Summary
Сочетание Ivacaftor и ivacaftor-lumacaftor являются два новых препаратов CF. Однако есть еще недостаток понимания их Фармакологических и фармакологии. Мы представляем оптимизированный метод ВЭЖХ-МС для одновременного анализа ivacaftor и его главных метаболитов и lumacaftor.
Abstract
Дефекты в Регулятор проводимости транс мембраны кистозный фиброз (МВТР) являются причиной кистозный фиброз (CF), болезнь с угрожающей жизни легких проявлениях. Ivacaftor (IVA) и ivacaftor-lumacaftor (яркость) комбинации являются два новых прорыв CF лекарств, которые непосредственно модулировать активность и торговля дефектных МВТР-белка. Однако есть еще недостаток понимания на фармакокинетические/фармакодинамика параметров и фармакологии ivacaftor и lumacaftor. Метод ВЭЖХ-МС для одновременного анализа концентрации ivacaftor, гидроксиметил ivacaftor, ivacaftor карбоксилатных и lumacaftor в биологических жидкостях у больных, получавших стандартные комбинации ivacaftor или ivacaftor-lumacaftor терапия ранее был разработан нашей группы и частично проверяются по стандартам FDA. Однако, чтобы разрешить высок объём анализа большего числа пациентов образцов, наша группа оптимизировал сообщил метод с помощью столбца реверс фаза хроматографии размер меньше поры (2.6 мкм, C8 100 Å; 50 x 2,1 мм) и градиентной жидкостной системы ( 0-1 мин: 40% B; 1-2 мин: 40-70% B; 2-2.7 мин: в 70% B; 2,7-2,8 мин: 70-90% B; 2.8-4.0 мин: 90% B стирки; 4.0-4.1 мин: 90-40% B; 4.1-6.0 мин: в 40% B) вместо Изократические элюции. Целью настоящего исследования было уменьшить время анализа ВЭЖХ-МС на сэмпл резко от ~ 15 мин до только 6 мин на сэмпл, которая необходима для анализа большого количества пациентов образцов. Этот метод целесообразно будет весьма полезными для исследований в воздействие-реакция этих препаратов CF прорыв.
Introduction
Кистозный фиброз (CF) является общим генетическим заболеванием, с участием слизь экзокринной железы легких, печени, поджелудочной железы и кишечника, вызывая прогрессивного мульти полиорганной недостаточности, такие как снижение легочной функции и недостаточность поджелудочной железы1, 2,3. Ivacaftor (IVA) является первым пищевых продуктов и медикаментов (FDA-США) и Европейское агентство лекарственных средств (EMA) одобрил муковисцидоз транс мембраны проводимости регулятор (МВТР) potentiator наркотиков, с свидетельствует клиническая эффективность производства значительного улучшение функции легких над плацебо в небольшого подмножества CF пациентов с учетом G551D-МВТР [глицин (G) в положение 551 заменяется аспарагиновой кислоты (D)] Миссенс-мутации (~ 4-5% из населенности CF)4,5. Это перорально наркотиков увеличивает МВТР канал открытия, тем самым увеличивая поток ионов хлорида и действуя на первичный дефект, который приводит к клинических проявлений CF4,6. К сожалению, IVA монотерапия не эффективен у пациентов с более распространенными гомозиготных F508del мутация [в кадр удаления гена МВТР, что приводит к потере фенилаланин (F) в позиции 508] что приводит смятых МВТР, который рассматривается в ~ 50% CF населения7,8.
Недавно FDA предоставил официальное утверждение для объединения IVA с корректором МВТР lumacaftor наркотиков. Умная стратегия объединения МВТР Корректор (lumacaftor, Лума), который спасает F508del-МВТР на поверхности клеток с модулятором (IVA), который потенцирует активность канала МВТР, эффективно расширяет окна лечения для большинства населения CF5 . Вопросы по-прежнему ли эти препараты будут выполнить свое обещание, как ряд противоречивых докладов появились что сомнение после их клиническая эффективность9,10. Кроме того, улучшение функции легких были лишь скромный (2,6-4% для комбинации ivacaftor-lumacaftor) по сравнению с успех, достигнутый с IVA монотерапии у больных с учетом G551D мутации (10.6-12,5%)8. Потенциальные антагонистических наркотиков-взаимодействиях между IVA и LUMA потенциально ограничивают клиническая эффективность ivacaftor-lumacaftor комбинации приходят от его менее идеальных фармакокинетические свойства7,11. IVA активно метаболизируется ферментами цитохрома P450 (CYP), главным образом в активный метаболит гидроксиметил IVA (IVA-M1, M1) и неактивной форме IVA-карбоксилатных (IVA-M6, M6)7,12. Индуктором CYP3A4 Лума, с другой стороны, широко не метаболизируется и это во многом экскретируется в неизмененном виде в фекалиях11. Как индукторов CYP3A4 вызывают метаболизм цитохрома, ivacaftor (CYP3A4 субстрата) концентрации могут быть сокращены. Кроме того IVA и LUMA очень гидрофобные молекулы и ~ 99% связаны с белками плазмы, что значительно ограничивает свободный (активные) препарата концентрация1,13.
В совокупности эти факторы могут собираются вместе, чтобы ограничить клиническая эффективность комбинации ivacaftor-lumacaftor. Не известно ли оптимальный плазменные концентрации достигаются под текущий режим дозирования для ivacaftor-lumacaftor комбинации или если порог терапевтического сохраняется8. В настоящее время существует нехватка информации о фармакокинетические параметры, такие как пик и концентрации в плазме установившемся ivacaftor или ivacaftor-lumacaftor. Учитывая отметил метаболизм ivacaftor и lumacaftor, мониторинг воздействия-реакция является условием для достижения оптимальной дозировке схемы для ivacaftor или ivacaftor-lumacaftor терапии. Наша группа недавно опубликовал первый метод ВЭЖХ/LC-MS для мониторинга воздействия-реакция IVA и LUMA14. До настоящего времени не поступало никаких альтернативных методов измерения концентрации ivacaftor, его метаболитов и lumacaftor. Для высокой пропускной способности анализа больших пациента коллектива и резко уменьшить время анализа, наша группа оптимизированный метод сообщалось с помощью столбца реверс фаза хроматографии размер меньше поры и градиентной жидкостной системы, уменьшает стоимость и время работы.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
утверждения этики был получен от Монаш Университета человека исследовательской этики Комитет (MUHREC).
1. применение анализа: сбор образцов пациента
- записывать время, когда пациент принимает их стандартной дозы 150 мг ivacaftor или ivacaftor 125 мг /lumacaftor 200 мг.
- Примечание вниз точное время, когда собирается образец крови пациента.
Примечание: Мы рекомендуем, собирая образцы 4-5 время течение 24 h. Если коллекция только один образец возможно, указанное время является 2,5-4 ч пост ivacaftor или ivacaftor-lumacaftor сочетание дозировки как C Макс концентрации в стационарном состоянии будет достижимо после > 5 дней подряд лечения. - Собирать 4-5 мл крови в коммерчески доступных необработанных синий трубы.
- После сбора всей крови, позволяют крови к свертыванию, оставляя нетронутыми при комнатной температуре.
Примечание: Обычно это занимает 15-30 мин - Удаление сгусток центрифугированием в 1,000-2,000 x g 10 мин при 4 ° C в охлажденных центрифуги. Назначить результате супернатанта как плазмы.
- После центрифугирования, немедленно перевести супернатант (плазмы) в чистой полипропиленовые трубы, с помощью пипетки Пастера. Ярлык плазмы трубки с ID пациента (например, 1 пациента), управляемых препарата (например, комбинация ivacaftor-lumacaftor) и время пациента образец был сбор (например, 2,5 ч после дозировки).
- Сохранить образцы в 2-8 ° C во время обработки. После завершения обработки, хранения образцов в – 20 ° C.
- В случае необходимости, корабль образцы с утвержденным курьера к анализу института.
Примечание: Образцы должны быть отправлены на сухого льда до прибытия и должна быть сохранена в – 80° C до анализа.
2. Подготовка и обработка понесенных образцов и стандартов
Примечание: плазмы от наивных здоровых доноров к терапии ivacaftor/lumacaftor был получен из австралийского Красного Креста. Для обеспечения целостности, все образцы/стандарты должны храниться при температуре 2-8 ° C в ходе сбора и обработки. После завершения обработки, хранения образцов в – 20 ° C.
- Весят IVA, IVA-карбоксилатных, гидроксиметил IVA и ЛЮМА, который будет служить в качестве ссылки для внутренних стандартов.
- Подготовить два независимых акций решения каждого аналита (IVA, M1, M6 и LUMA) в LC-MS класс метанола на 100 мкг/мл и 10 мкг/мл.
Примечание: Соединения истекает через 10 дней на benchtop. - Свежие подготовить LC-MS калибровки стандартов до каждой аналитической запуск путем разбавления калибровки стандартов акций решения в человеческой плазмы для достижения после концентрации: 0.01, 0,025, 0,05, 0,1, 0,2, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0 и 10.0 мкг/мл. Эти образцы, именуемые стандарты.
- Осадок белков, подготовить 0,1% муравьиной кислоты (ФА) в ацетонитриле (ACN, класс LC-MS) и оставить в холодильнике до тех пор, пока требуется.
3. Предварительная обработка понесенных образцов и стандартов
- позволяют обоих образцах плазмы пациента и пустой сбалансировать до комнатной температуры.
- Вихрь смешивать каждого образца плазмы для 15 s на сэмпл.
- Передачи 100 мкл Алиготе либо пустой плазмы для стандартов или пациентов образцов для анализа в трубку 1,5 мл полипропиленовые microcentrifuge.
- Добавить внутренние стандартные IVA в каждый из стандартных труб (например, 0,01, 0,025, 0,05, 0,1, 0,2, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0 и 10.0 мкг/мл для покрытия потенциальных концентрациях), закройте крышку, и вихрь для 2-3 s. Обратите внимание что внутренний стандарт только добавляется пустой плазмы и не внутренний стандарт добавляется пациентов образцов.
- Повторите шаг 3.4. для других внутренних стандартов, M1, M6 и LUMA.
- Спин вниз каждой трубы кратко для обеспечения того, чтобы без капельки на крышке.
- Добавить 200 мкл смеси 0,1% FA в АКС в каждую пробирку для осаждения белков плазмы.
- Водоворот смесь энергично для около 15 s.
- Позволяют трубы постоять 10 мин в холодильник.
- Центрифуг на 10000 x g 10 мин при температуре 4 ° C, если это возможно.
- Фильтр 200 мкл Алиготе супернатант через фильтр шприц 13 мм в 1,5 мл флакон ВЭЖХ.
- Передачи 100 мкл супернатант в пробирку LC-MS для анализа ВЭЖХ-МС.
4. ВЭЖХ-МС анализ
Примечание: был проведен анализ ВЭЖХ-МС на LC-MS системы в сочетании с тройной квадрупольный масс-спектрометр (Таблица 1).
- Повернуть на системе LC-MS, поместите лоток с образцами в auto сборники.
- Добавить столбец в столбец гвардии и подключиться к системе LC-MS.
- Придают обе бутылки подвижных фазах (бутылка A: 100% АКС; бутылка B: 0,1% муравьиной кислоты в воде) и сбалансировать системы LC-MS.
- Включить следующие параметры в протокол LC-MS.
- Разделить поток мобильных фаза перед входом в масс-спектрометр в соотношении 2:1 (отходы: MS входе).
- Выполнять градиента элюции при скорости потока 0,5 мл/мин с помощью мобильных фаза, состоящая из 100% АКС и 0,1% муравьиной кислоты в воде (отправная точка в широколиственные, v/v). Обратите внимание, что объем % мобильных фазы изменяется по всему анализ.
- Работают масс-спектрометр в режиме ионизации позитивные электроспрей.
- Убедитесь, что используются следующие параметры LC-MS: Ион спрей напряжение 4.5 кв, энергию столкновения 295.9 V, Небулайзерная газ: азота в 3 Л/мин; столкновения газ: Аргон; сушки газа расход 20 Л/мин, объектив напряжения Q3:-22 V, desolvation температуры 250 ° C с блоком тепла температуры 400 ° C.
- Тома inject 10 мкл на сэмпл.
- Обнаружения аналитов, используя несколько реакции, мониторинг (MRM). Отслеживать переходы ионов m/z 392.49 → 393, m/z 408.49 → 409, m/z 422.47 → 423 и m/z 452.40 → 453 IVA, IVA-М1, IVA-M6 и ЛЮМА, соответственно.
Примечание: Недавно усовершенствованного метода еще не полностью проверяться согласно стандартам FDA.
5. Калибровочные кривые
- конструкции LC-MS калибровочных кривых перед каждой аналитической запуска, используя отношения между пик области показатели каждого из четырех аналитов внутреннего стандарта и калибровки стандартных номинальной концентрации ivacaftor (IVA-М1, IVA-M6 или LUMA) в рамках программы настройки LC-MS.
Примечание: Точные шаги для построения калибровочной кривой зависит от модели используемого оборудования LC-MS. Эта информация может быть доступна в руководстве оборудование. - Выполнения регрессионного анализа линейных наименьших квадратов путем взвешивания 1/C 2 согласно взаимным концентраций.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Мы недавно сообщили метода, частично проверяются по стандартам FDA, на тройной квадрупольного LC-MS и ВЭЖХ системы детектор, с помощью столбца C8 (5 мкм, и.д. 3,9 мм x 50 мм) с мобильных фаза, состоящая из 100% АКС и 0,1% муравьиной кислоты в воде (широколиственные v/v) со скоростью потока 1 мл/мин. Линейной корреляции пиков наблюдалось над диапазоном концентрации от 0.01 до 10 мкг/мл в человеческой плазмы для всех метаболитов, ivacaftor, Iva-М1, Iva-M6 и lumacaftor14. Здесь был оптимизирован этот метод позволяет резко сократить LC удержания раз и, следовательно, полное время работы проба, которая необходима для анализа высок объём большое количество клинических образцов. Проба была оптимизирована с помощью столбца реверс фаза хроматографии размер меньше поры и градиента жидкостной системы вместо Изократические элюции, сокращая время на сэмпл из ~ 15 мин только 6 мин. Аналитов определяются в электроспрей позитивные режиме, с использованием нескольких реакции, мониторинг (MRM). Процедуры должны проверяться доме перед использованием, как мы ранее подробно14.
Точность метода был 94,2% ± 4,53% до 97,5% 2,94%, в зависимости от аналита14. Диапазон калибровки от 0,01 до 10 мкг/мл применяется для использования в клинических условиях, в частности учитывая, что под ivacaftor-lumacaftor терапия, очень низкие концентрации активных IVA и M1 нашей группой ранее сообщалось, в плазме потенциально связи с индукция CYP3A4, Лума, что приводит к большой IVA метаболизм14. Внутри дневной точность каждого аналита оценивалась с шестью образцами независимо подготовленных контроля качества (КК) в тот же день в концентрации 0,05, 0.5 и 8 мкг/мл. Точность между день оценивалась с шестью независимо подготовленных образцов КК на три дня подряд. Точность и повторяемость были рассчитаны через относительный стандартное отклонение (RSD). Для каждого образца, КК, RSD значения должны быть менее 15%15. Все четыре аналитов показал RSD значения менее 15%14. Нижний предел обнаружения (LOD) и количественной оценки (LOQ) были созданы: IVA Лод 2,50 x 10-3 мкг/мл и LOQ 7.57 x 10-3 мкг/мл; для M1, Лод 4.57 x 10-4 мкг/мл и LOQ 1,38 x 10-3 мкг/мл; для M6 Лод 5,86 x 10-4 мкг/мл и LOQ 1,78 x 10-3 мкг/мл; для LUMA LOD был 6.08 x 10-4 мкг/мл и LOQ 1,84 x 10-3 мкг/мл14. Типичная Хроматограмма показан на рисунке 1. Оптимизированный хроматографическое разрешение было получено с помощью мобильных фазы 100% АКС и 0,1% муравьиной кислоты в воде (отправная точка в широколиственные, v/v) с градиента элюции по столбцу C8 (2.6 мкм; 100 Å; 50 мм x 2,1 мм). Градиент разделения был использован с 40% мобильных этапа B от 0 до 1 мин; а затем 40% - 70% мобильных этапа B 1 мин 2 мин; проведение 70% мобильных этапа B от 2 мин до 2,7 мин; увеличение от 70% до 90% мобильных этапа B от 2.7 мин до 2,8 мин; проведение 90% мобильных этапа B от 2,8 мин до 4.0 мин для мытья целей; Наконец, возвращается с 90% до 40% мобильных B от мин 4.0 до 4.1 мин; Затем, проведение 40% мобильных этапа B от 4.1 мин до 6.0 мин для начальных условий (рис. 1). Время удержания LC были следующим M6 1.0 мин; для M1 1.3 мин; для IVA: 1.55 мин; для яркости: 2,3 мин (рис. 1). Во всех пробах пустой плазмы было отмечено никакого вмешательства со временем удержания любой аналитов, не обнаружено вмешательство из комбинации ivacaftor с lumacaftor.
Рисунок 1 : Представитель LC-MS Хроматограмма человеческой плазмы, шипами с 10 мкг/мл IVA-M6, IVA-М1, lumacaftor и ivacaftor по отношению к градиента элюции насоса. Муравьиная кислота 0,1% в ацетонитриле 100% воды и насос B (0-1 мин: 40% B; 1-2 мин: 40%-70% B; 2-2.7 мин: состоявшейся в 70%, B; 2,7-2,8 мин: 70%-90% B; 3,8-4,0 мин: 90% B стирки; 4.0-4.1 мин: 90%-40% B; 4.1-6.0 мин: в 40% B). Ион переходы и m/z 392.49 → 393, m/z 408.49 → 409, m/z 422.47 → 423 m/z 452.40 → 453 были использованы для MS/MS мониторинг ivacaftor, IVA - M1, IVA-M6 и lumacaftor, соответственно. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
| ВЭЖХ условия | |
| Колонка | C8; 2.6 мкм; 100 Å; 50 x 2,1 мм |
| Гвардии столбец | ВЭЖХ в строке фильтра 0,5 мкм; Фильтр глубина x 0,004 inID |
| Фильтр x 0,004 inID | |
| Температура колонки: | 30 ° C |
| Подвижная фаза A: | 0,1% FA в воде |
| Подвижная фаза B: | 100% ACN |
| Мобильный фазового состава на отправной точкой | 60 / 40 (v/v) |
| Температура образца: | 4 ° C |
| Объем впрыска: | 5 МКЛ |
| Мыть иглы | 80% метанола, 20% воды 300 мкл |
| Скорость потока: | 0,5 мл/мин |
| Градиент: | -1 мин: 40% B |
| -1-2 мин: 40% - 70% B | |
| -2-2,7 мин: в 70% B | |
| -2,7 - 2,8 мин: 70% - 90% B | |
| -2,8 - 4.0 мин: 90% B Стиральная | |
| -4.0 - 4.1 мин: 90% - 40% | |
| -4.1-6.0 мин: в 40%, | |
| Всего запустить: | 6 мин. |
| Время сохранения: | Время хранения для M6: 1,0 мин |
| Время хранения для M1: 1.3 мин | |
| Время хранения для IVA: 1.55 мин | |
| Время хранения для LUMA: 2,3 мин | |
| MS условия | |
| Режим обнаружения: | электроспрей позитивные ESI + |
| Ион спрей напряжения: | 4.5 кв |
| Энергия столкновения: | 295.9 V |
| Небулайзерная газ (азот): | 3 Л/мин |
| СИД Газа: | 230 кПа |
| Сушка газа (азот): | 20 Л/мин |
| Q1 предварительно стержень уклоном: | - & #1 |
Таблица 1: Описание условий ВЭЖХ-МС.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Как сообщалось ранее наша группа имеет впервые разработан и проверен метод ВЭЖХ и LC-MS для быстрого обнаружения и количественного определения ivacaftor и его главных метаболитов гидроксиметил IVA M1 (активный) и IVA-карбоксилатных M6 (неактивный); и lumacaftor в плазме крови и мокроты больных CF14. Assay сообщили нашей группой, ранее успешно используется для количественного определения концентрации Лума, IVA, IVA-M1 и IVA-M6 в плазме крови и мокроты CF пациентов, проходящих стационарное состояние стандартной терапии с IVA 150 мг /q12 h (Латинской терминологии: quaque 12 ч; один раз каждые 12 ч) или 200 мг /q12 ч LUMA-125 мг /q12 IVA сочетание14. Для высокой пропускной способности анализа большого количества пациентов образцов, мы оптимизировали сообщил метод, с помощью меньше поры размер реверс фаза хроматографии столбца C8 (2.6 мкм; 100 Å; 50 x 2,1 мм2) и градиентной жидкостной системы вместо текущего Изократические элюции. Это уменьшает время работы до 6 мин на сэмпл.
Этот надежный и Роман метод предлагает простой, чувствительной и быстрый подход для терапевтического мониторинга лекарственных препаратов ivacaftor и ivacaftor-lumacaftor комбинации в биологических жидкостях. Учитывая необходимость разработки воздействие-реакция максимизировать эффективность препарата, а также сдерживанию расходов на медицинское обслуживание, более чувствительные инструменты должны быть разработаны и проверяется, чтобы помочь врачам в использовании научно обоснованные методы лечения и высок объём аналитические методы для пациентов, страдающих от сравни наша группа ранее уже сообщал частично проверенного ВЭЖХ-МС одновременно анализа IVA, IVA-М1, IVA-M6 и LUMA в плазме крови и мокроты больных CF14. Создание общих и легко для использования аналитических протокол для анализа пациентов, получающих ivacaftor или ivacaftor-lumacaftor сочетание облегчит сравнение данных и интерпретации результатов будущих фармакокинетических исследований. Измерения IVA, IVA-М1, IVA-M6 и LUMA в биологических жидкостях, с использованием методов LC-MS может воплощать мощный инструмент для изучения воздействия ответ отношения по отношению к терапевтические результаты.
В целом ВЭЖХ-МС анализ ivacaftor или ivacaftor-lumacaftor комбинации в биологических жидкостях могут молекулярной основой для осуществления индивидуального Фармакотерапевтическая стратегий с пациентов, страдающих от CF и может оказаться полезно на основании сделать дорогой комбинированной терапии ivacaftor или ivacaftor-lumacaftor более экономически эффективным, указав потенциально потребность менее частые дозировки. Путем применения предлагаемого аналитического метода для клинических фармакокинетические/фармакодинамические исследования, возможность возникла для дальнейшего расследования фармакокинетические параметры ivacaftor или ivacaftor-lumacaftor комбинации на больших пациента коллектив.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
В национальном институте аллергии и инфекционных заболеваний (NIAID) национальных институтов здравоохранения (R01 AI111965) поддерживаются J.L. и Т.В. Содержание является исключительно ответственности авторов и не обязательно отражают официальную точку зрения в национальном институте аллергии и инфекционных заболеваний или национальных институтов здравоохранения. МС является австралийский NHMRC главный научный сотрудник. J. L. австралийского национального здравоохранения и медицинских исследований Совета (NHMRC) старший научный сотрудник, и т.в. Австралийский NHMRC промышленность карьера развития уровня 2 научный сотрудник. E.K.S назначен посол Янг 2017 для ASM (Американское общество микробиологии) и поддерживается австралийских последипломного Award.
Часть этой работы был представлен на 12th Australiasian конференции по муковисцидозом в Мельбурн (5-8го августа 2017).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| IVA (Cat#S114) | SelleckChem (USA). | ||
| LUMA (Cat#S1565) | SelleckChem (USA). | ||
| IVA-carboxylate (Cat# 510242247CS) | Clearsynth (Canada). | ||
| hydroxymethyl-IVA (Cat# 510240849CS) | Clearsynth (Canada). | ||
| Methanol (MeOH, LC-MS grade), | Sigma-Aldrich | ||
| acetonitrile (ACN, LC-MS grade) | Sigma-Aldrich | ||
| formic acid (FA) | Sigma-Aldrich | ||
| triple-quadrupole Shimadzu 8030 LC-MS | |||
| Phenomenex Kinetex (2.6 µm C8 100 Å; 50 × 2.1mm) | |||
| (KrudKatcher Ultrea HPLC In-Line Filter 0.5 m Depth Filter x 0.004inID). | |||
| 1.5 mL polypropylene microcentrifuge tube (VWR). | |||
| Eppendorf Centrifuge 5430 | |||
| 13-mm syringe filter (0.45 µm nylon, GRACE, USA) | |||
| [Phenomenex VEREX, 9 mm, PP, 300 µL, PTFE/Silicone septa]. |
References
- Schneider, E. K., et al. Drug-drug plasma protein binding interactions of ivacaftor. J Mol Recognit. 28 (6), 339-348 (2015).
- Solomon, M., Leatte, P. N. Treatments for Cystic fibrosis. , (2009).
- O'Sullivan, B. P., Flume, P. The clinical approach to lung disease in patients with cystic fibrosis. Semin Respir Crit Care Med. 30 (5), 505-513 (2009).
- Ramsey, B. W., et al. A CFTR potentiator in patients with cystic fibrosis and the G551D mutation. N Engl J Med. 365 (18), 1663-1672 (2011).
- Wainwright, C. E., et al. Lumacaftor-Ivacaftor in Patients with Cystic Fibrosis Homozygous for Phe508del CFTR. N Engl J Med. 373 (3), 220-231 (2015).
- Hadida, S., et al. Discovery of N-(2,4-di-tert-butyl-5-hydroxyphenyl)-4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxamide (VX-770, ivacaftor), a potent and orally bioavailable CFTR potentiator. J Med Chem. 57 (23), 9776-9795 (2014).
- FDA. FDA Advisory Commitee Briefing Material VERTEX-FDA Pulmonary-Allergy drugs advisory commitee. 98 , VERTEX Pharmaceuticals Incorporated. (2015).
- Holmes, D. False dawn for cystic fibrosis disease modifiers? Nat Rev Drug Discov. 13 (10), 713-714 (2014).
- Veit, G., et al. Some gating potentiators, including VX-770, diminish DeltaF508-CFTR functional expression. Sci Transl Med. 6 (246), 246ra297 (2014).
- Cholon, D. M., et al. Potentiator ivacaftor abrogates pharmacological correction of DeltaF508 CFTR in cystic fibrosis. Sci Transl Med. 6 (246), 246ra297 (2014).
- EMA, Assessment report ORKAMBI (ivacaftor/lumacaftor) European medicines agency. , (2015).
- VERTEX. Vertex prescribing infomation. , (2015).
- Matthes, E., et al. Low free drug concentration prevents inhibition of F508del CFTR functional expression by the potentiator VX-770 (ivacaftor). Br J Pharmacol. 173 (3), 459-470 (2016).
- Schneider, E. K., et al. Development of HPLC and LC-MS/MS methods for the analysis of ivacaftor, its major metabolites and lumacaftor in plasma and sputum of cystic fibrosis patients treated with ORKAMBI or KALYDECO. J Chrom B Analyt Technol Biomed Life Sci. 1038, 57-62 (2016).
- Su, Q., et al. An LC-MS/MS method for the quantitation of cabozantinib in rat plasma: application to a pharmacokinetic study. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 985, 119-123 (2015).
