente recuperado.
- Avaliar ferida em uma base diária para a deiscência e remover clipes no dia pós-operatório 14.
5. Dissecção Aórtica e coloração
- Seleccionar ratinhos para o sacrifício com base no ponto de tempo específico de interesse após uma lesão desnudação.
- Sacrificar ratos por inalação de isoflurano e injectar imediatamente com 5 mg de cloreto de metacolina para causar vascular relaxamento da musculatura lisa.
- Após a confirmação da morte por cessação respiratória, falta de reflexo da córnea e falta de movimento, perfundir com paraformaldeído a 4% em solução salina tamponada com fosfato, a uma pressão de perfusão de 100 mm Hg, através do ventrículo esquerdo do coração durante 10 min.
- Use um microscópio estereoscópico de dissecação para separar cuidadosamente a aorta abdominal intacto deos tecidos circundantes.
- Transecto a rostral aorta para as artérias renais e caudal à bifurcação ilíaca e aberto através de uma incisão longitudinal ao longo da superfície dorsal.
- Pin a aorta plana em um prato revestido 35 milímetros de silicone com o lado luminal para fixação por não menos de 2 horas, mas não mais do que 12 horas. Posteriormente, o tecido pode ser tanto embutido para corte ou utilizadas em en face whole-mount imunocitoquímica.
- Mount manchado aortas com o lado luminal de frente para a lamela em lâminas de vidro para microscopia confocal.
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Representative Results
Oitenta e cinco ratos foram submetidos a técnica cirúrgica de sobrevivência descrita neste relatório para o pinçamento da aorta abdominal infra-renal. A taxa de sobrevida global foi de 85,9%. As complicações operatórias incluídos hemorragia intestinal e grande navio de perfuração, resultando em 5,9% e 3,5% de mortalidade, respectivamente (Tabela 1). Após a recuperação da anestesia, os ratos andar normalmente e não mostram sinais de lesão isquêmica para os membros inferiores. Sem perda de peso ou falta de apetite foram anotados.
Figuras 1A e 1B mostram imagens da aorta abdominal infra seguintes laparotomia e dissecção retroperitoneal sob o microscópio estereoscópico sem (A) e com (B) pinçamento aórtico. Como mostrado, é vital para prender a largura da aorta na sua totalidade para garantir a desnudação ao longo da largura da aorta. Nosso protocolo descobriram que o uso acentuada curvatura Schwartz Micro Serremultas com uma largura da mandíbula de 1,75 mm e "forte" prima braçadeira produzida a maior ferida contínua em toda a largura da aorta com o tempo braçadeira mínima. No entanto, outros grampos foram testados em diversos intervalos de tempo de oclusão com tamanhos variáveis de lesão (Figura 1C). A parte restante dos resultados apresentados foram produzidos usando a braçadeira acima mencionado.
A avaliação histológica da aorta demonstra desnudação completa do revestimento endotelial com danos moderados para a camada de células de músculo liso subjacente, tal como demonstrado por coloração com H & E. Desnudação do endotélio ocorre em ambas as 10 s e 10 min, embora em graus diferentes (Figura 2). Para determinar o intervalo de tempo de aperto aórtico óptima necessária para desnudação arterial completa, os ratinhos foram submetidos a fixação por 10 s, 1 min e 10 min e foram imediatamente sacrificados para análise tal como descrito no protocolo acima. o sãoum de desnudação aumentou com o aumento temporizações de fixação (Figura 3). Em 10 segundos, uma lesão desnudação incompleta e desigual de aproximadamente 0,75 mm2 foi identificada por coloração desigual fibrinogénio, fibrinogénio, onde serve como um marcador para a lesão desnudação. Dez minutos de pinçamento aórtico produziu uma área endotelial completamente despidos de aproximadamente 1,2 mm2, no entanto esta quantidade de tempo de pinçamento foi considerada de alto risco para isquemia e reperfusão. Como tal, consideramos 1 min de pinçamento da aorta suficiente, o que produziu uma área de 0,88 mm2 de desnudamento, em média, para resultar em perto de lesão completa desnudamento arterial sem evidência de lesão isquêmica.
A extensão da lesão desnudação com 1 min de aperto aórtico é extremamente reprodutível, produzindo um diâmetro de 600 um e 0,88 mm2 de área de desnudamento (Figuras 3 e 4). ointensidade de coloração fibrinogénio é suficiente para identificar a lesão original em pontos de tempo posteriores. A Figura 4 mostra a coloração de fibrinogénio de três ratos que foram submetidos a um mínimo de aperto aórtico 24 h antes de serem sacrificados, a criação de uma lesão altamente reprodutível. Medição do fibrinogénio coloração 24 h após a lesão de seis aorta é de aproximadamente 0,81 milímetros 2 (Figura 5A), estatisticamente semelhante à lesão 0,88 milímetros 2 observado imediatamente após a lesão (p = 0,14). Em comparação com o endotélio não lesionado, a ferida margem de 24 h após a lesão mostra células endoteliais que migram com sobrejacente coloração fibrinogénio, marcação a re-endotelização no desnudação lesão (Figura 5B). Em média, a completa re-endotelização da lesão desnudação 0,88 milímetros 2 levou aproximadamente 3 dias. No entanto, esta abordagem pode ser ainda adaptado para produzir lesões denudação ainda maiores. Aperto várias vezes, cadadurante 1 min, a partir de rostral para caudal ao longo da aorta infra-renal produzida uma lesão desnudação 3,7 milímetros 2. Embora esta abordagem também danos na camada média, que nunca observado dissecção da aorta abdominal, como resultado de lesão do grampo.
Este protocolo demonstra que o pinçamento da aorta abdominal infra-renal pode ser realizada com segurança em um modelo murino para efeitos de criação de uma lesão desnudamento arterial e medir a regeneração endotelial.
Figura 1:. Isolado Infrarrenal Aorta Abdominal aorta abdominal infra isolada é mostrado sem (A) e com (B) um grampo vascular. Vários grampos de vários comprimentos e pinça pressione força foram usadas para selecionar o que oferece lesão consistente (C). A Schwartz Micro serrefine (seta) produziu a maior ferida contínua. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: Eficiência da coloração endotelial Desnudamento H & E de uma secção da aorta abdominal infra-renal em um mouse sem lesão (A) e após 10 segundos (B) e 10 min de pinçamento da aorta (C).. Vascular aperto desnuda completamente a camada endotelial, como pode ser verificado pela ausência de coloração de núcleos. Também a perda de núcleos de células de músculo liso mostra danos à camada média. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3:. Relacionamento da braçadeira Tempo para Wound Comprimento pinçamento da aorta abdominal infra foi realizada por 10 s, 1 min e 10 min. Imediatamente após a lesão, imunocitoquímica foi realizada en face por uma cirurgia sham e esses momentos como mostrado (A) e na resolução mais alta (B). Fibrinogênio (em roxo) identifica a área da lesão. β-catenina (a vermelho) identifica fronteiras endoteliais. O asterisco (*) marca o local de aplicação braçadeira. Ausência de β-catenina indica a falta de células endoteliais na área da lesão. (C) utiliza coloração fibrinogénio como um marcador da área de lesão desnudação para demonstrar que o aumento do tempo de aperto aumenta a área de desnudamento (n = 2 para cada ponto de tempo). As barras de erro representam o desvio padrão. Por favor, clique here para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4:. Identificação da lesão Área Vinte e quatro horas após o pinçamento da aorta durante 1 minuto, a aorta foi dissecada e corte para expor a camada íntima. Após fixação em 4% de paraformaldeído, imunocitoquímica, foi realizada en face. Fibrinogênio (em roxo) identifica a área da lesão (A). Maior ampliação da margem de ferida (B) e dentro da ferida (C) são apresentados. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5: Reprodutibilidade da DesnudamentoLesão e Identificação de Re-endotelização. Vinte e quatro horas após a lesão, a aorta foi dissecada como imunocitoquímica declarado e submetidos en face. Usando o fibrinogénio como um marcador para a lesão desnudamento, uma lesão altamente reprodutível é observada em (A) com uma área de desnudação média de 0,81 mm2 (n = 6). Imagens de maior resolução mostram que a margem da ferida exposições fibrinogénio coloração e células endoteliais migram (setas, a coloração púrpura) (B) em comparação com o endotélio não lesionado (C). As barras de erro representam o desvio padrão. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Tabela 1:. Operativo e pós-operatória Mortalidade Um total de 85 ratos Underwsobrevivência ent pinçamento da aorta abdominal infrafrenal com uma taxa de sobrevivência de 85,9%. Oito ratos (9,4%) não sobreviveu a cirurgia devido à hemorragia intestinal ou grande perfuração de vasos. Quatro ratinhos morreu no pós-operatório.
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Discussion
Lesão desnudamento arterial devido a intervenções percutâneas, como a angioplastia com balão e implante de stent vascular, resultar em trombose vascular precoce e tardia e reestenose e contribui para eventos isquêmicos recorrentes 3,12. Curiosamente, pinçamento vascular cirúrgica também foi implicado como causa de desnudamento arterial, expandindo o escopo do problema para pacientes submetidos a qualquer procedimento vascular, seja percutânea ou aberta 13. Enquanto prejudicada re-endotelização é uma causa muito reconhecido de trombose e restenose, os mecanismos moleculares que cercam a re-endotelização têm sido difíceis de elucidar. Os modelos animais se tornaram uma necessidade para ganhar uma maior compreensão da re-endotelização após lesão desnudamento arterial.
Existente modelos animais para estudar os efeitos celulares e moleculares da lesão desnudação arterial incluem aqueles em suínos, coelhos e roedor 7,9-11. roedor models frequentemente utilizados incluem o modelo carótida de rato balão da artéria lesão, o modelo de lesão fio do rato, e rato e modelos de rato de ligação 14,15. Enquanto o modelo de lesão por balão da artéria carótida de rato é o melhor caracterizado e mais comumente utilizados, os procedimentos de lesão carótida descritos por Lindner em camundongos ampliaram as possibilidades de utilização de cepas transgênicas 16,17. modelos de ratos geneticamente modificados diminuiu a incidência de potenciais efeitos fora do alvo e problemas associados com a especificidade inibidores farmacológicos, e pode permitir para ablação específica de tecido e condicional de elementos específicos de interesse. No entanto, a lesão carótida em ratos é extremamente desafiador e difícil de executar.
O modelo murino desnudação arterial da aorta abdominal infra-renal descrito aqui é relativamente fácil de aplicar e permite estudos de re-endotelização de uma grande artéria calibre in vivo. Cirurgias exibiu um sur aceitáveistaxa de vência de 85,9%. comprimento de feridas é dependente da dimensão da mandíbula de aperto, a força da prensa de aperto, e o comprimento de tempo o grampo vascular é a oclusão do vaso. Este modelo usa uma dimensão mm mandíbula 10 x 1.75 e 'forte' imprensa braçadeira durante 1 min para produzir uma lesão 0,88 mm 2 desnudamento que é altamente reprodutível. Variabilidade de comprimento ferida foi observada com diferentes dimensões da mandíbula e da duração da oclusão do vaso. Além disso, a área de desnudação pode ser expandido por aperto em série da aorta abdominal infra-renal do rostral para caudal. Como tal, este modelo oferece versatilidade no tamanho da lesão desnudação que pode ser manipulada para se encaixar de um estudo tem como objectivo.
Para avaliar a extensão da lesão e endoteliais taxas de fecho após a lesão, imunocitoquímica, foi realizada em vários pontos de tempo com anticorpos criados contra β-catenina junções para identificar células endoteliais ou ERG para identificar os núcleos das células endoteliais e fibrinogénio para identificar tele machucou área. Como re-endotelização ocorreu, coloração fibrinogénio foi usada para identificar a lesão original em comparação com a extensão da re-endotelização. Enquanto a forte coloração de fibrinogénio é significativamente atenuada após novo crescimento do endotélio, permanece intensidade suficiente para identificar a lesão original mesmo depois de pelo menos 4 dias pós-cirurgia.
Este modelo não é sem limitações. Como acontece com qualquer modelo animal, a cirurgia murino requer uma boa técnica cirúrgica e implica uma curva de aprendizado. Ratos podem rapidamente sucumbir a perfuração de vasos se dissecção não é realizada com cuidado, que às vezes é impossível de controlar. As causas mais comuns de morte operatória incluíram hemorragia intestinal e grande perfuração de vasos, em 5,9% e 3,5%, respectivamente. No entanto, com dissecção cuidadosa, a hemorragia é rara e perda de sangue geralmente pode ser mantida para menos de 0,1 ml em nossa experiência. Além disso, a dissecção da aorta adequada e braçadeira apropriadacolocação é parte integrante de uma lesão reprodutível. Ao examinar pulsatilidade aórtica distal pode ser usado para confirmar a oclusão da aorta completa, remoção de todo o tecido aderente para retroperitoneal da aorta é vital para a obtenção de uma ferida limpa e ininterrupta. Como mencionado anteriormente, os danos à camada média é observado com este procedimento de pinçamento da aorta. No entanto, a morte do músculo liso medial é uma consequência bem conhecida de expansão prolongada ou crônica vascular devido ao implante de stent, e resulta em posterior hiperplasia neointimal 18. danos Medial em nosso modelo não parece ter sequelas patológicas, como não temos a morte pós-operatória e estes ratos sobreviveram até 2 meses de pós-operatório.
Nós apresentamos um modelo murino versátil de lesão desnudamento arterial da aorta abdominal infra-renal que é reprodutível com boas taxas de sobrevivência. Este modelo preenche uma necessidade de estudar lesão arterial com uma variedade de modelos de ratinho transgénicos. adoção of este modelo murino pode ser usado para elucidar os mecanismos moleculares da re-endotelização em condições normais e patológicas.
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Disclosures
Os autores não têm nada para revelar.
Acknowledgments
Este trabalho foi apoiado por subsídios da Eli e Edythe Broad Centro de Medicina Regenerativa e Stem Cell Research no Programa de Formação de UCLA para ASS e AIM, Philip J. Whitcome Fellowship à AIM, e os Institutos Nacionais de Saúde (HL130290) para MLIA.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zeiss Discovery.V12 Stereomicroscope | Zeiss | 495037-9904-000 | |
| Rodent Heated Surgical Platform | Protech International | RES4000 | Heated platform for body temperature maintenance with nosecone for anesthestic maintenance and on which surgical procedure is performed |
| Isoflurane | Henry Schein | 50033 | 4% Induction; 2.5% Maintenance |
| Isoflurane Vaporizer | Summit Medical Equipment | 470062 | |
| Stryker T/Pump Warm Water Recirculator | Kent Scientific | TP-700 | |
| Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Carprieve (Carprofen) | Norbrook Laboratories | NDC 55529-131-01 | |
| Oster™ A5 Professional Animal Clipper | M.Schneider & Sons Inc. | 78005010 | Use with animal clipper size 40 |
| Adjustable Wire Retractor | Fine Science Tools | 17004-05 | |
| Schwartz Micro Serrefines - Sharp Bend | Fine Science Tools | 18052-03 | |
| Surgical Instruments | Fine Science Tools | sharp dissecting forceps, blunt forceps, fine scissors, spring scissors, hemostat | |
| 0.5% Marcaine | Hospira | 0409-1610-50 | |
| 5-0 Suture, Vicryl | Fisher Scientific | NC0189890 | tapered needle |
| Vetbond | Fisher Scientific | NC0304169 | |
| Falcon® 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish | Corning | 351008 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | 3097358-1004 | |
| Dissecting pins | Fisher Scientific | NC9681411 |
References
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