Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Medicine

ADSC ورقة زرع منع التقييد بعد موسع المريء بالمنظار تحت المخاطية تشريح

doi: 10.3791/55018 Published: February 10, 2017

Summary

تقارير هذه الدراسة وسيلة ناجحة من endoscopical الدهنية الخلايا اللحمية المشتقة من الأنسجة (ADSC) -sheet زرع لمنع تضيق المريء بعد تشريح الموسع بالمنظار تحت المخاطية (ESD) في نموذج الخنازير.

Abstract

في السنوات الماضية، وقد حفزت بناء ورقة خلية باهتمام واسع في الطب التجديدي، وخاصة بالنسبة للإجراءات الجراحة الترميمية. وقد أدى تطوير تكنولوجيات متنوعة تجمع بين خلايا انسجة المشتقة من الأنسجة الدهنية (ADSCs) مع مختلف المواد الحيوية لبناء أنواع عديدة من بدائل هندسة الأنسجة، مثل العظام والغضاريف، والأنسجة الدهنية من القوارض، والخنازير، أو ADSCs الإنسان. تمديد المريء تشريح تحت المخاطية بالمنظار (ESD) هو المسؤول عن تشكيل تضيق المريء. يبقى منع تضيق صعبة، مع عدم وجود علاجات فعالة المتاحة. وذكرت دراسات سابقة فعالية زرع خلية ورقة الغشاء المخاطي في نموذج الكلاب والبشر. وتعزى ADSCs خصائص مضادة للالتهابات، وآثار التعديل المناعي المحلية، تحريض اتساع الأوعية الدموية، وقدرات التمايز في الوسيطة والأنساب غير الوسيطة. توضح هذه الدراسة الأصلية وهيئة تنظيم الاتصالات بالمنظارnsplantation لبناء الأنسجة المهندسة ADSC لمنع تضيق المريء في نموذج الخنازير. وتألفت لبناء ADSC من ورقتين ADSC الصنعية الطبقات على بعضها البعض على غشاء دعامة الورق. وصفت وADSCs مع fluorophore PKH67 للسماح القائم على التحقيق ليزر متحد البؤر endomicroscopy الرصد (pCLE). في يوم من زرع، تم إجراء 5 سم، والبيئة والتنمية المستدامة نصفي كفافي المعروف للحث على تضيق المريء. تم على الفور زرع الحيوانات بالتنظير مع 4 بنيات ADSC. تم الحصول على التصاق كامل للبنيات ADSC بعد 10 دقيقة من تطبيق لطيف. تمت التضحية الحيوانات في يوم 28. تم زرع جميع الحيوانات بنجاح. وأكد زرع في يوم 3 مع تقييم pCLE إيجابي. بالمقارنة مع الحيوانات المزروعة، وضعت الحيوانات السيطرة قيود شديدة، مع تطور كبير أنسجة متليفة، مشكلة الهضمية أكثر تواترا، وتخفيض زيادة الوزن. في نموذجنا، وزرع allogeniج ADSCs، نظمت في أوراق خلية مزدوجة، بعد البيئة والتنمية المستدامة طويلة كانت ناجحة وترتبط بقوة مع انخفاض سعر تضيق المريء.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

لقد تغيرت إدارة أورام المريء سطحية مع تطور تقنيات المناظير الجديدة. في الوقت الحاضر، استئصال بالمنظار هو علاج الخط الأول. في الواقع، ويرتبط ذلك مع انخفاض معدلات الاعتلال والوفيات من الجراحة مع نتائج الأورام متساوية 3. استئصال بالمنظار المخاطية (EMR) وبتر تحت المخاطية بالمنظار (ESD) هي أكثر التقنيات المستخدمة على نطاق واسع. في حالة وجود ورم سطحي ممتد، ويفضل البيئة والتنمية المستدامة. مقارنة إقليم شرق المتوسط، البيئة والتنمية المستدامة تسمح أون resectioning كتلة، بغض النظر عن حجم الآفة والشكل 6. تأخر المضاعفات الرئيسية من أجل التنمية المستدامة هي تشكيل تضيق المريء، والذي يحدث عادة بين أسبوع وأسبوعين بعد استئصال. وقد أظهرت الدراسات التي نشرت مؤخرا ويرتبط ذلك تشكيل تضيق لحجم بتر. توصي جمعية بالمنظار اليابانية تجنب البيئة والتنمية المستدامة أحجام أكبر من ¾ من محيط المريء لأنها ترتبط مع تطور تضيق في أكثر من 90٪ من الحالات وتكون مسئولا عن مشاكل التغذية الحادة والتدهور الكبير في نوعية الحياة.

منع تضيق المريء لا يزال تحديا. الآليات التي تشارك في تشكيل تضيق لا يعلمها إلا جزئيا. تضيق تشكيلات يبدو أن تنجم عن رابطة آليتين مختلفتين: (1) الموالية للالتهابات التوظيف الخلوي و (2) تطوير التليف المفرطة 7. وقد اقترحت العديد من العلاجات الوقائية. ومع ذلك، وكانت النتائج غير مرضية، دون فائدة تذكر وآثار جانبية خطيرة 8 و 9. مؤخرا، قام فريق الياباني، Ohki وآخرون. واقترح لزرع خلية ورقة طبقة واحدة من الخلايا المخاطية الفموية ذاتي في esophندبة ageal. تم إجراء زرع مباشرة بعد ESD 10 و 11. أنها أثبتت فعالية هذا النهج المبتكر، لأول مرة في نموذج الكلاب ثم في المرضى.

الدهنية الخلايا اللحمية المشتقة من الأنسجة (ADSCs) واعدة في مجال الطب التجديدي. وقد أظهرت تطبيقها في العديد من المجالات نتائج مثيرة للاهتمام، وخاصة في عملية التئام الجروح. يقدم العلاج ADSC العديد من المزايا، لأن خلايا معزولة بسهولة وترتبط مع خصائص مضادة للالتهابات، والآثار المناعة المحلية، تحريض اتساع الأوعية الدموية، وقدرات التمايز في الوسيطة والأنساب غير الوسيطة 12 و 13 و 14.

في دراسة سابقة، أظهر فريقنا فعالية مزدوجة زرع بالمنظار ورقة ADSC لسابق تضيق المريءention بعد البيئة والتنمية المستدامة طويلة في نموذج الخنازير 15. في هذه المقالة، يتم عرض تقارير البناء ADSC ورقة وتقنية زرع endoscopical.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

تم علاج جميع الحيوانات وفقا لأبحاث لجنة الأخلاقيات الحيوانية (توجيهات وزارة الزراعة الفرنسية). تلقى البروتوكول على موافقة لجنة أخلاقيات المحلية المعتمد لالتجريب في مجال الحيوان بجامعة باريس ديكارت (عدد المسجلين MESR 2035.02، كلية الطب باريس ديكارت، باريس، فرنسا).

1. ADSC الثقافة ووسمها

  1. الحصول على ADSCs أكد من مؤسسة خاصة. ADSCs خيفي الثقافة عند 37 درجة مئوية وCO 2 مع ألفا الأساسية الدنيا والمتوسطة بما في ذلك 10٪ مصل العجل الجنين و 1٪ المضادات الحيوية (البنسلين والستربتومايسين) 5٪.
  2. الحصول على حوالي 24 × 10 6 ADSCs لكل حيوان باستخدام إجراءات توسيع الخلية القياسية (37 درجة مئوية و 5٪ CO 2). حصاد ADSCs باستخدام محلول التربسين القياسي (10 مل لطبق T150). أداء عد الخلايا مع عدادة الكريات.
  3. أداء الخلايا وصفها قبل يوم واحد زرع باستخدام العلاقات العامة PKH67 تلطيخوصف ocedure أدناه.
    ملاحظة: إن الهدف من هذا الإجراء تلطيخ هو السماح تتبع الخلية بعد الزرع.
    1. من أجل تسمية 2 × 10 6 ADSCs، وإعداد الحل ألف (2 × 10 6 الخلايا مع 100 ميكرولتر من مخفف C) والحل ب (4 ميكرولتر من PKH67 مع 1 مل من مخفف C).
    2. احتضان حلول A و B لمدة 2 دقيقة. ثم، إضافة 100 ميكرولتر من مصل العجل الجنين لمدة 1 دقيقة.
    3. شطف الحل مع 300 ميكرولتر من RPMI سيتراتي (298.5 ميكرولتر من RPMI و 1.5 ميكرولتر من سيترات) وأجهزة الطرد المركزي في 1500 x ج لمدة 5 دقائق. كرر هذه العملية 2 مرات. الحفاظ على الخلايا المسمى وحمايتها من ضوء حتى البناء ورقة.

2. انقر نقرا ADSC ورقة تعبيد

  1. قبل يوم واحد زرع، وإعداد 12-جيدا طبق زراعة الخلايا تستجيب للحرارة مع 4 مل لكل بئر من مستنبت الخلية المذكورة أعلاه، قبل PKH وضع العلامات. البذور الطبق مع 1.5 × 10 6 PKH-labeleخلايا د لكل بئر واحتضان لمدة 12 ساعة (37 درجة مئوية و 5٪ CO 2).
  2. في يوم من زرع، فصل ورقة خلية متموجة التي يحتضنها طبق في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
  3. نضح بلطف ورقة ADSC واحد مع ماصة وطبقة على ورقة مسعور (1.5 سم، وقطرها). استخدام هذه الورقة بمثابة غشاء الدعم.
  4. فهم رقة ADSC آخر وإيداع برفق على رأس الآخر للحصول على بناء طبقة مزدوجة.
  5. كرر هذه الإجراءات للحصول على أكبر عدد ممكن من يبني ورقة ADSC حسب الحاجة (4 لكل حيوان).

3. المريء بالمنظار تحت المخاطية تشريح (ESD)

  1. في يوم من زرع، قبل مداواة الحيوانات مع 10 ملغم / كغم من الكيتامين العضلي وحملهم مع 8 ملغم / كغم من البروبوفول في الوريد. ثم، تنفيذ التنبيب الرغامي والحفاظ على التخدير مع isoflurane 2.5٪ الاستنشاق.
  2. مرة واحدة الحيوان تحت التخدير العام، نفذ البيئة والتنمية المستدامة مع gastroscمكتب مستشار رئيس الوزراء، وهو VIDEOSCOPE، ​​ووحدة كهربية.
    1. استخدام سكين بالمنظار والتخثر لينة للحصول على علامات الظهرية-هيمي كفافي تتراوح ما بين 40 سم إلى 45 سم من القوس السني.
    2. حقن محلول الجلسرين تحتوي على نيلي اللون القرمزي الصبغة في الطبقة تحت المخاطية لفصل الطبقة المخاطية من الطبقة العضلية.
    3. استخدام سكين بالمنظار مع وضع أنا endocut للحصول شقوق كفافي.
    4. استخدام سكين بالمنظار مع وضع تخثر اضطر لإجراء تشريح تحت المخاطية، والانتقال من شق الداني إلى شق القاصي.
  3. في نهاية الإجراء البيئة والتنمية المستدامة، ومراقبة، ندبة المريء 5 سم طويلة نصفي كفافي تعريض الطبقة العضلية.

4. بالمنظار زراعة

  1. مباشرة بعد البيئة والتنمية المستدامة، زرع انبوب الحيوانات مع 4 مزدوجة يبني ورقة ADSC.
    1. فهم لبناء ورقة ADSC مع ملقط بالمنظار وحمايته أثناء النقل إلى مكان الجرح عن طريق استخدام واسع، وكأب بالمنظار شفافة.
    2. تطبيق كامل سطح بناء ورقة ADSC إلى السرير قرحة.
    3. بلطف تطبيق بناء ورقة ADSC لمدة 10 دقيقة للحصول على engraftment كاملة ومستقرة. لتطبيق، واستخدام الملقط بالمنظار أو غطاء بالمنظار وتطبيق سطح كامل من ADSC بناء على الطبقة تحت المخاطية للمريء.
  2. كرر هذا الإجراء أربع مرات لكل حيوان من أجل الحصول على أربعة مزدوجة يبني ورقة خلية زرع وملتصقة.
    ملاحظة: إن الهدف هو تغطية تقريبي نصف مساحة الجرحى.

5. بعد العملية الجراحية التقييم والمتابعة

  1. لكل حيوان، وضمان ما بعد ESD التسكين مع الحقن العضلي من 0.2 ملغم / كغم من المورفين ثلاث مرات في اليوم لليوم الأول ومع العلاج 28 يوما المضادة للحامض من إيسوميبرازول (40 ملغ / يوم). أداء الوقاية باستخدام المضادات الحيوية مع amoxicillفي (1 جم / يوم) لمدة 7 أيام. يأذن السوائل في يوم 1 و المواد الصلبة في اليوم التالي.
  2. متابعة مع الحيوانات لمدة 28 يوما. الحصول على التقييمات السريرية اليومية باستخدام ناضج بينكاس عشرات عسر البلع 16 و قياسات الوزن الاختلاف.
  3. المتعدد الوسائط تقييم تضيق: تحت التخدير العام، في الأيام المقررة 3، 14، و 28، إجراء تقييم متعدد الوسائط من حدوث تضيق.
    1. إجراء تقييم بالمنظار باستخدام وصف ندبة، وقياس تضيق، ودعم ورقة كشف الغشاء. قياس تضيق باستخدام المنظار لعبور من خلال تضيق (قطر المنظار هو 8 ملم). مراقبة ندبة، مع إيلاء الاهتمام بالجانب التهابات (حمامي المخاطية، وذمة المخاطية، والمخاطية نزيف عفوية) وغياب أو وجود غشاء دعامة الورق داخل ندبة.
    2. تطبيق pCLE التحقيق الأخضر عبر قناة المشغل المنظار مباشرة إلى السرير ندبة. بحث عن عفويةونظمت إشارة خضراء متوافقة مع المسمى PKH67-ورقة ADSC بناء engraftment.
    3. أداء 2 حالات متعامدة من تصوير المريء الباريت مع طوق الإشعاعي (الأمامي وحوادث جانب الأيسر). الحفاظ على أشد حالات لتقييم تضيق (درجة تضيق (٪) = [1- (طول محور القصير تحت تضيق / طول محور الطبيعي تحت تضيق) × 100)]) 17، 18.
  4. التضحية الحيوانية.
    1. في يوم 28، في نهاية فترة المتابعة، نفذ الذبيحة الحيوانية. في حين أن الحيوان لا يزال تحت التخدير العام، وضخ 100 ملغم / كغم من الفينوباربيتال في الوريد. ضمان موت الحيوان باستخدام الفحص السريري لعدم وجود نبضات القلب والتنفس الحركة.
    2. بعد التعرض القص والجهاز، وإزالة المريء من كل حيوان ضحى (مع 10٪ التثبيت الفورمالين مخزنة، تضمين البارافين، والقسمين 4 ميكرون سميكة). وصمة عار على الشرائحمع الهيماتوكسيلين والزعفران 15. ترقيم الشرائح للتحليل المحوسب والمقارنة بين المجموعات الحيوانية 15.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

ويرد ثقافة ADSCs وإجراءات الحصول على ورقة ADSC في الشكل 1. ويبين الشكل 2 بناء الكسب غير المشروع، تتكون من ورقتين ADSC الطبقات على بعضها البعض على غشاء الدعم ورقتهم. تم ADSCs المسمى سابقا مع fluorophore PKH67 للسماح في مراقبة الكسب غير المشروع المجراة مع pCLE. ويبين الشكل 3 خطوات مختلفة من تمديد المريء تشريح تحت المخاطية بالمنظار، مما أدى إلى ندبة المريء 5 سم، ونصفي كفافي. ويبين الشكل (4) وإجراء زرع بالمنظار. كان زرع ناجحة لجميع الحيوانات بعد 10 دقيقة من تطبيق لطيف. ويبين الشكل 5 التقييم pCLE إيجابي في اليوم 3، مما يؤكد نجاح العملية الزرع.

في فترة المتابعة سمح لمحللة بيانات تضيق المتعدد الوسائط هو. وأظهرت التقييمات المختلفة في الأرقام والجدول التالي. مقارنة للسيطرة على الحيوانات، أظهرت مجموعة الحيوان المزروعة المتاعب الهضمية أقل تواترا وأكبر زيادة الوزن في يوم 28. حيوان واحدة من مجموعة المزروعة ضعت تضيق المريء الحاد بالمقارنة مع جميع الحيوانات في السيطرة على المجموعة. بالمقارنة مع الحيوانات المزروعة، وضعت الحيوانات السيطرة أنسجة متليفة كبيرة. ويبين الجدول 1 النتائج السريرية وendoscopical خلال فترة المتابعة. ويبين الشكل 6 بالمنظار والنتائج الإشعاعية في نهاية فترة المتابعة في الحيوانات المزروعة وغير المزروعة. ويبين الشكل 7 النتائج النسيجية المختلفة بين الحيوانات المزروعة والسيطرة. وتؤكد هذه البيانات فعالية زرع ADSC ورقة للوقاية تضيق المريء.

018fig1.jpg "/>
الشكل 1. ورقة ADSC بناء. ألف وباء المبكر مرور ADSCs في أطباق ثقافة القياسية مع تكبير مختلفة. وتم الحصول على أوراق ADSC من زراعة ADSCs المسمى PKH على أطباق ثقافة تستجيب درجات الحرارة التجارية. C. عندما تم تخفيض درجة حرارة الحضانة إلى 20 درجة مئوية (درجة حرارة الغرفة)، كل خلايا منفصلة بشكل عفوي من السطوح طبق كما صحائف ADSC سليمة، دون الحاجة للعلاج الأنزيمية. د- ADSC رقة تحصد قبل البناء الكسب غير المشروع باستخدام غشاء نقل. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2
الشكل 2. انقر نقرا ADSC ورقة بناء. A، B، C. وقبل يوم واحد transplantation، كانت تحصد ADSCs المسمى PKH-في عدد أوائل مرور (P4 - P5)، المصنفة على زراعة الخلايا تستجيب للحرارة 12 جيد، ومثقف في 37 درجة مئوية و CO 2 مع ألفا الأساسية الدنيا والمتوسطة 5٪ منها 10٪ الجنين مصل لحم العجل و 1٪ المضادات الحيوية (البنسلين والستربتومايسين). والمغلفة كل بئر مع غشاء بولي-N-isopropylacrylamide (في الجزء السفلي من كل جانب) والمصنف مع 1.5 × 10 6 خلايا. عندما تم تخفيض درجة حرارة الحضانة إلى 20 درجة مئوية (درجة حرارة الغرفة)، كل خلايا منفصلة بشكل عفوي كما صحائف ADSC سليمة دون الحاجة للعلاج الأنزيمية. D. المخطط النظري لضعف بناء ورقة خلية مكونة من ورقتين ADSC الطبقات على بعضها البعض وتطبيقها على غشاء دعامة الورق. E. عرض العيانية مزدوج بناء ورقة خلية الانتهاء. تعديل من المرجع 15. يرجى النقر هنا ر س عرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (3)
الرقم 3. بالمنظار تحت المخاطية إجراء تشريح. تم إنشاء علامات A. بالمنظار لتحديد منطقة الاستئصال، تتراوح 40-45 سم من القوس السني وإشراك نصف محيط. ب- حقن تحت المخاطية من حل الجلسرين تحتوي على صبغة اللون النيلي اللون القرمزي. وكان الهدف من هذه الحقن لفصل الطبقة المخاطية من الطبقة العضلية من أجل فضح الطبقة تحت المخاطية. أجريت شقوق جيم الطرفية خارجيا لعلامات بالمنظار، وكشف عن طبقة تحت المخاطية حقن. D. الرأي بالمنظار في نهاية تشريح تحت المخاطية تظهر ندبة المريء 5 سم طويلة ونصفي كفافي.وآخرون = "_ فارغة"> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (4)
الرقم 4. ADSC ورقة مزدوجة بالمنظار الداخلي زراعة. A. أربعة ADSC يبني جاهزة للزرع. B. حماية ADSC بناء تحت سقف بالمنظار كبير قبل الزرع. عرض جيم بالمنظار من عبور البلعوم الحيوان، والتي تبين بناء ADSC محمية تحت سقف بالمنظار. D. كان 10 دقيقة من تطبيق ما يكفي للحصول على تمسك ورقة. تم تنفيذ الطلب باستخدام غطاء بالمنظار أو ملقط بالمنظار. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الرقم 5 الشكل 5. النتائج pCLE. pCLE يوم 3 يظهر إشارات عفوية ومكثفة مماثلة لتلك التي حصلت في المختبر، متوافقة مع زراعة ناجحة ورقة الخلية. لم يتم العثور على إشارة في أيام 14 و 28. ألف في المختبر pCLE إشارة من ADSCs في تعليق. ب- في المختبر إشارة pCLE من ADSCs نظمت في ورقة الخلية. جيم في الجسم الحي pCLE تطبيق التحقيق الى ندبة المريء. د. في الجسم الحي إشارة pCLE من ADSCs تصور في يوم 3 بعد الزرع. تعديل من المرجع 15. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (6)
الرقم 6. نتائجمن التحليل الصرفي في يوم 28. وبالمقارنة مع مجموعة المراقبة، أظهر بالمنظار والنتائج الإشعاعية في يوم 28 تضيق قصيرة وخفيفة دون توسع المنبع والغشاء المخاطي الانتهاء من إعادة epithelialized. تعديل من المرجع 15. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الرقم 7
الرقم 7. النسيجي تقييم المناطق التقييد. تم إجراء تحليل النسيجي بعد HES وضع العلامات ورقمنة الشرائح. في الحيوانات المزروعة (A)، وتحسن عملية الشفاء، مع زيادة إعادة الاندمال بتشكل النسيج الظهاري وانخفض تطوير التليف، مقارنة الحيوانات المزروعة وعدم (B). وثمة تطور أنسجة متليفة مكثفةلاحظ بسبب العضلية تدمير المخاطية، متليفة الداخلي الغزو طبقة العضلية، والعيوب المخاطية كبيرة. تعديل من المرجع 15. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الجدول 1
الجدول 1. تقييم السريرية خلال فترة المتابعة. تم إجراء تقييم السريرية باستخدام التقييم السريري اليومي وفقا لدرجة ناضج بينكاس ومع اختلاف الوزن. (*) ناضج بينكاس يسجل 16. التعديل من المرجع 15.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

في هذا النموذج خنزير، كان زرع ورقة ADSC ناجحة من الناحية الفنية، ويسمح في الجسم الحي تقييم pCLE لرصد خلية engraftment. أظهرت التقييمات السريرية، endoscopical والإشعاعية، والنسيجية فعالية ورقة ADSC بالمنظار في منع تضيق المريء بعد البيئة والتنمية المستدامة طويلة.

زرع بالمنظار من حل ADSC الجلسرين التي تحتوي على ورقة اللون القرمزي صبغ النيلي هو نهج مبتكر في مجال الطب التجديدي. Ohki وآخرون. وصف لأول مرة إجراء زرع بالمنظار. في دراستهم، وكانت تتألف يبني ورقة خلية من الأوراق عن طريق الفم المخاطية الظهارية خلية الطبقات على ورقة رقيقة من difluoride البولي فينيل، كما تستخدم غشاء دعم 10، 11، 19. وقد أدرك الغشاء الدعم بالملقط بالمنظار وضعت بعناية على السرير قرحة. سلتم الحصول على ورقة ل الالتزام بعد 10 دقيقة من تطبيق لطيف. لم تستنسخ هذا الإجراء. في هذه الدراسة، تم زرع مزدوجة يبني ورقة ADSC لأسباب متعددة. واستند اختيار ADSC على العديد من الدراسات التي أثبتت قدراتها المضادة للالتهابات، وخصوصا في عملية التئام الجلد. ومن المعروف ADSCs لتعديل الخلايا الكيراتينية والخلايا الليفية التفاعلات 7. آلية التنمية التليف معقدة ومفهومة جزئيا فقط. يبدو أن تأثير نظير الصماوي أن تلعب دورا رئيسيا في العمل ADSC، بما في ذلك إنتاج عامل مضاد للالتهابات، مثل TGFβ والعوامل المؤيدة للعائية 20.

بالمنظار الزرع ورقة ADSC لديها العديد من القيود. أولا، تم تطبيق صفائح الخلايا لمدة 10 دقيقة إلى ندبة المريء للحصول على التصاق مستقر. وكان هذا جزءا من إجراءات صعبة وصعبة من الناحية الفنية، وكان لا بد من تنفيذها من قبل ذوي الخبرة endoscopist. ومع ذلك، تم زرع جميع الحيوانات بنجاح، مما يؤكد جدوى من إجراء المنظار. مؤخرا، تم الابلاغ عن استخدام جهاز مطبوعة 3D لتحسين نجاح زرع خلية ورقة 21. الثانية، ويرتبط هذا الأسلوب مع معدل البقاء على قيد الحياة غير معروف. ندبة المريء هي بيئة عدائية للخلايا. يسمح طبق استجابة درجات الحرارة لإنتاج ورقة خلية بناء من خلال المصفوفة خارج الخلية ولتشكيل اتصالات الخلية. وبالتالي، من أجل تحسين معدل البقاء على قيد الحياة والتفاعلات ADSC، تم اختيار مزدوج بناء ورقة ADSC 22، 23. لم يتم تصميم هذه الدراسة لتقييم إما معدل بقاء الخلية أو تأثير جرعة من زرع على منع تضيق المريء، وكلاهما أسئلة مهمة. ثالثا، كما هو الحال في Ohki وآخرون. ، كان استخدام غشاء الدعم اللازم لحمل بناء ورقة ADSC. الخلفإيه زرع، لا يمكن إزالة غشاء دعامة الورق دون تدمير بناء. وكانت هذه المواد الغريبة داخل المريء المسؤولة عن زيادة الالتهابات. ومن شأن تقنية الأمثل تسمح لإزالة الغشاء دعامة الورق.

كان تحديا أيضا مراقبة زرع مع pCLE. تسمح هذه التقنية التصوير بالمنظار جديدة في التحليل النسيجي الجسم الحي، بما في ذلك التصور من نمط غدي،-الأوعية الدموية الصغيرة، وتغيير الخلوي. تم تقييم pCLE في العديد من أمراض الجهاز الهضمي، مثل مرض التهاب الأمعاء والمريء باريت، والخراجات البنكرياس موسينية 24 و 25. تم استخدام fluorophore PKH67-pCLE تتلاءم مع وضع العلامات الخلية. ولوحظ وجود إشارة الفلورسنت متوافقة مع وجود ورقة ADSC في 4 الحيوانات في اليوم 3. هذه النتيجة الإيجابية تعكس نجاح زرع ورقة ADSC. ومع ذلك، BECAاستخدام PKH67 لديه إشارة انخفضت مع مرور الوقت وبعد انقسام الخلايا، وتقييم pCLE ممكنا بعد بضعة أيام فقط زرع 26. Ohki وآخرون. وكاناي وآخرون. مراقبة زرع رقة الخلية من خلال المناعية، وأكدوا وجود خلايا حتى يوم 8 بعد الزرع. واستخدمت خلايا ناضجة في هذه الدراسة، والتي لديها ميزة المناعية محددة.

تضيق المريء هو واحد من الأحداث السلبية الخطيرة التالية البيئة والتنمية المستدامة، وبالتالي تحد من تطوير تقنية. التقنيات المثلى لمنع تشكيل تضيق لا تزال تفتقر. في الممارسة السريرية، توصف المرضى مع البيئة والتنمية المستدامة المريء طويلة العلاجات الوقائية المختلفة، مثل الستيرويدات، dilatations بالون بالمنظار، أو المريء الدعامات 27. وقد أجريت التطبيق المحلي من مادة بيولوجية، وكانت النتائج متفاوتة 28، 29 30 و 31. ولوحظ وجود إعادة الاندمال بتشكل النسيج الظهاري المبكر وزيادة في ندبة المريء. لتعديل مناعي المحلي، تتوفر في الأدبيات حول حقن ADSC أو الأمنيوسي تطبيق غشاء 32 و 33 بيانات قليلة. وقد لوحظ تشكيل تضيق تأخر ومعدل تضيق انخفضت.

في هذا النموذج الخنازير، تم تنفيذ الإجراء زرع خلية ورقة بالمنظار بنجاح. أظهرت ADSCs زرع منظم في أوراق خلية مزدوجة قدرتها على منع تشكيل تضيق المريء بعد البيئة والتنمية المستدامة طويلة. الآليات التي تشارك في شفاء ADSCعملية وغير مفهومة ويجب التحقيق أكثر في الدراسات المستقبلية. وهكذا، في ضوء هذه النتائج واعدة، وينبغي إجراء تجربة سريرية لتقييم فعالية بناء ورقة ADSC بعد أن مددت البيئة والتنمية المستدامة في المرضى.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Transparent endoscopic cap Q180 compatible Olympus Optical Co
GIF-Q180 gastroscope  Olympus Optical Co
Videoscope System Exera II  Olympus Optical Co
Injection needle 18 G Olympus Optical Co
Electrosurgery unit ERBE ICC 350  ERBE Technology
Indigo carmin 1% Life
Endoscopic hybrid knife Life
Minisonde Z pCLE green probe Mauna Kea Technology You must learn how to use the probe. The manipulation could be difficult.
Fetal bovine serum Sigma Aldrich 12105C
Trypsin Sigma Aldrich T146
Alpha minimum essential medium Thermo Fisher 22561-021
Phosphate-Buffered Salines Thermo Fisher 10010-023
PKH67 dye kit Sigma Aldrich Mini67-KT
12-well temperature responsive cell culture dish Upcell Thermo Scientific 174900 Feel the weel with 4 mL standard medium culture 30 min before seeding cells
Esomeprazole 40 mg  Biogaran
Moprhine sulfate 50 mg/mL Lavoisier
Amoxicilline 1 g Biogaran
Ketamine 250 mg/5 mL Panpharma
Propofol 10 mg/mL Fresenius
Hydrophobic paper Carrefour

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ono, S., Fujishiro, M., et al. Long-term outcomes of endoscopic submucosal dissection for superficial esophageal squamous cell neoplasms. Gastrointestinal endoscopy. 70, (5), 860-866 (2009).
  2. Pech, O., May, A., et al. Long-term efficacy and safety of endoscopic resection for patients with mucosal adenocarcinoma of the esophagus. Gastroenterology. 146, (3), 652-660 (2014).
  3. Yahagi, N. Is esophageal endoscopic submucosal dissection an extreme treatment modality, or can it be a standard treatment modality. Gastrointestinal Endoscopy. 68, (6), 1073-1075 (2008).
  4. Rösch, T., Sarbia, M., et al. Attempted endoscopic en bloc resection of mucosal and submucosal tumors using insulated-tip knives: a pilot series. Endoscopy. 36, (9), 788-801 (2004).
  5. Chennat, J., Ross, A. S., et al. Advanced pathology under squamous epithelium on initial EMR specimens in patients with Barrett's esophagus and high-grade dysplasia or intramucosal carcinoma: implications for surveillance and endotherapy management. Gastrointestinal endoscopy. 70, (3), 417-421 (2009).
  6. Oyama, T., Tomori, A., et al. Endoscopic submucosal dissection of early esophageal cancer. Clinical gastroenterology and hepatology: the official clinical practice journal of the American Gastroenterological Association. 3, (7), Suppl 1 67-70 (2005).
  7. Werner, S., Krieg, T., Smola, H. Keratinocyte-fibroblast interactions in wound healing. The Journal of Investigative Dermatology. 127, (5), 998-1008 (2007).
  8. Yamaguchi, N., Isomoto, H., et al. Effect of oral prednisolone on esophageal stricture after complete circular endoscopic submucosal dissection for superficial esophageal squamous cell carcinoma: a case report. Digestion. 83, (4), 291-295 (2011).
  9. Hanaoka, N., Ishihara, R., et al. Intralesional steroid injection to prevent stricture after endoscopic submucosal dissection for esophageal cancer: a controlled prospective study. Endoscopy. 44, (11), 1007-1011 (2012).
  10. Ohki, T., Yamato, M., et al. Treatment of oesophageal ulcerations using endoscopic transplantation of tissue-engineered autologous oral mucosal epithelial cell sheets in a canine model. Gut. 55, (12), 1704-1710 (2006).
  11. Ohki, T., Yamato, M., et al. Prevention of esophageal stricture after endoscopic submucosal dissection using tissue-engineered cell sheets. Gastroenterology. 143, (3), 582-588 (2012).
  12. García-Gómez, I., Elvira, G., et al. Mesenchymal stem cells: biological properties and clinical applications. Expert opinion on biological therapy. 10, (10), 1453-1468 (2010).
  13. Jorgensen, C., Noël, D. Mesenchymal stem cells in osteoarticular diseases. Regenerative Medicine. 6, (6), Suppl 44-51 (2011).
  14. Antonic, A., Sena, E. S., et al. Stem cell transplantation in traumatic spinal cord injury: a systematic review and meta-analysis of animal studies. PLoS biology. 11, (12), 1001738 (2013).
  15. Perrod, G., Rahmi, G., et al. Cell Sheet Transplantation for Esophageal Stricture Prevention after Endoscopic Submucosal Dissection in a Porcine Model. PLOS ONE. 11, (3), 0148249 (2016).
  16. Mellow, M. H., Pinkas, H. Endoscopic laser therapy for malignancies affecting the esophagus and gastroesophageal junction. Analysis of technical and functional efficacy. Archives of Internal Medicine. 145, (8), 1443-1446 (1985).
  17. N.A.S.C.E.T. Beneficial effect of carotid endarterectomy in symptomatic patients with high-grade carotid stenosis. The New England Journal of Medicine. 325, (7), 445-453 (1991).
  18. Randomised trial of endarterectomy for recently symptomatic carotid stenosis: final results of the MRC European Carotid Surgery Trial (ECST). Lancet. 351, (9113), 1379-1387 (1998).
  19. Kanai, N., Yamato, M., Ohki, T., Yamamoto, M., Okano, T. Fabricated autologous epidermal cell sheets for the prevention of esophageal stricture after circumferential ESD in a porcine model. Gastrointestinal Endoscopy. 76, (4), 873-881 (2012).
  20. Aggarwal, S., Pittenger, M. F. Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses. Blood. 105, (4), 1815-1822 (2005).
  21. Maeda, M., Kanai, N., et al. Endoscopic cell sheet transplantation device developed by using a 3-dimensional printer and its feasibility evaluation in a porcine model. Gastrointestinal Endoscopy. (2015).
  22. Haraguchi, Y., Shimizu, T., et al. Fabrication of functional three-dimensional tissues by stacking cell sheets in vitro. Nature Protocols. 7, (5), 850-858 (2012).
  23. Nishida, K., Yamato, M., et al. Corneal reconstruction with tissue-engineered cell sheets composed of autologous oral mucosal epithelium. The New England Journal of Medicine. 351, (12), 1187-1196 (2004).
  24. Napoléon, B., Lemaistre, A. -I., et al. A novel approach to the diagnosis of pancreatic serous cystadenoma: needle-based confocal laser endomicroscopy. Endoscopy. 47, (1), 26-32 (2015).
  25. Gabbani, T., Manetti, N., Bonanomi, A. G., Annese, A. L., Annese, V. New endoscopic imaging techniques in surveillance of inflammatory bowel disease. World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 7, (3), 230-236 (2015).
  26. Nagyova, M., Slovinska, L., et al. A comparative study of PKH67, DiI, and BrdU labeling techniques for tracing rat mesenchymal stem cells. In Vitro Cellular & Developmental Biology. Animal. 50, (7), 656-663 (2014).
  27. Jain, D., Singhal, S. Esophageal Stricture Prevention after Endoscopic Submucosal Dissection. Clinical Endoscopy. 49, (3), 241-256 (2016).
  28. Lua, G. W., Tang, J., Liu, F., Li, Z. S. Prevention of Esophageal Strictures After Endoscopic Submucosal Dissection: A Promising Therapy Using Carboxymethyl Cellulose Sheets. Digestive Diseases and Sciences. 61, (6), 1763-1769 (2016).
  29. Sakaguchi, Y., Tsuji, Y., et al. Triamcinolone Injection and Shielding with Polyglycolic Acid Sheets and Fibrin Glue for Postoperative Stricture Prevention after Esophageal Endoscopic Resection: A Pilot Study. The American Journal of Gastroenterology. 111, (4), 581-583 (2016).
  30. Sakurai, T., Miyazaki, S., Miyata, G., Satomi, S., Hori, Y. Autologous buccal keratinocyte implantation for the prevention of stenosis after EMR of the esophagus. Gastrointestinal endoscopy. 66, (1), 167-173 (2007).
  31. Nieponice, A., McGrath, K., et al. An extracellular matrix scaffold for esophageal stricture prevention after circumferential EMR. Gastrointestinal Endoscopy. 69, (2), 289-296 (2009).
  32. Honda, M., Hori, Y., et al. Use of adipose tissue-derived stromal cells for prevention of esophageal stricture after circumferential EMR in a canine model. Gastrointestinal endoscopy. 73, (4), 777-784 (2011).
  33. Barret, M., Pratico, C. A., et al. Amniotic membrane grafts for the prevention of esophageal stricture after circumferential endoscopic submucosal dissection. PloS One. 9, (7), 100236 (2014).
ADSC ورقة زرع منع التقييد بعد موسع المريء بالمنظار تحت المخاطية تشريح
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Perrod, G., Pidial, L., Camilleri, S., Bellucci, A., Casanova, A., Viel, T., Tavitian, B., Cellier, C., Clément, O., Rahmi, G. ADSC-sheet Transplantation to Prevent Stricture after Extended Esophageal Endoscopic Submucosal Dissection. J. Vis. Exp. (120), e55018, doi:10.3791/55018 (2017).More

Perrod, G., Pidial, L., Camilleri, S., Bellucci, A., Casanova, A., Viel, T., Tavitian, B., Cellier, C., Clément, O., Rahmi, G. ADSC-sheet Transplantation to Prevent Stricture after Extended Esophageal Endoscopic Submucosal Dissection. J. Vis. Exp. (120), e55018, doi:10.3791/55018 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter