Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

En kvantitativ sensoriske test paradigme at få foranstaltninger af smerte behandling i patienter, der gennemgår bryst kræft kirurgi

Published: January 18, 2018 doi: 10.3791/56918

Summary

Vedvarende postsurgical smerter kan være relateret til ændringer i smerte behandling. Ved vurdering af smerte som svar på standardiseret stimuli, kan ændringer i smerte behandling blive belyst. Vi præsenterer metoder for at opnå smertegrænser til forskellige stimuli og en foranstaltning af endogene analgesi i patienter, der gennemgår bryst kræft kirurgi.

Abstract

Kroniske smerter følgende kirurgi, vedvarende postsurgical smerter, er en vigtig meget udbredt tilstand bidrager til betydelig symptom byrde og lavere livskvalitet. Vedvarende postsurgical smerter er relativt ildfaste til behandling dermed generere et højt behov for forebyggende strategier og behandlinger. Identifikation af patienter med risiko for at udvikle vedvarende smerter er derfor et område med aktivt igangværende forskning. For nylig blev det påvist at peri-operative forstyrrelser i centrale smerter behandling muligvis kan forudsige vedvarende postsurgical smerter på lang sigt opfølgning i brystkræftpatienter. Formålet med den foreliggende betænkning er at præsentere en kort protokol for at opnå smertegrænser på forskellige stimuli på flere steder og en foranstaltning af endogene analgesi i brystkræftpatienter. Vi har brugt denne metode med held i klinisk sammenhæng og detaljeret nogle repræsentative resultater fra en klinisk undersøgelse.

Introduction

Kroniske smerter følgende kirurgi, vedvarende postsurgical smerter, er en vigtig forudsætning bidrager til betydelig symptom byrde og lavere livskvalitet1. Vedvarende post-operative smerter forbliver dårligt forstået, men er bredt anerkendt som smerten varer mere end 3 måneder efter operation2. Betingelsen er fælles, med skøn over dens udbredelse strækker sig fra 10% til 50% af alle postsurgical patienter3. Højrisiko procedurer omfatter bryst kirurgi4, torakotomi5, lemmer amputation6og Brok Reparation7. Vedvarende postsurgical smerter er relativt ildfaste til behandling og dermed har skabt interesse i potentielle forebyggende strategier og behandlinger. En bedre forståelse af forudsige og kendetegner vedvarende postoperative smerter vil hjælpe med at identificere delmængden af patienter, der er tilbøjelige til at kræve yderligere behandling for at optimere deres peri-operative smertebehandling.

For nylig blev det vist, at unormale ændringer i smertegrænser svar til kirurgi kan være prædiktiv værdi for udvikling på lang sigt vedvarende smerter i forbindelse med operation for brystkræft kræft8. Andre har understreget betydningen af konditioneret smerte graduering (CPM) effekt til at forudsige vedvarende postoperative smerter, for eksempel med hensyn til vedvarende smerter efter torakotomi5. CPM er den adfærdsmæssige korrelat af diffuse skadelige hæmmende kontrol, et fysiologisk fænomen, hvor input fra perifere c-fibre resultater i diffus hæmning fra hjernestammen af alle indkommende stimuli medieret af c-fiber fra heterotopisk felter9 . CPM-effekt måles ved at sammenligne tærskler til en skadelige stimulus, som måles før og efter anvendelsen af en anden forskellige stimulus, som er benævnt konditionering stimulus10.

Nuværende standardiseret kvantitative sensory testing (QST) protokoller, som tysk forskningsnetværk på neuropatiske smerter protokol11 er ganske omfattende og kan ikke være egnet til at udføre kirurgiske patienter. Formålet med den aktuelle publikation er at detaljer en kort og standardiseret protokol til at opnå både smertegrænser og en CPM-effektmåling i kirurgi brystkræftpatienter. Denne protokol er afledt fra en sammenlignende protokol mellem vores Universitet og Aalborg Universitet, Danmark12.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Denne protokol er blevet godkendt i forbindelse med en tidligere randomiseret kontrolleret forsøg8 af human forskning etiske udvalg region Arnhem-Nijmegen, Nederlandene (nr. 2004/239).

1. forberedelse til test

  1. Informeret samtykke:
    1. Anmeld informeret samtykkeerklæring sammen med patienten.
    2. Svar spørgsmål, patienten kan have med hensyn til undersøgelsen.
    3. Få skriftlig informeret samtykke ved at have tegnet patient formen informeret samtykke og underskrive det selv.
  2. Testmiljø:
    1. Udføre alle målinger i protokollen i en stimulus fattige og temperaturen stabil miljø (~ 21 ° C, ingen musik, ingen afdækkede vinduer, telefoner slukket).
      Bemærk: Tøj af eksperimentatoren skal være så neutral som muligt, dvs. bære en laboratoriekittel, være 'nøgne under albuer,' bære ingen smykker, og bære ingen parfume. Det er velkendt, at eksperimentatoren relaterede faktorer kan have indflydelse på resultatet af målingerne. Nogle af disse faktorer er ikke helt standardizable (f.eks. køn), men man skal holde dette i tankerne, når du forbereder udførelsen af målingerne.
    2. Under målingerne, sikre, at patienten og forskeren er de eneste mennesker i rummet, bede andre om at forlade.
    3. Vedhæft et "Forstyr ikke" tegn til dør for at undgå at blive forstyrret under målingerne.
    4. Udføre alle test med patienten i liggende stilling i seng, med undtagelse af CPM-test, som udføres med patienten siddende.
  3. Lokaliteter af test:
    1. Mark på følgende websteder for tærskel testning ved hjælp af en kirurgisk hud markør:
      området under den større tuberkelbakterier på bilaterale skuldre (C5 dermatome, pres og elektriske tærskler), den bilaterale thenar (C6, dermatome, tryk), på bilaterale iliaca kamme (L1 dermatome, pres og elektriske), bilaterale i midten af aksillær linje på brystvorten højde eller 7 cm fra de kirurgiske indsnit i tilfælde af brystkræft kirurgi (T4 dermatome, pres og elektriske tærskler).
    2. Markere CPM test websted ved hjælp af en kirurgisk hud markør: 15 cm over patella på webstedet ikke-dominerende krop (L3 dermatome, tryk).
    3. Markere en testkørsel websted ved hjælp af en kirurgisk hud markør, for eksempel, 15 cm over patella på webstedet dominerende krop.
  4. Elektrisk stimulation konfiguration:
    1. Anvende to selvklæbende hud elektroder på hver side af den afmærkede plet på hver elektrisk stimulation testsite. Placere elektroder med deres ydre diameter, så de netop rører hinanden på det markerede sted.
    2. Indstille QST stimulator til at levere tetanic stimulation (100 Hz, 0,2 ms firkantede bølger)- figur 1. Indstil ramping hastigheden til 1 mA/s. Sæt den første strøm til 0 mA, den maksimale strøm er automatisk indstillet til 50 mA af sikkerhedsgrunde.

2. elektriske smertegrænser

  1. Levering af elektricitet:
    1. Bruge QST stimulator. Tilsluttes stimulator ved hjælp af connection fører de selvklæbende elektroder.
  2. Måling af visuel analog skala (VAS):
    1. Brug skyderen VAS tilsluttet QST stimulator at opnå VAS scores. Skyderen VAS består af en kasse med en mobil håndtaget på en vandret linje, der repræsenterer VAS. Hånd skyderen til patienten.
    2. Forklare patienten, hvordan at bruge skyderen: "Styreenheden har en skyder. Denne skyderen kan flyttes til at angive, hvordan du oplever stimulus på en skala fra ingen smerter til den værst tænkelige smerte."
  3. Testkørsel:
    1. Forklar proceduren for den elektriske påvisningsgrænse (EDT) til patienten: "vi vil foretage en testkørsel til at få dig fortrolig med målingen. Stimulering vil starte, når du trykker på knappen, vil gradvist øge og stopper umiddelbart efter at give slip på knappen. Tryk på knappen når jeg fortælle dig at gøre det og lad gå når du føler dig noget."
      Bemærk: Alle instruktioner, der læses fra en manual til støtte i standardisering.
    2. Udføre en enkelt testkørsel på webstedet testkørsel til at demonstrere proceduren. Registrere resultatet på arket måling — figur 2. Sørg for at patienten ikke kan læse værdierne af målingerne under udførelsen af testene.
    3. Bede patienten om at angive, hvordan vedkommende oplevede den stimulus, ved hjælp af skyderen VAS og Bemærk resultatet.
    4. Forklar proceduren for den elektriske smertetærskel (EPT) til patienten: "vi vil gennemføre en testkørsel til at få dig fortrolig med målingen. Denne test er at bestemme din smerteopfattelse svar på elektrisk stimulation. Stimulering vil starte, når du trykker på knappen, vil gradvist øge og stopper umiddelbart efter at give slip på knappen. Tryk på knappen når jeg fortælle dig at gøre det og lad gå da stimulering bliver smertefuld."
    5. Udføre en enkelt testkørsel på den test site til at demonstrere proceduren. Post resultatet på arket måling.
    6. Bede patienten om at angive, hvordan vedkommende oplevede den stimulus, ved hjælp af skyderen VAS og Bemærk resultatet.
  4. Måling:
    1. Forklare proceduren for EDT igen til patienten, ved hjælp af ordlyden fra 2.3.1.
    2. Foranstaltning EDT på de forskellige undersøgelse sites (første C5, så T4 så L1). Udføre EDT måling tre gange på hver målestedet, tillade mindst 15 sekunder mellem målingerne at undgå afvikling virkninger.
    3. Bede patienten om at Vurder den associerede smerter på VAS efter den sidste EDT måling på hvert websted. Bemærk elektriske værdier og VAS scorer på arket måling. Sørg for at patienten ikke kan læse værdierne af målingerne under udførelsen af testene.
    4. Forklare proceduren for at bestemme EPT igen ved hjælp af ordlyden fra 2.3.4.
    5. Foranstaltning EPT på de forskellige undersøgelse sites (første C5, så T4 så L1). Udføre EPT måling tre gange på hver målestedet, tillade mindst 15 sekunder mellem målingerne at undgå afvikling virkninger.
    6. Bede patienten om at Vurder den associerede smerter på VAS efter den sidste EPT måling på hvert websted.
    7. Bemærk test elektriske værdier og VAS scorer på arket måling. Sørg for at patienten ikke kan læse værdierne af målingerne under udførelsen af testene.

3. pres smertegrænser

  1. Levering af pres:
    1. Levere pres med presset algometer med en 1,0 cm2 sonden under en vinkel på 90 °. Bruge en ramping sats på ~ 5 N/s ved at manuelt justere de anvendte tryk og pres på displayet. Starter ved 0 N og gælder indtil maksimalt 200 N af sikkerhedsgrunde.
      Bemærk: Vær omhyggelig med ikke at lade enheden udskridning på huden. For at forhindre udskridning af algometer er det vigtigt at placere sonden vinkelret på huden og støtte algometer med begge hænder samtidig langsomt øge presset. Forskeren bør stå fast til at give en kontrolleret stigning i trykket.
  2. Testkørsel:
    1. Forklar proceduren til patienten: "vi vil gennemføre en testkørsel til at få dig fortrolig med målingen. Denne måling er at bestemme din opfattelse af pres smerter i muskler. Jeg vil sætte et pres måling enhed på din muskelmasse og vil gradvist øge presset. Giv mig når følelsen af pres bliver dunkende, brændende eller smertefuld ved at sige 'nu.' "
    2. Udføre en enkelt testkørsel på test site. Sørg for at patienten ikke kan læse værdierne af målingerne under udførelsen af testene. Post resultatet på arket måling.
  3. Måling:
    1. Gentag instruktionerne for patienten ved hjælp af ordlyden fra 3.2.1.
    2. Lægge pres på de forskellige undersøgelse sites (første C5, derefter C6, derefter T4 derefter L1). Udføre pres smerte tærskel (PPT) måling to gange på hver målestedet, tillade mindst 15 sekunder mellem målingerne at undgå afvikling virkninger.
    3. Bede patienten om at Vurder den associerede smerter på VAS efter den sidste PPT måling på hvert websted.
    4. Bemærk-test pres værdier og VAS scorer på arket måling.

4. konditioneret smerte graduering paradigme

  1. Forkonditionering test stimulus
    1. Gentag 3.1.1. men bruge PPT som test stimulus. Gentag instruktionerne for patienten ved hjælp af ordlyden fra 3.2.1.
    2. Måle forudgående konditionering PPT på CPM test site (m. rectus femoris (L3) på ikke-dominerende side, 15 cm over knæskallen). Bede patienten om at vurdere de associerede smerter på skyderen VAS. Bemærk den værdi, hvor trykket bliver smertefuld og associerede smerter score.
    3. Forklar proceduren isvand til patienten: "Dette er en test for at få oplysninger om den måde, hvorpå kroppen behandler forskellige smerte signaler på samme tid. Jeg vil bede dem neddyppes din hånd ind i isvand i spanden. Placere din hånd i vandet, indtil håndleddet og fingrene spredes. Venligst holde din hånd i is-vand, indtil du kan ikke længere tolerere den."
    4. Fortæl patienten til at fjerne deres hånd fra vandet efter 3 minutter i nedsænkning eller tidligere hvis smerten bliver uudholdelig. "Hver 10 sekunder, jeg vil bede dig at sats smerte på et 0 til 10 skala, i hvilke 0 repræsenterer ingen smerter og 10 uudholdelige smerter. Når du tage din hånd ud af isvand vi vil måle pres smertetærskel på benet igen, svarende til hvordan vi gjorde det før."
  2. Konditionering stimulus:
    1. Bruge den kolde pressorstoffer opgave som conditioning stimulus. Måle vandets temperatur ved hjælp af en temperatur sonde og Bemærk temperatur (mål temperatur mellem 1 ° C og 4 ° C).
    2. Spørg patienten at fordybe dominerende hånd i is-kølet vand. Bede patienten om at Vurder smerte i hele den kolde pres opgave hver 10 sekunder på VAS og Bemærk resultatet. Bemærk den udfyldte sættetid på arket måling (maksimale varighed er 180 sekunder, i gennemsnit 56 ± 55 s8).
  3. Bestemme test stimulus efter conditioning:
    1. Foranstaltning PPT på webstedet CPM-test efter conditioning stimulus. Spørg patienten til sats den associerede smerter på VAS og Bemærk PPT og VAS-score på ark.

5. beregninger

  1. EPTs:
    1. Beregn den gennemsnitlige værdi for hver test placeringen af EDTs og EPTs.
  2. PPTs:
    1. Beregn den gennemsnitlige værdi for hver test placering af PPTs.
  3. CPM:
    1. Bestemme CPM-effekten ved at beregne den relative ændring (i %) i PPT på lokationen CPM-test før og efter konditionering stimulus10.
      CPM = ([PPTpost – PPTpre] / PPTpre) * 100
      CPM = konditioneret smerte graduering; PPT = pres smertetærskel.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

I tidligere udgivne kliniske forsøg med kvinder (N = 94) gennemgår operation for brystkræft, vi målte elektriske og pres smertegrænser samt CPM-ved hjælp af den protokol, der er beskrevet i denne rapport8. Vi udførte test paradigme før indgrebet og på forskellige tidspunkter i løbet af året efter kirurgi. Vi fandt, at kvinder, der udvikles vedvarende postsurgical smerter 12 måneder efter brystkræft kirurgi, defineret som en VAS af > 30 mm, udviser lavere tryk smertegrænser både tidligt og sent efter operationen. Figur 3 detaljer ændringer i tryk smertegrænser både begyndelsen (figur 3A) og slutningen (figur 3B) efter operationen. For nemheds skyld, er pres smertegrænser på forskellige måling sites summated og udtrykt som ændring vs baseline. Ved hjælp af logistisk regression, vi fandt, at for hver 10% lavere tærskler 5 dage efter kirurgi, patienter var 50% mere tilbøjelige til at udstille kroniske smerter på 12 måneder efter operationen (konfidensinterval 10 – 100% mere tilbøjelige, p = 0.01).

Figure 1
Figur 1: Screenshot af software interfacet og de relevante indstillinger skal bruges til elektrisk måling af QST. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2: Scoring ark. N: Newton; mA: milliAmpere; VAS: visuel analog skala; EDT: Elektriske påvisningsgrænse; EPT: Elektriske smertegrænse; CPM, konditioneret smerte graduering; PA: Pres algometry; IWB: isvand spanden test. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3 : Ændring i pres smertegrænser i året efter brystkræft kirurgi. Paneler A og B viser den gennemsnit ± SE på de tidlige og sene postoperative tidspunkter, henholdsvis. Tidspunkter er mærket i forhold til kirurgi, baseline vurdering var ~ 1 uge forud for operationen. Analyse var af blandet modeller analyse ved hjælp af faktorer 'Tid' og 'Vedvarende smerte' med Bonferroni korrigeret post hoc sammenligning af enkelte tidspunkter. * Forskellige vs patienter uden vedvarende smerter på 12 måneder efter operationen (α-niveau 0,05), specifikt: p = 0,02 på dag 5; p < 0,01 på dag 15; p < 0,01 på 30 dage; p = 0,02 på 3 måneder; p ≤0.01 på 6 måneder og; p = 0,03 på 12 måneder. Dette tal er blevet ændret fra van Helmond mfl. 8. venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Vores metode til kvantificering pres smertegrænser, elektriske smertegrænser, og CPM kan være anvendt med succes i en klinisk sammenhæng, da dens korte varighed (~ 20 minutter). Vi har tidligere vist, at pres smerte værdier opnået tidligt efter kirurgi kan være af værdi i at forudsige vedvarende smerter på lang sigt opfølgning i forbindelse med bryst kræft kirurgi8. Mens elektriske smertegrænser CPM ikke var prædiktiv for vedvarende smerter i vores undersøgelse, har andre vist, at disse foranstaltninger kan være af værdi med hensyn til andre procedurer5,13. En begrænsning ved at bruge elektriske smertegrænser er, at det kan udgøre en unaturlig stimulus. Men det faktum, at det omgår lokale graduering og at det giver meget præcis kontrol over intensitet og timing, forbedre repeterbarhed, førte os at inkludere det i den nuværende protokol14. Alternative stimulus modaliteter, såsom varme, kan potentielt bruges til at erstatte den elektriske stimulering i denne protokol.

Vi håber, at detaljer en afgrænset, men værdifulde, kvantitative sensoriske test paradigme vil føre til større anvendelse af disse foranstaltninger i forbindelse med undersøgelse af vedvarende smerter efter brystkræft. Endnu en gang perioperative kvantitative sensoriske test data bliver tilgængelige kan det være muligt at identificere delpopulationer af patienter, der er i høj risiko for at udvikle vedvarende postsurgical smerter og skræddersy periprocedural behandlinger for at minimere risikoen for i sidste ende udvikle vedvarende smerter.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ingen interessekonflikter eller finansielle interesser til at videregive.

Acknowledgments

Vi takker de patienter, der deltog i undersøgelsen præsenteret i afsnittet 'Repræsentative resultater'.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bed N/A N/A Any type of hospital bed or medical exam table
Desk N/A N/A Any type of commercially available desk
Office chair N/A N/A Any type of commercially available office chair
Force FPX 50 Pressure algometer Wagner Instruments, Greenwich, CT, USA N/A Pressure algometer with a 1.0 cm2 circular tip to deliver pressure to perform pressure pain threshold measurements
Desktop computer N/A N/A Any type of commercially available Windows computer to run QST-IV Stimulus Manager software on to control the QST-IV stimulator
QST-IV Stimulus Manager Embedded Control BV, Ruurlo, the Netherlands N/A Software to control the settings of QST-IV electrical stimulator
QST-IV Electrical Stimulator Embedded Control BV, Ruurlo, the Netherlands N/A Electrical quantitative sensory testing device with a patient operated switch. Device used to deliver electrical current to perform the electrical threshold measurements
VAS Slider Embedded Control BV, Ruurlo, the Netherlands N/A The VAS slider consists of a box with a mobile lever on a horizontal bar that represents the VAS and is connected to the QST-IV.
Kendall H34SG 50 x 45 mm Covidien, Mansfield, USA N/A Self-adhesive skin electrodes to apply to the measurement points on the skin to deliver electrical stimualtion
Crushed Ice N/A N/A Ice generated by ice machine to cool water sufficiently for the cold pressor test
Bucket N/A N/A Any type of commercially available 10 L bucket
Surgical skin marker Covidien, Mansfield, USA N/A Any type of commercially available surgical skin marker
Stopwatch N/A N/A Any type of commercially available stopwatch
Measurement form N/A N/A Score form provided in the manuscript
Pencil N/A N/A Any type of commercially available pencil
Thermometer N/A N/A Thermometer to measure water temperature of ice water
Ruler N/A N/A Any type of commercially available ruler

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Macrae, W. A. Chronic post-surgical pain: 10 years on. Br J Anaesth. 101 (1), 77-86 (2008).
  2. IASP Taxonomy Working Group. Classification of Chronic Pain. , (2011).
  3. Kehlet, H., Jensen, T. S., Woolf, C. J. Persistent postsurgical pain: risk factors and prevention. Lancet. 367 (9522), 1618-1625 (2006).
  4. Steegers, M. A., Wolters, B., Evers, A. W., Strobbe, L., Wilder-Smith, O. H. Effect of axillary lymph node dissection on prevalence and intensity of chronic and phantom pain after breast cancer surgery. J Pain. 9 (9), 813-822 (2008).
  5. Yarnitsky, D., et al. Prediction of chronic post-operative pain: pre-operative DNIC testing identifies patients at risk. Pain. 138 (1), 22-28 (2008).
  6. Hsu, E., Cohen, S. P. Postamputation pain: epidemiology, mechanisms, and treatment. J Pain Res. 6, 121-136 (2013).
  7. Franneby, U., Sandblom, G., Nordin, P., Nyren, O., Gunnarsson, U. Risk factors for long-term pain after hernia surgery. Ann Surg. 244 (2), 212-219 (2006).
  8. van Helmond, N., et al. Hyperalgesia and Persistent Pain after Breast Cancer Surgery: A Prospective Randomized Controlled Trial with Perioperative COX-2 Inhibition. PLoS One. 11 (12), e0166601 (2016).
  9. Le Bars, D. The whole body receptive field of dorsal horn multireceptive neurones. Brain Res Brain Res Rev. 40 (1-3), 29-44 (2002).
  10. Yarnitsky, D., et al. Recommendations on practice of conditioned pain modulation (CPM) testing. Eur J Pain. 19 (6), 805-806 (2015).
  11. Rolke, R., et al. Quantitative sensory testing: a comprehensive protocol for clinical trials. Eur J Pain. 10 (1), 77-88 (2006).
  12. Wilder-Smith, O. H. A Paradigm-Shift in Pain Medicine: Implementing a Systematic Approach to Altered Pain Processing in Everyday Clinical Practice. Based on Quantitative Sensory Testing. , Aalborg Univesity. (2013).
  13. Nasri-Heir, C., et al. Altered pain modulation in patients with persistent postendodontic pain. Pain. 156 (10), 2032-2041 (2015).
  14. Treede, R. D., Meyer, R. A., Raja, S. N., Campbell, J. N. Peripheral and central mechanisms of cutaneous hyperalgesia. Prog Neurobiol. 38 (4), 397-421 (1992).

Tags

Medicin sag 131 smertetærskel konditioneret smerte graduering diffuse skadelige hæmmende kontrol kvantitative sensoriske test vedvarende postsurgical smerter kroniske postsurgical smerter brystkræft kirurgi
En kvantitativ sensoriske test paradigme at få foranstaltninger af smerte behandling i patienter, der gennemgår bryst kræft kirurgi
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

van Helmond, N., Timmerman, H.,More

van Helmond, N., Timmerman, H., Olesen, S. S., Drewes, A. M., Kleinhans, J., Wilder-Smith, O. H., Vissers, K. C., Steegers, M. A. A Quantitative Sensory Testing Paradigm to Obtain Measures of Pain Processing in Patients Undergoing Breast Cancer Surgery. J. Vis. Exp. (131), e56918, doi:10.3791/56918 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter