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Medicine

Vivo में Cx3cr1gfp/gfp रिपोर्टर चूहों के साथ इमेजिंग-डोमेन ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी और स्कैनिंग लेजर Ophthalmoscopy

Published: November 11, 2017 doi: 10.3791/55984
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Department of Ophthalmology and Department of Clinical Research, Bern University Hospital and University of Bern

Summary

इस प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे उच्च संकल्प इमेजिंग तकनीक जैसे वर्णक्रमीय डोमेन ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी और स्कैनिंग लेजर ophthalmoscopy छोटे कुतर में उपयोग किया जा सकता है, एक नेत्र इमेजिंग मंच प्रणाली का उपयोग कर, पर जानकारी प्राप्त करने के लिए रेटिना की मोटाई और microglial सेल वितरण, क्रमशः ।

Abstract

वर्णक्रमीय डोमेन ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी (एसडी-OCT) और स्कैनिंग लेजर ophthalmoscopy (SLO) बड़े पैमाने पर प्रयोगात्मक नेत्र विज्ञान में प्रयोग किया जाता है । वर्तमान प्रोटोकॉल में चूहों ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (gfp) के प्रवर्तक के तहत व्यक्त Cx3cr1 (बालब/c-Cx3cr1gfp/gfp) रेटिना में vivo में छवि microglia कोशिकाओं का इस्तेमाल किया गया । Microglia रेटिना के मैक्रोफेज निवासी है और कई रेटिना रोगों1,2,3,4,5,6में फंसाया गया है । इस प्रोटोकॉल की पीढ़ी के लिए एक विस्तृत दृष्टिकोण प्रदान करता है रेटिना बी-स्कैन, एसडी के साथ-OCT, और microglia सेल वितरण की इमेजिंग में Cx3cr1gfp/ SLO के साथ gfp चूहों में vivo, एक नेत्र इमेजिंग प्लेटफॉर्म प्रणाली का उपयोग कर. प्रोटोकॉल कई रिपोर्टर माउस लाइनों में उपयोग किया जा सकता है । हालांकि, यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल के लिए कुछ सीमाएं हैं । सबसे पहले, दोनों SLO और एसडी अक्टूबर, उच्च संकल्प मोड में इस्तेमाल किया, उच्च अक्षीय संकल्प के साथ डेटा इकट्ठा लेकिन पार्श्व संकल्प कम है (३.५ µm और 6 µm, क्रमशः). इसके अलावा, ध्यान और SLO में संतृप्ति स्तर पैरामीटर चयन और आंख के सही संरेखण पर अत्यधिक निर्भर है । इसके अतिरिक्त, चूहों में मानव रोगियों के लिए डिजाइन उपकरणों का उपयोग मानवीय आँख की तुलना में माउस आँख की उच्च कुल ऑप्टिकल शक्ति के कारण चुनौतीपूर्ण है; यह भी दूसरों के बीच में माउस लेंस द्वारा आवर्धन पर निर्भर कर रहे हैं, जो7वृद्धि अशुद्धियां पार्श्व करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । हालांकि, के बावजूद कि अक्षीय स्कैन की स्थिति पार्श्व आवर्धन पर निर्भर है, अक्षीय एसडी-OCT माप सही कर रहे हैं8.

Introduction

प्रयोगात्मक नेत्र विज्ञान में, रेटिना विकृति की परीक्षा आम तौर पर ऊतकीय तकनीकों का उपयोग कर मूल्यांकन किया जाता है. हालांकि, प्रोटोकॉल पशु euthanization की आवश्यकता होती है और ऊतक के वास्तविक गुणों को परिवर्तन के कारण हो सकता है । एसडी-अक्टूबर और SLO नियमित नैदानिक प्रयोजनों के लिए नैदानिक नेत्र विज्ञान में इस्तेमाल कर रहे हैं और इस तरह के मधुमेह धब्बेदार शोफ के रूप में कई रेटिना रोगों की निगरानी के लिए9, पूर्वकाल कोरोनरी ऑप्टिक न्यूरोपैथी10, या रेटनाइटिस पिगमेंटोसा11 . एसडी अक्टूबर और SLO गैर इनवेसिव तकनीक है कि रेटिना, जो आगे के हस्तक्षेप के बिना फैली हुई पुतली के माध्यम से कल्पना कर रहे है की उच्च संकल्प छवियों को उत्पंन कर रहे हैं । एसडी अक्टूबर रेटिना के पार अनुभागीय छवियों को बनाने के लिए backscattering डेटा इकट्ठा करके रेटिना संरचना और रेटिना की मोटाई की जानकारी प्रदान करता है, जबकि SLO रेटिना के त्रिविम उच्च कंट्रास्ट छवियों का उत्पादन करने के लिए प्रतिदीप्ति डेटा एकत्र. आजकल, दोनों तकनीकों तेजी से प्रयोगात्मक छोटे कुतर12,13,14,15 (या भी zebrafish16,17) का उपयोग कर नेत्र विज्ञान में इस्तेमाल कर रहे है और कर सकते है गुणात्मक और मात्रात्मक जानकारी12,17,18,19,20,21प्रदान करें ।

lipofuscins या रेटिना में drusen के गठन की तरह अंतर्जात fluorophores के संचय ऑटो फ्लोरोसेंट संकेत के रूप में SLO द्वारा visualized किया जा सकता है । इस सुविधा का निदान और उम्र के रूप में रेटिना रोगों की निगरानी के लिए एक मूल्यवान तकनीक SLO बनाता है संबंधित धब्बेदार अध-पतन या रेटनाइटिस पिगमेंटोसा22,23. प्रयोगात्मक नेत्र विज्ञान में, ऑटो प्रतिदीप्ति इमेजिंग (वायुसेना) रिपोर्टर माउस लाइनों में विशिष्ट कोशिका प्रकार का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । उदाहरण के लिए, चूहों heterozygous के प्रवर्तक के तहत gfp की अभिव्यक्ति के लिए Cx3cr124 सामान्य रेटिना में microglial कोशिकाओं के vivo विज़ुअलाइज़ेशन में और microglia/macrophage की जांच के लिए लाभप्रद हैं रेटिना रोग में गतिशीलता21. Microglia रेटिना के निवासी मैक्रोफेज हैं, जो चोट लगने पर ऊतक homeostasis और ऊतक मरम्मत पर एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं1,25,26. रेटिना में Microglia सक्रियण रेटिना में चोट, ischemia, और अध..., रेटिना रोग2,3,4,5में इन कोशिकाओं की भूमिका का सुझाव दिया गया है, 6.

वर्तमान प्रोटोकॉल का उद्देश्य है रेटिना इमेजिंग के लिए एक अपेक्षाकृत सरल विधि का वर्णन और रेटिना मोटाई की माप एसडी-OCT का उपयोग कर, और gfp के दृश्य के लिए सकारात्मक microglia कोशिकाओं में Cx3cr1gfp/gfp माउस रेटिना का उपयोग SLO (हीडलबर्ग Spectralis एचआरए + झालेले system). इस प्रोटोकॉल इमेजिंग और विभिंन माउस लाइनों में स्वस्थ या रोगग्रस्त रेटिना की मोटाई माप के लिए उपयोग किया जा सकता है । इसके अतिरिक्त, morphometric विश्लेषणों के लिए किया जा सकता है की पहचान और ठहराव के लिए microglia संख्या और microglia सक्रियकरण रेटिना में SLO21का उपयोग कर । Microglia कोशिकाएं केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) में अपक्षयी रोगों से जुड़ी हैं, जिनमें रेटिना२७,२८,२९है. इस प्रकार, दो वर्तमान प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किया तरीकों के संयोजन के द्वारा, microglia वितरण और रेटिना अध कि पतन के सहसंबंध बनाया जा सकता है, जो रोग गंभीरता या vivo मेंचिकित्सीय दृष्टिकोण की प्रभावशीलता की निगरानी की सुविधा कर सकते हैं ।

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Protocol

< p class = "jove_content" > सभी प्रक्रियाओं में, बालब/c वयस्क पुरुष और मादा चूहे जो Cx3cr1 के प्रवर्तक के अधीन gfp व्यक्त करते थे < सुप वर्ग = "xref" > 24 . चूहों नेत्र और दृष्टि अनुसंधान में पशुओं के उपयोग के लिए ARVO बयान के अनुसार इलाज किया गया और सभी प्रक्रियाओं स्विस सरकार से पशु कल्याण पर संघीय स्विस विनियमों के अनुसार अनुमोदित किया गया । चूहों medetomidine हाइडरोक्लॉराइड के एक चमड़े के नीचे इंजेक्शन द्वारा anesthetized थे (०.७५ मिलीग्राम/किग्रा) और ketamine (४५ मिलीग्राम/ उचित संज्ञाहरण श्वसन दर और पशु & #39; एस एक पूंछ चुटकी के खिलाफ पलटा निगरानी द्वारा पुष्टि की थी । प्रयोगों के अंत में, चूहों सह 2 साँस लेना के साथ euthanized थे.

< p class = "jove_content" > ध्यान दें: प्रत्येक इमेजिंग सत्र के रूप में जल्दी संभव के रूप में प्रदर्शन (अधिकतम 20 मिनट), के बाद से मोतियाबिंद गठन संज्ञाहरण में बाधा हो सकती है रेटिना विज़ुअलाइज़ेशन < सुप क्लास = "xref" > 30 .

< p class = "jove_title" > 1. सिस्टम विन्यास

  1. कंप्यूटर चालू करें.
    2. बिजली आपूर्ति चालू
  2. । संदेश & #34; प्रारंभ प्राप्ति माड्यूल & #34; डिवाइस के नियंत्रण कक्ष स्क्रीन पर दिखाई देगा ।
  3. सॉफ्टवेयर के डेस्कटॉप शॉर्टकट पर डबल क्लिक करें सॉफ्टवेयर संचालित करने के लिए ।
  4. डेटाबेस दृश्य पर, क्लिक करें & #34; जोड़ें रोगी & #34; चिह्न.
  5. पॉप-अप विंडो में, सभी आवश्यक जानकारी सम्मिलित करें (अंतिम नाम, प्रथम नाम, शीर्षक, जन्मतिथि, लिंग, और रोगी-ID) क्लिक करें और & #34; ok & #34;. पॉप विंडो पर corneal वक्री 2 मिमी सेट और क्लिक करें & #34; ok & #34;.
  6. स्थिति एक 78D मानक नेत्र गैर संपर्क भट्ठा लैंप लेंस के सामने मानक 30 & #176; ऑप्टिक और यह टेप के साथ सुरक्षित रूप से जकड़ना ।
  7. सुनिश्चित करें कि डिवाइस के बाईं ओर फ़िल्टर लीवर संकेत पर स्थित है & #34; A & #34; दोनों IR + OCT और AF इमेजिंग की अनुमति देने के लिए (< सबल वर्ग = "xfig" > चित्रा १ ).
< p class = "jove_title" > 2. माउस तैयारी

  1. ०.७५ मिलीग्राम/kg के एक medetomidine हाइडरोक्लॉराइड खुराक और फॉस्फेट में ४५ मिलीग्राम/किग्रा की एक ketamine खुराक-बफर खारा (पंजाब, पीएच ७.४) संज्ञाहरण समाधान तैयार करने के लिए उपयोग करें । इस प्रकार, एक 20 जी माउस, मिश्रण के लिए 15 & #181; एल के साथ medetomidine हाइडरोक्लॉराइड के 18 & #181; l को ketamine के एक अंतिम खंड में ५० & #181; l को पंजाब में. समाधान को एक सप्ताह तक के लिए 4 & #176; C पर संग्रहीत करें ।
  2. कूड़ा द्वारा माउस समझ और प्रत्येक आंख पर tropicamide ०.५% + phenylephrine हाइडरोक्लॉराइड २.५% की एक बूंद के लिए पुतली फैलाव को प्राप्त करने के लागू होते हैं ।
  3. रखने के लिए माउस को रोका, और एक इंसुलिन एक 30G सुई से जुड़ी सिरिंज के साथ, सुई ५० & #181; संज्ञाहरण समाधान के एल चमड़े के नीचे । माउस को वापस अपने पिंजरे में डाल दिया है कि एक हीटिंग पैड के ऊपर रखा गया है । 3-5 मिनट रुको जब तक माउस पूरी तरह से बेहोश है । संवेदनाहारी गहराई का आकलन करने के लिए, माउस की पूंछ चुटकी । धीरे से एक कपास झाड़ू के साथ माउस कॉर्निया छू द्वारा corneal पलटा की जांच करें । यदि कोई धनात्मक पलटा मनाया जाता है, तो इमेजिंग.
    के साथ जारी रखें नोट: यह संज्ञाहरण के दौरान श्वसन दर की निगरानी करने के लिए महत्वपूर्ण है । यदि माउस को पूरी तरह से बेहोश नहीं है, श्वसन दर एक दर्दनाक उत्तेजना पर वृद्धि होगी ।
  4. प्रत्येक आंख पर 2% hydroxypropylmethylcellulose बूंदों के एक आवेदन के साथ माउस कॉर्निया हाइड्रेट ।
< p class = "jove_title" > 3. SD-OCT

  1. लगभग ३२ & #176 की एक वार्मिंग पैच जगह पर कस्टम मेड प्लेटफॉर्म पर संलग्न डिवाइस के चिन बाकी (< मजबूत वर्ग = "xfig" > चित्रा 1 ).
    2. दाईं आंख की छवि के लिए
  2. , माउस को प्लेटफ़ॉर्म के बाएं भाग पर रखें (< सशक्त वर्ग = "xfig" > आरेख 1 ). सुनिश्चित करें कि माउस की सही कक्षा लेंस चेहरे और उसके शरीर मंच के बाएं हिस्से पर प्रवण निहित है ।
  3. सही आँख पर hydroxypropylmethylcellulose की एक बूंद लागू करते हैं और ध्यान से स्थिति एक + 4 diopter कठोर गैस पारगंय संपर्क लेंस उस पर (गोलाकार शक्ति:-२५.०० करने के लिए + २५.०० diopters). संतुलित नमक समाधान (बीएसएस) में संपर्क लेंस स्टोर । लेंस हड़पने के लिए, नुकसान से बचने के लिए प्लास्टिक या सिलिकॉन संदंश का उपयोग करें ।
  4. नियंत्रण कक्ष प्रदर्शन के दाहिने कोने पर पीला बॉक्स प्रेस अधिग्रहण मॉड्यूल (< मजबूत वर्ग पर ग्रीन बॉक्स = "xfig" > चित्रा 2a ) शुरू करने के लिए । पीला बॉक्स हरा हो जाएगा और नियंत्रण कक्ष मेनू स्क्रीन पर दिखाई देगा (< सबल वर्ग = "xfig" > चित्रा 2a ).
    5. बी-स्कैन के अधिग्रहण के लिए
  5. , नियंत्रण कक्ष पर विकल्प IR + OCT का चयन करें (< सबल वर्ग = "xfig" > चित्रा 2a ). चयनित सेटिंग्स नियंत्रण कक्ष पर नीले रंग में हाइलाइट किए गए हैं ।
  6. Select & #34; रेटिना & #34; के तहत & #34; आवेदन और संर & #34; सॉफ्टवेयर में और डिवाइस पर micromanipulator का उपयोग कर माउस आँख की ओर लैंस ले जाना (< सबल वर्ग = "xfig" > चित्रा 1 ). रेटिना पर ध्यान केंद्रित करने से पहले यह जांच लें कि संकेत & #34; ओडी & #34; स्क्रीन के बाएं नीचले भाग पर चयनित है । सॉफ़्टवेयर स्वचालित रूप से बाएँ (OS) और उद्देश्य की स्थिति के आधार पर दाएँ (OD) आँख की पहचान करता है.
    नोट: यदि उद्देश्य प्लेटफ़ॉर्म के मध्य पर स्थित है, तो स्क्रीन के निचले भाग पर एक त्रुटि संदेश दिखाई देगा. उस मामले में, फिर से माउस की स्थिति थोड़ा जब तक सॉफ्टवेयर सही आंख पहचानता है ।
    7. ध्यान घुंडी के साथ
  7. , जब तक बड़े जहाजों स्पष्ट रूप से कंप्यूटर स्क्रीन के बाईं तरफ fundus छवि में देखा जाता है रेटिना पर ध्यान केंद्रित । कैमरा को ऊपर या नीचे ले जाने के लिए, क्रमश: बाएं या दाएं, कैमरे को उस दिशा में ले जाने के लिए, या दक्षिणावर्त या उल्टी, micromanipulator को घुमाकर ले जाएं ।
    नोट: मंच पर माउस की स्थिति या लेंस ऊपर की तरफ या नीचे की ओर अवरक्त छवि में ऑप्टिक तंत्रिका सिर के पसंदीदा स्थानीयकरण को प्राप्त करने के लिए कदम ।
  8. संवेदनशीलता घुंडी घड़ी को कम करने या fundus छवि की चमक बढ़ाने के लिए दक्षिणावर्त बारी । इष्टतम ध्यान प्राप्त होता है, एक एसडी-अक्टूबर बी स्कैन स्क्रीन के दाईं ओर दिखाई देगा.
    नोट: यदि ध्यान समायोजित करके B-स्कैन विज़ुअलाइज़ नहीं किया जा सकता है, तो कीबोर्ड पर संयोजन ctrl + Alt + Shift + O दबाएँ. पॉप-अप विंडो में, जब तक कि B-स्कैन स्क्रीन पर प्रकट होता है, तब तक संदर्भ आर्म का मान समायोजित करें.
    9. स्क्रीन के नीचे दाईं ओर
  9. , प्रतिमान मेनू से एकल स्कैन चुनें (< सशक्त वर्ग में एकल पंक्ति = "xfig" > चित्र बी ).
  10. डिवाइस के micromanipulator (< सबल वर्ग = "xfig" > चित्रा 1 ) वाम, ठीक है, आगे, या पिछड़े (कैमरे को उस दिशा में बारी करने के लिए) सुनिश्चित करें कि बी स्कैन एसडी-OCT स्कैन विंडो के ऊपर और नीचे कोनों के बीच स्थित है ।
  11. उच्च गुणवत्ता वाले चित्रों को प्राप्त करने के लिए न्यूनतम 9 करने के लिए स्वचालित रीयल-टाइम (एआरटी) मान सेट करें ।
    नोट: कला कई लगातार स्कैन औसत द्वारा छवि गुणवत्ता में सुधार । उच्च द & #34; कला & #34; मान, संकेत-से-शोर अनुपात अधिक और इस प्रकार छवि गुणवत्ता । हालांकि, & #34 बढ़ाने से; कला & #34; मान, क्य समय भी बढ जाता है ।
  12. प्रेस द & #34; मोल & #34; बटन (< मजबूत वर्ग = "xfig" > चित्रा 2 ) नियंत्रण कक्ष स्क्रीन पर और छवियों का अधिग्रहण.
  13. फिर से माउस की स्थिति बाईं आंख छवि और दोहराएं कदम 3.2-3.12.
  14. प्लास्टिक/सिलिकॉन संदंश के साथ संपर्क लेंस निकालें और यह बीएसएस.
    15. में जगह
  15. hydroxypropylmethylcellulose की एक ताजा बूंद के साथ माउस कॉर्निया हाइड्रेट और एक ऊतक कागज के साथ अतिरिक्त हटा दें ।
  16. निकाल मानक 30 & #176; ऑप्टिक इसे घुमाकर उल्टी.
  17. इत द ५५ & #176; लेंस और प्रत्येक आँख के लिए दोहराएँ कदम 3.4-3.12.
< p class = "jove_title" > 4. ऑटो प्रतिदीप्ति इमेजिंग

  1. प्लेटफॉर्म पर माउस ले जाने के बिना, नियंत्रण कक्ष पर IR चुनें ।
    2. ध्यान घुंडी के साथ
  2. , बड़ी रेटिना वाहिकाओं पर ध्यान केंद्रित.
    3. नियंत्रण कक्ष पर
  3. का चयन वायुसेना.
  4. संवेदनशीलता घुंडी बारी की सुइयों को कम करने के लिए या छवि की चमक बढ़ाने के लिए दक्षिणावर्त.
  5. संवेदनशीलता घुंडी प्रेस और उच्च गुणवत्ता छवियों को प्राप्त करने के लिए ६७ या अधिक करने के लिए मान & #34; कला & #34; मूल्य सेट करें ।
  6. जब सेट & #34; ART & #34; मान पर पहुंच गया है, तो दबाएं & #34; मोल & #34 के लिए छवि प्राप्त करने के लिए नियंत्रण कक्ष पर । संवेदनशीलता घुंडी फिर से प्रेस औसत रोकने के लिए । ध्यान समायोजित, अलग रेटिना परतों कल्पना करने के लिए.
  7. निकाल द ५५ & #176; & #160; लेंस और माउंट वाइड फील्ड १०२ & #176; & #160; लेंस. चरणों का पालन करें ४.१ & #8211; प्रत्येक माउस और हर माउस के लिए दोनों की आंखों के लिए ४.६.
  8. click & #8220; छवियाँ सहेजें & #8221; विंडो की बाईं ऊपरी बॉर्डर पर और फिर क्लिक करें & #8220; निकास & #8221;. कंप्यूटर में छवियों को सहेजने के लिए, माउस नाम पर डबल क्लिक करके स्क्रीन के दाएं भाग पर सूची से माउस का चयन करें । प्रत्येक छवि पर अलग से डबल क्लिक करें और फिर फ्लॉपी डिस्क आइकन पर क्लिक करें । छवि को इच्छित फ़ोल्डर में. tif,. bmp,. jpg, या. png के रूप में सहेजें । बाहर निकलने के लिए सॉफ्टवेयर प्रेस & #8220; फाइल & #8221; व & #8220; निकास & #8221;.
< p class = "jove_title" > 5. संज्ञाहरण उलटा

  1. हाइड्रेट hydroxypropylmethylcellulose की एक बूंद के साथ माउस आंखें और एक हीटिंग पैड पर माउस वापसी ।
  2. medetomidine हाइडरोक्लॉराइड के शामक प्रभाव रिवर्स करने के लिए २.२५ मिलीग्राम/kg की एक खुराक में atipamezole समाधान तैयार करते हैं । एक 20 जी माउस के लिए, 9 & #181 जोड़ें; atipamezol के एक अंतिम खंड में १५० & #181; l पंजाबियों । समाधान को एक सप्ताह तक के लिए 4 & #176; C पर संग्रहीत करें ।
    3. संज्ञाहरण इंजेक्शन के बाद
  3. मिन (चरण २.२), इंजेक्षन १५० & #181; L के atipamezole समाधान के चमड़े के नीचे.
  4. निगरानी संज्ञाहरण से वसूली तक माउस । जब माउस पूरी तरह से (atipamezole इंजेक्शन के बाद 5-10 मिनट) बरामद किया है इसे वापस अपने पिंजरे में डाल दिया । वसूली पशु की क्षमता से संकेत दिया है जब अपने शरीर बारी जब एक तरफ रखी, गतिविधि चलने के पुनः प्राप्त, और पर्यावरण उत्तेजना के जवाब में प्रतिक्रिया ।
< p class = "jove_title" > 6. एसडी-oct छवियां से मैंयुअल रेटिना मोटाई माप

  1. पशु के नाम पर डबल क्लिक करके OCT स्कैन खोलें ।
  2. 30 & #176; या ५५ & #176; लैंस के साथ प्राप्त बी-स्कैन को खोलें ।
  3. चुन & #34; मोटाई profile & #34;.
  4. दबा द & #34; Edit लेयर फॉल्ट & #34; आइकॉन (< मजबूत वर्ग = "xfig" > फिगर बी ). सॉफ्टवेयर स्वचालित रूप से आंतरिक सीमित और आधार झिल्ली की पहचान करता है ।
  5. यदि आवश्यक हो, मैंयुअल रूप से आंतरिक सीमित और आधार झिल्ली की स्थिति को सही । ऐसा करने के लिए, स्क्रीन के बाईं ओर से संशोधित की जाने वाली परत को चुनें और फिर लाल वृत्त विकल्प (< मज़बूत वर्ग = "xfig" > चित्रा b ). पंक्ति को संशोधित करने के लिए दबाया गया माउस बटन के साथ वृत्त ले जाएं ।
  6. ठीक से संगत परत स्थिति के लिए पंक्ति को संशोधित करें । & #34; सहेजें और बंद करें & #34; विंडो से बाहर निकलने के लिए
    नोट: रंजित की भावना के कारण, सॉफ़्टवेयर गलत तरीके से आधार झिल्ली की पहचान हो सकती है । इस प्रकार, यह रेटिना मोटाई माप करने के लिए आगे बढ़ने से पहले इसे मैन्युअल रूप से परिभाषित करने के लिए बेहतर है.
  7. & #34; रेटिना & #34; के अधीन & #34; परत & #34; विकल्प. रेटिना की मोटाई का एक आरेख स्क्रीन के निचले भाग पर दिखाई देगा.
  8. चयनित स्थिति के लिए रेटिना की मोटाई (& #181; m में इंगित) को देखने के लिए या तो आरेख पर या किसी भिन्न स्थिति पर क्लिक करें.
  9. ऑप्टिक तंत्रिका सिर से वांछित दूरी में रेटिना की मोटाई को मापने और एक स्प्रेडशीट में मूल्यों की प्रतिलिपि.
  10. दोहराएं चरण 5.1-5.9 प्रत्येक माउस के लिए दोनों के लिए 30 & #176; और ५५ & #176; लेंस.
  11. वांछित सॉफ्टवेयर के साथ सांख्यिकीय विश्लेषण करते हैं.

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Representative Results

यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए, SD-OCT स्कैन और SLO छवियाँ एक ही इमेजिंग सत्र में Cx3cr1gfp/gfp चूहों से प्राप्त किए गए थे । चित्रा 3 प्रतिनिधि एसडी-अक्टूबर एकल स्कैन एक 30 डिग्री या एक ५५ डिग्री लेंस के साथ प्राप्त शामिल (चित्रा 3) और प्रतिनिधि SLO एक ५५ डिग्री या एक १०२ डिग्री लेंस के साथ प्राप्त छवियों, जहां gfp सकारात्मक microglia कोशिकाओं की कल्पना कर रहे हैं । धमनियां के उच्च भावना एसडी-OCT ५५ ° लेंस की तुलना में 30 डिग्री के साथ प्राप्त स्कैन में मनाया जाता है । हालांकि, रेटिना वास्तुकला दोनों में स्पष्ट है 30 ° और ५५ ° छवियों (चित्रा 3, सही बढ़ाया छवियों). रेटिना सीमाओं के मैनुअल सुधार के बाद (आंतरिक सीमित और आधार झिल्ली), रेटिना मोटाई माप का एक अच्छा संबंध 30 हे और ५५ ° लेंस के बीच मनाया गया जब ऑप्टिक तंत्रिका सिर से एक ही दूरी में मापने ( चित्र 3सी; पियरसन सहसंबंध = ०.९६७, प & #60; ०.०००१) । पिछले अध्ययनों से पता चला है कि एसडी oct स्कैन पर रेटिना मोटाई माप ऊतकीय रेटिना वर्गों पर पूर्व vivo माप के साथ अच्छी तरह से सहसंबंधित15,31 और इस प्रकार एसडी-oct एक गैर इनवेसिव तकनीक के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है रेटिना मोटाई माप के लिए । SLO का प्रयोग, हम ऑटो फ्लोरोसेंट छवियों में hyperreflective संकेत के रूप में gfp सकारात्मक microglia कोशिकाओं की पहचान सकता है, लेकिन व्यापक क्षेत्र १०२ ° लेंस को ५५ ° लेंस की तुलना में एक बड़ा fundus क्षेत्र को कवर कर रहा था । SLO भी एक कार्यात्मक fractalkine रिसेप्टर के साथ रिपोर्ट चूहों में रेटिना microglia कोशिकाओं के वितरण और सक्रियण की निगरानी के लिए उपयोग किया जा सकता (Cx3cr1gfp/+ चूहों) सामान्य या रोगग्रस्त रेटिना12में, 21,३२. एक ही इमेजिंग सत्र में SLO के साथ एसडी अक्टूबर के संयोजन रेटिना अध-पतन पर microglia वितरण और सक्रियण के बारे में जानकारी प्रदान कर सकते हैं और चूहों में रेटिना रोगों की निगरानी के लिए उपयोगी हो सकता है21.

Figure 1
चित्र 1: वर्तमान अध्ययन में प्रयुक्त डिवाइस की प्रतिनिधि छवि. माउस के दाईं आंख की छवि के लिए, माउस को कस्टम के बाएं हिस्से पर तैनात किया गया है अपनी सही कक्षा के साथ मंच बनाया लेंस और उसके शरीर को मंच के बाएं हिस्से पर प्रवण झूठ बोल रही है । मंच की ऊंचाई दक्षिणावर्त मोड़ (मंच को कम करने के लिए) या उल्टी (मंच ऊपर उठाने के लिए) "चिन आराम समायोजन" के द्वारा समायोजित किया जा सकता है । फिल्टर लीवर IR + OCT और वायुसेना इमेजिंग की अनुमति देने के लिए "एक" के लिए तैनात किया जाना चाहिए । ध्यान घुंडी (चित्रा पर दिखाई नहीं) के साथ, प्रयोगकर्ता स्कैनर का ध्यान बदल सकते हैं. micromanipulator को सही ढंग से रोशन और उच्च गुणवत्ता वाले चित्रों के लिए रेटिना संरेखित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । उद्देश्य ऊपर ले जाया जा सकता है, नीचे, ठीक है, या कैमरे के हैंडल से छोड़ दिया । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्र 2: डिवाइस के नियंत्रण कक्ष का चित्रण. (A) नियंत्रण कक्ष प्रदर्शन के बाएं भाग पर अधिग्रहण मोड का चयन किया जा सकता है (अवरक्त, ir; ऑटो प्रतिदीप्ति, वायुसेना या indocyanine ग्रीन एंजियोग्राफी, ICGA; संयुक्त या नहीं ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी के साथ, OCT) । पैनल के मध्य भाग पर अधिग्रहण सेटिंग चुना जा सकता है (यदि छवि, खंड या मात्रा स्कैन की तीव्रता) । देखने का क्षेत्र लोड लेंस द्वारा निर्धारित किया जाता है । संवेदनशीलता घुंडी आईआर या वायुसेना छवि की चमक समायोजित किया जा सकता है के साथ । संवेदनशीलता घुंडी दबाकर, सॉफ्टवेयर एक उच्च गुणवत्ता छवि प्रदान करने के लिए आईआर या वायुसेना में प्राप्त छवियों औसत शुरू कर देंगे । (ख) प्राप्ति प्रतिमान मेनू का चित्रण । (C) संगत चिह्न के साथ सॉफ़्टवेयर में उपयोग किए गए फ़ंक्शंस का सारांश । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्रा 3: अक्टूबर स्कैन और Cx3cr1gfp/gfp माउस रेटिना के ऑटो फ्लोरोसेंट छवियां । (a) बी-माउस रेटिना का स्कैन एक ५५ ° (ऊपरी पैनल) या एक 30 डिग्री लेंस (नीचे पैनल) के साथ प्राप्त की । पीले बक्से के उच्च आवर्धन सही पैनल पर प्रस्तुत कर रहे हैं । (ख) gfp सकारात्मक microglia कोशिकाओं के रेटिना में Cx3cr1gfp/gfp चूहों एक ५५ ° और एक १०२ ° लेंस के साथ प्राप्त की छवियां (बाएं और दाएं पैनलों, क्रमशः) । (ग) रेटिना की मोटाई माप, ऑप्टिक तंत्रिका सिर से एक ही दूरी पर मापा, एसडी-OCT 30 ° और ५५ ° लेंस से व्युत्पंन स्कैन पर । एक अच्छा संबंध दो लेंस के बीच मनाया गया था (पियरसन सहसंबंध = ०.९६७) । स्केल सलाखों: २०० µm, १०० बढ़ाया एसडी OCT छवियों पर µm (एक, सही पैनल) । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

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Discussion

वर्तमान लेख रेटिना B-स्कैन और माउस रेटिना में gfp सकारात्मक microglia वितरण की इमेजिंग के अधिग्रहण के लिए एक प्रोटोकॉल एक ही इमेजिंग सत्र में प्रदर्शित करता है । एसडी-OCT और SLO तेजी से रेटिना रोग के पशु मॉडलों में प्रयोग किया जाता है समय के साथ रेटिना परिवर्तन की जानकारी प्रदान करने के लिए10,14,17,18,21. इस प्रोटोकॉल के साथ, Cx3cr1gfp/gfp या Cx3cr1gfp/ माउस रेटिना गैर इनवेसिव छवि और रेटिना की मोटाई की जानकारी प्राप्त किया जा सकता है । इस रेटिना रोग प्रयोगात्मक मॉडल में गंभीर रूप से महत्वपूर्ण है, जहां रोग गंभीरता समय पर परिवर्तन या जब चिकित्सीय उपचार परीक्षण कर रहे हैं. इसके अलावा, प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे संवाददाता माउस लाइनों रेटिना में फ्लोरोसेंट कोशिकाओं के vivo में इमेजिंग के लिए उपयोग किया जा सकता है ।

हालांकि, यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल कुछ सीमाएं हैं । पहले, मनुष्यों के लिए डिजाइन किए गए उपकरणों में माउस रेटिना की इमेजिंग माउस आंख की उच्च कुल ऑप्टिकल शक्ति के कारण चुनौतीपूर्ण हो सकता है, जो वृद्धि अशुद्धियां7के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । हालांकि, अक्षीय एसडी-OCT माप सही कर रहे है8। इसके अतिरिक्त, सॉफ्टवेयर के "सेट संदर्भ" विकल्प का उपयोग चूहों में अनुवर्ती परीक्षा के बजाय मंच पर माउस की निश्चित स्थिति के कारण मुश्किल है और इस प्रकार माउस रेटिना के अनुदैर्ध्य इमेजिंग चुनौतीपूर्ण हो सकता है । आंख के अनुदैर्ध्य संरेखण स्थिति से अवरक्त छवि के केंद्र में ऑप्टिक तंत्रिका प्राप्त किया जा सकता है और फिर वांछित छवियों को प्राप्त करने । आदेश में आंख रोटेशन के लिए सही करने के लिए, एसडी-अक्टूबर एन चेहरा छवियों के मैनुअल संरेखण अधिग्रहण के बाद प्रदर्शन किया जा सकता है और मोटाई माप के लिए लागू के रूप में३३कहीं वर्णित है । इमेजिंग प्रणाली वर्तमान प्रोटोकॉल में इस्तेमाल के अलावा, अंय इमेजिंग प्रणालियों भी विकसित किया गया है कि एक बड़ा कोण प्रदान और संपर्क लेंस के उपयोग के बिना एक बड़ा रेटिना क्षेत्र छवि कर सकते हैं । उदाहरण के लिए Optos एक बड़ा रेटिना सतह को कवर कर सकते हैं, लेकिन अधिक से अधिक छवि परिवर्तनशीलता के साथ वर्तमान अध्ययन३४में प्रयुक्त डिवाइस की तुलना में । इन सीमाओं के बावजूद, वर्तमान प्रोटोकॉल रेटिना रोग के कई प्रयोगात्मक मॉडल में उपयोग किया जा सकता है । जानकारी है कि प्राप्त किया जा सकता है रेटिना मोटाई परिवर्तन (सूजन, शोष), रेटिना टुकड़ी का पता लगाने, या hyperreflective डॉट्स और fluorophore-लेबल कोशिकाओं और वृद्धि या उनकी संख्या की कमी की उपस्थिति भी शामिल है ।

Cx3cr1 (Cx3cr1gfp/), जो एक कार्यात्मक fractalkine रिसेप्टर है की अभिव्यक्ति के लिए चूहों heterozygous में दो तरीकों का संयोजन, प्रयोगकर्ता एक साथ vivo में पता लगाने के लिए सक्षम बनाता है रेटिना में रेटिना की अखंडता के परिवर्तन और रेटिना विषमता के आसपास में संभव microglia संचय (उदा (उदाहरणके लिए, रेटिना की सूजन के दौरान, रेटिना शोष) या चोट । इसके अलावा, morphometric विश्लेषण लागू करके, microglia सक्रियण राज्य सोमा आकार और microglia प्रक्रियाओं की जटिलता के आधार पर मूल्यांकन किया जा सकता है21. रेटिना के रोगों में, रेटिना की नस रोड़ा, सक्रियकरण और microglia/मैक्रोफेज के संचय के रूप में रेटिना एट्रोफिक साइटों पर मनाया गया है27। इसके अलावा, Nr2e3 जीन (परमाणु रिसेप्टर उपपरिवार 2 समूह ई सदस्य 3) के लिए दोषपूर्ण चूहों में, recessively विरासत बढ़ाया एस कोन संवेदनशीलता सिंड्रोम (ESCS) के एक माउस मॉडल, बाहरी परमाणु परत तह (rosettes) जल्दी में मनाया जा सकता है प्रसव असावे.

दिलचस्प है, microglia कोशिकाओं rosettes के अंदर पाया जा सकता है और यह सुझाव दिया गया है कि microglia इन चूहों के रेटिना में मनाया photoreceptors के अध: पतन के लिए योगदान हो सकता है३५,३६. microglia के सक्रियकरण के बाद से रेटिना रोगों की एक किस्म के पाठ्यक्रम में फंसा दिया गया है और कभी-रेटिना वास्तुकला में परिवर्तन के साथ है10,27,३७,३८ , एसडी-OCT और SLO के संयोजन microglia सक्रियण और रेटिना अध कि पतन के बीच सहसंबंध प्रकट कर सकते हैं । कुछ चुनौतियों के बावजूद, वर्तमान प्रोटोकॉल ऐसी जानकारी longitudinally प्रदान कर सकते हैं, और इस प्रकार यह microglia वितरण के साथ रेटिना क्षति के सहसंबंध के लिए मूल्यवान होगा/सक्रियण और चिकित्सीय उपचार की निगरानी के लिए 21प्रभावशीलता ।

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

यह काम स्विस नेशनल साइंस फाउंडेशन (SNSF; #320030_156019) के अनुदान से समर्थित था । लेखकों हीडलबर्ग इंजीनियरिंग GmBH, जर्मनी से वित्तीय सहायता प्राप्त की ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Spectralis Imaging system (HRA+OCT) Heidelberg Engineering, Germany N/A ophthalmic imaging platform system
Heidelberg Eye Explorer Heidelberg Engineering, Germany N/A Version 1.9.13.0
78D standard ophthalmic non-contact slit lamp lens Volk Optical Inc., Ohio, USA V78C
Spectralis wide angle 55° lens Heidelberg Engineering, Germany 50897-002
ultra widefield 102° lens Heidelberg Engineering, Germany 50117-001
medetomidine hydrochloride 1 mg/mL (Domitor) Provet AG, Lyssach, Switzerland Swissmedic Nr. 50'590 - ATCvet: QN05CM91 anesthetic/analgesic
ketamine 50mg/ml (Ketalar) Parke-Davis, Zurich, Switzerland 72276388 anesthetic
tropicamide 0.5% + phenylephrine HCl 2.5% (Augentropfen mix) ISPI, Bern, Switzerland N/A pupil dilation
Omnican Insulin-50 0.5 ml G30 0.3 x 12mm B. Braun Mesungen AG, Carl-Braun-Straße, Germany 9151125
hydroxypropylmethylcellulose (Methocel 2%) OmniVision, Neuhausen, Switzerland N/A
+4 dpt rigid gas permeable contact lens Quantum I, Bausch + Lomb Inc., Rochester, NY N/A Base Curve: 7.20 to 8.40 mm
Diameter: 9.00 / 9.60 / 10.20 mm
Power: -25.00 to +25.00 Diopters
balanced salt solution (BSS) Inselspital, Bern, Switzerland N/A
silicon forceps N/A N/A
atipamezole 5 mg/mL (Antisedan) Provet AG, Lyssach, Switzerland N/A α2 adrenergic receptor antagonist
GraphPad Prism 7 GraphPad Software, Inc, San Diego, CA, USA N/A statistical analysis software

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References

  1. Madeira, M. H., Boia, R., Santos, P. F., Ambrosio, A. F., Santiago, A. R. Contribution of microglia-mediated neuroinflammation to retinal degenerative diseases. Mediators Inflamm. , 673090 (2015).
  2. Ng, T. F., Streilein, J. W. Light-induced migration of retinal microglia into the subretinal space. Invest Ophthalmol Vis Sci. 42 (13), 3301-3310 (2001).
  3. Langmann, T. Microglia activation in retinal degeneration. J Leukoc Biol. 81 (6), 1345-1351 (2007).
  4. Joly, S., et al. Cooperative phagocytes: resident microglia and bone marrow immigrants remove dead photoreceptors in retinal lesions. Am J Pathol. 174 (6), 2310-2323 (2009).
  5. Arroba, A. I., Alvarez-Lindo, N., van Rooijen, N., de la Rosa, E. J. Microglia-mediated IGF-I neuroprotection in the rd10 mouse model of retinitis pigmentosa. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (12), 9124-9130 (2011).
  6. Zhang, C., Lam, T. T., Tso, M. O. Heterogeneous populations of microglia/macrophages in the retina and their activation after retinal ischemia and reperfusion injury. Exp Eye Res. 81 (6), 700-709 (2005).
  7. Geng, Y., et al. Optical properties of the mouse eye. Biomed Opt Express. 2 (4), 717-738 (2011).
  8. Lozano, D. C., Twa, M. D. Development of a rat schematic eye from in vivo biometry and the correction of lateral magnification in SD-OCT imaging. Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (9), 6446-6455 (2013).
  9. Vaz-Pereira, S., et al. Optical Coherence Tomography Features Of Active And Inactive Retinal Neovascularization In Proliferative Diabetic Retinopathy. Retina. 36 (6), 1132-1142 (2016).
  10. Kokona, D., Haner, N. U., Ebneter, A., Zinkernagel, M. S. Imaging of macrophage dynamics with optical coherence tomography in anterior ischemic optic neuropathy. Exp Eye Res. , (2016).
  11. Makiyama, Y., et al. Macular cone abnormalities in retinitis pigmentosa with preserved central vision using adaptive optics scanning laser ophthalmoscopy. PLoS One. 8 (11), e79447 (2013).
  12. Paques, M., et al. High resolution fundus imaging by confocal scanning laser ophthalmoscopy in the mouse. Vision Res. 46 (8-9), 1336-1345 (2006).
  13. Joshi, R., et al. Spontaneously occurring fundus findings observed using confocal scanning laser ophthalmoscopy in wild type Sprague Dawley rats. Regul Toxicol Pharmacol. 77, 160-166 (2016).
  14. Muraoka, Y., et al. Real-time imaging of rabbit retina with retinal degeneration by using spectral-domain optical coherence tomography. PLoS One. 7 (4), e36135 (2012).
  15. Fischer, M. D., et al. Noninvasive, in vivo assessment of mouse retinal structure using optical coherence tomography. PLoS One. 4 (10), e7507 (2009).
  16. Bell, B. A., et al. Retinal vasculature of adult zebrafish: in vivo imaging using confocal scanning laser ophthalmoscopy. Exp Eye Res. 129, 107-118 (2014).
  17. Bailey, T. J., Davis, D. H., Vance, J. E., Hyde, D. R. Spectral-domain optical coherence tomography as a noninvasive method to assess damaged and regenerating adult zebrafish retinas. Invest Ophthalmol Vis Sci. 53 (6), 3126-3138 (2012).
  18. Huber, G., et al. Spectral domain optical coherence tomography in mouse models of retinal degeneration. Invest Ophthalmol Vis Sci. 50 (12), 5888-5895 (2009).
  19. Dysli, C., Enzmann, V., Sznitman, R., Zinkernagel, M. S. Quantitative Analysis of Mouse Retinal Layers Using Automated Segmentation of Spectral Domain Optical Coherence Tomography Images. Transl Vis Sci Technol. 4 (4), 9 (2015).
  20. Sim, D. A., et al. A simple method for in vivo labelling of infiltrating leukocytes in the mouse retina using indocyanine green dye. Dis Model Mech. 8 (11), 1479-1487 (2015).
  21. Bosco, A., Romero, C. O., Ambati, B. K., Vetter, M. L. In vivo dynamics of retinal microglial activation during neurodegeneration: confocal ophthalmoscopic imaging and cell morphometry in mouse glaucoma. J Vis Exp. (99), e52731 (2015).
  22. Acton, J. H., Cubbidge, R. P., King, H., Galsworthy, P., Gibson, J. M. Drusen detection in retro-mode imaging by a scanning laser ophthalmoscope. Acta Ophthalmol. 89 (5), e404-e411 (2011).
  23. Greenstein, V. C., et al. Structural and functional changes associated with normal and abnormal fundus autofluorescence in patients with retinitis pigmentosa. Retina. 32 (2), 349-357 (2012).
  24. Jung, S., et al. Analysis of fractalkine receptor CX(3)CR1 function by targeted deletion and green fluorescent protein reporter gene insertion. Mol Cell Biol. 20 (11), 4106-4114 (2000).
  25. Wang, X., et al. Requirement for Microglia for the Maintenance of Synaptic Function and Integrity in the Mature Retina. J Neurosci. 36 (9), 2827-2842 (2016).
  26. Ebneter, A., Casson, R. J., Wood, J. P., Chidlow, G. Microglial activation in the visual pathway in experimental glaucoma: spatiotemporal characterization and correlation with axonal injury. Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (12), 6448-6460 (2010).
  27. Ebneter, A., Kokona, D., Schneider, N., Zinkernagel, M. S. Microglia Activation and Recruitment of Circulating Macrophages During Ischemic Experimental Branch Retinal Vein Occlusion. Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (2), 944-953 (2017).
  28. Lin, Y. L., Potter-Baker, K. A. Using theoretical models from adult stroke recovery to improve use of non-invasive brain stimulation for children with congenital hemiparesis. J Neurophysiol. , (2017).
  29. Combadiere, C., et al. CX3CR1-dependent subretinal microglia cell accumulation is associated with cardinal features of age-related macular degeneration. J Clin Invest. 117 (10), 2920-2928 (2007).
  30. Bermudez, M. A., et al. Time course of cold cataract development in anesthetized mice. Curr Eye Res. 36 (3), 278-284 (2011).
  31. Toth, C. A., et al. A comparison of retinal morphology viewed by optical coherence tomography and by light microscopy. Arch Ophthalmol. 115 (11), 1425-1428 (1997).
  32. Ebneter, A., Kokona, D., Jovanovic, J., Zinkernagel, M. S. Dramatic Effect of Oral CSF-1R Kinase Inhibitor on Retinal Microglia Revealed by In Vivo Scanning Laser Ophthalmoscopy. Transl Vis Sci Technol. 6 (2), 10 (2017).
  33. Gabriele, M. L., et al. Reproducibility of spectral-domain optical coherence tomography total retinal thickness measurements in mice. Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (12), 6519-6523 (2010).
  34. Nakao, S., et al. Wide-field laser ophthalmoscopy for mice: a novel evaluation system for retinal/choroidal angiogenesis in mice. Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (8), 5288-5293 (2013).
  35. Wang, N. K., et al. Origin of fundus hyperautofluorescent spots and their role in retinal degeneration in a mouse model of Goldmann-Favre syndrome. Dis Model Mech. 6 (5), 1113-1122 (2013).
  36. Wang, N. K., et al. Cellular origin of fundus autofluorescence in patients and mice with a defective NR2E3 gene. Br J Ophthalmol. 93 (9), 1234-1240 (2009).
  37. Thanos, S. Sick photoreceptors attract activated microglia from the ganglion cell layer: a model to study the inflammatory cascades in rats with inherited retinal dystrophy. Brain Res. 588 (1), 21-28 (1992).
  38. Hughes, E. H., et al. Generation of activated sialoadhesin-positive microglia during retinal degeneration. Invest Ophthalmol Vis Sci. 44 (5), 2229-2234 (2003).

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चिकित्सा मुद्दा १२९ Microglia रेटिना ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी स्कैनिंग लेजर ophthalmoscopy vivo में इमेजिंग नेत्र विज्ञान
<em>Vivo में</em> <em>Cx3cr1<sup>gfp/gfp</sup> </em> रिपोर्टर चूहों के साथ इमेजिंग-डोमेन ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी और स्कैनिंग लेजर Ophthalmoscopy
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Kokona, D., Jovanovic, J., Ebneter, A., Zinkernagel, M. S. In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy. J. Vis. Exp. (129), e55984, doi:10.3791/55984 (2017).

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