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Medicine

在体内图像的Cx3cr1gfp/gfp 记者光谱域光学相干层析成像和扫描激光眼底

Published: November 11, 2017 doi: 10.3791/55984
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Department of Ophthalmology and Department of Clinical Research, Bern University Hospital and University of Bern

Summary

本协议描述了如何利用眼科成像平台系统, 在小啮齿动物中利用光谱域光学相干层析成像和扫描激光眼底等高分辨率成像技术, 获取有关视网膜厚度和胶质细胞分布, 分别。

Abstract

光谱领域光学相干层析成像 (SD OCT) 和扫描激光眼底 (斯洛伐克) 广泛应用于实验眼科。在本协议中, 在Cx3cr1的启动子 (balb/c/c-Cx3cr1gfp/gfp) 下, 使用表达绿色荧光蛋白 (gfp) 的小鼠在视网膜中对胶质细胞进行了体内的图像。小胶质细胞是视网膜的常驻巨噬, 并有牵连在几个视网膜疾病1,2,3,4,5,6。该协议提供了一个详细的方法来生成视网膜 B 扫描, 与 SD OCT, 和成像的小胶质细胞分布在Cx3cr1gfp/gfp 鼠与斯洛伐克在体内, 使用眼科成像平台系统。该协议可用于几个记者鼠标线。但是, 这里提出的协议有一些限制。首先, 斯洛伐克和 SD OCT, 当用于高分辨率模式, 收集数据具有较高的轴向分辨率, 但横向分辨率较低 (3.5 µm 和6µm, 分别)。此外, 斯洛伐克的焦点和饱和度高度依赖于参数的选择和眼睛的正确对准。此外, 使用设计的人的病人在小鼠是具有挑战性的, 由于更高的总光功率的鼠标眼睛相比, 人眼;这可能导致侧向放大率不准确7, 这也取决于鼠标镜头在其他方面的放大倍数。然而, 尽管轴向扫描位置取决于横向放大率, 轴向 SD OCT 测量是准确的8。

Introduction

在实验性眼科, 视网膜病理学的检查通常使用组织学技术进行评价。然而, 组织学要求动物 euthanization, 并可能导致改变的实际性质的组织。SD OCT 和斯洛伐克是常规用于临床眼科诊断目的和监测的一些视网膜疾病, 如糖尿病性黄斑水肿9, 前缺血性视神经病变10, 或视网膜色素变性11.SD OCT 和斯洛伐克是非侵入性的技术, 产生高分辨率的图像的视网膜, 这是可视化通过扩张瞳孔不进一步干预。SD OCT 提供视网膜结构和视网膜厚度的信息, 通过收集后向散射数据来创建视网膜的横断面图像, 而斯洛伐克收集荧光数据以产生视网膜的立体高对比度图像。现在, 这两种技术都越来越多地用于实验性眼科使用小鼠12,13,14,15 (甚至斑马鱼16,17), 可以提供定性和定量信息12、17、18、19、20、21。

内源性荧光如 lipofuscins 的积累或视网膜疣的形成可通过斯洛伐克作为自动荧光信号进行可视化。该功能使斯洛伐克成为诊断和监测视网膜疾病, 如年龄相关的黄斑变性或视网膜色素变性的有价值的技术22,23。在实验性眼科, 自动荧光成像 (AF) 可用于检测特定的细胞类型在记者的鼠标线。例如, 在Cx3cr124的启动子下, 杂表达 gfp 的小鼠对在正常视网膜中胶质细胞的可视化以及对胶质细胞/巨噬生物的研究是有利的。视网膜疾病的动态21。小胶质细胞是视网膜的常驻巨噬生物, 在损伤的组织稳态和组织修复中起关键作用1,25,26。小胶质细胞活化在视网膜已报告视网膜损伤, 缺血, 和变性, 提示在视网膜疾病的这些单元的作用2,3,4,5,6。

本议定书的目的是描述一个相对简单的方法, 视网膜成像和测量视网膜厚度使用 SD OCT, 并可视化 gfp 阳性小胶质细胞在Cx3cr1gfp/gfp 鼠标视网膜使用斯洛伐克 (海德堡 Spectralis HRA + OCT 系统)。本协议可用于各种小鼠行中健康或病变视网膜的成像和厚度测量。此外, 还可以使用斯洛伐克21对视网膜小胶质细胞数和微胶质细胞的活化进行形态学分析。小胶质细胞与中枢神经系统 (CNS) 的退行性疾病有关, 包括视网膜27,28,29。因此, 结合本协议中使用的两种方法, 可以使小胶质细胞分布与视网膜变性的相关性, 从而有助于监测疾病的严重性或治疗方法的有效性在体内。

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Protocol

在所有过程中, balb/c/c 的成年雄性和雌性小鼠在 "Cx3cr1" 的启动子下表达 gfp, 使用 24 。根据《关于在眼科和视力研究中使用动物的帕特声明》对小鼠进行了治疗, 所有的程序都是瑞士政府根据《联邦瑞士动物福利条例》批准的。通过皮下注射盐酸 medetomidine (0.75 毫克/千克) 和氯胺酮 (45 毫克/千克) 麻醉小鼠。通过监测呼吸速率和动物和 #39 对尾部捏的反射, 确定了适当的麻醉。在实验结束时, 小鼠被安乐死, CO 2 吸入.

注意: 尽可能快地执行每个成像会话 (最多20分钟), 因为麻醉后白内障形成可能会妨碍视网膜可视化 30 .

1. 系统配置

  1. 打开计算机.
  2. 打开电源。消息和 #34; 启动采集模块和 #34; 将出现在设备的控制面板屏幕上.
  3. 双击软件的桌面快捷方式来操作软件.
  4. 在 "数据库" 视图中, 单击 "#34"; 添加患者和 #34; 图标.
  5. 在弹出窗口中, 插入所有必需的信息 (姓氏、名字、标题、出生日期、性别和患者 ID), 然后单击并 #34; 好的 #34。在弹出窗口设置的角膜曲率为2毫米, 并点击和 #34; 好的 #34;...
  6. 在标准30和 #176 前放置一个78D 标准的眼科非接触式狭缝灯透镜, 并将其安全地固定在磁带上.
  7. 确保设备左侧的滤镜拉杆位于指示和 #34 上; A 和 #34; 允许 IR + OCT 和 AF 成像 ( 图 1 ).

2。鼠标准备

  1. 使用 medetomidine 盐酸盐剂量为0.75 毫克/千克和氯胺酮剂量为45毫克/千克的磷酸盐缓冲盐水 (PBS, pH 7.4) 准备麻醉解决方案。因此, 对于一个20克的老鼠, 混合15和 #181; 盐酸 medetomidine 与18和 #181; l 的氯胺酮到最后的体积50和 #181; 我在 PBS将解决方案存储在4和 #176; C 最多为一周.
  2. 抓住鼠标的颈背和应用一滴卡 0.5% + 肾上腺素盐酸盐2.5% 在每只眼睛, 以达到瞳孔扩张.
  3. 将鼠标保持克制, 并将胰岛素注射器附在30G 针上, 注入50和 #181; 麻醉液的 L将鼠标放回放在加热垫上方的笼子里。等待3-5 分钟, 直到鼠标完全镇静。为了评估麻醉深度, 捏一下老鼠的尾巴。用棉签轻轻触摸鼠标角膜, 检查角膜反射。如果没有观察到阳性反射, 请继续进行成像.
    注意: 监测麻醉期间的呼吸率是很重要的。如果老鼠没有完全镇静, 呼吸的速率将会在痛苦的刺激下增加.
  4. 在每只眼睛上使用 2% hydroxypropylmethylcellulose 滴的小鼠角膜.

3。SD OCT

  1. 将温度约32和 #176 的变暖补丁放在设备的下巴休息的 custom-made 平台上 ( 图 1 ).
  2. 若要图像右眼, 请将鼠标放在平台的左部分 ( 图 1 )。确保鼠标的右轨道朝向镜头, 其主体位于平台的左侧.
  3. 在右眼上应用一滴 hydroxypropylmethylcellulose, 并小心地将 +4 屈光度刚性透气接触镜置于其上 (球形电源:-25.00 至 +25.00 屈光度)。将隐形眼镜储存在平衡盐溶液 (BSS) 中。要抓住镜片, 使用塑料或硅钳来避免损坏.
  4. 按下控制面板显示的右上角的黄色框以启动采集模块 (绿色方框在 图 2A )。黄色框将变成绿色, 控制面板菜单将出现在屏幕上 ( 图 2A ).
  5. 要获取 B 扫描, 请在控制面板上选择 "IR + OCT" 选项 ( 图 2A )。选中的设置在 "控制面板" 中以蓝色突出显示.
  6. 选择和 #34; 视网膜和 #34; #34; 应用和结构; #34; 在软件中, 使用设备上的微将镜头移向鼠标眼睛 ( 图 1 )。在聚焦到视网膜之前, 检查指示和 #34; OD 和 #34; 在屏幕的左下部分选择。该软件根据目标的位置自动识别左 (OS) 和右 (OD) 眼.
    注意: 如果目标定位在平台的中间, 屏幕底部将出现一条错误消息。在这种情况下, 稍微重新鼠标, 直到软件识别正确的眼睛.
  7. 使用焦点旋钮, 将焦点放在视网膜上, 直到在计算机屏幕左侧的眼底图像中清晰地看到大血管。通过向左或向右转动微来移动照相机, 将相机按该方向移动, 或顺时针或逆时针, 分别将摄像机上下移动.
    注意: 在平台上重新定位鼠标或将镜头向上或向下移动, 以实现红外图像中的视觉神经头的首选定位.
  8. 逆时针旋转灵敏度旋钮以减少或顺时针方向增加眼底图像的亮度。当实现最佳聚焦时, 屏幕右侧将出现一个 SD OCT B 扫描.
    注意: 如果无法通过调整焦点来可视化 B 扫描, 请按键盘上的组合 Ctrl + Alt + Shift + O。在弹出窗口中, 调整参考臂的值, 直到 B 扫描出现在屏幕上.
  9. 在屏幕右下角, 从 "图案" 菜单中选择 "单个扫描" (在 "图 2B" ) 中的 "单行" .
  10. 将设备的微 ( 图 1 ) 向左、向右、向前或向后打开 (以该方向打开照相机), 以确保 B 扫描位于 SD OCT 扫描窗口的顶部和底部角之间.
  11. 将自动实时 (ART) 值设置为至少9以获得高质量的图像.
    注意: ART 通过平均连续扫描来提高图像质量。#34; 艺术与 #34; 价值; 高信噪比和图像质量。然而, 通过增加 #34; 艺术和 #34; 价值, 获取时间也增加.
  12. 按 #34; 获取和 #34; 按钮 ( 图 2 ) 在控制面板屏幕上并获取图像.
  13. 重新定位鼠标以图像左眼并重复步骤 3.2-3.12.
  14. 用塑料/硅钳取出隐形眼镜, 并将其放入 BSS 中.
  15. 用一滴新的 hydroxypropylmethylcellulose 将老鼠角膜水合, 然后用纸巾除去多余的部分.
  16. 通过逆时针旋转来移除标准30和 #176; 光学.
  17. 安装55和 #176; 镜头并对每只眼睛重复步骤 3.4-3.12.

4。自动荧光成像

  1. 不在平台上移动鼠标, 请在控制面板上选择 IR.
  2. 聚焦旋钮, 聚焦于大的视网膜血管.
  3. 在控制面板上选择 AF.
  4. 逆时针旋转灵敏度旋钮以减少或顺时针方向, 以增加图像的亮度.
  5. 按下敏感旋钮并设置 #34; 艺术和 #34; 值为67或更高, 以获得高质量的图像.
  6. 当集和 #34; 艺术和 #34; 价值已经达到, 新闻和 #34; 获取和 #34; 在控制面板上获取图像。再次按下灵敏度旋钮停止平均。调整焦点, 以可视化不同的视网膜层.
  7. 删除55和 #176; #160; 镜头并安装宽字段102和 #176; #160; 镜头。按照步骤4.1 和 #8211; 4.6 为每个鼠标和每只鼠标的眼睛.
  8. 单击并 #8220; 保存图像和 #8221; 在窗口的左上边框, 然后单击和 #8220; 退出和 #8221;。要保存计算机中的图像, 请通过双击鼠标名称从屏幕右侧的列表中选择鼠标。分别双击每个图像, 然后单击软盘图标。将图像另存为所需文件夹中的. tif、. bmp、. jpg 或. png。退出软件 #8220; 文件和 #8221; #8220; 退出和 #8221;.

5。麻醉逆转

  1. 用一滴 hydroxypropylmethylcellulose 将鼠标的眼睛与热垫上的鼠标返回.
  2. 以2.25 毫克/千克的剂量制备唑溶液, 以逆转盐酸 medetomidine 的镇静效果。对于20克鼠标, 添加9和 #181; atipamezol 在最后的150和 #181 的数量; l PBS。将解决方案存储在4和 #176; C 最多为一周.
    3. 麻醉注射后最小值 (步骤 2.2), 注入 150 #181; 唑溶液皮下注射.
  3. 监视鼠标直到麻醉恢复。当鼠标完全恢复 (唑注射后5-10 分钟) 把它放回笼子里。恢复是指动物的能力, 在一侧奠定了它的身体时, 重拾步行活动, 并响应环境刺激反应.

6。人工视网膜厚度测量从 SD oct 图像

  1. 通过双击该动物的名称打开 oct 扫描.
  2. 打开用30和 #176 获得的 B 扫描; 或55和 #176; 镜头.
  3. 选择和 #34; 厚度剖面和 #34;.
  4. 按 #34; 编辑图层分割和 #34; 图标 ( 图 2B )。该软件自动识别内限和基膜.
  5. 如有必要, 手动更正内限和基底膜的位置。为此, 请选择要从屏幕左侧修改的图层, 然后选取红色圆圈选项 ( 图 2B )。按下鼠标按钮移动圆圈以修改该行.
  6. 修改行以正确定位相应图层。单击并 #34; 保存和关闭 #34; 退出窗口.
    注: 由于脉络膜反射率的原因, 该软件可能不正确地识别出底座。因此, 最好在进行视网膜厚度测量之前, 手动定义它.
  7. 选择和 #34; 视网膜和 #34; 下 #34; 图层和 #34; 选项。屏幕底部会出现视网膜厚度图.
  8. 单击图上或 B 扫描上的不同位置可查看所选位置的视网膜厚度 (显示在和 #181; m).
  9. 测量所需距离视神经头的视网膜厚度并在电子表格中复制值.
  10. 对30和 #176 中的每个鼠标重复步骤 5.1-5.9; 55 和 #176; 镜头.
  11. 使用所需软件执行统计分析.

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Representative Results

使用这里提供的协议, SD OCT 扫描和斯洛伐克图像是从Cx3cr1gfp/gfp 鼠标在同一成像会话中获得的。图 3包括具有代表性的 SD OCT 单扫描, 它获得了30°或55°透镜 (图 3A) 和具有55°或102°透镜的具有代表性的斯洛伐克图像, 其中 gfp 阳性小胶质细胞是可视化的。与55°透镜相比, 在30°的 SD OCT 扫描中观察到脉络膜的高反射率。然而, 视网膜结构是清楚的在30°和55°图像 (图 3, 正确放大的图像)。在人工矫正视网膜边界 (内限和基底膜) 后, 在与视神经头相同距离测量时, 30 o与55°透镜之间的视网膜厚度测量有很好的相关性 (图 3C;皮尔逊相关 = 0.967, p和 #60; 0.0001)。以往的研究表明, sd oct 扫描的视网膜厚度测量与组织学视网膜切片的活体测量有很好的相关性,15,31 , 因此 sd oct 可作为非侵入性技术使用。用于视网膜厚度测量。利用斯洛伐克, 我们可以识别 gfp 阳性小胶质细胞作为 hyperreflective 信号在汽车荧光图像, 但宽场102°透镜能够覆盖更大的眼底面积相比, 55 °透镜。斯洛伐克也可用于监测视网膜小胶质细胞的分布和激活的报告鼠的功能性 fractalkine 受体 (Cx3cr1gfp/+ 小鼠) 在正常或病变视网膜12, 21,32。在同一个成像环节中, SD OCT 与斯洛伐克的结合可以提供有关小胶质细胞在视网膜变性时的分布和活化的信息, 并可用于监测鼠视网膜病变21。

Figure 1
图 1: 本研究中使用的设备的代表性图像.要像鼠标右眼一样, 鼠标定位在 custom-made 平台的左侧, 其右侧的轨道朝向镜头, 其身体俯卧在平台的左侧。平台的高度可以通过顺时针方向 (降低平台) 或逆时针方向 (升降平台) 调整 "下巴休息调整"。过滤杠杆必须定位到 "A", 以允许 IR + OCT 和 AF 成像。与焦点旋钮 (不可见的数字), 实验者可以改变扫描仪的焦点。微可以用来正确地照亮和校准视网膜的高品质图像。目标可以向上、向下、向右或由照相机手柄向左移动。请单击此处查看此图的较大版本.

Figure 2
图 2: 设备控制面板的插图.(A) 在控制面板的左侧显示可选择的采集模式 (红外线、IR; 自动荧光、AF 或哚绿血管造影、ICGA; 结合或不与光学相干层析成像, OCT)。在面板的中间部分可以选择采集设置 (IF 图像的强度, 剖面或体积扫描)。视野是由被装载的透镜决定的。用灵敏度旋钮可以调节 IR 或 AF 图像的亮度。通过按下灵敏度旋钮, 软件将开始平均在 IR 或 AF 获得的图像提供高质量的图像。(B) "获取模式" 菜单的插图。(C) 使用相应图标的软件中的函数摘要。请单击此处查看此图的较大版本.

Figure 3
图 3: OCT 扫描和自动荧光图像的Cx3cr1gfp/gfp 鼠标视网膜.(a) B 扫描用55° (上面板) 或30°透镜 (底部面板) 获得的小鼠视网膜。在右侧的面板上显示黄色方框的较高放大。(B) 绿色荧光蛋白阳性小胶质细胞在Cx3cr1gfp/gfp 鼠视网膜中的图像, 获得55°和102°透镜 (分别为左、右面板)。(C) 视网膜厚度测量, 测量的距离从光学神经头, SD OCT 扫描从30°和55°透镜获得。两个透镜之间有一个良好的相关性 (皮尔逊相关性 = 0.967)。缩放栏: 200 µm, 100 µm 放大 SD OCT 图像 (右面板)。请单击此处查看此图的较大版本.

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Discussion

本篇文章展示了一个协议为获取视网膜 B 扫描和成像的 gfp 阳性小胶质细胞分布在老鼠视网膜在同一成像会议。SD OCT 和斯洛伐克越来越多地用于视网膜疾病的动物模型, 提供信息的视网膜改变的时间10,14,17,18,21。使用此协议, Cx3cr1gfp/gfp 或Cx3cr1gfp/+ 鼠标视网膜可性成像, 并可获得视网膜厚度信息。这在视网膜疾病的实验模型中非常重要, 在那里疾病的严重程度会随着时间的推移而改变, 或者在治疗的时候进行测试。此外, 该协议还描述了如何将记者鼠标线用于视网膜中的荧光细胞的活体成像。

然而, 这里提出的协议有一些局限性。首先, 在为人类设计的设备中, 对鼠标视网膜的成像可能具有挑战性, 因为鼠标眼睛的总光功率较高, 这会导致侧向放大率不准确7。然而, 轴向 SD OCT 测量是准确的8。此外, 在小鼠的后续检查使用 "设置参考" 选项的软件是相当困难的, 由于不固定位置的鼠标在平台上, 从而纵向成像的小鼠视网膜可能是挑战。眼睛的纵向对准可以通过在红外图像的中心定位视神经, 然后获得所需的图像来实现。为了矫正眼睛旋转, 可以在采集后执行 SD-OCT en 图像的手动对齐, 并适用于其他地方33所描述的厚度测量。除了在本协议中使用的成像系统之外, 还开发了其他成像系统, 它提供了更大的角度, 并可以在不使用隐形眼镜的情况下图像更大的视网膜区域。Optos 例如可以覆盖更大的视网膜表面, 但与本研究中使用的设备相比, 图像的变异性更大34。尽管存在这些局限性, 但本协议可用于几种视网膜疾病的实验模型。可获得的信息包括视网膜厚度的改变 (肿胀, 萎缩), 视网膜脱离的检测, 或 hyperreflective 点和荧光标记细胞的存在, 以及其数量的增加或减少。

两种方法的组合在小鼠杂表达的Cx3cr1 (Cx3cr1gfp/+), 其中有一个功能 fractalkine 受体, 使实验者能够同时检测体内视网膜病变或损伤期间视网膜完整性的实时改变和可能的小胶质细胞积聚 (如、视网膜肿胀、视网膜萎缩)。此外, 通过应用形态学分析, 可以评估小胶质细胞的活化状态, 根据细胞的大小和复杂性的胶质细胞过程21。在视网膜疾病, 如视网膜静脉闭塞, 激活和积累的小胶质/巨噬细胞的视网膜萎缩的网站已经观察到27。此外, 在小鼠缺陷为Nr2e3基因 (核受体亚科2组 E 成员 3), 一个小鼠模型的隐性遗传增强 s-锥敏感性综合征 (干细胞), 外核层折叠 (花环) 可以在早期观察产后的日子。

有趣的是, 小胶质细胞可以被发现在花环内, 它已经被认为是光在这些老鼠的视网膜上观察到的退化,35,36。由于小胶质细胞的活化在各种视网膜疾病的过程中有牵连, 有时伴有视网膜结构的改变10,27,37,38, SD OCT 和斯洛伐克的结合可以揭示小胶质细胞活化与视网膜变性之间的相关性。尽管存在一些挑战, 本议定书可以纵向提供这种信息, 从而对视网膜损伤与小胶质细胞分布/活化的相关性和对治疗治疗的监测有价值有效性21。

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Disclosures

作者没有什么可透露的。

Acknowledgments

这项工作得到了瑞士国家科学基金会 (SNSF; #320030_156019) 的资助。作者获得德国海德堡工程有限公司的非金融支持。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Spectralis Imaging system (HRA+OCT) Heidelberg Engineering, Germany N/A ophthalmic imaging platform system
Heidelberg Eye Explorer Heidelberg Engineering, Germany N/A Version 1.9.13.0
78D standard ophthalmic non-contact slit lamp lens Volk Optical Inc., Ohio, USA V78C
Spectralis wide angle 55° lens Heidelberg Engineering, Germany 50897-002
ultra widefield 102° lens Heidelberg Engineering, Germany 50117-001
medetomidine hydrochloride 1 mg/mL (Domitor) Provet AG, Lyssach, Switzerland Swissmedic Nr. 50'590 - ATCvet: QN05CM91 anesthetic/analgesic
ketamine 50mg/ml (Ketalar) Parke-Davis, Zurich, Switzerland 72276388 anesthetic
tropicamide 0.5% + phenylephrine HCl 2.5% (Augentropfen mix) ISPI, Bern, Switzerland N/A pupil dilation
Omnican Insulin-50 0.5 ml G30 0.3 x 12mm B. Braun Mesungen AG, Carl-Braun-Straße, Germany 9151125
hydroxypropylmethylcellulose (Methocel 2%) OmniVision, Neuhausen, Switzerland N/A
+4 dpt rigid gas permeable contact lens Quantum I, Bausch + Lomb Inc., Rochester, NY N/A Base Curve: 7.20 to 8.40 mm
Diameter: 9.00 / 9.60 / 10.20 mm
Power: -25.00 to +25.00 Diopters
balanced salt solution (BSS) Inselspital, Bern, Switzerland N/A
silicon forceps N/A N/A
atipamezole 5 mg/mL (Antisedan) Provet AG, Lyssach, Switzerland N/A α2 adrenergic receptor antagonist
GraphPad Prism 7 GraphPad Software, Inc, San Diego, CA, USA N/A statistical analysis software

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Madeira, M. H., Boia, R., Santos, P. F., Ambrosio, A. F., Santiago, A. R. Contribution of microglia-mediated neuroinflammation to retinal degenerative diseases. Mediators Inflamm. , 673090 (2015).
  2. Ng, T. F., Streilein, J. W. Light-induced migration of retinal microglia into the subretinal space. Invest Ophthalmol Vis Sci. 42 (13), 3301-3310 (2001).
  3. Langmann, T. Microglia activation in retinal degeneration. J Leukoc Biol. 81 (6), 1345-1351 (2007).
  4. Joly, S., et al. Cooperative phagocytes: resident microglia and bone marrow immigrants remove dead photoreceptors in retinal lesions. Am J Pathol. 174 (6), 2310-2323 (2009).
  5. Arroba, A. I., Alvarez-Lindo, N., van Rooijen, N., de la Rosa, E. J. Microglia-mediated IGF-I neuroprotection in the rd10 mouse model of retinitis pigmentosa. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (12), 9124-9130 (2011).
  6. Zhang, C., Lam, T. T., Tso, M. O. Heterogeneous populations of microglia/macrophages in the retina and their activation after retinal ischemia and reperfusion injury. Exp Eye Res. 81 (6), 700-709 (2005).
  7. Geng, Y., et al. Optical properties of the mouse eye. Biomed Opt Express. 2 (4), 717-738 (2011).
  8. Lozano, D. C., Twa, M. D. Development of a rat schematic eye from in vivo biometry and the correction of lateral magnification in SD-OCT imaging. Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (9), 6446-6455 (2013).
  9. Vaz-Pereira, S., et al. Optical Coherence Tomography Features Of Active And Inactive Retinal Neovascularization In Proliferative Diabetic Retinopathy. Retina. 36 (6), 1132-1142 (2016).
  10. Kokona, D., Haner, N. U., Ebneter, A., Zinkernagel, M. S. Imaging of macrophage dynamics with optical coherence tomography in anterior ischemic optic neuropathy. Exp Eye Res. , (2016).
  11. Makiyama, Y., et al. Macular cone abnormalities in retinitis pigmentosa with preserved central vision using adaptive optics scanning laser ophthalmoscopy. PLoS One. 8 (11), e79447 (2013).
  12. Paques, M., et al. High resolution fundus imaging by confocal scanning laser ophthalmoscopy in the mouse. Vision Res. 46 (8-9), 1336-1345 (2006).
  13. Joshi, R., et al. Spontaneously occurring fundus findings observed using confocal scanning laser ophthalmoscopy in wild type Sprague Dawley rats. Regul Toxicol Pharmacol. 77, 160-166 (2016).
  14. Muraoka, Y., et al. Real-time imaging of rabbit retina with retinal degeneration by using spectral-domain optical coherence tomography. PLoS One. 7 (4), e36135 (2012).
  15. Fischer, M. D., et al. Noninvasive, in vivo assessment of mouse retinal structure using optical coherence tomography. PLoS One. 4 (10), e7507 (2009).
  16. Bell, B. A., et al. Retinal vasculature of adult zebrafish: in vivo imaging using confocal scanning laser ophthalmoscopy. Exp Eye Res. 129, 107-118 (2014).
  17. Bailey, T. J., Davis, D. H., Vance, J. E., Hyde, D. R. Spectral-domain optical coherence tomography as a noninvasive method to assess damaged and regenerating adult zebrafish retinas. Invest Ophthalmol Vis Sci. 53 (6), 3126-3138 (2012).
  18. Huber, G., et al. Spectral domain optical coherence tomography in mouse models of retinal degeneration. Invest Ophthalmol Vis Sci. 50 (12), 5888-5895 (2009).
  19. Dysli, C., Enzmann, V., Sznitman, R., Zinkernagel, M. S. Quantitative Analysis of Mouse Retinal Layers Using Automated Segmentation of Spectral Domain Optical Coherence Tomography Images. Transl Vis Sci Technol. 4 (4), 9 (2015).
  20. Sim, D. A., et al. A simple method for in vivo labelling of infiltrating leukocytes in the mouse retina using indocyanine green dye. Dis Model Mech. 8 (11), 1479-1487 (2015).
  21. Bosco, A., Romero, C. O., Ambati, B. K., Vetter, M. L. In vivo dynamics of retinal microglial activation during neurodegeneration: confocal ophthalmoscopic imaging and cell morphometry in mouse glaucoma. J Vis Exp. (99), e52731 (2015).
  22. Acton, J. H., Cubbidge, R. P., King, H., Galsworthy, P., Gibson, J. M. Drusen detection in retro-mode imaging by a scanning laser ophthalmoscope. Acta Ophthalmol. 89 (5), e404-e411 (2011).
  23. Greenstein, V. C., et al. Structural and functional changes associated with normal and abnormal fundus autofluorescence in patients with retinitis pigmentosa. Retina. 32 (2), 349-357 (2012).
  24. Jung, S., et al. Analysis of fractalkine receptor CX(3)CR1 function by targeted deletion and green fluorescent protein reporter gene insertion. Mol Cell Biol. 20 (11), 4106-4114 (2000).
  25. Wang, X., et al. Requirement for Microglia for the Maintenance of Synaptic Function and Integrity in the Mature Retina. J Neurosci. 36 (9), 2827-2842 (2016).
  26. Ebneter, A., Casson, R. J., Wood, J. P., Chidlow, G. Microglial activation in the visual pathway in experimental glaucoma: spatiotemporal characterization and correlation with axonal injury. Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (12), 6448-6460 (2010).
  27. Ebneter, A., Kokona, D., Schneider, N., Zinkernagel, M. S. Microglia Activation and Recruitment of Circulating Macrophages During Ischemic Experimental Branch Retinal Vein Occlusion. Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (2), 944-953 (2017).
  28. Lin, Y. L., Potter-Baker, K. A. Using theoretical models from adult stroke recovery to improve use of non-invasive brain stimulation for children with congenital hemiparesis. J Neurophysiol. , (2017).
  29. Combadiere, C., et al. CX3CR1-dependent subretinal microglia cell accumulation is associated with cardinal features of age-related macular degeneration. J Clin Invest. 117 (10), 2920-2928 (2007).
  30. Bermudez, M. A., et al. Time course of cold cataract development in anesthetized mice. Curr Eye Res. 36 (3), 278-284 (2011).
  31. Toth, C. A., et al. A comparison of retinal morphology viewed by optical coherence tomography and by light microscopy. Arch Ophthalmol. 115 (11), 1425-1428 (1997).
  32. Ebneter, A., Kokona, D., Jovanovic, J., Zinkernagel, M. S. Dramatic Effect of Oral CSF-1R Kinase Inhibitor on Retinal Microglia Revealed by In Vivo Scanning Laser Ophthalmoscopy. Transl Vis Sci Technol. 6 (2), 10 (2017).
  33. Gabriele, M. L., et al. Reproducibility of spectral-domain optical coherence tomography total retinal thickness measurements in mice. Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (12), 6519-6523 (2010).
  34. Nakao, S., et al. Wide-field laser ophthalmoscopy for mice: a novel evaluation system for retinal/choroidal angiogenesis in mice. Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (8), 5288-5293 (2013).
  35. Wang, N. K., et al. Origin of fundus hyperautofluorescent spots and their role in retinal degeneration in a mouse model of Goldmann-Favre syndrome. Dis Model Mech. 6 (5), 1113-1122 (2013).
  36. Wang, N. K., et al. Cellular origin of fundus autofluorescence in patients and mice with a defective NR2E3 gene. Br J Ophthalmol. 93 (9), 1234-1240 (2009).
  37. Thanos, S. Sick photoreceptors attract activated microglia from the ganglion cell layer: a model to study the inflammatory cascades in rats with inherited retinal dystrophy. Brain Res. 588 (1), 21-28 (1992).
  38. Hughes, E. H., et al. Generation of activated sialoadhesin-positive microglia during retinal degeneration. Invest Ophthalmol Vis Sci. 44 (5), 2229-2234 (2003).

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