Summary
Ivacaftor og ivacaftor-lumacaftor er to nye CF stoffer. Men er det fortsatt en mangel på forståelse på PK/PD og farmakologi. Vi presenterer en optimalisert HPLC-MS teknikk for samtidige analyse av ivacaftor og dens viktigste metabolitter og lumacaftor.
Abstract
Feil i cystisk fibrose trans-membran konduktans regulator (CFTR) er årsaken til cystisk fibrose (CF), en sykdom med livstruende lunge manifestasjoner. Ivacaftor (IVA) og ivacaftor-lumacaftor (LUMA) kombinasjon er to nye gjennombrudd CF stoffer som direkte modulerer aktiviteten og smugling av defekte CFTR-protein. Men er det fortsatt en mangel på forståelse på farmakokinetiske/Farmakodynamiske parametere og farmakologi i ivacaftor og lumacaftor. HPLC-MS teknikken for samtidige analyse av konsentrasjonen av ivacaftor, hydroxymethyl-ivacaftor, ivacaftor-carboxylate og lumacaftor i biologiske væsker pasienter mottar standard ivacaftor eller ivacaftor-lumacaftor-kombinasjon terapi har tidligere vært utviklet av vår gruppe og delvis godkjent FDA standarder. Men hvis høy gjennomstrømming analyse av et større antall pasientprøvene, vår gruppe har optimalisert rapporterte metoden ved hjelp av en mindre pore størrelse omvendt-fase kromatografi kolonne (2,6 µm, C8 100 Å; 50 x 2.1 mm) og en gradient løsemiddel systemet ( 0-1 min: 40% B; 1-2 min: 40-70% B; 2-2.7 min: holdt på 70% B; 2.7-2,8 min: 70-90% B; 2.8-4.0 min: 90% B vasking; 4.0-4.1 min: 90-40% B; 4.1-6.0 min: holdt på 40% B) i stedet for en isocratic elueringsrør. Målet med denne studien var å den HPLC-MS analyse per prøve dramatisk fra ~ 15 min bare 6 minutter per prøve, som er avgjørende for analyse av mye pasientprøvene. Denne hensiktsmessig metode vil være av stor nytte for studier i eksponering-svar forholdet mellom disse gjennombrudd CF stoffene.
Introduction
Cystisk fibrose (CF) er en vanlig genetisk sykdom som involverer exocrine Slim kjertler lungene, lever, bukspyttkjertel, og tarmen forårsaker progressiv flere organ svikt, som en nedgang i lungefunksjonen og pancreatic mangelfull1, 2,3. Ivacaftor (IVA) er første Food and Drug Administration (FDA-USA) og europeiske Legemidler Agency (EMA) godkjent cystisk fibrose trans-membran konduktans regulator (CFTR) forsterker stoffet, med dokumentert klinisk effekt produserer en betydelig bedring i lungefunksjonen enn placebo i en undergruppe av CF pasienter med G551D-CFTR [glysin (G) i posisjon 551 erstattes av aspartic syre (D)] eks. missense mutasjon (~ 4-5% av befolkningen CF)4,5. Dette administreres oralt narkotika øker CFTR kanalen åpner, dermed øke klorid ion strømmen og handler på den primære feilen som fører til de kliniske manifestasjoner av CF4,-6. Dessverre IVA monoterapi er ikke effektivt hos pasienter med mer vanlig homozygous F508del mutasjon [i rammen sletting av CFTR genet som resulterer i tap av fenylalanin (F) på posisjon 508] som resulterer i misfolded CFTR, som er sett i ~ 50% av den CF befolkning7,8.
Nylig, FDA har gitt godkjenning for å kombinere IVA med CFTR corrector stoffet lumacaftor. Smart strategi kombinerer en CFTR corrector (lumacaftor, LUMA) som redder F508del-CFTR til celleoverflaten med en modulator (IVA) som potentiates CFTR kanal aktivitet, utvider effektivt vinduet behandling for de fleste av CF befolkningen5 . Spørsmål fortsatt over om disse stoffene vil oppfylle sitt løfte som en rekke motstridende rapporter har dukket at kastet tvil over sine klinisk effekt9,10. I tillegg forbedringer i lungefunksjonen var bare beskjeden (2.6-4% for ivacaftor-lumacaftor kombinasjon) sammenlignet med suksessen oppnådd med IVA monoterapi hos pasienter med G551D mutasjon (10.6-12,5%)8. Potensielle antagonistiske narkotika-interaksjoner mellom IVA og LUMA som potensielt begrenser kliniske effekten av ivacaftor-lumacaftor kombinasjon kommer fra dens mindre enn ideell farmakokinetiske egenskapene7,11. Cytochrome P450 enzymer (CYP), metaboliseres mye IVA primært til en aktive metabolitten hydroxymethyl-IVA (IVA-M1, M1) og en uvirksom blankett IVA-carboxylate (IVA-M6, M6)7,12. CYP3A4 inducer LUMA, derimot, mye metaboliseres ikke og er hovedsakelig utskilles uendret i avføring11. Som CYP3A4 indusere indusere cytochrome metabolisme, kan ivacaftor (CYP3A4 substrat) konsentrasjoner bli redusert. Videre både IVA og LUMA er veldig hydrofobe molekyler og er ~ 99% bundet til plasma proteiner, som grenser betydelig gratis (aktiv) narkotika konsentrasjon1,13.
Kollektivt, kan disse faktorene komme sammen å begrense kliniske effekten av ivacaftor-lumacaftor-kombinasjon. Det er ikke kjent om optimal plasma konsentrasjoner er oppnådd under den gjeldende dose for ivacaftor-lumacaftor-kombinasjon eller hvis terapeutiske terskelen opprettholdes8. Tiden, er det en paucity av informasjon om farmakokinetiske parametere som toppen og stabil plasma konsentrasjoner av ivacaftor eller ivacaftor-lumacaftor. Gitt bemerket metabolismen av ivacaftor og lumacaftor, er overvåking av eksponering-svar relasjoner nødvendige for å oppnå optimal dosering regimer for ivacaftor eller ivacaftor-lumacaftor terapi. Vår gruppe nylig publiserte den første HPLC/LC-MS metoden for overvåking av eksponering-svar relasjoner IVA og LUMA14. Ingen alternativ teknikker for måling av konsentrasjonen av ivacaftor, metabolitter og lumacaftor har blitt rapportert til dato. Tillate høy gjennomstrømming analyse av et større pasienten kollektiv og dramatisk redusere analyse, vår gruppe har optimalisert rapporterte metoden ved hjelp av en mindre pore størrelse omvendt-fase kromatografi kolonne og en gradient løsemiddel systemet som reduserer kostnader og kjører ganger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
godkjenning for etikk ble innhentet fra Monash University menneskelige forskning etikk Committee (MUHREC).
1. påføring av analysen: pasienten prøvetaking
- registrere tiden når pasienten tar sin standard dose av 150 mg ivacaftor eller ivacaftor 125 mg /lumacaftor 200 mg.
- Merk ned nøyaktig tid når pasienten blodprøve samles.
Merk: Vi anbefaler å samle 4-5 prøver over 24 h klokkeslett kurs. Hvis samlingen av bare ett utvalg er mulig, på angitt tidspunkt er 2.5-4 h post ivacaftor eller ivacaftor-lumacaftor kombinasjon dosering som C max konsentrasjoner på steady state vil være oppnåelig etter > 5 dager med påfølgende behandling. - Samle 4-5 mL blod i kommersielt tilgjengelig ubehandlet blå rør.
- Etter samling av hele blod, tillater blodet å koagulere ved å la det uforstyrret ved romtemperatur.
Merk: Dette vanligvis tar 15-30 min. - Fjerne blodpropp ved sentrifugering 1000-2000 x g i 10 min på 4 ° C i en nedkjølt sentrifuge. Angi resulterende nedbryting som plasma.
- Etter sentrifugering, øyeblikkelig overføre nedbryting (plasma) inn i et rent polypropylen rør med en Pasteur pipette. Etiketten plasma tube med pasient ID (f.eks pasient 1), administrert stoffet (f.eks ivacaftor-lumacaftor kombinasjon) og tid tålmodig prøven var samlet (f.eks 2,5 t etter dosering).
- Behold eksempler på 2-8 ° C under behandling. Når handling er fullført, lagrer samples ved – 20 ° C.
- Om nødvendig sende prøver med en godkjent kurer for å analysere Institutt.
Merk: Utvalg skal leveres på tørris før ankomst og bør holdes på – 80° C før analysen.
2. Forberedelse og behandling av påløper prøver og standarder
Merk: Plasma fra friske blodgivere naiv til ivacaftor/lumacaftor behandling ble innhentet fra den australske Røde Kors. For å sikre integriteten, bør alle prøver/standarder holdes på 2-8 ° C under innsamling og behandling. Når handling er fullført, lagrer samples ved – 20 ° C.
- Veier ut IVA, IVA-carboxylate, hydroxymethyl-IVA og LUMA som vil tjene som en referanse for de interne standardene.
- Forberede to uavhengige lager løsninger av hver analytt (IVA, M1, M6 og LUMA) i LC-MS klasse metanol 100 µg/mL og 10 µg/mL.
Merk: Forbindelser utløper etter 10 dager på Borstemmaskin. - Ferskt forberede LC-MS kalibrering standarder før hver analytisk kjøre ved fortynning av kalibrering lager løsninger i humant plasma å oppnå følgende konsentrasjoner: 0.01, 0.025, 0,05, 0,1, 0,2, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0 og 10,0 µg/mL. Disse prøvene er referert til som standarder.
- å utløse proteiner, forberede 0,1% maursyre (FA) i acetonitrile (ACN, LC-MS klasse) og la i kjøleskapet før trengte.
3. Forbehandling av påløper prøver og standarder
- tillate begge tålmodig og tom plasmaprøver å equilibrate til romtemperatur.
- Vortex å blande hver plasmaprøve 15 s per prøve.
- Overføre en 100 µL aliquot enten tom plasma for standarder eller pasientprøvene for analyse til en 1.5-mL polypropylen microcentrifuge tube.
- Legge til interne standard IVA i hver av standard rør (f.eks 0.01, 0.025, 0,05, 0,1, 0,2, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0 og 10,0 µg/mL å dekke området for potensielle konsentrasjon), stenger lokket og vortex for 2-3 s. notat interne standarden er bare lagt til tom plasma og ingen intern standard legges til pasientprøvene.
- Gjenta trinn 3.4. for de andre interne standardene M1, M6 og LUMA.
- Nedspinning hver rør kort for å sikre at det ikke finnes noen dråper på lokket.
- Legge til 200 µL av miksen på 0,1% FA i ACN i hver rør til å fremkalle plasma proteiner.
- Virvle blandingen kraftig for 15 s.
- Tillate rør stå i 10 minutter i kjøleskapet.
- Sentrifuge 10.000 x g i 10 min ved 4 ° C, hvis mulig.
- Filtrere en 200 µL aliquot nedbryting av gjennom et 13 mm sprøyte filter i 1,5 mL HPLC ampuller.
- Overføre 100 µL av nedbryting i LC-MS ampullen for HPLC-MS analyse.
4. HPLC-MS analyse
Merk: The HPLC-MS analyse var utført på et LC-MS system kombinert med trippel quadrupole masse spectrometer (tabell 1).
- Slå på LC-MS systemet, kan du plassere skuffen med eksemplene auto-fargeprøvene.
- Legge kolonnen til en vakt kolonne og koble til LC-MS.
- Koble begge flasker mobile phases (flaske A: 100% ACN, flaske B: 0,1% maursyre i vann) og equilibrate LC-MS systemet.
- Inkludere følgende parametere i LC-MS-protokollen.
- Delt den mobile strømmen før det masse spectrometer i forholdet 2:1 (avfall: MS innløp).
- Utfører en gradient elueringsrør på en strømningshastighet på 0,5 mL/min bruker en mobil fase som består av 100% ACN og 0,1% maursyre i vann (utgangspunkt i 40:60, v/v). Merk at volum prosent av mobile fase endringer i hele analysen.
- Opererer på masse spectrometer i en positiv electrospray ionization modus.
- Kontroller at LC-MS er som følger: ion spray spenning 4.5 kV, kollisjon energi 295.9 V, nebulizing gass: nitrogen på 3 L/min, kollisjon gass: argon; tørking gass gjennomstrømning 20 L/min, linse spenning Q3:-22 V, desolvation temperatur 250 ° C med en varme-blokk temperaturen på 400 ° C.
- Injisere 10 µL volum per eksempel.
- Finn analytter bruker flere reaksjon overvåking (MRM). Overvåke ion overgangene m/z 392.49 → 393, m/z 408.49 → 409, m/z 422.47 → 423 og m/z 452.40 → 453 IVA, IVA-M1, IVA-M6 og LUMA, henholdsvis.
Merk: Nylig optimalisert metoden har ennå ikke fullstendig validert i henhold til FDA standarder.
5. Kalibrering kurver
- konstruere LC-MS kalibrering kurver før hver analytisk kjøre med forholdet mellom peak området prosenter av hver av de fire analytter interne standard og kalibrering standard nominell konsentrasjonen av ivacaftor (IVA-M1, IVA-M6 eller LUMA) LC-MS innstillinger programmet.
Merk: Den nøyaktige fremgangsmåten for bygging av kalibreringskurven er avhengig av LC-MS utstyr som brukes. Denne informasjonen kan være tilgjengelig i utstyr manualen. - Utfører lineær minste kvadrater regresjonsanalyse ved å vekte 1/C 2, avhengig av resiproke til konsentrasjoner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi har nylig rapportert en metode, delvis godkjente FDA standarder, på en trippel-quadrupole LC-MS og HPLC detektor system, bruker en C8 kolonne (5 µm, 3.9 x 50 mm ID) med mobile fase som består av 100% ACN og 0,1% maursyre i vann (40:60 v/v) på en strømningshastighet på 1 mL/min. En lineær sammenheng av toppene ble observert en konsentrasjon varierer fra 0.01 til 10 µg/mL i humant plasma for alle metabolitter, ivacaftor, Iva-M1, Iva-M6 og lumacaftor14. Her denne metoden er optimalisert til å tillate dramatisk redusert LC tid og derfor fullstendig kjøretiden til analysen, som er avgjørende for høy gjennomstrømming analyse av store mengder av klinisk prøver. Analysen var optimalisert ved hjelp av en mindre pore størrelse omvendt-fase kromatografi kolonne og en gradient løsemiddel systemet i stedet for en isocratic eluering vil redusere tiden per eksempel fra ~ 15 min til bare 6 minutter. Analytter fastsettes i electrospray positivt modus bruker flere reaksjon overvåking (MRM). Prosedyren skal valideres huset før bruk, som vi tidligere har detaljert14.
Nøyaktigheten av metoden var 94,2% ± 4.53 til 97,5% ± 2.94%, avhengig av de analytt14. Kalibrering området 0,01 til 10 µg/mL er gjeldende for bruk i klinisk setting, særlig gitt at under ivacaftor-lumacaftor terapi, svært lave konsentrasjoner av aktive IVA og M1 ble rapportert av vår gruppe tidligere i plasma potensielt løsningsmidler induksjon av CYP3A4 av LUMA, som resulterer i omfattende IVA metabolisme14. Intradag nøyaktigheten av hver analytt ble vurdert med seks uavhengig forberedt kvalitetskontroll (QC) prøver på samme dag i konsentrasjoner på 0,05, 0,5 og 8 µg/mL. Mellom dag nøyaktigheten ble vurdert med seks uavhengig forberedt QC prøver på tre dager. Nøyaktighet og presisjon ble beregnet via relative standardavvik (RSD). For hver QC prøve, RSD verdiene bør være mindre enn 15%15. Alle fire analytter viste RSD verdier på mindre enn 15%14. Den nedre grensen for påvisning (LOD) og kvantifisering (LOQ) ble etablert: for IVA LOD 2,50 x 10-3 µg/mL og LOQ 7.57 x 10-3 µg/mL; for M1, LOD 4.57 x 10-4 µg/mL og LOQ 1,38 x 10-3 µg/mL; for M6 LOD 5.86 x 10-4 µg/mL og LOQ 1,78 x 10-3 µg/mL; LUMA LOD var 6,08 x 10-4 µg/mL og LOQ 1.84 x 10-3 µg/mL14. En typisk chromatogram er vist i figur 1. En optimalisert brukt kromatografiske oppløsning ble hentet ved hjelp av en mobil fase av 100% ACN og 0,1% maursyre i vann (utgangspunkt i 40:60, v/v) med en gradient elueringsrør på en C8 kolonne (2,6 µm; 100 Å; 50 x 2.1 mm). Gradient separasjon ble brukt med 40% av mobile fase B fra 0 til 1 min; deretter 40% - 70% av mobile fase B fra 1 min til 2 min; holder 70% av mobile fase B fra 2 min til 2,7 min; øker fra 70% til 90% av mobile B fra 2,7 min til 2,8 min; holde 90% av mobile fase B fra 2,8 min til 4.0 min for vask formål; endelig tilbake fra 90% til 40% av mobile B fra 4.0 min til 4,1 min; deretter holder 40% av mobile fase B fra 4.1 min til 6.0 min første vilkår (figur 1). De LC tid var som følger i M6 1.0 min; i M1 1.3 min; for IVA: 1.55 min; for LUMA: 2,3 min (figur 1). I alle tomme plasmaprøver, ingen interferens med tiden av en av analytter ble observert, heller fant forstyrrelser fra kombinasjonen av ivacaftor med lumacaftor.
Figur 1 : Representant LC-MS chromatogram i humant plasma spiked med 10 µg/mL IVA-M6, IVA-M1, lumacaftor og ivacaftor i forhold til gradient tilsettes Pump. En 0,1% maursyre i vann og pumpe B 100% acetonitrile (0-1 min: 40% B, 1-2 min: 40%-70% B, 2-2.7 min: holdt på 70% B, 2.7-2,8 min: 70%-90% B; 3.8-4.0 min: 90% B vaske; 4.0-4.1 min: 90%-40% B; 4.1-6.0 min: holdt på 40% B). Ion overgangene m/z 392.49 → 393, m/z 408.49 → 409, m/z 422.47 → 423 og m/z 452.40 → 453 ble brukt for MS-/ MS overvåking av ivacaftor, IVA - M1, IVA-M6 og lumacaftor, henholdsvis. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
| HPLC forhold | |
| Kolonne | C8; 2.6 µm; 100 Å; 50 x 2.1 mm |
| Vakt kolonne | HPLC In-Line Filter 0,5 µm; Dybde Filter x 0.004 inID |
| Filteret x 0.004 inID | |
| Kolonnen temperatur: | 30 ° C |
| Mobile fase A: | 0,1% FA i vann |
| Mobile fase B: | 100% ACN |
| Mobile fase komposisjon ved utgangspunkt | 60 / 40 (v/v) |
| Eksempel temperatur: | 4 ° C |
| Injeksjon volum: | 5 ΜL |
| P vask | 80% metanol, 20% vann 300 µL |
| Infusjonshastigheten: | 0,5 mL/min |
| Gradering: | -1 min: 40% B |
| -1-2 min: 40% - 70% B | |
| -2-2,7 min: holdt på 70% B | |
| -2.7 - 2,8 min: 70% - 90% B | |
| -2,8 - 4.0 min: 90% B vask | |
| -4.0 - 4.1 min: 90% - 40% | |
| -4.1-6.0 min: holdt på 40%, | |
| Total kjøre: | 6 minutter |
| Tid: | Oppbevaringsperioden for M6: 1.0 min |
| Oppbevaringsperioden for M1: 1,3 min | |
| Oppbevaringsperioden for IVA: 1.55 min | |
| Oppbevaringsperioden for LUMA: 2,3 min | |
| MS forholdene | |
| Maskinvareidentifiseringen modus: | electrospray positive ESI + |
| Ion spray spenning: | 4.5 kV |
| Kollisjon energi: | 295.9 V |
| Nebulizing gass (nitrogen): | 3 L/min |
| CID gass: | 230 kPa |
| Tørking gasstrømmen (nitrogen): | 20 L/min |
| Q1 pre rod skjevhet: | - & #1 |
Tabell 1: Detaljer av HPLC-MS.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Som tidligere rapportert har vår gruppe for første gang utviklet og godkjent en såkalt HPLC og LC-MS metode for rask påvisning og måling av ivacaftor og dens viktigste metabolitter hydroxymethyl-IVA M1 (aktiv) og IVA-carboxylate M6 (inaktiv). og lumacaftor i plasma og sputum CF pasienter14. Analysen rapportert av vår gruppe tidligere ble brukt å kvantifisere konsentrasjonen av LUMA, IVA, IVA-M1 og IVA-M6 i plasma og sputum CF pasienter gjennomgår steady state standard terapi med IVA 150 mg /q12 h (latinsk terminologi: quaque 12 h; en gang hver 12 h) eller 200 mg /q12 h LUMA-125 mg /q12 h IVA kombinasjon14. For høy gjennomstrømming analyse av store mengder pasientprøvene, vi har optimalisert rapporterte metoden ved hjelp av en mindre pore størrelse omvendt-fase kromatografi kolonne C8 (2,6 µm; 100 Å; 50 x 2.1 mm2) og en gradient løsemiddel systemet i stedet for gjeldende isocratic tilsettes. Dette reduserer kjøretiden til 6 min per prøve.
Denne pålitelige og romanen metoden tilbyr en enkel og rask og følsom tilnærming for terapeutisk medikament overvåking av kombinasjon av ivacaftor og ivacaftor-lumacaftor i biologiske væsker. Gitt behovet for å utvikle eksponering-svar relasjoner for å maksimere narkotika effekt i tillegg til å inneholde helsetjenester kostnader, må mer følsomme verktøy være utviklet og godkjent for å bistå klinikere bruke evidensbasert behandling og høy gjennomstrømming analytiske teknikker for pasienter som lider av jf vår gruppe har tidligere rapportert en delvis validert HPLC-MS for å analysere samtidig IVA, IVA-M1, IVA-M6 og LUMA i plasma og sputum CF pasienter14. Etablere en vanlig og lett-å-bruke analytisk protokoll for analyse av pasienter som får ivacaftor eller ivacaftor-lumacaftor kombinasjon vil lette sammenligning av data og tolkning av resultatene av fremtidige farmakokinetiske studier. Måle IVA, IVA-M1, IVA-M6 og LUMA i biologiske væsker med LC-MS teknikker kan legemliggjøre et kraftig verktøy for å utforske eksponering-respons-forhold i forhold til terapeutiske resultater.
Generelt, HPLC-MS analyse av ivacaftor eller ivacaftor-lumacaftor kombinasjon i biologiske væsker kan gi molekylær grunnlag for gjennomføringen av individualisert Farmakoterapeutisk strategier med pasienter som lider av CF og kan være nyttig på gjør det dyrt Kombinasjonsbehandling for ivacaftor eller ivacaftor-lumacaftor mer kostnadseffektivt, av potensielt indikerer behovet for sjeldnere dosering. Bruker den foreslåtte analysemetode kliniske farmakokinetiske/Farmakodynamiske studier, har mulighet oppstått for ytterligere å undersøke farmakokinetiske parameterne ivacaftor eller ivacaftor-lumacaftor kombinasjon på en større pasient kollektive.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
JL og TV støttes av National Institute of Allergy og smittsomme sykdommer (NIAID) av National Institutes of Health (R01 AI111965). Innholdet er ansvar forfattere og representerer ikke nødvendigvis den offisielle synet av National Institute of Allergy og smittsomme sykdommer eller National Institutes of Health. MC er en australsk NHMRC rektor stipendiat. J. L. er en australsk National Health and Medical Research Council (NHMRC) seniorforsker TV er en australsk NHMRC industrien karriere utvikling nivå 2 stipendiat. E.K.S er en utnevnt unge ambassadør 2017 for ASM (American Society for mikrobiologi) og støttes av den australsk Postgraduate Award.
Deler av dette arbeidet ble presentert på 12th Australiasian konferanse om cystisk fibrose i Melbourne (5-8th av August 2017).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| IVA (Cat#S114) | SelleckChem (USA). | ||
| LUMA (Cat#S1565) | SelleckChem (USA). | ||
| IVA-carboxylate (Cat# 510242247CS) | Clearsynth (Canada). | ||
| hydroxymethyl-IVA (Cat# 510240849CS) | Clearsynth (Canada). | ||
| Methanol (MeOH, LC-MS grade), | Sigma-Aldrich | ||
| acetonitrile (ACN, LC-MS grade) | Sigma-Aldrich | ||
| formic acid (FA) | Sigma-Aldrich | ||
| triple-quadrupole Shimadzu 8030 LC-MS | |||
| Phenomenex Kinetex (2.6 µm C8 100 Å; 50 × 2.1mm) | |||
| (KrudKatcher Ultrea HPLC In-Line Filter 0.5 m Depth Filter x 0.004inID). | |||
| 1.5 mL polypropylene microcentrifuge tube (VWR). | |||
| Eppendorf Centrifuge 5430 | |||
| 13-mm syringe filter (0.45 µm nylon, GRACE, USA) | |||
| [Phenomenex VEREX, 9 mm, PP, 300 µL, PTFE/Silicone septa]. |
References
- Schneider, E. K., et al. Drug-drug plasma protein binding interactions of ivacaftor. J Mol Recognit. 28 (6), 339-348 (2015).
- Solomon, M., Leatte, P. N. Treatments for Cystic fibrosis. , (2009).
- O'Sullivan, B. P., Flume, P. The clinical approach to lung disease in patients with cystic fibrosis. Semin Respir Crit Care Med. 30 (5), 505-513 (2009).
- Ramsey, B. W., et al. A CFTR potentiator in patients with cystic fibrosis and the G551D mutation. N Engl J Med. 365 (18), 1663-1672 (2011).
- Wainwright, C. E., et al. Lumacaftor-Ivacaftor in Patients with Cystic Fibrosis Homozygous for Phe508del CFTR. N Engl J Med. 373 (3), 220-231 (2015).
- Hadida, S., et al. Discovery of N-(2,4-di-tert-butyl-5-hydroxyphenyl)-4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxamide (VX-770, ivacaftor), a potent and orally bioavailable CFTR potentiator. J Med Chem. 57 (23), 9776-9795 (2014).
- FDA. FDA Advisory Commitee Briefing Material VERTEX-FDA Pulmonary-Allergy drugs advisory commitee. 98 , VERTEX Pharmaceuticals Incorporated. (2015).
- Holmes, D. False dawn for cystic fibrosis disease modifiers? Nat Rev Drug Discov. 13 (10), 713-714 (2014).
- Veit, G., et al. Some gating potentiators, including VX-770, diminish DeltaF508-CFTR functional expression. Sci Transl Med. 6 (246), 246ra297 (2014).
- Cholon, D. M., et al. Potentiator ivacaftor abrogates pharmacological correction of DeltaF508 CFTR in cystic fibrosis. Sci Transl Med. 6 (246), 246ra297 (2014).
- EMA, Assessment report ORKAMBI (ivacaftor/lumacaftor) European medicines agency. , (2015).
- VERTEX. Vertex prescribing infomation. , (2015).
- Matthes, E., et al. Low free drug concentration prevents inhibition of F508del CFTR functional expression by the potentiator VX-770 (ivacaftor). Br J Pharmacol. 173 (3), 459-470 (2016).
- Schneider, E. K., et al. Development of HPLC and LC-MS/MS methods for the analysis of ivacaftor, its major metabolites and lumacaftor in plasma and sputum of cystic fibrosis patients treated with ORKAMBI or KALYDECO. J Chrom B Analyt Technol Biomed Life Sci. 1038, 57-62 (2016).
- Su, Q., et al. An LC-MS/MS method for the quantitation of cabozantinib in rat plasma: application to a pharmacokinetic study. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 985, 119-123 (2015).
