Summary
Este protocolo descreve técnicas como de alta resolução de imagem como tomografia de coerência óptica de domínio espectral e digitalização laser Oftalmoscopia pode ser utilizado em pequenos roedores, usando um sistema de plataforma de imagem oftálmica, para obter informações sobre espessura da retina e microglial celular distribuição, respectivamente.
Abstract
Tomografia de coerência óptica de domínio espectral (SD-OCT) e digitalização Oftalmoscopia do laser (SLO) são usados extensivamente em oftalmologia experimental. No presente protocolo, camundongos expressando verde proteína fluorescente (gfp) sob o promotor da Cx3cr1 (BALB/c-Cx3cr1gfp/gfp) foram usados para imagem microglia células na vivo na retina. Microglia são macrófagos residentes da retina e têm sido implicados em várias doenças da retina1,2,3,4,5,6. Este protocolo fornece uma abordagem detalhada para geração de B-retina, com SD-OCT e imagem latente de distribuição de célula microglia em camundongos Cx3cr1gfp/gfp com SLO na vivo, usando um sistema de plataforma de imagem oftálmica. O protocolo pode ser usado em várias linhas de rato de repórter. No entanto, existem algumas limitações do protocolo aqui apresentado. Em primeiro lugar, ambos SLO e SD-OCT, quando usado no modo de alta resolução, coletar dados com alta resolução axial, mas a resolução lateral são mais baixos (3,5 µm e 6 µm, respectivamente). Além disso, o nível de saturação e foco em SLO é altamente dependente da seleção do parâmetro e o alinhamento correcto do olho. Além disso, usar dispositivos projetados para pacientes humanos em ratos é desafiador, devido a maior potência óptica total do olho do rato comparado ao olho humano; Isso pode levar a lateral ampliação imprecisões7, que também são dependentes a ampliação pela lente do mouse entre outros. No entanto, apesar de que a tomografia axial posição é dependente da ampliação lateral, as medições de SD-OCT axiais são precisos8.
Introduction
Na oftalmologia experimental, exame de patologia retiniana geralmente é avaliada usando técnicas histológicas. No entanto, histologia requer a eutanásia de animais e pode causar alteração para as propriedades reais do tecido. SD-OCT e SLO são rotineiramente usados em oftalmologia clínica para fins de diagnóstico e de acompanhamento de diversas doenças da retina como edema macular diabético9, neuropatia óptica isquêmica anterior10ou retinite pigmentosa11 . SD-OCT e SLO são técnicas não-invasivas que geram imagens de alta resolução da retina, que são visualizadas através da pupila dilatada sem mais intervenção. SD-OCT fornece informações da estrutura da retina e da espessura da retina através da recolha de dados Retrodispersão para criar imagens transversais da retina, enquanto SLO coleta dados de fluorescência para produzir imagens estereoscópicas de alto contraste da retina. Hoje em dia, ambas as técnicas são cada vez mais utilizadas em oftalmologia experimental usando pequenos roedores12,13,14,15 (ou mesmo zebrafish16,17) e pode fornece tanto informações qualitativas e quantitativas12,17,18,19,20,21.
Acumulação de fluorophores endógena como lipofuscins ou a formação de drusen na retina pode ser visualizada por SLO como sinal fluorescente auto. Esta característica torna SLO uma técnica valiosa para diagnóstico e monitoramento de doenças da retina como a degeneração macular relacionada à idade ou retinite pigmentosa22,23. Na oftalmologia experimental, fluorescência de auto imagem (AF) pode ser usada para a detecção de tipos de células específicas em linhas de rato de repórter. Por exemplo, ratos heterozigotos para a expressão de gfp sob o promotor de Cx3cr124 são vantajosos para visualização no vivo das pilhas microglial na retina normal e para a investigação de micróglia/macrófago dinâmica na doença da retina,21. Microglia são os macrófagos residentes da retina, que desempenham um papel fundamental na homeostase do tecido e reparação dos tecidos após lesão1,25,26. Ativação da microglia na retina tem sido relatada em degeneração, sugerindo um papel dessas células na doença da retina,2,3,4,5, , isquemia e lesão da retina 6.
O objectivo do presente protocolo é descrever um método relativamente simples para a imagem da retina e medição de espessura da retina usando SD-OCT e para visualização de células de gfp microglia positivo no rato retina utilizando Cx3cr1gfp/gfp SLO (sistema Heidelberg Spectralis HRA + OCT). Este protocolo pode ser utilizado para medições de imagem e espessura da retina saudável ou doente em várias linhas de rato. Além disso, as análises morfométricas podem ser realizadas para a identificação e quantificação de números microglia e ativação da microglia na retina usando SLO21. As células da micróglia são associadas com doenças degenerativas no sistema nervoso central (CNS), incluindo a retina27,28,29. Assim, combinando os dois métodos utilizados no presente protocolo, pode ser feita correlação de distribuição microglia e degeneração da retina, que pode facilitar o monitoramento severidade da doença ou a eficácia da terapêutica se aproxima na vivo.
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Protocol
em todos os procedimentos, BALB/c adulto masculinos e femininos ratos que expressam gfp sob o promotor da Cx3cr1 foram usados 24. Os ratos foram tratados de acordo com a instrução de ARVO para o uso de animais em oftalmologia e visão pesquisa e todos os procedimentos foram aprovados do governo suíço, de acordo com os regulamentos federais suíços em matéria de bem-estar Animal. Os ratos foram anestesiados por uma injeção subcutânea de cloridrato de medetomidina (0,75 mg/kg) e a cetamina (45 mg/kg). Anestesia adequada foi confirmada pelo monitoramento da frequência respiratória e o animal ' reflex s contra uma pitada de cauda. No final dos experimentos, os ratos foram sacrificados com inalação de CO 2.
Nota: realizar cada sessão de imagens tão rapidamente quanto possível (no máximo 20 min), desde a formação da catarata anestesia seguinte poderá prejudicar a visualização da retina 30.
1. configuração do sistema
- ligar o computador.
- Ligar a alimentação. A mensagem " módulo de aquisição de início " aparecerá na tela de painel de controle do dispositivo.
- Duplo clique no atalho do software no desktop para operar o software.
- No modo de exibição de banco de dados, clique no " adicionar o paciente " ícone.
- Na janela pop-up, insira todas as informações necessárias (sobrenome, nome, título, data de nascimento, sexo e paciente-ID) e clique em " okey ". Na janela pop definir a curvatura da córnea de 2mm e clique " okey ".
- Colocar uma lente de lâmpada 78D Oftalmologia padrão sem contato fenda na frente a óptica padrão 30 ° e fixá-la de forma segura com fita.
- Certifique-se de que a alavanca à esquerda do dispositivo é posicionada sobre a indicação de " A " para permitir que os IR + OCT e AF de imagem ( Figura 1).
2. Preparação de mouse
- uso uma dose de cloridrato de medetomidina de 0,75 mg/kg e uma ketamina dose de 45 mg/kg em tampão fosfato salino (PBS, pH 7,4) para preparar a solução de anestesia. Assim, para um rato de 20 g, misture 15 µ l de cloridrato de medetomidina com 18 µ l de cetamina para um volume final de 50 µ l de PBS. Armazenar a solução a 4 ° C por até uma semana.
- Segure o mouse pela nuca e aplique uma gota de tropicamida 0.5% + cloridrato de fenilefrina 2,5% em cada olho para conseguir a dilatação da pupila.
- Manter o mouse contido e com uma seringa de insulina anexada a uma agulha 30G, 50 µ l da solução de anestesia de injectar por via subcutânea. Coloque o mouse de volta à sua jaula que é colocada sobre uma almofada de aquecimento. Espere 3-5 min até que o mouse está totalmente sedado. Para avaliar a profundidade anestésica, belisca o rabo do rato. Verificar o reflexo corneal tocando suavemente a córnea de rato com um cotonete. Se nenhum reflexo positivo é observado, continue com as imagens.
Nota: É importante monitorar a frequência respiratória durante a anestesia. Se o mouse não está totalmente sedado, a taxa respiratória irá aumentar após um estímulo doloroso. - Hidrato a córnea de rato com um aplicativo de hidroxipropilmetilcelulose 2% gotas em cada olho.
3. SD-OCT
- Coloque um patch de aquecimento de cerca de 32 ° C na plataforma sob medida anexada no descanso de queixo do dispositivo ( Figura 1).
- a imagem do olho direito, posicione o mouse na parte esquerda da plataforma ( Figura 1). Certifique-se de que a órbita direita do mouse enfrenta a lente e seu corpo encontra-se sujeito na parte esquerda da plataforma.
- Aplicar uma gota de hidroxipropilmetilcelulose no olho direito e cuidadosamente coloque uma lente de contato dioptria + 4 rígida gás permeável nele (poder esférico:-25.00 para +25,00 dioptrias). Armazene a lente de contato em solução salina balanceada (BSS). Para agarrar a lente, usar fórceps de plástico ou silicone para evitar danos.
- Pressione a caixa amarela no canto direito do visor do painel de controle para iniciar o módulo de aquisição (caixa verde na Figura 2A). A caixa amarela vai ficar verde e no menu do painel de controle aparecerá na tela ( Figura 2A).
- Para aquisição de B-scans, selecione a opção IR + OCT no painel de controle ( Figura 2A). Configurações selecionadas são destacadas em azul no painel de controle.
- Select " Retina " sob " aplicação e estrutura " no software e mover a lente para o olho do mouse usando o micromanipulador no dispositivo ( Figura 1). Antes de se concentrar sobre a retina, verificar a indicação " OD " estiver selecionada na parte inferior esquerda da tela. O software identifica automaticamente a esquerda (OS) e olho direito (OD) com base na posição do objectivo.
Nota: Se o objetivo é posicionado no meio da plataforma, uma mensagem de erro aparecerá na parte inferior da tela. Nesse caso, volte a posicionar o mouse ligeiramente até que o software reconhece o olho correto. - Com o botão de foco, foco na retina, até os grandes vasos são claramente vistos na imagem do fundo à esquerda da tela do computador. Mover a câmera rodando o micromanipulador esquerda ou direita mover a câmera nessa direção, ou no sentido horário ou no sentido anti-horário, para mover a câmera, cima ou baixo, respectivamente.
Nota: Reposicionar o mouse na plataforma ou mover a lente para cima ou para baixo para alcançar a localização preferencial da cabeça do nervo óptico na imagem infravermelha. - Rode o botão de sensibilidade no sentido anti-horário para reduzir ou no sentido horário para aumentar o brilho da imagem do fundo. Quando o foco ideal é alcançado, um SD-OCT B-scan aparecerá no lado direito da tela.
Nota: Se o B-scan não pode ser visualizado, ajustando o foco, pressione a combinação Ctrl + Alt + Shift + O no teclado. Na janela pop-up, ajustar o valor do braço referência até o B-scan aparece na tela. - No canto inferior direito da tela, escolha o único scan no menu padrão (única linha na Figura 2B).
- Transformar o micromanipulador do dispositivo ( Figura 1) esquerda, direita, frente ou para trás (para ligar a câmera nessa direção) para garantir que o B-scan localiza-se entre a parte superior e inferior cantos da SD-OCT varrer janela.
- Definir o valor de automática em tempo real (arte) para pelo menos 9 para obter imagens de alta qualidade.
Nota: Arte melhora a qualidade de imagem por uma média de vários exames consecutivos. Quanto maior o " arte " valor, quanto maior a relação sinal-ruído e, portanto, a qualidade da imagem. No entanto, aumentando o " arte " de valor, a aquisição de tempo também é aumentado. - Imprensa o " adquirir " botão ( Figura 2) sobre a tela do painel de controle e adquirir as imagens.
- Re-posicione o mouse para o olho esquerdo da imagem e repita etapas 3.2-3.12.
- Remover a lente de contato com a pinça de plástico/silicone e coloque-o no BSS.
- Hidratar a córnea de rato com uma gota fresca de hidroxipropilmetilcelulose e remova o excesso com um papel absorvente.
- Remover a óptica padrão 30 °, girando-o no sentido anti-horário.
- Montar a lente 55 ° e repita etapas 3.4-3.12 para cada olho.
4. Auto fluorescência Imaging
- sem mover o mouse sobre a plataforma, selecionar IR em painel de controle.
- Com o botão de foco, foco sobre os grandes vasos da retina.
- No painel de controle selecione AF.
- Rode o botão de sensibilidade no sentido anti-horário para reduzir ou no sentido horário para aumentar o brilho da imagem.
- Pressione o botão de sensibilidade e defina o " arte " valor de 67 ou mais para obter alta qualidade imagens.
- Quando o conjunto " arte " valor foi alcançado, pressione " adquirir " no painel de controle para adquirir a imagem. Pressione o botão de sensibilidade novamente para parar uma média. Ajustar o foco, para visualizar as diferentes camadas da retina.
- Remover a lente de 55° e montar a lente de 102° de campo largo. Siga os passos 4.1 – 4.6 para ambos os olhos de cada rato e para cada mouse.
- Clique “ salvar imagens ” do lado esquerdo superior da janela e clique em “ sair do ”. Para salvar as imagens no computador, selecione o mouse na lista na parte direita da tela clicando duas vezes no nome do rato. Clique duas vezes sobre cada imagem separadamente e, em seguida, clique no ícone do disquete. Salve a imagem como TIF,. bmp,. jpg ou. png na pasta desejada. Para sair, pressione o software “ arquivo ” e “ sair do ”.
5. Reversão de anestesia
- hidratar os olhos de rato com uma gota de hidroxipropilmetilcelulose e retornar o mouse sobre uma almofada de aquecimento.
- Solução de atipamezole preparar uma dose de 2,25 mg/kg para reverter os efeitos sedativos de cloridrato de medetomidina. Para um mouse de 20 g, adicione 9 µ l de atipamezol em um volume final de 150 µ l de PBS. Armazenar a solução a 4 ° C por até uma semana.
- min após injeção de anestesia (passo 2.2), 150 µ l de solução de atipamezole de injectar por via subcutânea.
- Monitorar o mouse até a recuperação da anestesia. Quando o mouse está totalmente recuperado (5-10 min após a injeção de atipamezole) colocá-lo de volta à sua jaula. Recuperação é indicada pela capacidade do animal para transformar seu corpo quando colocada de um lado, recuperar a atividade de caminhar, e reagindo em resposta à estimulação ambiental.
6. Medição de espessura da retina manual de imagens SD-OCT
- abrir a varredura OCT clicando duas vezes sobre o nome do animal.
- Abra o B-scan, obtido com a lente de 30 ° ou ° 55.
- Escolher " perfil de espessura ".
- Imprensa o " editar segmentações de camada " ícone ( Figura 2B). O software automaticamente identifica a limitação interna e membrana de base.
- Se necessário, corrigir manualmente a posição da limitação interna e membrana de base. Para fazer isso, escolha a camada a ser modificada do lado esquerdo da tela e, em seguida, a opção círculo vermelho ( Figura 2B). Mover o círculo com o botão do mouse pressionado para modificar a linha.
- Modificar a linha para posicionar a camada correspondente corretamente. Clique em " salvar e fechar " para sair da janela.
Nota: Devido a refletividade de coroide, o software pode identificar a membrana base incorretamente. Assim, é preferível para defini-lo manualmente antes de prosseguir para medições de espessura da retina. - Escolher " Retina " sob a " camada " opção. Um diagrama da espessura da retina aparecerá na parte inferior da tela.
- Clique em uma posição diferente sobre o diagrama ou sobre o B-scan para ver a espessura da retina (indicada em µm) para a posição selecionada.
- Medir a espessura da retina na distância desejada da cabeça do nervo óptico e copiar os valores em uma planilha.
- Repita os passos 5.1-5.9 para cada rato para a lente de 55 ° a 30 ° e.
- Realizar análise estatística com o software desejado.
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Representative Results
Usando o protocolo aqui apresentado, SD-OCT verifica e SLO imagens foram obtidas a partir de Cx3cr1gfp/gfp ratos na mesma sessão de imagens. Figura 3 inclui representante SD-OCT único exames obtidos com um 30 ° ou uma lente de 55 ° (Figura 3A) e imagens representativas de SLO obtidos com um 55 ° ou uma lente de 102 °, onde gfp positivas microglia células são visualizadas. Maior refletividade da coroide é observada na SD-OCT exames obtidos com o 30 ° em relação à lente 55 °. Contudo, arquitetura da retina é evidente em ambos a 30 ° e as imagens de 55 ° (Figura 3, certa imagens ampliadas). Após correções manuais de limites da retina (limitação interna e membrana de base), uma boa correlação das medições de espessura da retina foi observada entre os 30 ó e a lente de 55 ° quando medir na mesma distância da cabeça do nervo óptico ( Figura 3; Correlação de Pearson = 0.967, p < 0,0001). Estudos anteriores mostraram que as medições de espessura da retina na SD-OCT varreduras correlacionam bem com medições de ex vivo em cortes histológicos da retina15,31 e, portanto, SD-OCT podem ser usadas como uma técnica não-invasiva para medições de espessura da retina. Usando o SLO, identificássemos gfp positivas microglia células como sinal de hyperreflective nas imagens fluorescentes auto, no entanto, a lente de 102 ° campo largo foi capaz de cobrir uma área maior do fundo em comparação com a lente de 55 °. SLO também pode ser utilizada para o acompanhamento da distribuição de células da retina microglia e ativação em ratos de repórter com um receptor de fractalkine funcional (Cx3cr1gfp / + ratos) no retina normal ou doentes12, 21,32. A combinação de SD-out com SLO na mesma sessão de imagem pode fornecer informações sobre a distribuição de micróglia e ativação com degeneração da retina e pode ser útil para o monitoramento de doenças da retina em ratos21.
Figura 1: imagem representativa do dispositivo utilizado no presente estudo. Para a imagem do olho direito do mouse, o mouse é posicionado na parte esquerda da plataforma sob medida com sua órbita direita virada para a lente e seu corpo deitado inclinado na parte esquerda da plataforma. A altura da plataforma pode ser ajustada girando no sentido horário (para baixar a plataforma) ou no sentido anti-horário (para levantar a plataforma) a "regulação queixo". A alavanca do filtro deve ser posicionada para "A" para permitir que imagens IR + OCT e AF. Com o botão de foco (não visível na figura), o experimentador pode mudar o foco do scanner. O micromanipulador pode ser usado para iluminar e alinhar a retina para imagens de alta qualidade corretamente. O objetivo pode ser movido, cima, baixo, direita ou deixado pelo identificador de câmera. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: ilustração do painel de controle do dispositivo. (A) na parte esquerda do visor do painel de controle, os modos de aquisição podem ser selecionados (infravermelho, IR; fluorescência de auto, AF ou angiografia indocianina verde, ICGA; combinadas ou não com a tomografia de coerência óptica, OCT). Na parte central do painel a configuração de aquisição pode ser escolhida (intensidade dos exames de imagem, seção ou volume se). O campo de visão é determinado pela lente carregada. Com o botão de sensibilidade pode ser ajustada a luminosidade da imagem infravermelhos ou AF. Pressionando o botão de sensibilidade, o software iniciará uma média de imagens obtidas em IR ou AF para fornecer uma imagem de alta qualidade. (B) ilustração do menu padrão de aquisição. (C) Resumo das funções usadas no software com o ícone correspondente. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: OCT verifica e auto fluorescentes imagens da retina do rato Cx3cr1gfp/gfp . (A) B-faz a varredura da retina do rato obtidos com um 55 ° (painel superior) ou uma lente de 30 ° (painel inferior). Ampliações das caixas amarelas são apresentadas no painel direito. (B) imagens de células gfp microglia positivo as retinas de ratos Cx3cr1gfp/gfp obtidos com um 55 ° e uma lente de 102 ° (esquerda e direita painéis, respectivamente). Medições de espessura da retina (C), medidos na mesma distância da cabeça do nervo óptico, na SD-OCT varreduras derivadas da lente de 30 ° e 55 °. Observou-se uma boa correlação entre as duas lentes (correlação de Pearson = 0.967). Barras de escala: 200 µm, 100 µm em ampliada imagens SD-OCT (um, painel direito). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
O presente artigo demonstra um protocolo para a aquisição de B-retina e a imagem latente de gfp microglia positiva distribuição na retina do rato na mesma sessão de imagens. SD-OCT e SLO são cada vez mais usados em modelos animais de doença da retina para fornecer informações de alterações da retina ao longo do tempo,10,14,17,18,21. Com este protocolo, Cx3cr1gfp/gfp ou Cx3cr1gfp / + retina do rato pode ser fotografada de forma não-invasiva e podem ser obtidas informações da espessura da retina. Isso é extremamente importante em modelos experimentais de doença da retina, onde a severidade da doença muda ao longo do tempo ou quando tratamentos terapêuticos são testados. Além disso, o protocolo descreve como linhas de repórter do mouse podem ser utilizadas para a geração de imagens em vivo de células fluorescentes na retina.
No entanto, o protocolo apresentado aqui tem algumas limitações. Primeiro, a imagem da retina do rato em dispositivos projetados para humanos pode ser desafiador devido ao maior poder ótico total do olho do rato, que pode levar a lateral ampliação imprecisões7. No entanto, as medições de SD-OCT axiais são precisos8. Além disso, exames em camundongos, usando a opção "definir a referência" do software são bastante difícil devido à posição não fixa do mouse sobre a plataforma e assim a imagem longitudinal da retina do rato pode ser desafiador. Alinhamento longitudinal do olho pode ser alcançado pelo posicionamento do nervo óptico no centro da imagem infravermelha e então adquirir as imagens desejadas. A fim de corrigir a rotação do olho, alinhamentos manuais das imagens SD-OCT pt rosto podem ser realizados após a aquisição e aplicam as medições de espessura conforme descrito em outro lugar33. Além do sistema de imagem usado no presente protocolo, outros sistemas de imagem também foram desenvolvidos que proporcionam um maior ângulo e pode imagem uma maior área da retina, sem o uso da lente de contato. Optos por exemplo pode cobrir uma maior superfície da retina mas com maior variabilidade de imagem em comparação com o dispositivo utilizado no presente estudo34. Apesar dessas limitações, o presente protocolo pode ser utilizado em vários modelos experimentais de doenças da retina. As informações que podem ser obtidas incluem alterações de espessura da retina (edema, atrofia), detecção de descolamento de retina ou a presença de pontos de hyperreflective e células fluoróforo-rotulados e o aumento ou diminuição dos seus números.
Combinação dos dois métodos em ratos heterozigotos para a expressão de Cx3cr1 (Cx3cr1gfp / +), que tem um receptor de fractalkine funcional, permite que o experimentador detectar simultaneamente na vivo alterações da integridade da retina em tempo real e possível acumulação do microglia nas proximidades de anormalidades da retina (por exemplo, retina, edema, atrofia da retina) durante a doença da retina ou lesões. Além disso, aplicando a Análise morfométrica, estado de ativação da microglia pode ser avaliado com base no tamanho da soma e complexidade da microglia processa21. Em doenças da retina, como a oclusão da veia retiniana, ativação e acúmulo de micróglia/macrófagos na retina atróficas sites foram observados27. Além disso, em ratos com defeito para o gene Nr2e3 (Nuclear Receptor subfamília 2 Grupo E membro 3), um modelo do rato do padrão herdada reforçada síndrome de sensibilidade S-cone (CES), a camada nuclear externa dobrável (rosetas) pode ser observada no início dias pós-parto.
Curiosamente, células da microglia podem ser encontradas dentro as rosetas e tem sido sugerido que microglia pode contribuir para a degeneração dos FOTORRECEPTORES observada em retinas destes ratos35,36. Desde que a ativação da microglia têm sido implicados no decurso de uma variedade de doenças da retina e às vezes é acompanhada de alterações na arquitetura da retina10,,27,37,38 , a combinação de SD-OCT e SLO pode revelar correlações entre a ativação da microglia e degeneração da retina. Apesar de alguns desafios, o presente protocolo pode fornecer tais informações longitudinalmente, e, portanto, é importante para a correlação de danos na retina com distribuição/ativação da microglia e de acompanhamento do tratamento terapêutico eficácia de21.
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Disclosures
Os autores não têm nada para divulgar.
Acknowledgments
Este trabalho foi financiado por um subsídio da Swiss National Science Foundation (SNSF; #320030_156019). Os autores receberam apoio financeiros Heidelberg Engineering GmBH, Alemanha.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Spectralis Imaging system (HRA+OCT) | Heidelberg Engineering, Germany | N/A | ophthalmic imaging platform system |
| Heidelberg Eye Explorer | Heidelberg Engineering, Germany | N/A | Version 1.9.13.0 |
| 78D standard ophthalmic non-contact slit lamp lens | Volk Optical Inc., Ohio, USA | V78C | |
| Spectralis wide angle 55° lens | Heidelberg Engineering, Germany | 50897-002 | |
| ultra widefield 102° lens | Heidelberg Engineering, Germany | 50117-001 | |
| medetomidine hydrochloride 1 mg/mL (Domitor) | Provet AG, Lyssach, Switzerland | Swissmedic Nr. 50'590 - ATCvet: QN05CM91 | anesthetic/analgesic |
| ketamine 50mg/ml (Ketalar) | Parke-Davis, Zurich, Switzerland | 72276388 | anesthetic |
| tropicamide 0.5% + phenylephrine HCl 2.5% (Augentropfen mix) | ISPI, Bern, Switzerland | N/A | pupil dilation |
| Omnican Insulin-50 0.5 ml G30 0.3 x 12mm | B. Braun Mesungen AG, Carl-Braun-Straße, Germany | 9151125 | |
| hydroxypropylmethylcellulose (Methocel 2%) | OmniVision, Neuhausen, Switzerland | N/A | |
| +4 dpt rigid gas permeable contact lens | Quantum I, Bausch + Lomb Inc., Rochester, NY | N/A | Base Curve: 7.20 to 8.40 mm Diameter: 9.00 / 9.60 / 10.20 mm Power: -25.00 to +25.00 Diopters |
| balanced salt solution (BSS) | Inselspital, Bern, Switzerland | N/A | |
| silicon forceps | N/A | N/A | |
| atipamezole 5 mg/mL (Antisedan) | Provet AG, Lyssach, Switzerland | N/A | α2 adrenergic receptor antagonist |
| GraphPad Prism 7 | GraphPad Software, Inc, San Diego, CA, USA | N/A | statistical analysis software |
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