Summary
Здесь мы представляем три различных экспериментов для изучения Aeromonas инфекции в C. elegans. Используя эти удобные методы, это легко для оценки токсичности между и внутри Aeromonas видов.
Abstract
Человеческий патоген Aeromonas было клинически показано, чтобы причинить гастроэнтерита, раневые инфекции, сепсис и мочевыводящих путей. Большинство человеческих заболеваний, как сообщается, быть связаны с четырьмя видами бактерий: Aeromonas dhakensis, аэромонадами hydrophila, Aeromonas veroniiи Aeromonas caviae. Модельный организм Caenorhabditis elegans является bacterivore, который обеспечивает отличную инфекции модель изучить бактериальных патогенеза Aeromonas. Здесь мы представляем три различных экспериментов для изучения Aeromonas инфекции с использованием модели C. elegans , включая выживание, жидкие токсичности и анализов некроз мышц. Результаты трех методов определения вирулентности Aeromonas согласуются. A. dhakensis , было показано, что наиболее токсичных среди 4 основных вида Aeromonas , вызывая клинической инфекции. Эти методы представлены быть удобным способом для оценки токсичности между и внутри Aeromonas видов и способствовать нашему пониманию патогенеза Aeromonas инфекции.
Introduction
Клинически доказано человеческий патоген, Aeromonas, причинить гастроэнтерита, раневые инфекции, сепсис и мочевых инфекций1,2. Ассоциироваться с четырех бактериальных видов были зарегистрированы наиболее ассоциированных заболеваний человека: Aeromonas dhakensis, аэромонадами hydrophila, Aeromonas veroniiи Aeromonas caviae 2,3 , 4 , 5. среди Aeromonas инфекционные заболевания, инфекции мягких тканей может привести к тяжелой заболеваемости и смертности в организме человека. Следует отметить некроз мышц является наиболее тяжелой формой инфекции мягких тканей6. Наблюдение за выживание и некроз мышц Caenorhabditis elegans после инфекции является удобным способом спекулировать на токсичность Aeromonas.
Ученые уже разработали многочисленные модели организмов для изучения бактериальных инфекций. В предыдущих исследованиях мышей, zebrafishes и нематод использовались как животных моделей для изучения патогенеза и вирулентности Aeromonas6,,78. Каждое животное модель имеет свой ' преимущества и приложений. Модельный организм, Caenorhabditis elegans, представляет нематода bacterivorous какие потребления бактерий как foodnaturally. C. elegansразработал сложный врожденной иммунной системы против бактериальной инфекции в течение его эволюции. Под напряжение, бактериальной инфекции C. elegans было доказано быть отличным инфекции модель для изучения бактериальных патогенеза Aeromonas6,7,9 и другие патогены как гриб10 и инфекции, вызванной энтерогеморрагической кишечной палочки O157: H711. Однако есть еще не публикации, которая фокусируется на методологии использования C. elegans в качестве модели для изучения вирулентности Aeromonas.
Здесь, мы представляем три различных экспериментов для изучения Aeromonas инфекции с помощью C. elegans как животной модели: анализы для выживания, жидкие токсичности и некроз мышц. Эти методы являются удобным способом для оценки токсичности между и внутри Aeromonas видов и улучшения понимания патогенеза Aeromonas.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Подготовка питательной среды
Примечание: См. таблицу 1 для приготовления раствора.
- Подготовить M9 средних12, растворяют 1,5 г х2PO4, 5,66 g Na2HPO4и 2,5 г NaCl в 500 мл деионизованной воды. Автоклавированием при температуре 121 ° C в течение 20 минут ждать, пока остынет до комнатной температуры, а затем добавить 0,5 мл 1 М MgSO4 перед первым использованием.
- Чтобы подготовить нематоды роста среднего (НГМ)12, Растворите 3 g NaCl, бактериальных Пептон 2.5 g и 20 g агар в 1 Л деионизированной воды. Автоклавированием при температуре 121 ° C в течение 20 минут ждать, пока остынет до 55 ° C на водяной бане, а затем добавить 1 мл CaCl 1 M2, 1 мл 1 М MgSO4, 1 мл 5% холестерина в этаноле и 25 мл фосфатного буфера. Вихрем перемешать.
- Наливайте около 5 мл NGM в каждый 6 см Петри. Избегайте пузырь производства на поверхности пластины. Оставьте пластины при комнатной температуре на 1 ночь и пакет для сохранения при 4 ° C. Вернуть к комнатной температуре перед использованием.
- Чтобы подготовить обогащенного NGM (ENGM), растворяют 3 g NaCl, 5 g бактериальных Пептон, экстракт дрожжей 1 g и 30 g агар в 1 Л деионизированной воды. Автоклавированием при температуре 121 ° C в течение 20 минут подождать, пока остынет до 55 ° C в ванне с водой и добавить 1 мл CaCl 1 M2, 1 мл 1 М MgSO4, 1 мл 5% холестерина в этаноле и 25 мл фосфатного буфера. Вихрем перемешать.
- Наливайте около 10 мл ENGM в каждом 9 см Петри. Избегайте пузырь производства на поверхности пластины. Оставьте пластины при комнатной температуре на 1 ночь и пакет для сохранения при 4 ° C. Привести к комнатной температуре перед использованием.
- Подготовить S средних12, смешать цитрат калия 40 мл S базальной, 0,4 мл 1 M, решение, 0,12 мл CaCl 1 М2, 0,12 мл 1 М MgSO4, 40 мкл 5% холестерина в этаноле и 1 мл 8 мм FudR перед использованием металлов 0,4 мл трассировки.
2. Синхронизация C. elegans6,9,12
- Мыть около 2000 червей в стадии беременных Взрослый с 10 мл стерильной обессоленной воды в 15 мл. Промойте бактерий 3 x, держим червей в нижней части трубки.
- Центрифуга для образца за 1 мин на 500 x g тянуть вниз червей. Удалить супернатант и держать червей в 3,5 мл деионизированной воды.
- Добавьте 1 mL NaOCl (10 – 15%) и 0,5 мл 5 M Кох в трубу. Смесь равномерно встряхнув для < 6 мин лизируют тела червя.
- После того, как яйца освобождаются от червей, добавьте 10 мл деионизированной воды, чтобы остановить lysis. Центрифуги для 1 мин на 1200 x g тянуть вниз яйца и удалить супернатант насколько это возможно. Промойте средних по крайней мере 3 x 15 мл M9.
Примечание: Смотрите шаг 1.1 для состава среднего M9. - Храните яйца в 1 мл M9 среде. Транспортировать яйца в 3,5 см блюдо для инкубации при 20 ° C на одну ночь (примерно 12-18 ч).
Примечание: После инкубации яиц вылупятся червь личинки, который называется первой стадии личинки (L1). - Пипетка из 10 мкл L1 червей в среде M9. Подсчитать количество червя и рассчитать концентрацию L1 червей в среде M9.
- Семя более 10000 инкубировали L1 стадии червей с пипетки на 9 см ENGM плиты с ОР50 кишечная палочка .
- В этом шаге распространение 0,5 мл на ночь культивированный E. coli ОР50 отваром Бертани Лурия (LB) на пластину ENGM 9 см. Инкубировать пластины при 37 ° C для 16-18 ч
Примечание: Чтобы избежать загрязнения, распространяя шаг должен выполняться в Ламинарный шкаф. - Охладите до комнатной температуры перед посевом L1 червей. Семя более 10000 инкубировали L1 стадии червей на ENGM табличке с E. coli ОР50.
- В этом шаге распространение 0,5 мл на ночь культивированный E. coli ОР50 отваром Бертани Лурия (LB) на пластину ENGM 9 см. Инкубировать пластины при 37 ° C для 16-18 ч
- Инкубируйте червей при 20 ° C для 44 h, или до тех пор, пока они растут на стадии личинки (L4) 4тыс .
Примечание: Смотрите Шаг 1.3 для состава ENGM среды. Червь имеет белая точка в форме полумесяца на середине тела стороне на стадии L4. - Используйте синхронизированные L4, этап червей в следующем анализов. Использование дикого типа N2 червей в C. elegans assay выживаемости с Aeromonas dhakensis и пробирной жидкости токсичности C. elegans с Aeromonas dhakensis. Использование RW1596 червей (myo-3(st386); stEx30 [myo-3p::GFP::myo-3 + rol-6(su1006)]) в C. elegans assay некроз мышц с Aeromonas dhakensis.
3. C. elegans Assay выживаемости с Aeromonas6,9
- В день посева L1 червей на распространение с E. coli ОР50 ENGM выберите один колонии каждого из четырех Aeromonas штаммов или E. coli ОР50 и культуры с 2 мл LB отвара соответственно при 37 ° C для 16 h.
Примечание: Чтобы избежать заражения, этот шаг должен выполняться в Ламинарный шкаф. Здесь были использованы следующие штаммы бактерий: E. coli ОР50, нормальное питание источник C. elegans. A. dhakensis AAK1, первый полностью виртуализированных патогенных клинических A. dhakensis изолировать. A. hydrophila A2-066, A. veronii A2-007 и A. caviae А2-9307121 являются репрезентивно клинических изолятов от национального Ченг Кунг университетской больницы. - Измерение поглощения600 ОД бактериальных бульона и корректировать бактериальных бульон ОД600 = 2.0 с LB отвара.
- Месте и распространение 30 мкл бактериальных бульон каждая пластина NGM 6 см. На ночь культуры пластин при комнатной температуре.
Примечание: Смотрите Шаг 1.2 состав NGM среднего. - На следующий день L1 червей расти на сцену L4 случайным образом выбрать и передачи 50 червей NGM пластины с каждым из четырех Aeromonas штаммов или кишечной палочки ОР50.
- Инкубируйте NGM пластины при 20 ° C до завершения анализа.
- Передать все живые черви свежеподготовленные NGM пластины с бактериями и подсчитать количество живой, мертвой, а датчик глистов каждый день до тех пор, пока последний червь мертв.
Примечание: Передать червей свежий подготовленный NGM пластины каждый день для поддержания инфекции, даже если с помощью стерильных червей (напримерglp-4, или с FudR). - Участок на основе ежедневных данных расчет кривых выживания.
4. C. elegans жидкого токсичности Assay с Aeromonas7
Примечание: Чтобы избежать заражения, шаги должны выполняться в Ламинарный шкаф.
- На следующий день после посева L1 червей на ENGM табличке с E. coli ОР50, выбрать один колонии каждого из четырех Aeromonas штаммы E. coli ОР50 и культуры с 5 мл LB отвара при 37 ° C для 16 h.
Примечание: В протоколе, были использованы следующие штаммы бактерий: E. coli ОР50, нормальное питание источник C. elegans. A. dhakensis AAK1, первый полностью виртуализированных патогенных клинических A. dhakensis изолировать. A. hydrophila A2-066, A. veronii A2-007 и A. caviae А2-9307121 являются репрезентивно клинических изолятов от национального Ченг Кунг университетской больницы. - Измерьте absorbance600 ОД бактерии бульона.
- Центрифуга бактериальных бульон на 3500 x g на 15 минут, чтобы удалить LB отвара. Ресуспензируйте бактерии и отрегулировать бактериальных бульон ОД600 = 3.0 с S среднего. Мкл 195 бактериальной бульон в среде S для по крайней мере 8 скважин 96-луночных плиты.
Примечание: Смотрите Шаг 1.6 для состава S среды. - Смывают червей L4 на ENGM табличке с E. coli ОП5 с помощью M9 среднего. Отрегулируйте червь решение к концентрации 5 червей за мкл и добавить 5 мкл раствора червя в каждой скважине 96-луночных пластины. Убедитесь, что существует примерно 25 червей за хорошо.
- Инкубировать 96-луночных пластины на шейкер на 200 об/мин при 25 ° C.
- Подсчитать количество живой червей и мертвых червей после 24, 48 и 72 ч. рассчитать выживаемость каждой скважины с использованием следующей формулы: (Черви живут черви/общее) × 100%.
- Нарисуйте точечная диаграмма с ежедневных расчетов данных.
5. C. elegans Assay некроз мышц с Aeromonas6
Примечание: Чтобы избежать заражения, эти шаги должны выполняться в Ламинарный шкаф.
- В день L1 черви являются семенами на распространение с E. coli ОР50 ENGM, выбрать один колонии каждого из четырех Aeromonas штаммы E. coli ОР50 и культуры с 2 мл LB отвара при 37 ° C для 16 h.
Примечание: Здесь были использованы следующие штаммы бактерий: E. coli ОР50, нормальное питание источник C. elegans. A. dhakensis AAK1, первый полностью виртуализированных патогенных клинических A. dhakensis изолировать. A. hydrophila A2-066, A. veronii A2-007 и A. caviae А2-9307121 являются репрезентивно клинических изолятов от национального Ченг Кунг университетской больницы. - Измерить ОД600 поглощения бактерий бульона и отрегулировать бактерии бульон ОД600 = 2.0 с LB отвара. Месте и распространение 30 мкл бактериальной бульон на 6 см NGM пластины. На ночь культуры пластин при комнатной температуре.
- В день L1 червей расти на сцену L4, передачи 50 червей для каждой NGM пластины с каждым из четырех Aeromonas штаммов или кишечной палочки ОР50. Инкубировать NGM пластины при 20 ° C. Передача червей каждые 24 ч для недавно подготовленных NGM пластины с бактериями.
- Возьмите мышцы изображения с помощью микроскопа флуоресценции.
- Случайным образом выберите 10 червей на 2% гель агарозы в среде M9 на слайде. Парализовать червей, используя 2 мкл азид натрия 1% в среде M9 на агарозе менее чем 5 минут прежде чем принимать фотографии.
- Поместите крышку выскальзования и захвата изображения мышц, используя Зеленый флуоресцентный белок (ГПУП) фильтр на флуоресцентный микроскоп с зарядовой камеры. Захвата изображения мышц на 24, 48 и 72 ч после этапа L4.
- Проведите анализ и фигура Подготовка образа с обработки изображений программное обеспечение.
Примечание: Определения баллы и уровни повреждения мышц показаны на рисунке 3, для которой критерии перечислены следующим: 3 очка за отсутствующих мышечных волокон; 2 балла за разрыв или сломанные мышечных волокон; 1 очко для изогнутых мышечных волокон; 0 очков для здорового мышечных волокон.
6. Статистический анализ
- Выполните все эксперименты как минимум три раза независимо.
- Используйте метод Каплана-Мейера для оценки нематоды Caenorhabditis elegans выживания анализов и лог ранг тест в анализе различия на выживание. Установить статистической значимости 0,05.
- Используйте t критерия Стьюдента для анализа статистические результаты анализов жидких токсичности C. elegans для двух разных групп. Используйте одностороннюю теста ANOVA, анализируя различия между тремя или более значениями для одной независимой переменной. Установить статистической значимости 0,05.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Следуя протоколы, описанные выше, это легко различать токсичность из четырех Aeromonas штаммов. Выживание пробирного C. elegans показан на рисунке 1. C. elegans инфицированных Aeromonas видов, в порядке от высокой к низкой выживаемости были: A. caviae, A. veronii, A. hydrophila и A. dhakensis. Хотя есть разнообразие с точки зрения токсичности между и внутри Aeromonas видов, выживаемость C. elegans, в среднем, показали высокой смертности среди червей, инфицированных с A. dhakensis. Вирулентность A. hydrophila , A. dhakensis (p < 0.01) уступала. В отличие от а. dhakensis и A. hydrophila,ослабленных virulences а. veronii и A. caviae были замечены в C. elegans assay выживаемости. Разнообразие выживаемости C. elegans инфицированных различными видами Aeromonas согласуется с клинических наблюдений Aeromonas инфекции7.
На рисунке 2показаны результаты пробу жидкого токсичности C. elegans . С время инфекции количество червей, которые пережили значительно сократилось, когда C. elegans был заражен с а. dhakensis и A. hydrophila. Выживаемость червей, инфицированных с A. dhakensis уступала инфицированных с A. hydrophila. В отличие от группы, инфицированных с а. veronii и A. caviae имели более высокие показатели выживания в каждый момент времени по сравнению с а. dhakensis и A. hydrophila. Тенденции выживаемости C. elegans в Пробирной жидкости токсичности, представляющие вирулентности различных видов Aeromonas схожи с теми, которые наблюдались в assay выживаемости.
В C. elegans assay некроз мышц мы впервые классифицированы уровень повреждения мышц и назначен баллы в зависимости от соответствующего уровня. Определения уровней повреждения мышц и оценка приводятся на рисунке 3. Скоринг критерии для каждого уровня повреждения мышц является следующим: 0 очков для здорового мышечных волокон; 1 очко для изогнутых мышечных волокон; 2 балла за разрыв или сломанные мышечных волокон; 3 очка за потери мышечных волокон. Результаты некроз мышц C. elegans пробирного в Aeromonas инфицированных -C. elegans показан на рисунке 4. Степень повреждения мышц различаются Aeromonas видов. Уровни мышц ущерб колебалась в порядке от легкой до тяжелой следующим: A. caviae, A. veronii, A. hydrophila и а. dhakensis в каждый момент времени. В отличие от а. hydrophila и A. dhakensisнекроз мышц не было очевидно в глистах, инфицированных с а. caviae и A. veronii. Большинство червей, инфицированных с а. caviae и A. veronii были записаны как 0 очков. C. elegans инфицированных с а. hydrophila и A. dhakensis выставлены тяжелых мышечных повреждений. Следует отметить большинство червей, инфицированных с A. dhakensis продемонстрировал мышечных повреждений градуированные ≥2 точек. Степень некроз мышц C. elegans инфицированных с а. dhakensis была более тяжелых с точки зрения более высокий процент ноты ≥ 2 балла, по сравнению с A. hydrophila. Тяжесть некроз мышц в 4 видов Aeromonas коррелирует с результатами анализов токсичности выживания и жидкости.
Описанные выше методы предлагают удобный способ дифференцировать вирулентности разнообразия среди и внутри Aeromonas видов. Кроме того это надежные модели для изучения взаимодействия между возбудителя и хост.
Рисунок 1 : Кривых выживания C. elegans. Assay выживаемости показывает различные токсичность различных видов Aeromonas C. elegans (**: P < 0.01; *: P < 0,05). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2 : Выживаемость C. elegans от Пробирной жидкости токсичности. Пробу жидкого токсичности показывает различные токсичность различных видов Aeromonas C. elegans. На (A) 24 ч (B) 48 h и (C) 72 h пост Aeromonas инфекции, C. elegans инфицированных с а. dhakensis имеет самый низкий показатель выживания. Результат показывает, что A. dhakensis является наиболее токсичных видов Aeromonas в C. elegans (***: P < 0,001; **: P < 0.01, погрешностей: стандартное отклонение, SD). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3 : Соответствующие ноты для некроз мышц в C. elegans индуцированных Aeromonas инфекции. Критерии для мышечной некроза и соответствующие результаты таковы: 3 очка за отсутствующих мышечных волокон; 2 балла за разрыв или сломанные мышечных волокон; 1 очко для изогнутых мышечных волокон; 0 очков для здорового мышечных волокон. Указаны Бент мышечных волокон (стрелки), разрыву мышечных волокон (стрелок) и отсутствует мышечных волокон (звезда). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4 : Баллы некроз мышц C. elegans . Результаты некроз мышц показывают различные токсичность различных видов Aeromonas C. elegans. На (A) 24 ч, (B) 48 h и (C) 72 h пост Aeromonas инфекции, повреждения мышц C. elegans является сильная от инфекции с а. dhakensis. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
| Решение | Подготовка |
| Фосфатного буфера | Растворяют 119.35 г KH2PO4 и 21.43 г K2HPO4, в 1 Л деионизированной воды. Автоклаве при температуре 121 ° C 20 мин Отрегулируйте значение рН рН = 6.0 с Кох. Подождать, пока остынет до комнатной температуры |
| S базальная | Растворите 5.85 г NaCl, 6 g KH2PO4и 1 g K2HPO4 в 1 Л деионизированной воды. Обработайте автоклавированием при температуре 121 ° C в течение 20 мин. Подождите, пока остынет до комнатной температуры. |
| Цитрат калия 1 М | Растворите 4 g лимонной acid•H2O и 58.7 g tri калия citrate•H2O в 0,2 мл деионизованной воды. Отрегулируйте значение рН рН = 6.0. Обработайте автоклавированием при температуре 121 ° C в течение 20 мин. Подождите, пока остынет до комнатной температуры. |
| Решение металлов трассировки | Распустить 1,86 г динатриевой ЭДТА, 0,69 г FeSO4•7 H2O, 0,2 г НКД2• 4 H2O, 0,29 г ZnSO4•7 H2O, 0,025 г CuSO4•5 H2O в 1 Л деионизированной воды. Обработайте автоклавированием при температуре 121 ° C в течение 20 мин. Подождать, пока остынет до комнатной температуры Держите решение в темноте. |
| LB отвара | Растворите в 10 г NaCl, Триптон 10 g и 5 g дрожжевой экстракт в 1 Л деионизированной воды. Обработайте автоклавированием при температуре 121 ° C в течение 20 мин. Подождите, пока остынет до комнатной температуры. |
Таблица 1: Приготовления раствора.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
C. elegans является bacterivorous нематод, что естественно воздухозаборники бактерий как еда и разработал сложный врожденный иммунитет к бактерии в ходе эволюционного процесса. Два главных органов, техническое обслуживание и поддержание иммунитета являются эпидермиса и кишки9,13. Эпидермис и полосы мышц C. elegans напоминают мягких структур в6млекопитающих и человека. Из-за этих характеристик C. elegans применяется в качестве модельного организма для изучения патогенеза Aeromonas инфекции.
Здесь мы представляем три метода для изучения Aeromonas инфекции в C. elegans , которые представитель различных токсичности среди 4 Aeromonas видов и соотносятся с клинического наблюдения7. Эти удобные способы отличить различные степени токсичности среди Aeromonas видов. С помощью этих методов, исследователи могут изучить вирулентности различных видов Aeromonas и механизму защиты хостов на Aeromonas инфекции.
В этих трех методов C. elegans выступает не только как хищник, но и как добычу Aeromonas. Если черви находятся не в здоровом состоянии перед испытанием, результаты взаимодействия хост возбудитель будет отличаться. Таким образом важно быть очень осторожным, когда манипулирования C. elegans. Чтобы избежать чрезмерного повреждения яйца C. elegans в синхронизации шаг, обязательно соблюдать выпуска яиц непрерывно. После того, как яйца повреждены, штриховкой количество яиц, C. elegans во многом будет уменьшаться. Даже если поврежденные яйца люк успешно, черви, вероятно иметь проблемы развития. Таким образом критически важно для завершения шага 2.3 в течение 6 мин после того, как черви подвергаются NaOCl и Кох.
Трех методов, описанных выше Показать сплоченной результаты на токсичность Aeromonas в C. elegans, включая два различных экспериментов, измерения выживаемости C. elegans под Aeromonas инфекции и один наблюдая за морфологические изменения мышц. Вирулентность тест, с использованием различных разработанных методов могут предоставлять различные результаты. Например ранее ученые наблюдали различные результаты в C. elegans пластины и жидкости assays14. В нашем исследовании мы также нашли было расхождения, существующие между этими двумя анализов9. Считается, что внешние условия будут влиять вирулентности возбудителя, и исследователи должны найти оптимальные условия для изучения механизма вирулентности. С другой точки зрения стоит изучение и понимание основных механизмов в конкретных условиях инфекции.
В этой работе мы создали модель инфекции в C. elegans для изучения вирулентности Aeromonas и соответствующий хост ответ после инфицирования. Эти три метода могут применяться для изучения других видов Aeromonas за пределами 4 вида, рассмотрены в настоящем исследовании. Кроме того эти подходы обеспечит платформу для изучения базового механизма, ответственного за некроз мышц, вызванных бактериальной инфекции и разработать потенциальных методов лечения, чтобы улучшить клинические исходы инфекции тяжелой мягких тканей.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Мы благодарны за помощь из фонда основных C. elegans в Тайване и диагностической микробиологии и антимикробной сопротивления лаборатории из национальных Ченг Кунг университетской больницы для предоставления Aeromonas изолирует. Мы также признаем Caenorhabditis центр генетики (CGC) и WormBase. Мы также благодарю Savana Мур для редактирования рукопись.
Это исследование было частично поддерживается грантов от министерства науки и технологий Тайваня (наиболее 105-2628-B-006-017-MY3) и национального Ченг Кунг университетской больницы (NCKUH-10705001) п.л. Чэнь.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Shaker incubator | YIH DER | LM-570R | Bacteria incubation |
| K2HPO4 | J.T.Baker | MP021519455 | Culture medium preparation |
| KH2PO4 | J.T.Baker | 3246-05 | Culture medium preparation |
| Na2HPO4 | J.T.Baker | MP021914405 | Culture medium preparation |
| NaCl | SIGMA | 31434 | Culture medium preparation |
| MgSO4 | SIGMA | M7506 | Culture medium preparation |
| agar | Difco | 214530 | Culture medium preparation |
| CaCl2 | SIGMA | C1016 | Culture medium preparation |
| cholesterol | SIGMA | C8503 | Culture medium preparation |
| ethanol | SIGMA | 32205 | Culture medium preparation |
| KOH | SIGMA | P5958 | Culture medium preparation |
| 6 cm Petri plate | ALPHA PLUS | 46 | agar plate preparation |
| 96-well plate | FALCON | 353072 | liquid assay |
| bacterial peptone | Affymetrix/USB | AAJ20048P2 | Culture medium preparation |
| yeast extract | SIGMA | 92144 | Culture medium preparation |
| citric acid•H2O | SIGMA | C1909 | Culture medium preparation |
| tri-potassium citrate•H2O | SIGMA | 104956 | Culture medium preparation |
| FudR | SIGMA | 1271008 | Culture medium preparation |
| disodium EDTA | SIGMA | E1644 | Culture medium preparation |
| FeSO4•7 H2O | SIGMA | 215422 | Culture medium preparation |
| MnCl2•4 H2O | SIGMA | 221279 | Culture medium preparation |
| ZnSO4•7 H2O | SIGMA | 204986 | Culture medium preparation |
| CuSO4•5 H2O | SIGMA | C8027 | Culture medium preparation |
| tryptone | SIGMA | 16922 | Culture medium preparation |
| Microscope system | Nikon | Eclipase Ti inverted | microscope imaging |
| Scientific CCD Camera | QImaging | Retiga-2000R Fast 1394 | microscope imaging |
References
- Parker, J. L., Shaw, J. G. Aeromonas spp. clinical microbiology and disease. Journal of Infection. 62 (2), 109-118 (2011).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Skin and soft-tissue infections caused by Aeromonas species. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 32 (4), 543-547 (2013).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Biliary tract infections caused by Aeromonas species. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 32 (2), 245-251 (2013).
- Chuang, H. C., et al. Different clinical characteristics among Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii biovar sobria and Aeromonas caviae monomicrobial bacteremia. Journal of Korean Medical Science. 26 (11), 1415-1420 (2011).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Gau, S. J., Hsueh, P. R. Skin and soft tissue infection caused by Aeromonas species in cancer patients. Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 46 (2), 144-146 (2013).
- Chen, P. L., et al. A Disease Model of Muscle necrosis caused by Aeromonas dhakensis infection in Caenorhabditis elegans. Frontiers in Microbiology. 7, 2058 (2016).
- Chen, P. L., et al. Virulence diversity among bacteremic Aeromonas isolates: ex vivo, animal, and clinical evidences. PLoS One. 9 (11), 111213 (2014).
- Saraceni, P. R., Romero, A., Figueras, A., Novoa, B. Establishment of infection models in zebrafish larvae (Danio rerio) to study the pathogenesis of Aeromonas hydrophila. Frontiers in Microbiology. 7, 1219 (2016).
- Chen, Y. W., Ko, W. C., Chen, C. S., Chen, P. L. RIOK-1 Is a Suppressor of the p38 MAPK Innate Immune Pathway in Caenorhabditis elegans. Frontiers in Immunology. 9, 774 (2018).
- Powell, J. R., Ausubel, F. M. Models of Caenorhabditis elegans infection by bacterial and fungal pathogens. Methods in Molecular Biology. 415, 403-427 (2008).
- Chou, T. C., et al. Enterohaemorrhagic Escherichia coli O157:H7 Shiga-like toxin 1 is required for full pathogenicity and activation of the p38 mitogen-activated protein kinase pathway in Caenorhabditis elegans. Cellular Microbiology. 15 (1), 82-97 (2013).
- Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. WormBook. , 1-11 (2006).
- Engelmann, I., Pujol, N. Innate immunity in C. elegans. Advances in Experimental Medicine and Biology. 708, 105-121 (2010).
- Feinbaum, R. L., et al. Genome-wide identification of Pseudomonas aeruginosa virulence-related genes using a Caenorhabditis elegans infection model. PLoS Pathogens. 8 (7), 1002813 (2012).
