Summary
Sure tumor mikromiljø spiller vigtige roller i tumor progression. For at vurdere virkningerne af sure ekstracellulære pH på kræft celler in vitro etableret vi enkle sure kultur systemer.
Abstract
Betingelserne for tumor mikromiljø hypoxi f.eks næringsstof sult, spiller en kritisk rolle i kræft progression og malignitet. Men rollen som sure ekstracellulære pH i tumor aggressivitet og dens underliggende mekanisme har ikke blevet grundigt undersøgt i forhold til hypoksiske eller næringsstof sult betingelser. Derudover er en veldefineret kultur metode til at efterligne den sure ekstracellulære tumor mikromiljø ikke blevet fuldt rapporteret.
Her præsenterer vi en simpel i vitro kultur metode for at opretholde sure ekstracellulære pH bruge reduceret bikarbonat og øget laktat eller HCl-koncentrationer i dyrkningsmediet. Medium pH blev opretholdt i mindst 24 timer og gradvist faldt med 72 h efter kultur af PANC-1 og AsPC-1 bugspytkirtelkræftceller. Tre særskilte sure media betingelser i denne undersøgelse meget upregulated pH-responderende gener såsom MSMO1, INSIG1og IDI1 sammenlignet med hypoxi eller næringsstof sult. Opregulering af disse gener kan bruges som markør af sure pH-værdi. Disse enkle teknikker er gavnligt at belyse underliggende mekanismer af tumor malignitet under sure tumor mikromiljø. Derfor vores ekstracellulære sure pH kultur system giver mulighed for opdagelsen af cellulære sure pH svar ikke kun i kræftceller, men også i primærelementer, såsom renal tubulær celler, i forhold til de andre sure lidelser herunder, diabetisk Ketoacidose, mælkesyre acidose, renal tubulær acidose og respiratorisk acidose.
Introduction
Tumor mikromiljø spiller vigtige roller i tumor progression og kræft celle metabolisme1,2,3. Kræftceller er ofte udsat for betingelser såsom hypoxi, næringsrige afsavn og sure ekstracellulære pH (pHe). Dog rollen som pHe i tumor progression ikke blevet afklaret så udførligt som hypoxi eller næringsstof sult. PHe i tumor væv kan blive sure, nåede ca pH 6,84,5. Sure pH-værdi udspringer af aerobe og anaerobe glycolytic udskillelse af protoner (H+) og laktat af prolifererende kræft celler5,6.
Nylige undersøgelser afslørede, at sure pHe-induceret Histon deacetylation, fedtsyre oxidation og exocytose af sure lysosomer for tilpasning til den alvorlige sure miljø7,8,9,10. Men mekanismer gennem hvilke ekstracellulære forsuring påvirker kræft adfærd og identiteten af nøglen lovgivere i sure pH tumor mikromiljø ikke har fastlagt fuldt ud. Desuden flere rapporter beskrevet forskellige sure pH medier ved hjælp af uklare koncentrationer af bikarbonat, Tris, rør og HEPES buffer eller laktat og HCl, men der er få rapporter at demonstrere stabilitet af den justerede medium eller omfattende sammenligning af flere forskellige sure dyrkningsmedier7,8,9,10
For at belyse centrale regulatorer og metaboliske ændringer i kræftceller i forbindelse med ekstracellulære forsuring, vi etableret en simpel i vitro kultur model for at bevare en sure pHe og undersøgt rollen af pHe i kræft celler11. Du bruger denne metode, vi opretholdt en sure næringssubstratet med en pHe af 6,8 ved 37 ° C under 5% CO2, ved hjælp af reducerede bikarbonat koncentrationer i dyrkningsmediet. pH 7,4 blev brugt som normalt og styre medium. Medium pH blev opretholdt i mindst 24 timer og gradvist faldt 72 h i kultur af PANC-1 og AsPC-1 bugspytkirtelkræftceller. Fordi øget glykolyse accelererer udskillelsen af protoner, men også laktat7,8,9, vi også etableret en kultur metode efterligne laktat-induceret acidose ved tilføjelse af laktat i stedet for at reducere den bikarbonat koncentration. Derudover HCl-induceret sure pHe i mediet giver os mulighed at udelukke muligheden for, at cellulære svar til sure pH næringssubstratet ikke er på grund af en nedsat koncentration af bikarbonat. Desuden kan ved hjælp af forskellige medier med en pH på 6,4 til 7.4 med forskellige bikarbonat koncentration, vi vurdere omfanget af pHe effekter på cellulære svar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. forberedelse af sure næringssubstratet
-
Forberedelse af kontrol (pH 7,4) og lav-pH (pH 6,8) næringssubstratet
- 4,75 g DMEM pulver uden L-glutamin i 500 mL vand opløses.
- Forberede 0,33 M NaHCO3 løsning i en tryktæt flaske.
OBS: Det er vigtigt at bruge en pres stramme flaske da NaHCO3 udsender CO2 gas når opvarmet og termisk nedbrydes. - Autoklave medium og løsning. Tillade disse buffere til afkøles til 25 ° C.
- Der tilsættes 5 mL af 200 mM L-glutamin, penicillin-streptomycin, 5 mL og 50 mL af føtal bovint serum til 500 mL i DMEM uden bikarbonat.
- Kontrol (pH 7,4) medium, tilføje 2,4 mL 0,33 M NaHCO3 opløsning pr. 100 mL af DMEM uden bikarbonat. For lav-pH (pH 6,8) medium, tilføje 0,6 mL 0,33 M NaHCO3 opløsning pr. 100 mL af DMEM uden bikarbonat.
- Kontrollere medium pH efter 24 timers inkubation ved 37 ° C under 5% CO2.
Bemærk: Mængden af NaHCO3 løsning skal justeres afhængigt af medium pH, hvilket kan variere afhængigt af CO2 -indholdet af inkubator og lufttryk. Ideelt, for første gang, det er bedre at måle de mellemstore pH med forskellige bikarbonat koncentration skal bestemme den passende mængde af NaHCO3 løsning til at tilføje til DMEM.- Indsamle næringssubstratet umiddelbart efter fjernelse kultur parabol fra CO2 inkubator og måle pH-værdien ved hjælp af et pH-meter. Holde den medium temperatur på 37 ° C ved hjælp af et vandbad, hvis nødvendigt. Måle den medium pH tre gange uafhængigt af hinanden.
Bemærk: NaHCO3 løsning skal opbevares ved 4 ° C og hver medier skal være frisk fremstillede. Kommercielt tilgængelige produkter, som kan anvendes i denne undersøgelse er angivet i Tabel af materialer.
- Indsamle næringssubstratet umiddelbart efter fjernelse kultur parabol fra CO2 inkubator og måle pH-værdien ved hjælp af et pH-meter. Holde den medium temperatur på 37 ° C ved hjælp af et vandbad, hvis nødvendigt. Måle den medium pH tre gange uafhængigt af hinanden.
-
Forberede laktat-induceret eller HCl-induceret sure næringssubstratet
- Tilføje 74 µL af laktat løsning eller 125 µL 1 M HCL til 100 mL af kontrol mediet (parat i trin 1.1.5).
- Kontrollere medium pH efter 24 timers inkubation ved 37 ° C under 5% CO2.
Bemærk: Mængden af laktat eller HCl løsning også skal justeres efter den medium pH, hvilket kan variere afhængigt af CO2 indhold i rugemaskinen og lufttryk. Ideelt, er det bedre at måle medium pH med seriel laktat eller HCl koncentrationer til at bestemme den passende mængde for at justere til den ønskede pH af mediet.
2. høst og behandling af celler
- Begynde at dyrke celler ved 37 ° C under 5% CO2 mindst 1 uge før du udfører eksperimenter.
Bemærk: De cellelinjer, der anvendes i denne undersøgelse er angivet i Tabel af materialer. - Passage celler, når de når frem til 70-90% confluency. Tillad ikke celler bliver sammenflydende. Ændre medium hver 2-3 dage i løbet af daglige dyrkning.
- Cellerne vaskes ved tilsætning af 5 mL PBS. Opsug PBS og tilføje fjernelse enzym som 1 mL Trypsin.
- Der inkuberes ved 37 ° C, indtil cellerne er afrundet og begynde at frigøre.
- Der tilsættes 5 mL af næringssubstratet til fritliggende cellerne og deaktivere enzym. Overføre cellesuspension til en 15 mL rør og centrifugeres i 3 min på 300 x g. aspirat supernatanten og genopslæmmes celler med næringssubstratet.
- Tælle de levedygtige celler ved hjælp af en hemocytometer og Trypan-blå.
- Frø 5,0 x 105 celler/brønd af et 10-cm parabol i 10 mL af medium. Inkuber celler i 24 timer ved 37 ° C under 5% CO2.
- Opsug næringssubstratet, cellerne vaskes med 5 mL PBS, og der tilsættes 10 mL af det sure næringssubstratet forberedt i afdeling 1. Inkuber celler i 24 timer ved 37 ° C under 5% CO2.
3. RNA isolering
- Opsug næringssubstratet og vaske cellerne med 5 mL PBS. Cellerne sprænges ved at tilføje RNA udvinding reagens (Se Tabeller af materialer).
- Skrabe parabol kort, derefter fjerne RNA udvinding reagens med en pipette og deponere RNA udvinding reagens/celle lysate ind i en 1,5 mL rør. Forlade ved stuetemperatur i 5 min.
- Tilsæt 250 µL chloroform og rystes glasset kraftigt for ca. 15 s. henstår ved stuetemperatur i 5 min, og der centrifugeres ved ≥8, 000 x g i 5 min.
- Fjern forsigtigt den vandige fase ved hjælp af en pipette. Efterlade nogle af den vandige fase. Sted i en anden 1,5 mL tube.
- Tilføje 550 µL isopropanol til den vandige fase og bland forsigtigt. Henstår ved stuetemperatur i 5 min. centrifugeres ved maksimal hastighed (≥20, 000 x g) i 20 min. ved 4 ° C.
- Hæld isopropanol og tilsæt 1 mL 75% ethanol i DEPC behandlet vand. Bland forsigtigt. Der centrifugeres ved 8.000 x g i 5 min.
- Med pipette overfoeres fra ethanol og lad pellets lufttørre.
- Tilføje ca 15-25 µL (afhængig af udbyttet) af DEPC behandlet vand til RNA pellet. Blandes grundigt.
- Måler koncentrationen af isolerede RNA ved måling af OD på 260 nm med et spektrofotometer.
4. cDNA syntese
- Kombinere følgende komponenter i en PCR reaktion tube: op til 5 µg total RNA, 1 µL Oligo dT (50 µM) eller tilfældige Primer Mix (60 µM), 1 µL 10 mM dNTP og nukleasen-gratis vand til et volumen af 14 µL.
- Bland og kortvarigt centrifugeres komponenter ved hjælp af en lille benchtop centrifuge (~ 5 s). Denaturere prøve RNA/primer for 5 min. ved 65 ° C. Spin-kort (~ 5 s) ved hjælp af en lille benchtop centrifugeres og sætte prøven straks på køl i mindst 1 minut.
- Tilføj følgende komponenter: 4 µL 5 x Reverse transkription buffer, 1 µL Reverse transkriptase (200 U/µL), 1 µL RNase Inhibitor (40 U/µL).
Bemærk: Eksempler på kommercielt tilgængelige kits er vist i Tabel af materialer - Cap tube, mix, og derefter centrifugeres kort indholdet ved hjælp af en lille benchtop centrifuge (~ 5 s). Inkuber den kombinerede reaktionsblandingen på 50-55 ° C i 10 min.
- Deaktiver reaktionen ved at inkubere ved 80 ° C i 10 min.
5. måling af syre-responderende genekspression ved hjælp af Real-time PCR
- Kombinere følgende komponenter i en 384-godt reaktion plade: 1 µL skabelon cDNA, 0,75 µL 10 X N',N'-dimethyl-N-[4-[(E)-(3-methyl-1,3-benzothiazol-2-ylidene)methyl]-1-phenylquinolin-1-ium-2-yl]-N-propylpropane-1,3-diamine, 0,3 µL 50 µM frem primer, 0,3 µL 50 µM reverse primer, 1 µL Taq-polymerase, 2,5 µL 10 x Taq-polymerase buffer, 2,5 µL 20 mM dNTP, 16.65 µL vand.
Bemærk: Eksempel på kommercielt tilgængelige kits er vist i Tabel af materialer. En liste over primere er vist i tabel 1. En 96-brønd reaktion plade kan også bruges i dette trin. Andre sonder (fx, Taqman sonde) kan også bruges. - Opsætning af eksperimentet og den følgende PCR program på en Real-time PCR System: 50 ° C i 2 min., 1 cyklus; 95 ° C i 10 min., 1 cyklus; 95 ° C til 15 s og 60 ° C i 1 minut, 40 cykler; 95 ° C i 15 s, 1 cyklus; 60 ° C i 15 s, 1 cyklus; 95 ° C i 15 s, 1 cyklus.
- Pladen anbringes i qPCR instrument. Starte programmet.
Bemærk: Opregulering af pH lydhør generne MSMO1, INSIG1og IDI1 kan måles ved protein niveauer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
For at bestemme den passende bikarbonat koncentration, vi forberedte DMEM på vifte af 0 - 8 mM NaHCO3 (endelig koncentration i dyrkningsmediet) og lykkedes at forberede kultur medier med pH spænder fra 6,4-7.4 (figur 1). Vi forberedte DMEM med 8 mM NaHCO3 (pH 7,4) som kontrol medium og 2 mM NaHCO3 (pH 6,8) som et medium med sure pH-værdi ifølge en tidligere rapport med angivelse af at den ekstracellulære pH når pH 6,8 for solide tumorer4,5. PH i det sure medium blev påført i 24 timer, og gradvist faldt til omkring 6,6 pH for 72 h under kultur PANC-1 og AsPC-1 celler (figur 2). Næste, for at bestemme mængden af laktat eller HCl forpligtet til at justere pH 6,8 kontrol mellemlang (pH 7,4), vi tilføjet forskellige mængder af laktat eller HCl til kontrol medium og målt pH i mediet, og fandt, at pH-værdien af kontrolelementet medium med en endelig koncentration n af 22,5 µM laktat og 6,25 mM HCl nåede en værdi på 6,8 (figur 3).
Effekten af ekstracellulære forsuring ved hjælp af et medium med lav pH kan evalueres let, baseret på opregulering af sure pH-responderende gener såsom MSMO1, IDI1og INSIG1. Udtryk for disse gener blev stærkt forøget under lav pH i forhold til deres udtryk under hypoxi eller næringsstof sult (figur 4). Hertil kommer, opregulering af disse gener var ikke bestemt til et medium hvor sure pH-værdi var forårsaget af nedsat bikarbonat niveauer, og de var også upregulated af et medie, hvor sure pH var forårsaget af tilsætning af laktat og/eller HCl (figur 5). Sammenligning af cellulære svar hen til medier, hvor sure pH-værdi er afledt af reduceret bikarbonat niveauer eller tilsætning af laktat eller HCl gør det muligt for os at afgøre, om cellulære svar er specifikke for visse typer af forsuring. Opregulering af sure pH ansvarlige gener såsom IDI1, MSMO1og INSIG1 under ekstracellulære lav pH forekommer også i normale celler (figur 6), så vores metode kan anvendes ikke kun tumorceller, men også normale celler. Under høj pH tilstand var udtryk niveauet af pH-ansvarlige gener ikke upregulated i PANC-1 og AsPC-1 celler (figur 7), som kan bruges som negativ kontrol.
Figur 1. Korrelation mellem NaHCO3 koncentration og medium pH. Vandrette akse viser koncentration af NaHCO3 og lodrette akse viser medium pH ved 37 ° C under 5% CO2. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2. Ændring af medium pH af lav-pH (pH 6,8) næringssubstratet under 72 h-kultur. Medium pH blev påført i 24 timer og gradvist faldt til 72 h i kultur, cellerne PANC-1 og AsPC-1. 5,0 x 105 celler var seedet til en 10-cm parabol i 10 mL af medium, inkuberes i 24 timer og ændret til lav pH næringssubstratet. Data er præsenteret som den gennemsnit ± SEM af mindst tre uafhængige forsøg. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3. Sammenhæng mellem laktat eller HCl koncentrationer og pH-værdi på mellemlang. Kontrol medium (pH 7,4) blev bufferet med forskellige koncentrationer af laktat eller HCl. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4. Transkriptionel opregulering af sure pH-responderende gener som reaktion på lavt pH. Udtrykket var MSMO1, IDI1og INSIG1 højere i PANC-1 og AsPC-1 celler i forbindelse med lav pH (pH) end under hypoxi (H) eller næringsstof sult (NS) betingelser efter 24 h. Data præsenteres som den gennemsnit ± SEM af mindst tre uafhængige forsøg. Student's t-test blev udført for de angivne sammenligninger. p < 0,005. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5. Transkriptionel opregulering af sure pH-responderende gener i svar til mælkesyre acidose og HCl-medieret acidose. Udtryk for IDI1, MSMO1og INSIG1 mRNAs i PANC-1 celler og celler, AsPC-1 var bestemt af kvantitative real-time polymerase kædereaktion analyse under kontrol (Con, pH 7,4), lav pH (pH, pH 6,8, reduceret mængden af NaHCO3 ), mælkesyre acidose (laktat, pH 6,8, øget mængden af laktat) og HCl-medieret acidose (HCl, pH 6,8, øget mængden af HCl) betingelserne for 24 h. Data præsenteres som den gennemsnit ± SEM af mindst tre uafhængige forsøg. Student's t-test blev udført for de angivne sammenligninger. p < 0,005. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 6. Transkriptionel opregulering af sure pH-responderende gener som reaktion på lavt pH i normale celler. Udtryk niveau af MSMO1, IDI1og INSIG1 var upregulated i fibroblastic KMS-6, TIG, og MRC9 celler og HUVEC endotelceller efter 24 h. Data præsenteres som den gennemsnit ± SEM af mindst tre uafhængige forsøg. Student's t-test blev udført for de angivne sammenligninger. p < 0,005. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 7. Udtryk niveau af sure pH-ansvarlige gener under høj pH (pH 7,6 til 8,0) tilstand i sammenligning under lav pH (pH 6,8). Udtryk niveauet af pH-ansvarlige gener såsom IDI1, MSMO1og INSIG1 forbliver uændret på høj pH (pH 7,6 til 8,0) betingelser i PANC-1 og AsPC-1 celler efter 24 h. Data præsenteres som den gennemsnit ± SEM af mindst tre uafhængige forsøg. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
| Primer | Videresende primer sekvens | Primer | Omvendt pimer sekvens | ||
| ACTB | 5'-AGAAGGAGATCACTGCCCTGGCACC-3' | ACTB | 5'-CCTGCTTGCTGATCCACATCTGCTG-3' | ||
| MSMO1 | 5'-ATCATGAGTTTCAGGCTCCATT-3' | MSMO1 | 5'-AAGCACGATTCCAATGAAAAAT-3' | ||
| INSIG1 | 5'-TGGCAGCTTCCCAAGTATTC-3' | INSIG1 | 5'-ACTGCGGGTTGGTAATTGAG-3 ' | ||
| IDI1 | 5'-TGGATAAAACCCCTGTGGTG-3' | IDI1 | 5'-CAACATCCGGCATAACTGTG-3' | ||
Bord 1. Liste over primere bruges i kvantitative real-time PCR analyse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Her, beskrev vi en simpel sure pH kultur system og dets evalueringsprocessen. Kombinationen af tre metoder til medium forsuring, dvs, reduceret bikarbonat koncentration, laktat tilsætning og HCl tilsætning, gjort det muligt at efterforske mekanismen, pH-svar grundigt og sammenligne den cellulære reaktion på andre tumor microenvironmental betingelser såsom hypoksi eller næringsstof sult.
Nøglen til denne metode er at fastslå de relevante koncentrationer af bikarbonat, laktat og HCl i dyrkningsmediet. Måling medium pH med forskellige bikarbonat koncentration, når du udfører denne metode for første gang er vigtig for at bestemme den passende mængde NaHCO3 i mediet. Under denne proces, er det nødvendigt at måle den medium pH efter 24 timers inkubation ved 37 ° C under 5% CO2, som medium temperatur og ligevægt status af CO2 i høj grad påvirke den medium pH. Autoklavering af bikarbonat er ofte anbefales, som bikarbonat nemt bliver flad. Celle tæthed og celle confluency er afgørende faktorer for stort antal voksende kræftceller let surt næringssubstratet selv i kontrolprøver. Derudover svar ekstracellulære sure pH-værdi afhænger af tilstanden af cellerne og kan falme som celler er passaged, så celler med mindre end 10 passager blev brugt til eksperimenter.
Vores metode er betydeligt demonstreret stabilitet af medium pH i 24 timer og sammenlignet flere sure pH medier. I denne protokol, blev medium pH på 6.8 brugt som en lav pH tilstand, men seriel sure pH-værdi mellem pH 6.4 og 6,9, ud over seriel grundlæggende pH medier mellem pH 7,4 og 8.0, blev brugt til at undersøge cellulære reaktion mod ekstracellulære forsuring.
Vi fokuseret hovedsagelig på kræftceller, men denne metode kan bruges til andre typer af celler i tumor mikromiljø, herunder stromale celler, immun celler og vaskulære endotel celler. Vi og andre rapporterede, at i det mindste nogle pH følsomme mekanismer i kræftcellerne er fælles i normale celler7. Det er også muligt at anvende denne metode til analyse af andre primærelementer samt embryonale stamceller og induceret pluripotente stamceller. En begrænsning af denne kultur system kunne være svært at opretholde den sure pH tilstand i langsigtet eksperimenter.
Acidose er forbundet med forskellige typer af sygdomme. Denne metode kan anvendes ikke kun i kræftforskning men også i at studere sure sygdomme såsom diabetisk Ketoacidose, renal tubulær acidose og respiratorisk acidose.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatteren Ayano Kondo er ansat af Carstens Hakko Kirin Co., Ltd.
Acknowledgments
Vi takke medlemmerne af Division af genom videnskab og laboratorium for Systembiologi og medicin, RCAST, The University of Tokyo. Vi især takke Dr. H. Aburatani, Dr. T. Kodama, (LSBM, RCAST, The University of Tokyo), Dr. K. Tomizuka, Dr. T. Yoshida, og Dr. A.
Kunisato (Carstens Hakko Kirin Co, Ltd) til nyttige diskussioner og støtte. Dette arbejde blev delvist støttet af licensbetaling for unge videnskabsmand (A) (26710005, T.O.), licensbetaling for videnskabelig forskning på Innovative områder (26116711 og 16 H 01567, T.O.) og licensbetaling for udfordrende
Sonderende forskning (16. K 14605, T.O.) fra ministeriet for uddannelse, kultur, sport, videnskab og teknologi i Japan, Takeda Science Foundation (T.O.), Kobayashi grundlaget for kræftforskning (T.O.) og projekt for kræftforskning, og Terapeutiske Evolution (P-skabe) og den praktiske forskning for Innovative kræft kontrol fra Japan Agency for medicinsk forskning og udvikling, AMED (T.O.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| Dulbecco's Modified Eagle Medium“Nissui” 2 | Nissui | 05919 | |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher | 10438 | |
| NaHCO3 | Wako | 191-01305 | |
| L-glutamine solution | Thermo Fisher | 25030-081 | |
| Penicillin-Streptomycin Mixed Solution(Stabilized) | Nacalai | 09367-34 | |
| 0.5g/l-Tripsin/0.53mmol/l-EDTA Solution, with Phenol Red | Nacalai | 32778-05 | |
| 0.5%-Trypan Blue Stain Solution | Nacalai | 29853-34 | |
| Lactic acid solution | Sigma-Aldrich | 252476 | |
| Hydrochloric acid solution | Sigma-Aldrich | H9892 | |
| RNeasy Plus Mini Kit | QIAGEN | 74134 | |
| SuperScript IV First-Strand Synthesis System | Thermo Fisher | 18091 | |
| Power SYBR Green PCR Master Mix | Applied Biosystems | 4368702 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell lines | |||
| PANC-1 | ATCC | CRL-1469 | |
| AsPC-1 | ATCC | CRL-1682 | |
| KMS-6 | JCRB Cell Bank | JCRB0432 | |
| TIG | JCRB Cell Bank | ||
| MRC9 | ATCC | CCL-212 | |
| HUVEC | ATCC | CRL-1730 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| NanoDrop One Microvolume UV-Vis Spectrophotometer with Wi-Fi | Thermo Fisher | ND-ONE-W | |
| QuantStudio 5 Real-Time PCR System | Thermo Fisher | CRL-1682 |
References
- Cairns, R. A., Harris, I. S., Mak, T. W.
- Chang, C. H., et al. Metabolic Competition in the Tumor Microenvironment Is a Driver of Cancer Progression. Cell. 162 (6), 1229-1241 (2015).
- Hsu, P. P., Sabatini, D. M. Cancer cell metabolism: Warburg and beyond. Cell. 134 (5), 703-707 (2008).
- Gerweck, L. E., Seetharaman, K. Cellular pH gradient in tumor versus normal tissue: potential exploitation for the treatment of cancer. Cancer research. 56 (6), 1194-1198 (1996).
- Webb, B. A., Chimenti, M., Jacobson, M. P., Barber, D. L. Dysregulated pH: a perfect storm for cancer progression. Nature Rev. Cancer. 11 (9), 671-677 (2011).
- Gatenby, R. A., Gillies, R. J. Why do cancers have high aerobic glycolysis? Nature reviews. Cancer. 4 (11), 891-899 (2004).
- McBrian, M. A., et al. Histone acetylation regulates intracellular pH. Mol Cell. 49 (2), 310-321 (2013).
- Damaghi, M., et al. Chronic acidosis in the tumour microenvironment selects for overexpression of LAMP2 in the plasma membrane. Nat Commun. 6, 8752 (2015).
- Corbet, C., et al. Acidosis Drives the Reprogramming of Fatty Acid Metabolism in Cancer Cells through Changes in Mitochondrial and Histone Acetylation. Cell Metab. 24 (2), 311-323 (2016).
- Chen, J. L., et al. The genomic analysis of lactic acidosis and acidosis response in human cancers. PLoS genetics. 4 (12), e1000293 (2008).
- Kondo, A., et al. Extracellular Acidic pH Activates the Sterol Regulatory Element-Binding Protein 2 to Promote Tumor Progression. Cell Rep. 18 (9), 2228-2242 (2017).
