Summary
在这里, 我们介绍了三个不同的实验来研究空气单胞菌感染的线虫。利用这些方便的方法, 很容易评估aeromonas物种之间和内部的毒性。
Abstract
人体病原体气单胞菌已被临床证明可引起肠胃炎、伤口感染、败血症和尿路感染。据报道, 大多数人类疾病与四种细菌有关:沙科氏气菌、嗜水气单胞菌、马尖气单胞菌和鱼子酱。菌型菌是一种具有良好感染模型的细菌, 为研究气单胞菌的细菌发病机制提供了良好的感染模型。在这里, 我们介绍了三个不同的实验, 以研究气单胞菌感染使用线虫模型, 包括生存, 液体毒性, 和肌肉坏死检测。三种测定气单胞菌毒力的方法的结果是一致的。在引起临床感染的4种主要aeromonas物种中,达克斯被认为是毒性最大的物种。这些方法被证明是一个方便的方法来评估气单胞菌物种之间和内部的毒性, 并有助于我们了解气单胞菌感染的发病机制。
Introduction
人体病原体气单胞菌已被临床证明会引起肠胃炎、伤口感染、败血症和尿路感染1, 2.据报告, 大多数相关的人类疾病与四种细菌有关: dhakensis 气菌、水氢气单胞菌、veronii型和caviae 气体 2,3,4 个,5.在气单胞菌传染病中, 软组织感染可导致人类严重发病率和死亡率。值得注意的是, 肌肉坏死是软组织感染最严重的形式.观察线虫感染后的生存和肌肉坏死是推测气单胞菌毒性的一种简便方法。
科学家们已经开发出许多模型生物来研究细菌感染。在以往的研究中, 小鼠、斑马鱼和线虫被用作动物模型, 研究aeromonas6、7、8的发病机制和毒力。每一种动物模型都有其优势和应用。该生物模型, 线虫, 是一种具有天然的细菌摄入的细菌线虫。线虫在进化过程中已经形成了一种复杂的抗细菌感染的先天免疫系统。在细菌感染的压力下,线虫已被证明是研究aeromonas6、7、9等病原体细菌发病机制的良好感染模型如真菌10和肠出血性大肠杆菌o157: h7 11.然而, 目前还没有一份出版物关注使用作为研究 aeromonas 毒力的模型的方法.
在这里, 我们介绍了三个不同的实验, 以研究aeromonas感染使用线虫作为动物模型: 检测生存, 液体毒性, 和肌肉坏死. 这些方法是评价气单胞菌物种之间和内部毒性的一种简便方法, 有助于提高对气单胞菌发病机制的认识。
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Protocol
1. 培养基的制备
注: 有关溶液的制备, 请参见表1。
- 制备 mL 介质12, 在500毫升去离子水中溶解 1.5克 kh 2 po 4,5.66 克na 2 hpo 4, 2.5 克氯化碳.在121°c 下的高压灭菌器 20分钟, 等到冷却到室温, 然后在首次使用前加入 0.5 ml 的 1 mgso4 。
- 制备线虫生长介质 (ngm)12, 在1升去离子水中溶解3克氯化碳、2.5 克细菌肽和20克琼脂。121°c 高压灭菌器 20分钟, 等到水浴中冷却至 55°c, 然后在水浴中加入1毫升 cacl2、1 ml 1 ml (1 ml) (1 ml) (乙醇中5% 胆固醇) 和25毫升磷酸盐缓冲液。旋转混合得好。
- 将约 5 ml ngm 倒进每个6厘米的培养皿中。避免板材表面产生气泡。在室温下留下盘子1晚, 在4°c 时保存包装。使用前恢复室温。
- 制备富 nm (engm), 在1升去离子水中溶解3克氯化钠、5克细菌肽、1克酵母提取物和30克琼脂。121°c 高压灭菌器 20分钟, 等到水浴冷却至 55°c, 并在水浴中加入1毫升 cacl2、1 ml 1 ml (1 ml) (1 ml) (乙醇中的5% 胆固醇) 和25毫升磷酸盐缓冲液。旋转混合得好。
- 将约10毫升 engm 倒进每一个9厘米的培养皿中。避免板材表面产生气泡。在室温下留下盘子1晚, 在4°c 时保存包装。使用前达到室温。
- 制备 s 介质12, 使用前将 40 ml s 基拉、0.4 ml 1 m 柠檬酸钾、0.4 ml 微量金属溶液、0.12 ml 的 1 m cacl 2、0.12ml 的 1 m mgso 4、40μl 的5% 胆固醇在乙醇中混合, 1 ml 为 8 mm fudr.
2. 线虫 6 、9、12 的同步
- 在一个15毫升的试管中, 用10毫升的无菌去离子水清洗大约 2, 000只虫子。将细菌冲洗 3倍, 将蠕虫保持在管底。
- 以 500 x 克的速度将样品离心 1分钟, 以拉下蠕虫。去除上清液, 并将蠕虫保存在 3.5 ml 去离子水中。
- 在试管中加入1毫升 naocl (10–15%) 和 0.5 ml 5 m koh。通过晃动均匀地搅拌 lt;6, 使蠕虫体裂解。
- 鸡蛋从蠕虫中释放后, 加入 1 0 毫升去离子水阻止裂解。以 1200 x 克的速度离心 1分钟, 以拉下鸡蛋, 并尽可能地去除上清液。用15毫升 mL 介质清洗至少3倍。
注: 关于 m9 介质的组成, 请参见步骤1.1。 - 将鸡蛋保存在1毫升 mL 介质中。将鸡蛋输送到3.5 厘米的盘子, 以便在20°c 下孵育一晚 (约 12-18小时)。
注: 孵育后, 卵将孵化成虫幼虫, 这被称为第一个幼虫 (l1) 阶段。 - 在 m9 培养基中输出10μl 的 l1 蠕虫。计算蠕虫数, 计算 m9 培养基中 l1 蠕虫的浓度。
- 种子最多 10, 000 培养 l1 期蠕虫与一个管道在一个9厘米 engm 板上传播与大肠杆菌op50。
- 在这一步中, 用 luria-bertani (lb) 肉汤在9厘米的 engm 板上传播0.5 毫升隔夜培养的大肠杆菌 op50. 在37°c 下将板材孵化16–18小时
注: 为避免污染, 应在层流罩中进行铺展步骤。 - 播种 l1 蠕虫前冷却至室温。在 engm 板上的种子最多 10, 000 培养 l1 期蠕虫与大肠杆菌op50。
- 在这一步中, 用 luria-bertani (lb) 肉汤在9厘米的 engm 板上传播0.5 毫升隔夜培养的大肠杆菌 op50. 在37°c 下将板材孵化16–18小时
- 在20°c 下将蠕虫培育44小时或直到它们生长到第4个幼虫 (l4 ) 阶段。
请注意:关于 engm 介质的组成, 见步骤1.3。蠕虫在 l4 阶段的身体两侧有一个半月形的白点。 - 在以下检测中使用同步的 l4 阶段蠕虫。用野生型 n2 蠕虫与大黄的虫进行存活试验, 用菌进行液体毒性试验. 使用 rw1596 蠕虫 (myo-3(st386);stEx30[myo-3: gfp: myo-3 + 6(su1006)]) 与产气体肌肉坏死试验。
3. c. 线虫与气单胞菌的生存检测 6,9
- 在 engm 上的 l1 蠕虫与大肠杆菌op50 传播的当天, 在37°c 的温度下, 分别选取四个aeromonas菌株或大肠杆菌op50 中的一个菌落和2毫升 lb 肉汤培养16小时。
请注意:为避免污染, 此步骤应在层流罩中执行。在这里, 使用了以下菌株:大肠杆菌op50, 正常的食物来源的线虫。大白菜aak1, 第一个完全测序的病原体临床a. dhakensis分离。a. phinphila a2-066、 a. veronii A2-066 和a. caviae a2-9307121 是国立成功大学医院的具有代表性的临床分离株。 - 测量细菌肉汤的od 600 吸收率, 用 lb 液将细菌肉汤调整到 od600 = 2.0。
- 发现并传播30μl 的细菌肉汤, 每个6厘米 ngm 板。在室温下隔夜给盘子培养。
请注意:有关 ngm 介质的组成, 请参见步骤1.2。 - 在 l1 蠕虫生长到 l4 阶段的那一天, 随机挑选50个蠕虫并将其转移到 ngm 板, 分别有四个aeromonas菌株或大肠杆菌op50。
- 在20°c 下培育 ngm 板, 直到检测完成。
- 将所有的活虫转移到一个新准备的带有细菌的 ngm 板, 每天数一数活的、死的和传感器蠕虫的数量, 直到最后一条蠕虫死亡。
请注意:每天将蠕虫转移到新鲜准备的 ngm 板, 以维持感染, 即使使用无菌蠕虫 (例如, glp-4, 或与 fudr)。 - 根据日数据计算绘制生存曲线。
4.用气单胞菌进行 c. 线虫液体毒性测定7
请注意:为避免污染, 应在层流罩中执行步骤。
- 在 engm 板上播种 l1 蠕虫与大肠杆菌op50 一起传播后的第二天, 在四个aeromonas菌株和大肠杆菌op50 中各选择一个菌落, 并在37°c 下分别用5毫升 lb 肉培养16小时。
注: 在该协议中, 使用了以下细菌菌株:大肠杆菌op50, 线虫的正常食物来源。大白菜aak1, 第一个完全测序的病原体临床a. dhakensis分离。a. phinphila a2-066、 a. veronii A2-066 和a. caviae a2-9307121 是国立成功大学医院的具有代表性的临床分离株。 - 测量细菌肉汤的 od 600吸收率。
- 以 3, 500 x 克离心细菌肉汤 15分钟, 取出 lb 肉汤。用 s 培养基将细菌再利用, 将细菌肉汤调整到 od600 = 3.0。在96孔板的 s 介质中加入195μl 的细菌肉汤, 以达到至少8口井。
请注意:有关 s 介质的组成, 请参见步骤1.6。 - 用 m9 培养基用大肠杆菌op5 清洗 engm 板上的 l4 蠕虫。将蜗杆溶液调整为每μl 5 蠕虫的浓度, 并在96孔板的每一口井中添加5μl 的蜗杆溶液。确保每口井大约有25个蠕虫。
- 在25°c 的转速为200转时将96孔板筛上。
- 用以下公式计算每口井的存活率: (活蠕虫/总蠕虫) x100%。
- 使用每日数据计算绘制散点图。
5.气单胞菌肌肉坏死检测6
请注意:为避免污染, 这些步骤应在层流罩中执行。
- 在 l1 蠕虫播种的那一天, engm 与大肠杆菌op50 一起传播, 选择四个aeromonas菌株和大肠杆菌op50 中的每一个菌落, 并在37°c 时分别用2毫升 lb 肉汤培养16小时。
请注意:在这里, 使用了以下菌株:大肠杆菌op50, 正常的食物来源的线虫。大白菜aak1, 第一个完全测序的病原体临床a. dhakensis分离。a. phinphila a2-066、 a. veronii A2-066 和a. caviae a2-9307121 是国立成功大学医院的具有代表性的临床分离株。 - 测量细菌肉汤的od 600 吸收率, 并用 lb 肉汤将细菌肉汤调整到 od600 = 2.0。在6厘米 ngm 板上发现并传播30μl 的细菌肉汤。在室温下隔夜给盘子培养。
- 在 l1 蠕虫生长到 l4 阶段的那一天, 将50个蠕虫转移到每个 ngm 板, 每个蠕虫具有四个aeromonas菌株或大肠杆菌op50。在20°c 下培育 ngm 板。每24小时将蠕虫转移到新制备的带有细菌的 ngm 板。
- 使用荧光显微镜拍摄肌肉图像。
- 在幻灯片上随机选择10只蠕虫到 m9 培养基中2% 琼脂糖凝胶上。在拍摄图像前, 在琼脂糖上使用 m9 培养基中的 2μl 1% 氮化钠使蠕虫瘫痪不到5分钟。
- 使用绿色荧光蛋白 (gfp) 滤镜, 用电荷耦合设备相机在荧光显微镜上放置一个盖板并捕捉肌肉图像。在 l4 阶段后24小时、48小时和72小时拍摄肌肉图像。
- 使用图像处理软件进行图像分析和图形准备。
请注意:分数和肌肉损伤水平的定义如图 3所示, 其标准如下: 3 点缺失的肌肉纤维;2分用于肌肉纤维破裂或断裂;弯曲的肌纤维 1点;健康肌肉纤维的0点。
6. 统计分析
- 独立执行所有实验至少三次。
- 用卡普兰-梅耶尔的方法来评估线虫的生存检测, 并使用对数等级测试来分析生存差异。将统计意义定为0.05。
- 利用学生的 t 检验分析了两组的线虫液体毒性检测的统计结果。使用单向方差分析测试分析一个独立变量的三个或多个值之间的差异。将统计意义定为0.05。
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Representative Results
通过遵循上述协议, 很容易区分与四种 aeromonas菌株的毒性。线虫的存活试验如图 1所示。从高到低依次显示的感染 aeromonas物种的线虫的存活率为: a. caviae、a. veronii、a. phphila和a. dhakensis. 虽然aeromonas物种之间和内部的毒性存在多样性, 但线虫的存活率平均显示,感染 a. dhakensis的蠕虫的死亡率最高。水草的毒力低于水族(p < 0.01).与金银花和水杨树相比,在线虫的存活试验中观察到了和的减毒毒力。不同气单胞菌感染的线虫存活率的多样性与气单胞菌感染的临床观察结果一致。
线虫液体毒性试验的结果如图 2所示。随着感染时间的延长,线虫感染 a. dhakensis或a.dhakensis 的蠕虫数量显著减少。感染水龙线虫的成活率低于感染水花的蠕虫。与此形成鲜明对比的是, 与达霍茨和亲水杆菌相比, 感染 a. veronii 或a. caviae 的群体在每个时间点的存活率都较高。在代表不同气溶胶物种毒性的液体毒性测定中, 线虫的存活率趋势与在存活试验中观察到的相似。
在线虫肌肉坏死的分析中, 我们首先根据相应的水平对肌肉损伤的程度进行分类, 并分配分数。分数和肌肉损伤水平的定义如图 3所示。每个肌肉损伤水平的评分标准如下: 健康肌纤维0分;弯曲的肌纤维 1点;2分用于肌肉纤维破裂或断裂;3分的肌肉纤维损失。在肌细胞感染的-- 线虫中进行的线虫肌肉坏死试验结果如图 4所示.肌肉损伤程度因 aeromonas物种而异。肌肉损伤的程度从轻微到严重不等, 具体如下: a. caviae、a. veronii、a. p水phila 和 a. dhakensis在每个时间点。与仙人掌和水轮虫相比, 感染caviae和 a . veronii的蠕虫的肌肉坏死并不明显。大多数感染caviae和a. veronii的蠕虫被记录为0点。感染了水或水族的线虫表现出严重的肌肉损伤。值得注意的是, 大多数感染了的蠕虫都表现出分级≥2分的肌肉损伤。与嗜水菌相比, 感染的线虫肌肉坏死程度更为严重, 得分≥2分的比例较高。4个 aeromonas物种的肌肉坏死的严重程度与生存和液体毒性检测结果相关。
上述方法为区分aeromonas物种之间和内部的毒力多样性提供了一种方便的方法。此外, 这是一个可靠的模型, 通过它来研究病原体和宿主之间的相互作用。
图 1:线虫的生存曲线.生存试验表明, 不同的气单胞菌种类对线虫的毒性不同 (* *: p < 0.01; *: p < 0.05)。请点击这里查看此图的较大版本.
图 2液体毒性试验中线虫的成活率.液体毒性测定显示了不同的气单胞菌种类对线虫的毒性。在 (a) 24小时、(b) 48小时和 (c) 72小时后的aeromonas感染,感染 a. dhakensis 的线虫的存活率最低。结果表明,是对的毒性最大的 aeromonas物种 (* * * *: p < 0.001; * * *: p < 0.01, 误差柱: 标准偏差, sd)。请点击这里查看此图的较大版本.
图 3:气单胞菌感染引起的线虫肌肉坏死的相应评分.肌肉坏死的标准和相应的分数如下: 3 分缺失的肌纤维;2分用于肌肉纤维破裂或断裂;弯曲的肌纤维 1点;健康肌肉纤维的0点。弯曲的肌肉纤维 (箭头)、断裂的肌肉纤维 (箭头) 和丢失的肌肉纤维 (恒星) 被表明。请点击这里查看此图的较大版本.
图 4:线虫肌肉坏死的分数.肌肉坏死的分数显示了不同的气单胞菌种类对线虫的毒性。在 (a) 24小时、(b) 48小时和 (c) 72小时后的aeromonas感染, 的肌肉损伤是最严重的感染 a. dhakensis 。请点击这里查看此图的较大版本.
| 解决 方案 | 制备 |
| 磷酸盐缓冲器 | 在1升去离子水中溶解119.35 克的 kh2po4 和21.43 克的 k2hpo4。 121°c 高压灭菌器20分钟 使用 koh 将 ph 值调整为 ph = 6.0。 等待, 直到冷却到室温 |
| s basal | 在1升去离子水中溶解 5.85 g 氯化钠、6克 kh2po 4和1克 k2 hpo 4. 在121°c 下的高压灭菌器20分钟。 等待, 直到冷却到室温。 |
| 1 m 柠檬酸钾 | 在0.2 毫升的去离子水中溶解4 克柠檬酸·h2o 和58.7 克柠檬酸三钾·h2o。 将 ph 值调整为 phct6.0。 在121°c 下的高压灭菌器20分钟。 等待, 直到冷却到室温。 |
| 痕量金属溶液 | 溶解1.86 克 edta 二钠, 0.69克feso4·7h2o, 0.2 g mncl 2·4 h2o, 0.69 克 znso 4·7 h2o, 0.025 g c水利4·5h2o在 1 l 去离子水中. 在121°c 下的高压灭菌器20分钟。 等待, 直到冷却到室温 把溶液蒙在鼓里。 |
| lb 汤 | 在1升去离子水中溶解10克氯化钠、10克色氨酸和5克酵母提取物。在121°c 下的高压灭菌器20分钟。 等待, 直到冷却到室温。 |
表 1: 解决方案准备。
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Discussion
线虫是一种天然摄入细菌作为食物的细菌的细菌线虫, 在其进化过程中对细菌产生了复杂的先天免疫力。维持和支持免疫的两个主要器官是表皮和肠道 9,13。线虫的表皮和肌肉带类似于哺乳动物和人类的软组织结构.由于这些特点,线虫可作为研究气单胞菌感染发病机制的模型生物。
在这里, 我们提出了三种方法来检测空气单胞菌感染的方法, 这代表了 4种气单胞菌之间的不同毒性, 并与临床观察7相关。这些方便的方法区分了 aeromonas 物种之间不同程度的毒性。利用这些方法, 研究人员可以研究不同的气单胞菌物种的毒力和宿主对气单胞菌感染的防御机制。
在这三种方法中,线虫不仅是食肉动物, 也是 aeromonas的猎物。如果蠕虫在测试前不处于健康状态, 宿主-病原体相互作用的结果将有所不同。因此, 在操作线虫时非常小心是很重要的。为避免在同步步骤中对卵造成过度损害, 一定要持续观察鸡蛋的释放情况。一旦鸡蛋受损,蛋的孵化数量将大幅减少。即使受损的卵孵化成功, 蠕虫也可能出现发育问题。因此, 在蠕虫接触 naocl 和 koh 后6分钟内完成步骤2.3 是至关重要的。
上述三种方法在对的气单胞菌毒性上显示了一致的结果, 包括两种不同的实验, 测量了在气单胞菌感染下的存活率, 另一种是观察肌肉的形态变化。使用不同设计的方法进行毒力测试可以提供不同的结果。例如, 科学家以前在线虫的平板和液体检测14中观察到了不同的结果.在我们的研究中, 我们还发现这两种检测9之间存在差异。外界认为, 外部环境会影响病原体的毒力, 研究人员需要找到最佳条件来探索毒力机制。从另一个角度来看, 值得研究和了解感染特定条件下的潜在机制。
在本研究中, 我们建立了一个在线虫中的感染模型, 研究了气单胞菌的毒力和感染后的相应宿主反应。这三种方法可用于研究本研究所涉及的 4个物种以外的其他 aeromonas物种。此外, 这些方法将提供一个平台, 研究引起细菌感染引起的肌肉坏死的潜在机制, 并开发潜在的疗法, 以改善严重软组织感染的临床结果。
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Disclosures
作者没有什么可透露的。
Acknowledgments
我们感谢台湾线虫核心设施的协助, 感谢国立成功大学医院微生物学和抗菌素耐药性诊断实验室提供的 aeromonas分离物。我们也感谢 caenorhabditis 遗传学中心 (cgc) 和蠕虫基地。我们也感谢萨瓦娜·摩尔编辑了手稿。
这项研究得到了台湾科技部 (最大部分 105-268-b-0017-017-my3) 和国立成功大学医院 (nckuh-10705001) 至 p. l. chen 的部分资助。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Shaker incubator | YIH DER | LM-570R | Bacteria incubation |
| K2HPO4 | J.T.Baker | MP021519455 | Culture medium preparation |
| KH2PO4 | J.T.Baker | 3246-05 | Culture medium preparation |
| Na2HPO4 | J.T.Baker | MP021914405 | Culture medium preparation |
| NaCl | SIGMA | 31434 | Culture medium preparation |
| MgSO4 | SIGMA | M7506 | Culture medium preparation |
| agar | Difco | 214530 | Culture medium preparation |
| CaCl2 | SIGMA | C1016 | Culture medium preparation |
| cholesterol | SIGMA | C8503 | Culture medium preparation |
| ethanol | SIGMA | 32205 | Culture medium preparation |
| KOH | SIGMA | P5958 | Culture medium preparation |
| 6 cm Petri plate | ALPHA PLUS | 46 | agar plate preparation |
| 96-well plate | FALCON | 353072 | liquid assay |
| bacterial peptone | Affymetrix/USB | AAJ20048P2 | Culture medium preparation |
| yeast extract | SIGMA | 92144 | Culture medium preparation |
| citric acid•H2O | SIGMA | C1909 | Culture medium preparation |
| tri-potassium citrate•H2O | SIGMA | 104956 | Culture medium preparation |
| FudR | SIGMA | 1271008 | Culture medium preparation |
| disodium EDTA | SIGMA | E1644 | Culture medium preparation |
| FeSO4•7 H2O | SIGMA | 215422 | Culture medium preparation |
| MnCl2•4 H2O | SIGMA | 221279 | Culture medium preparation |
| ZnSO4•7 H2O | SIGMA | 204986 | Culture medium preparation |
| CuSO4•5 H2O | SIGMA | C8027 | Culture medium preparation |
| tryptone | SIGMA | 16922 | Culture medium preparation |
| Microscope system | Nikon | Eclipase Ti inverted | microscope imaging |
| Scientific CCD Camera | QImaging | Retiga-2000R Fast 1394 | microscope imaging |
References
- Parker, J. L., Shaw, J. G. Aeromonas spp. clinical microbiology and disease. Journal of Infection. 62 (2), 109-118 (2011).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Skin and soft-tissue infections caused by Aeromonas species. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 32 (4), 543-547 (2013).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Biliary tract infections caused by Aeromonas species. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 32 (2), 245-251 (2013).
- Chuang, H. C., et al. Different clinical characteristics among Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii biovar sobria and Aeromonas caviae monomicrobial bacteremia. Journal of Korean Medical Science. 26 (11), 1415-1420 (2011).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Gau, S. J., Hsueh, P. R. Skin and soft tissue infection caused by Aeromonas species in cancer patients. Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 46 (2), 144-146 (2013).
- Chen, P. L., et al. A Disease Model of Muscle necrosis caused by Aeromonas dhakensis infection in Caenorhabditis elegans. Frontiers in Microbiology. 7, 2058 (2016).
- Chen, P. L., et al. Virulence diversity among bacteremic Aeromonas isolates: ex vivo, animal, and clinical evidences. PLoS One. 9 (11), 111213 (2014).
- Saraceni, P. R., Romero, A., Figueras, A., Novoa, B. Establishment of infection models in zebrafish larvae (Danio rerio) to study the pathogenesis of Aeromonas hydrophila. Frontiers in Microbiology. 7, 1219 (2016).
- Chen, Y. W., Ko, W. C., Chen, C. S., Chen, P. L. RIOK-1 Is a Suppressor of the p38 MAPK Innate Immune Pathway in Caenorhabditis elegans. Frontiers in Immunology. 9, 774 (2018).
- Powell, J. R., Ausubel, F. M. Models of Caenorhabditis elegans infection by bacterial and fungal pathogens. Methods in Molecular Biology. 415, 403-427 (2008).
- Chou, T. C., et al. Enterohaemorrhagic Escherichia coli O157:H7 Shiga-like toxin 1 is required for full pathogenicity and activation of the p38 mitogen-activated protein kinase pathway in Caenorhabditis elegans. Cellular Microbiology. 15 (1), 82-97 (2013).
- Stiernagle, T.
- Engelmann, I., Pujol, N.
- Feinbaum, R. L., et al. Genome-wide identification of Pseudomonas aeruginosa virulence-related genes using a Caenorhabditis elegans infection model. PLoS Pathogens. 8 (7), 1002813 (2012).
