Summary
Combinação de Ivacaftor e ivacaftor-lumacaftor são duas novas drogas CF. No entanto, ainda há uma falta de entendimento sobre sua PK/PD e farmacologia. Apresentamos uma técnica de HPLC-MS otimizada para a análise simultânea de ivacaftor e seus principais metabolitos e lumacaftor.
Abstract
Defeitos no regulador de condutância trans-membrana de fibrose cística (CFTR) são a causa da fibrose cística (CF), uma doença com manifestações pulmonares fatais. Ivacaftor (IVA) e a combinação de ivacaftor-lumacaftor (LUMA) são duas novas drogas descoberta CF que modulam diretamente a atividade e o tráfico da proteína CFTR defeituosa. No entanto, ainda há uma falta de entendimento sobre os parâmetros farmacocinéticos/farmacodinâmicos e a farmacologia do ivacaftor e lumacaftor. A técnica de HPLC-MS para a análise simultânea das concentrações de hidroximetil-ivacaftor, ivacaftor, ivacaftor-carboxilato e lumacaftor em fluidos biológicos em pacientes recebendo a combinação padrão de ivacaftor ou ivacaftor-lumacaftor terapia já havia sido desenvolvido pelo nosso grupo e parcialmente validado para padrões do FDA. No entanto, para permitir a análise da elevado-produção de um maior número de amostras de doentes, nosso grupo otimizou o método relatado com o uso de uma coluna de cromatografia de fase reversa de tamanho de poro menor (2,6 µm, C8 100 Å; 50 x 2.1 mm) e um sistema de solvente gradiente ( 0-1 min: 40% B; 1-2 min: 40-70% B; 2-2.7 min: realizada em 70% B; 2,7-2,8 min: 70-90% B; 2.8-lavagem de B 4,0 min: 90%; 4.0-4,1 min: 90-40% B; 4.1-6.0 min: realizada em 40% B) em vez de uma eluição isocrática. O objetivo deste estudo foi reduzir o tempo de análise de HPLC-MS por amostra dramaticamente de ~ 15 min para apenas 6 min, por exemplo, que é essencial para a análise de uma grande quantidade de amostras de doentes. Esse método conveniente será de considerável utilidade para estudos nas relações de exposição-resposta dessas drogas de CF de avanço.
Introduction
Fibrose cística (CF) é uma doença genética comum, que envolve as glândulas exócrinas muco do pulmão, fígado, pâncreas e intestino causando insuficiência de múltiplos órgão progressiva, como um declínio na função pulmonar e insuficiência pancreática1, 2,3. Ivacaftor (IVA) é o primeiro Food and Drug Administration (FDA-EUA) e a Agência Europeia de medicamentos (EMA) aprovou a droga de potenciador do regulador (CFTR) de condutância de trans-membrana fibrose cística, com eficácia clínica evidenciada, produzindo uma significativa melhora na função pulmonar sobre placebo em um pequeno subconjunto de pacientes com FC tendo o G551D-CFTR [glicina (G) na posição 551 é substituída pelo ácido aspártico (D)] mutação missense (~ 4-5% da população CF)4,5. Esta administrada por via oral a droga aumenta o canal CFTR, abrindo, assim, aumentar o fluxo de íons cloreto e agindo sobre o defeito primário que leva para as manifestações clínicas da CF4,6. Infelizmente, o IVA em monoterapia não é eficaz em pacientes com a mutação mais comum de F508del homozigota [na exclusão de quadro do gene CFTR que resulta na perda de fenilalanina (F) na posição 508] que resulta em misfolded CFTR, o que é visto em ~ 50% de o CF população7,8.
Recentemente, o FDA concedeu aprovação para a combinação de IVA com o corrector CFTR lumacaftor de drogas. A estratégia inteligente de combinar um corrector CFTR (lumacaftor, LUMA) que resgata F508del-CFTR à superfície da célula com um modulador (IVA), que potencializa a atividade de canais CFTR, efetivamente expande a janela de tratamento para a maioria da população CF5 . Dúvidas sobre se essas drogas vão cumprir sua promessa como um número de relatos conflitantes surgiram dúvidas sobre sua eficácia clínica9,10elenco. Além disso, melhorias na função pulmonar foram apenas modesta (2.6-4% para a combinação de ivacaftor-lumacaftor) em comparação com o sucesso alcançado com IVA monoterapia em pacientes tendo um G551D mutação (10.6-12,5%)8. Potenciais interacções medicamentosas antagônica entre IVA e LUMA que potencialmente limitam a eficácia clínica da combinação de ivacaftor-lumacaftor vem de suas propriedades farmacocinéticas ideal menos de7,11. IVA é extensivamente metabolizada pelas enzimas de citocromo P450 (CYP), principalmente para um metabólito ativo hidroximetil-IVA (IVA-M1, M1) e uma forma inactiva IVA-carboxilato (IVA-M6, M6)7,12. O indutor de CYP3A4 LUMA, por outro lado, não é extensivamente metabolizado e é largamente excretado inalterado na fezes11. Como indutores de CYP3A4 induzem o metabolismo do citocromo, concentrações de ivacaftor (substrato de CYP3A4) poderiam ser reduzidas. Além disso, tanto o IVA e LUMA são moléculas muito hidrofóbicas e são ~ 99% ligado às proteínas plasmáticas, que limita significativamente a concentração de droga livre (ativa)1,13.
Coletivamente, esses fatores podem estar chegando juntos para limitar a eficácia clínica da combinação de ivacaftor-lumacaftor. Não se sabe se as concentrações plasmáticas ideais são alcançadas sob o regime de dosagem atual para combinação de ivacaftor-lumacaftor ou se o limiar terapêutico é mantido8. Atualmente, há uma escassez de informações sobre parâmetros farmacocinéticos, como o pico e concentrações plasmáticas de estado estacionário de ivacaftor ou ivacaftor-lumacaftor. Tendo em conta o metabolismo notável de ivacaftor e lumacaftor, monitoramento das relações de exposição-resposta é indispensável para alcançar regimes de dosagem ideal para terapia de ivacaftor ou ivacaftor-lumacaftor. Nosso grupo publicou recentemente o primeiro método HPLC/LC-MS para o monitoramento das relações de exposição-resposta de IVA e LUMA14. Não há técnicas alternativas de medir as concentrações de ivacaftor, seus metabólitos e lumacaftor foram relatadas até à data. Para permitir a análise do elevado-throughput de um coletivo maior do paciente e reduzir drasticamente o tempo de análise, o nosso grupo otimizou o método relatado com o uso de uma coluna de cromatografia de fase reversa de tamanho de poros menor e um sistema de solvente gradiente que reduz custos e tempos de corrida.
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Protocol
aprovação ética foi obtida da Monash University humano pesquisa ética Comissão (MUHREC).
1. aplicação do ensaio: coleta de amostra de paciente
- registrar o tempo quando o paciente toma sua dose padrão de 150 mg ivacaftor ou /lumacaftor de 125 mg de ivacaftor 200 mg.
- Nota para baixo o tempo exato quando a amostra de sangue do paciente é recolhida.
Nota: Recomendamos que a coleta de amostras de 4-5 sobre um curso de tempo de 24 h. Se a coleta de única amostra é possível, o ponto do tempo indicado é 2.5-4 h post ivacaftor ou ivacaftor-lumacaftor combinação de dosagem como C máx concentrações no estado estacionário será realizáveis após > 5 dias de tratamento consecutivo. - Coletar 4-5 mL de sangue em tubos de azuis não tratados comercialmente disponíveis.
- Após a coleta do sangue total, permitem que o sangue a coagular, deixando-a intacta à temperatura ambiente.
Nota: Isto normalmente leva 15-30 min. - Remover o coágulo por centrifugação a 1.000-2.000 x g durante 10 minutos a 4 ° C em uma centrífuga refrigerada. Designar o sobrenadante resultante como plasma.
- Após centrifugação, imediatamente transferir o sobrenadante (plasma) em um tubo limpo polipropileno usando uma pipeta Pasteur. Rótulo o plasma do tubo com a identificação do paciente (por exemplo, 1 paciente), a droga administrada (por exemplo, combinação de ivacaftor-lumacaftor) e tempo de amostra do paciente foi coletado (por exemplo, pós-dosagem de 2,5 h).
- Amostras de manter a 2-8 ° C durante a manipulação. Uma vez que o tratamento é concluído, armazenar as amostras em – 20 ° C.
- , Se necessário, enviamos amostras com um mensageiro aprovado ao Instituto analisando.
Nota: As amostras estão a ser transferidos em gelo seco até a chegada e devem ser mantidas em – 80° C até análise.
2. Preparação e processamento de amostras efectuadas e normas
Nota: Plasma de doadores saudáveis ingênuo para terapia ivacaftor/lumacaftor foi obtido da Cruz Vermelha australiana. Para garantir a integridade, todas as amostras/padrões devem ser mantidos a 2-8 ° C durante a colheita e o processamento. Uma vez que o tratamento é concluído, armazenar as amostras em – 20 ° C.
- Pesar IVA, IVA-carboxilato, hidroximetil-IVA e LUMA, que servirá como referência para as normas internas.
- Preparar duas soluções estoque independentes de cada analito (IVA, M1, M6 e LUMA) em metanol de grau de LC-MS a 100 µ g/mL e 10 µ g/ml.
Nota: Compostos expirará após 10 dias sobre a bancada. - Recém preparar padrões de calibração de LC-MS antes de cada execução analítica por diluição dos padrões de calibração Soluções conservadas em estoque em plasma humano para atingir concentrações na sequência: 0,01, 0.025, 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.5, 5,0 e 10,0 µ g/mL. Estas amostras são referidas como padrões.
- De precipitar proteínas, preparar 0,1% de ácido fórmico (FA) em acetonitrila (ACN, grau de LC-MS) e deixar na geladeira até ser necessário.
3. Pré-tratamento de amostras efectuadas e normas
- permitir que ambas as amostras de plasma do paciente e em branco equilibrar a temperatura ambiente.
- Vortex para misturar cada amostra de plasma por 15 s por exemplo.
- Transferir uma alíquota de 100 µ l de qualquer plasma em branco para os padrões ou as amostras para análise em um tubo de polipropileno microcentrifuga 1,5 mL.
- Acrescentar a IVA de padrão interna em cada um dos tubos padrão (por exemplo, 0,01, 0.025, 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0 e 10,0 µ g/mL para cobrir o intervalo de concentração potencial), feche a tampa e vórtice para 2-3 s. nota que a norma interna é apenas adicionado ao plasma em branco e sem padrão interno é adicionado das amostras.
- Repita o passo 3.4. para os outros padrões internos, M1, M6 e LUMA.
- Spin-down cada tubo brevemente para assegurar que não há nenhum gotículas na tampa.
- Adicionar 200 µ l da mistura de 0,1% de FA na ACN em cada tubo de precipitar proteínas plasmáticas.
- Vortex a mistura vigorosamente por cerca de 15 s.
- Permitir que tubos repousar durante 10 min na geladeira.
- Centrifugar a 10.000 x g durante 10 minutos a 4 ° C, se possível.
- Filtrar num filtro de seringa de 13 mm em um frasco HPLC de 1,5 mL uma alíquota de 200 µ l do sobrenadante.
- Transferir 100 µ l do sobrenadante dentro do frasco de LC-MS para a análise de HPLC-MS.
4. Análise de HPLC-MS
Nota: HPLC-MS a análise foi realizada em um sistema de LC-MS, juntamente com o espectrômetro de massa triplo quadrupolo (tabela 1).
- Transformar o sistema de LC-MS, coloque a bandeja com as amostras no autoamostrador.
- Unir a coluna a uma coluna de guarda e se conectar ao sistema de LC-MS.
- Anexar as duas garrafas de fases móveis (frasco r: 100% do Grupo ACN; garrafa b: 0,1% de ácido fórmico na água) e equilibrar o sistema de LC-MS.
- Incorporar os seguintes parâmetros do protocolo de LC-MS.
- Dividir o fluxo de fase móvel antes de entrar o espectrômetro de massa na proporção de 2:1 (resíduos: entrada de MS).
- Realizar uma gradiente eluição com um caudal de 0,5 mL/min usando uma fase móvel composta de 100% do Grupo ACN e 0,1% ácido fórmico em água (inicio em 40: 60, v/v). Note-se que a porcentagem de volume de fase móvel muda ao longo da análise.
- Operar o espectrômetro de massa em um modo de ionização electrospray positivo.
- Certifique-se de que as configurações de LC-MS são os seguintes: tensão de pulverizador de íon 4,5 kV, energia de colisão 295.9 V, gás de nebulização: nitrogênio em 3 L/min; gás de colisão: argônio; secagem gás vazão 20 L/min, lente tensão Q3:-22 V, desolvation temperatura 250 ° C, com um bloco de calor temperatura de 400 ° C.
- Volume de injectar 10 µ l por exemplo.
- Detectar analitos usando múltiplas reação monitoramento (MRM). Monitorar as transições do íon de m/z 392.49 → 393, m/z 408.49 → 409, m/z 422.47 → 423 e m/z 452.40 → 453 para IVA, IVA-M1, IVA-M6 e LUMA, respectivamente.
Nota: O método recém otimizado ainda tem que ser totalmente validado conforme normas FDA.
5. As curvas de calibração
- as curvas de calibração de construção o LC-MS antes de cada corrida analítica, usando a relação entre as proporções de área do pico de cada uma das substâncias a quatro analisar de padrão interno e as concentrações nominais padrão de calibração de ivacaftor (M1-IVA, IVA-M6 ou LUMA) dentro do programa de configurações de LC-MS.
Nota: As etapas exatas para a construção da curva de calibração é dependente do modelo de equipamento de LC-MS sendo usado. Essas informações podem estar disponíveis no manual do equipamento. - Realizar a análise de regressão linear menos-quadrados por ponderação 1/C 2, de acordo com a recíproca das concentrações.
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Representative Results
Temos recentemente relatado um método validado parcialmente às normas da FDA, em um triplo-quadrupolo LC-MS e um sistema detector HPLC, usando uma coluna C8 (5 µm, identificação de 3,9 mm x 50 mm) com a fase móvel composta de 100% do Grupo ACN e 0,1% ácido fórmico em água (40: 60 v/v) em uma taxa de fluxo de 1 mL/min. Uma correlação linear dos picos observou-se uma faixa de concentração de 0,01 a 10 µ g/mL no plasma humano para todos os metabólitos, ivacaftor, Iva-M1, Iva-M6 e lumacaftor14. Aqui esse método foi otimizado permitir que dramaticamente reduzido LC tempos de retenção e, portanto, o tempo de execução completo do ensaio, que é essencial para a análise da elevado-produção de uma grande quantidade de amostras clínicas. O ensaio foi otimizado com o uso de uma coluna de cromatografia de fase reversa de tamanho de poros menor e um sistema gradiente de solvente em vez de uma eluição isocrática, reduzindo o tempo por exemplo de ~ 15 min para apenas 6 min. Os analitos são determinados no modo positivo de electrospray usando múltiplas reação monitoramento (MRM). O procedimento deve ser validado internamente antes da utilização, como temos anteriormente detalhados14.
A precisão do método foi de 94,2% ± 4,53% a 97,5% ± 2,94%, dependendo do analito14. Calibração de 0,01 a 10 µ g/mL é aplicável para uso na prática clínica, em especial tendo em conta que sob terapia ivacaftor-lumacaftor, concentrações muito baixas de ativo IVA e M1 foram relatadas pelo nosso grupo anteriormente, no plasma potencialmente devido a a indução da CYP3A4 por LUMA, que resulta em extenso metabolismo de IVA14. A precisão intradia de cada analito foi avaliada com seis amostras de controlo de qualidade independente preparado (QC) no mesmo dia em concentrações de 0,05, 0,5 e 8 µ g/mL. A precisão do dia Inter foi avaliada com seis amostras QC independentemente preparadas em três dias consecutivos. Exatidão e precisão foram calculadas através do desvio padrão relativo (RSD). Para cada amostra QC, os valores RSD devem ser inferior a 15%15. Todos os quatro analitos apresentaram valores RSD de menos de 15%14. Estabeleceram-se o limite de detecção (LOD) e quantificação (LOQ): por IVA LOD 2,50 x 10-3 µ g/mL e LOQ 7,57 x 10-3 µ g/mL; para M1, LOD 4,57 x 10-4 µ g/mL e LOQ 1,38 x 10-3 µ g/mL; para M6 LOD 5,86 x 10-4 µ g/mL e LOQ 1,78 x 10-3 µ g/mL; para LUMA LOD era 6,08 x 10-4 µ g/mL e LOQ 1.84 x 10-3 µ g/mL14. Um cromatograma típico é mostrado na Figura 1. Obteve-se uma resolução cromatográfica otimizada usando uma fase móvel de 100% do Grupo ACN e 0,1% ácido fórmico em água (inicio em 40: 60, v/v) com uma gradiente eluição em uma coluna C8 (2,6 µm; 100 Å; 50 x 2,1 mm). Utilizou-se a separação de gradiente com 40% de fase móvel B de 0 a 1 min; em seguida, 40% - 70% de fase móvel B de 1 min a 2 min; segurando a 70% de fase móvel B de 2 min para 2,7 min; aumento de 70% para 90% da fase móvel B de min 2,7 a 2,8 min; segurando a 90% da fase móvel B de min 2,8 a 4,0 min para a lavagem de fins; Finalmente voltando de 90% a 40% do móvel B de 4,0 min-min 4,1; em seguida, segurando 40% de fase móvel B de min 4,1 a 6,0 min para condições iniciais (Figura 1). Os tempos de retenção LC foram os seguintes para M6 1.0 min; para min 1.3 M1; para IVA: 1,55 min; para LUMA: 2,3 min (Figura 1). Em todas as amostras de plasma em branco, não observou-se nenhuma interferência com o tempo de retenção de qualquer das substâncias a analisar, nem foi detectada de interferência da combinação de ivacaftor com lumacaftor.
Figura 1 : Representante LC-MS cromatograma do plasma humano cravado com 10 µ g/mL de IVA-M6, IVA-M1, lumacaftor e ivacaftor em relação a eluição gradiente da bomba. Um ácido fórmico de 0,1% em água e bomba B 100% acetonitrila (0-1 min: 40% B; 1-02:00 %-70% B; 2-2.7 min: realizada em 70% B; 2,7-2,8 min: 70%-90% B; 3.8-4.0 min: 90% B lavagem; B 4.0-4,1 min: 90%-40%; 4.1-6.0 min: realizada em 40% B). As transições do íon de m/z 392.49 → 393, m/z 408.49 → 409, m/z 422.47 → 423 e m/z 452.40 → 453 foram usadas para MS/MS monitoramento de ivacaftor, IVA - M1, IVA-M6 e lumacaftor, respectivamente. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
| Condições HPLC | |
| Coluna | C8; 2,6 µm; 100 Å; 50 x 2.1 mm |
| Coluna de guarda | HPLC filtro em linha 0.5 µm; Filtro de profundidade x 0,004 inID |
| Filtro x 0,004 inID | |
| Temperatura da coluna: | 30 ° C |
| Fase móvel r: | 0,1% FA na água |
| Fase móvel b: | 100% ACN |
| Composição de fase móvel no ponto de partida | 60 / 40 (v/v) |
| Temperatura da amostra: | 4 ° C |
| Volume de injeção: | 5 Μ l |
| Lavagem de agulha | 80% de metanol, 300 µ l de água de 20% |
| Taxa de fluxo: | 0,5 mL/min |
| Gradiente: | 01:00 % B |
| -1-02:00 % - 70% B | |
| -2-2.7 min: realizada em 70% B | |
| -2,7 - 2,8 min: 70% - 90% B | |
| -2,8 - 4,0 min: 90% B lavagem | |
| -4.0 - 4,1 min: 90% - 40% | |
| -4.1-6,0 min: realizada em 40%, | |
| Total de executar: | 6 mins |
| Tempos de retenção: | Tempo de retenção para M6: 1,0 min |
| Tempo de retenção para M1: 1,3 min | |
| Tempo de retenção de IVA: 1,55 min | |
| Tempo de retenção para LUMA: 2,3 min | |
| Condições de MS | |
| Modo de detecção: | electrospray ESI positivo + |
| Tensão de pulverizador de iões: | 4,5 kV |
| Energia de colisão: | 295.9 V |
| Nebulização de gás (nitrogênio): | 3 L/min |
| Gás do CID: | 230 kPa |
| Fluxo de gás (nitrogênio) de secagem: | 20 L/min |
| Viés de pre-haste Q1: | - & #1 |
Tabela 1: Detalhes das condições de HPLC-MS.
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Discussion
Como relatado anteriormente, o nosso grupo tem para primeira vez desenvolvido e validado um método HPLC e LC-MS para a rápida detecção e quantificação de ivacaftor e seus principais metabolitos M1 hidroximetil-IVA (ativo) e IVA-carboxilato M6 (inativo); e lumacaftor no plasma e escarro de CF pacientes14. O ensaio relatado anteriormente pelo nosso grupo foi usado com sucesso para quantificar a concentração de LUMA, IVA, IVA-M1 e IVA-M6 no plasma e escarro de pacientes com FC submetidos à terapia padrão de estado estacionário com IVA 150 mg /q12 h (terminologia Latina: Alves 12 h; uma vez a cada 12 h) ou 200 mg /q12 h LUMA-125 mg /q12 h IVA combinação14. Para a análise da elevado-produção de grandes quantidades de amostras de doentes, otimizamos o método relatado usando uma menor coluna de cromatografia de fase reversa de tamanho dos poros C8 (2,6 µm; 100 Å; 50 x 2.1 mm2) e um sistema gradiente de solvente em vez da corrente eluição isocrática. Isso reduz o tempo de execução para 6 min por amostra.
Esse método confiável e inovador oferece uma abordagem simples, sensível e rápida para o monitoramento de drogas terapêuticas de combinação de ivacaftor e ivacaftor-lumacaftor em fluidos biológicos. Dada a necessidade de desenvolver relações de exposição-resposta para maximizar a eficácia de drogas, bem como conter os custos com saúde, ferramentas mais sensíveis precisam ser desenvolvido e validado para auxiliar os médicos no uso de terapias baseadas em evidências e elevado-throughput técnicas analíticas para pacientes que sofrem de CF. nosso grupo tem relatado anteriormente um parcialmente validado HPLC-MS para analisar simultaneamente o IVA, IVA-M1, IVA-M6 e LUMA no plasma e escarro de CF pacientes14. Estabelecer um protocolo analítico comum e fácil de usar para a análise dos pacientes que receberam a combinação de ivacaftor ou ivacaftor-lumacaftor facilitaria a comparação de dados e interpretação dos resultados dos estudos farmacocinéticos no futuros. Medir o IVA, IVA-M1, IVA-M6 e LUMA em fluidos biológicos usando técnicas de LC-MS pode encarnar uma ferramenta poderosa para explorar a relação exposição-resposta em relação aos resultados terapêuticos.
Mais geralmente, HPLC-MS análise da combinação de ivacaftor ou ivacaftor-lumacaftor em fluidos biológicos pode fornecer uma base molecular para a implementação de estratégias farmacoterapêutica individualizadas com pacientes que sofrem de CF e pode revelar-se útil em razão de fazer a terapia de combinação de ivacaftor ou ivacaftor-lumacaftor cara mais custo-eficaz, potencialmente, indicando a necessidade de dosagem menos frequente. Aplicando o método analítico proposto para estudos clínicos farmacocinéticos/farmacodinâmicos, a oportunidade surgiu para investigar os parâmetros farmacocinéticos da combinação de ivacaftor ou ivacaftor-lumacaftor um paciente maior coletivo.
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Disclosures
Os autores não têm nada para divulgar.
Acknowledgments
J. l. e T.V. são suportados pelo Instituto Nacional de alergia e doenças infecciosas (NIAID) dos institutos nacionais de saúde (R01 AI111965). O conteúdo é exclusivamente da responsabilidade dos autores e não representam necessariamente as opiniões oficiais do Instituto Nacional de alergia e doenças infecciosas ou o National Institutes of Health. MC é um pesquisador australiano NHMRC Principal. J. L. é um australiano de saúde nacional e Conselho de pesquisa médica (NHMRC) Senior Research Fellow e T.V. é um australiano NHMRC indústria carreira desenvolvimento nível 2 Research Fellow. E.K.S é um nomeado embaixador Young 2017 para ASM (sociedade americana de microbiologia) e é suportado pelo prêmio de pós-graduação australiana.
Partes deste trabalho foi apresentado no 12th Australiasian conferência sobre fibrose cística em Melbourne (5-8th de agosto de 2017).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| IVA (Cat#S114) | SelleckChem (USA). | ||
| LUMA (Cat#S1565) | SelleckChem (USA). | ||
| IVA-carboxylate (Cat# 510242247CS) | Clearsynth (Canada). | ||
| hydroxymethyl-IVA (Cat# 510240849CS) | Clearsynth (Canada). | ||
| Methanol (MeOH, LC-MS grade), | Sigma-Aldrich | ||
| acetonitrile (ACN, LC-MS grade) | Sigma-Aldrich | ||
| formic acid (FA) | Sigma-Aldrich | ||
| triple-quadrupole Shimadzu 8030 LC-MS | |||
| Phenomenex Kinetex (2.6 µm C8 100 Å; 50 × 2.1mm) | |||
| (KrudKatcher Ultrea HPLC In-Line Filter 0.5 m Depth Filter x 0.004inID). | |||
| 1.5 mL polypropylene microcentrifuge tube (VWR). | |||
| Eppendorf Centrifuge 5430 | |||
| 13-mm syringe filter (0.45 µm nylon, GRACE, USA) | |||
| [Phenomenex VEREX, 9 mm, PP, 300 µL, PTFE/Silicone septa]. |
References
- Schneider, E. K., et al. Drug-drug plasma protein binding interactions of ivacaftor. J Mol Recognit. 28 (6), 339-348 (2015).
- Solomon, M., Leatte, P. N. Treatments for Cystic fibrosis. , (2009).
- O'Sullivan, B. P., Flume, P. The clinical approach to lung disease in patients with cystic fibrosis. Semin Respir Crit Care Med. 30 (5), 505-513 (2009).
- Ramsey, B. W., et al. A CFTR potentiator in patients with cystic fibrosis and the G551D mutation. N Engl J Med. 365 (18), 1663-1672 (2011).
- Wainwright, C. E., et al. Lumacaftor-Ivacaftor in Patients with Cystic Fibrosis Homozygous for Phe508del CFTR. N Engl J Med. 373 (3), 220-231 (2015).
- Hadida, S., et al. Discovery of N-(2,4-di-tert-butyl-5-hydroxyphenyl)-4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxamide (VX-770, ivacaftor), a potent and orally bioavailable CFTR potentiator. J Med Chem. 57 (23), 9776-9795 (2014).
- FDA. FDA Advisory Commitee Briefing Material VERTEX-FDA Pulmonary-Allergy drugs advisory commitee. 98 , VERTEX Pharmaceuticals Incorporated. (2015).
- Holmes, D. False dawn for cystic fibrosis disease modifiers? Nat Rev Drug Discov. 13 (10), 713-714 (2014).
- Veit, G., et al. Some gating potentiators, including VX-770, diminish DeltaF508-CFTR functional expression. Sci Transl Med. 6 (246), 246ra297 (2014).
- Cholon, D. M., et al. Potentiator ivacaftor abrogates pharmacological correction of DeltaF508 CFTR in cystic fibrosis. Sci Transl Med. 6 (246), 246ra297 (2014).
- EMA, Assessment report ORKAMBI (ivacaftor/lumacaftor) European medicines agency. , (2015).
- VERTEX. Vertex prescribing infomation. , (2015).
- Matthes, E., et al. Low free drug concentration prevents inhibition of F508del CFTR functional expression by the potentiator VX-770 (ivacaftor). Br J Pharmacol. 173 (3), 459-470 (2016).
- Schneider, E. K., et al. Development of HPLC and LC-MS/MS methods for the analysis of ivacaftor, its major metabolites and lumacaftor in plasma and sputum of cystic fibrosis patients treated with ORKAMBI or KALYDECO. J Chrom B Analyt Technol Biomed Life Sci. 1038, 57-62 (2016).
- Su, Q., et al. An LC-MS/MS method for the quantitation of cabozantinib in rat plasma: application to a pharmacokinetic study. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 985, 119-123 (2015).
