Summary
Her introduserer vi tre forskjellige eksperimenter for å studere Aeromonas infeksjon i C. elegans. Bruker metodene praktisk, er det lett å vurdere toksisitet mellom og innenfor Aeromonas arter.
Abstract
Human patogen Aeromonas har vært klinisk vist å forårsake gastroenteritis, sårinfeksjoner, septicemia og urin skrift infeksjoner. De fleste mennesker sykdommer er rapportert å være assosiert med fire arter av bakterier: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veroniiog Aeromonas caviae. Modell organismen Caenorhabditis elegans er en bacterivore som gir en utmerket infeksjon modell ved å studere bakteriell patogenesen av Aeromonas. Her introduserer vi tre forskjellige eksperimenter for å studere Aeromonas infeksjon med C. elegans modell, inkludert overlevelse, flytende toksisitet og muskel nekrose analyser. Resultatene av de tre metodene bestemme virulens av Aeromonas var konsekvent. A. dhakensis viste seg å være den mest giftige blant 4 store Aeromonas arter forårsaker klinisk infeksjoner. Disse metodene er vist å være en praktisk måte å vurdere toksisitet mellom og innenfor Aeromonas arter og bidra til vår forståelse av patogenesen av Aeromonas infeksjon.
Introduction
Human patogen, Aeromonas, har klinisk vist å forårsake gastroenteritis, sårinfeksjoner, septicemia og urin skrift infeksjoner1,2. Mest tilknyttede menneskelige sykdommer er rapportert å være assosiert med fire bakterie-art: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veroniiog Aeromonas caviae 2,3 , 4 , 5. blant Aeromonas smittsomme sykdommer, bløtvev infeksjoner kan forårsake alvorlig sykelighet og dødelighet hos mennesker. Av notatet er muskel nekrose den strengeste formen av bløtvevet infeksjoner6. Observasjon av overlevelse og muskel nekrose av Caenorhabditis elegans etter infeksjon er en praktisk metode å spekulere toksisitet av Aeromonas.
Forskere har allerede utviklet mange modell organismer å studere bakterielle infeksjoner. I tidligere studier, ble mus, zebrafishes og nematoder brukt som modeller for dyr for å studere patogenesen og virulens Aeromonas6,7,8. Hver dyremodell har sin ' fordeler og programmer. Modell organismen, Caenorhabditis elegans, er en bacterivorous Rundormer som inntak bakterier som foodnaturally. C. eleganshar utviklet en komplisert medfødte immunsystemet mot bakteriell infeksjon i løpet av sin utvikling. Under stress bakteriell infeksjon, har C. elegans vist seg for å være en utmerket infeksjon modell å studere bakteriell patogenesen av Aeromonas6,7,9 og andre patogener som sopp10 og enterohaemorrhagic Escherichia coli O157: H711. Men er det fortsatt ingen publikasjon som fokuserer på metodologi ved C. elegans som modell for å studere virulens av Aeromonas.
Her introduserer vi tre forskjellige eksperimenter for å studere Aeromonas infeksjon med C. elegans som en dyremodell: analyser for overlevelse, flytende toksisitet og muskel nekrose. Disse metodene er en praktisk måte å vurdere toksisitet mellom og innenfor Aeromonas arter og øke forståelsen av patogenesen av Aeromonas.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. forberedelse av kultur Medium
Merk: Se tabell 1 for løsning forberedelse.
- For å forberede M9 middels12, løses 1,5 g KH2PO4, 5.66 g Na2HPO4og 2.5 g av NaCl i 500 mL deionisert vann. Autoclave ved 121 ° C i 20 min. vente kjølt ned til romtemperatur, og deretter legge 0,5 mL 1 M MgSO4 før førstegangsbruk.
- For å forberede Rundormer vekst medium (NGM)12, løses 3 g NaCl, 2.5 g bakteriell pepton og 20 g agar i 1 L deionisert vann. Autoclave ved 121 ° C i 20 min. vente kjølt ned til 55 ° C i et vannbad og legger 1 mL 1 M CaCl2, 1 mL 1 M MgSO4, 1 mL av 5% kolesterol i etanol og 25 mL av fosfatbuffer. Virvel å blande godt.
- Hell ca 5 mL NGM i hver 6 cm Petriskål. Unngå boble produksjon på overflaten av platen. La plater ved romtemperatur for 1 natt og pakken lagre på 4 ° C. Bringe tilbake til romtemperatur før bruk.
- For å forberede beriket NGM (ENGM), løses 3 g NaCl, 5 g bakteriell pepton, 1 g gjærekstrakt og 30 g agar i 1 L deionisert vann. Autoclave ved 121 ° C i 20 min. Vent til kjølt ned til 55 ° C i et vannbad, og 1 mL 1 M CaCl2, 1 mL 1 M MgSO4, 1 mL av 5% kolesterol i etanol og 25 mL av fosfatbuffer. Virvel å blande godt.
- Hell ca 10 mL ENGM i hver 9 cm Petriskål. Unngå boble produksjon på overflaten av platen. La plater ved romtemperatur for 1 natt og pakken lagre på 4 ° C. Bringe til romtemperatur før bruk.
- Å forberede S middels12, bland 40 mL S Basal, 0.4 mL 1 M kalium citrate, metaller 0,4 mL sporing løsning, 0,12 mL 1 M CaCl2, 0,12 mL 1 M MgSO4, 40 µL av 5% kolesterol i etanol og 1 mL av 8 mM FudR før bruk.
2. synkronisering av C. elegans6,9,12
- Vask rundt 2000 ormer i gravid-voksen scenen med 10 mL steril deionisert vann i en 15 mL tube. Bleke bakterier 3 x, holde ormer nederst på røret.
- Sentrifuge utvalget for 1 min på 500 x g å trekke ned ormer. Fjern nedbryting, og holde ormer i 3,5 mL vaskebuffer vann.
- Legg 1 mL NaOCl (10-15%) og 0,5 mL 5 M KOH inn i røret. Blandingen jevnt ved å riste < 6 min å lyse ormen organer.
- Når eggene er løslatt fra ormer, legge 10 mL vaskebuffer vann for å stoppe lyse. Sentrifuge for 1 min på 1200 x g trekke ned egg og fjerne nedbryting som mulig. Vask med 15 mL M9 middels minst 3 x.
Merk: Se trinn 1.1 for sammensetningen av M9 medium. - Holde egg i 1 mL M9 medium. Transport egg til en 3,5 cm rett for inkubasjon ved 20 ° C for en natt (ca 12 – 18 h).
Merk: Etter inkubasjon, vil eggene være utklekket for å ormen Larven som kalles som førstetrinns Larven (L1). - Pipetter ut 10 µL av L1 i M9 medium. Antall orm og Beregn konsentrasjonen av L1 ormer i M9 medium.
- Frø minst 10.000 ruges L1 scenen ormer med en Pipetter på en 9 cm ENGM plate spres med Escherichia coli OP50.
- I dette trinnet kultivert spredning 0,5 mL natten E. coli OP50 med Luria-Bertani (LB) kjøttkraft på 9 cm ENGM plate. Inkuber platen på 37 ° C 16 til 18 h
Merk: For å unngå forurensning, spre trinnet skal utføres i laminær strømning hette. - Avkjøles til romtemperatur før såing L1 ormer. Frø minst 10.000 ruges L1 scenen ormer på ENGM plate med E. coli OP50.
- I dette trinnet kultivert spredning 0,5 mL natten E. coli OP50 med Luria-Bertani (LB) kjøttkraft på 9 cm ENGM plate. Inkuber platen på 37 ° C 16 til 18 h
- Inkuber ormer ved 20 ° C i 44 h eller til de vokser til 4th Larven (L4) scenen.
Merk: Se trinn 1.3 for sammensetningen av ENGM medium. En orm har en hvit prikk i halvmåne form på midten av kroppen siden L4 scenen. - Bruk den synkroniserte L4 scenen ormer i de følgende analyser. Bruk villtype N2 ormer i C. elegans overlevelse analysen med Aeromonas dhakensis og C. elegans flytende toksisitet analysen med Aeromonas dhakensis. Bruk RW1596 ormer (myo-3(st386), stEx30 [myo-3p::GFP::myo-3 + rol-6(su1006)]) i C. elegans muskel nekrose analysen med Aeromonas dhakensis.
3. C. elegans overlevelse analysen med Aeromonas6,9
- På dagen for såing L1 ormer på ENGM sprer med E. coli OP50, Velg en enkelt koloni av hver av de fire Aeromonas stammer eller E. coli OP50 og kultur med 2 mL LB kjøttkraft henholdsvis på 37 ° C 16 h.
Merk: For å unngå forurensning, bør dette trinnet utføres i laminær strømning hette. Her de følgende bakterielle stammene ble brukt: E. coli OP50, vanlig mat kilden C. elegans. A. dhakensis AAK1, den første fullt sekvensielt patogene klinisk A. dhakensis isolere. A. hydrophila A2-066, A. veronii A2-007 og A. caviae A2-9307121 er representatively kliniske isolater fra National Cheng Kung University Hospital. - Måle OD600 absorbansen av bakteriell kjøttkraft og justere bakteriell suppen OD600 = 2.0 med LB kjøttkraft.
- Oppdage og spre 30 µL av bakteriell kjøttkraft hver 6 cm NGM plate. Kultur platene i romtemperatur over natten.
Merk: Se trinn 1.2 for sammensetningen av NGM medium. - På dagen L1 ormer vokse til L4 scenen, tilfeldig plukke og overføre 50 ormer til en NGM plate med hver av de fire Aeromonas stammer eller E. coli OP50.
- Inkuber NGM platene på 20 ° C før analysen er fullført.
- Overføre alle levende ormer til en nylig utarbeidet NGM plate med bakterier og telle antall bor, død, og sensor ormer hver dag før siste ormen er død.
Merk: Overføre ormer til en frisk forberedt NGM plate hver dag for vedlikehold av infeksjon, selv om bruker sterilt ormer (f.eks-glp-4, eller FudR). - Tegne inn den overlevelse kurver basert på daglige Databeregningen.
4. C. elegans flytende toksisitet analysen med Aeromonas7
Merk: For å unngå forurensning, bør trinnene utføres i laminær strømning hette.
- Dagen etter seeding L1 ormer på ENGM plate spres med E. coli OP50, Velg en enkelt koloni av hver av de fire Aeromonas stammer og E. coli OP50 og kultur med 5 mL LB kjøttkraft hver på 37 ° C 16 h.
Merk: I protokollen, de følgende bakterier stammene ble brukt: E. coli OP50, vanlig mat kilden C. elegans. A. dhakensis AAK1, den første fullt sekvensielt patogene klinisk A. dhakensis isolere. A. hydrophila A2-066, A. veronii A2-007 og A. caviae A2-9307121 er representatively kliniske isolater fra National Cheng Kung University Hospital. - Måle OD600 absorbansen bakterier suppen.
- Sentrifuge bakteriell suppen 3500 x g i 15 min fjerne LB kjøttkraft. Resuspend bakterier og justere bakteriell suppen OD600 = 3.0 med S medium. Legge til 195 µL av bakteriell kjøttkraft S medium minst 8 brønner av en 96-brønns plate.
Merk: Se trinn 1.6 for sammensetningen av S medium. - Vask av ormene L4 på ENGM plate med E. coli OP5 ved hjelp av M9 medium. Juster ormen løsningen en konsentrasjon av 5 per µL og tilsett 5 µL av ormen løsningen hver brønn av 96-brønns plate. Kontroller at det er ca 25 ormer per brønn.
- Inkuber 96-brønns plate en shaker på 200 rpm på 25 ° C.
- Telle antall live ormer og død ormer etter 24, 48 og 72 h. beregne overlevelse av hver brønn med følgende formel: (Live ormer/totalt ormer) × 100%.
- Tegne en XY tomten graf med daglige data for beregning.
5. C. elegans muskel nekrose analysen med Aeromonas6
Merk: For å unngå forurensning, bør disse trinnene utføres i laminær strømning hette.
- Dag L1 ormer er seeded på ENGM spres med E. coli OP50, plukke en enkelt koloni av hver av de fire Aeromonas stammer og E. coli OP50 og kultur med 2 mL LB kjøttkraft hver på 37 ° C 16 h.
Merk: Her de følgende bakterier stammene ble brukt: E. coli OP50, vanlig mat kilden C. elegans. A. dhakensis AAK1, den første fullt sekvensielt patogene klinisk A. dhakensis isolere. A. hydrophila A2-066, A. veronii A2-007 og A. caviae A2-9307121 er representatively kliniske isolater fra National Cheng Kung University Hospital. - Måle OD600 absorbansen bakterier suppen og justere bakterier suppen OD600 = 2.0 med LB kjøttkraft. Oppdage og spre 30 µL av bakteriell kjøttkraft på 6 cm NGM plater. Kultur platene i romtemperatur over natten.
- Dag vokse L1 ormer til L4 scenen, overføring 50 ormer å hver NGM plate med hver av de fire Aeromonas stammer eller E. coli OP50. Inkuber NGM platene på 20 ° C. Overføre ormer hver 24 h til nylig forberedt NGM plater med bakterier.
- Ta muskel bilder fluorescens mikroskop.
- Tilfeldig plukke 10 ormer på en 2% agarose gel i M9 medium på et lysbilde. Lamme ormer bruke 2 µL av 1% Natriumazid i M9 medium på agarose for mindre enn 5 minutter før du tar bilder.
- Plasser en cover slip og ta muskel bilder med en grønn fluorescerende protein (GFP) filtrere på fluorescerende mikroskop med kostnad - sammen enheten kameraet. Fange muskel bildene på 24, 48 og 72 h legge L4 scenen.
- Gjør bildet analyse og figur forberedelse med en bildebehandling.
Merk: Definisjonene for poengene og muskel skader nivåene er vist i Figur 3som kriteriene er oppført som følger: 3 poeng for manglende muskelfibre; 2 poeng for sprukket eller ødelagt muskelfibre; 1 poeng for bøyd muskelfibre; 0 poeng for sunn muskelfibre.
6. statistiske analyser
- Utføre alle eksperimentene minst tre ganger uavhengig.
- Bruk metoden Kaplan-Meier for å vurdere C. elegans overlevelse analyser, og bruk Logg-rank test i analysere overlevelse forskjeller. Angi statistisk signifikans på 0,05.
- Bruke Student t-test for å analysere statistiske resultatene av C. elegans flytende toksisitet analyser for de to forskjellige gruppene. Bruke enveis ANOVA test i å analysere forskjeller mellom tre eller flere verdier for en uavhengig variabel. Angi statistisk signifikans på 0,05.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ved å følge protokollene som beskrevet ovenfor, er det enkelt å skille mellom toksisitet fra de fire Aeromonas stammene. Den overlevelse analysen C. elegans er vist i figur 1. Overlevelse av C. elegans infisert med Aeromonas arter, vises i rekkefølge fra høy til lav var: A. caviae, A. veronii, A. hydrophila, og A. dhakensis. Selv om det mangfold i form av toksisitet mellom og innenfor Aeromonas arter, viste overlevelse av C. elegans, gjennomsnittlig, høyeste dødelighet blant ormer infisert med A. dhakensis. Virulens av A. hydrophila var dårligere enn det av A. dhakensis (p < 0,01). I motsetning til A. dhakensis og A. hydrophila,ble de dempes virulences A. veronii og A. caviae observert i C. elegans overlevelse analysen. Mangfoldet av overlevelse av C. elegans infisert med ulike Aeromonas arter er konsistent med kliniske observasjoner av Aeromonas infeksjon7.
Resultatene av flytende toksisitet analysen C. elegans vises i figur 2. Med infeksjon tid sunket antall ormer som overlevde betraktelig når C. elegans var infisert med A. dhakensis eller A. hydrophila. Overlevelse av ormene infisert med A. dhakensis var dårligere enn dem infisert med A. hydrophila. Derimot hadde gruppene infisert med A. veronii eller A. caviae høyere overlevelse på hvert punkt i forhold til A. dhakensis og A. hydrophila. Utviklingen av overlevelse C. elegans i flytende toksisitet analysen representerer virulens ulike Aeromonas arter er like de observeres i overlevelse analysen.
C. elegans muskel nekrose analysen, vi først klassifisert nivåer av muskel skader og tildelt score etter de tilhørende graden. Definisjonene av score og muskel skader nivåene finnes i Figur 3. Kriteriene for hver muskel skader nivå er som følger: 0 poeng for sunn muskelfibre; 1 poeng for bøyd muskelfibre; 2 poeng for sprukket eller ødelagt muskelfibre; 3 poeng for tap av muskel fiber. Resultatene av C. elegans muskel nekrose analysen i Aeromonas infiserte -C. elegans er vist i Figur 4. Grader av muskel skader variert blant Aeromonas arter. Nivåene av muskel skader varierte i rekkefølge fra mild til alvorlig som følger: A. caviae, A. veronii, A. hydrophila, og A. dhakensis på hvert tidspunkt. Kontrast A. hydrophila og A. dhakensisvar muskel nekrose ikke opplagt i worms infisert med A. caviae og A. veronii. De fleste ormer infisert med A. caviae og A. veronii ble registrert som 0 poeng. C. elegans infisert med A. hydrophila eller A. dhakensis utstilt alvorlig muskel skader. Av notatet, de fleste av ormene infisert med A. dhakensis vist muskel skader gradert ≥2 poeng. Graden av muskel nekrose av C. elegans infisert med A. dhakensis var mer alvorlig i en høyere prosentandel av score ≥ 2 poeng sammenlignet med A. hydrophila. Alvorlighetsgraden av muskel nekrose i de 4 Aeromonas -artene korrelert med resultatene fra de overlevelse og flytende toksisitet analyser.
Metodene som er beskrevet ovenfor tilbyr en praktisk måte å skille virulens mangfold mellom og innenfor Aeromonas arter. I tillegg er dette en pålitelig modell ved å studere samspillet mellom en patogen og vert.
Figur 1 : Den overlevelse kurver C.elegans. Den overlevelse analysen viser de ulike toksisitet av ulike Aeromonas arter C. elegans (**: P < 0.01; *: P < 0,05). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2 : Overlevelse C. elegans fra flytende toksisitet analysen. Flytende toksisitet analysen viser de forskjellige toksisitet av ulike Aeromonas arter C. elegans. På (A) 24 h, (B) 48t, og (C) 72 h post Aeromonas infeksjon, C. elegans infisert med A. dhakensis har lavest overlevelse. Resultatet antyder at A. dhakensis er den mest giftige Aeromonas arten å C. elegans (***: P < 0,001; **: P < 0.01, feilfelt: standardavvik, SD). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3 : De tilsvarende scorene for muskel nekrose i C. elegans indusert av Aeromonas infeksjon. Kriteriene for muskel nekrose og tilsvarende score er som følger: 3 poeng for manglende muskelfibre; 2 poeng for sprukket eller ødelagt muskelfibre; 1 poeng for bøyd muskelfibre; 0 poeng for sunn muskelfibre. Bøyd muskelfibre (piler), sprukket muskelfibre (pilspisser) og manglende muskelfibre (stjerne) angis. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4 : C. elegans muskel nekrose score. Muskel nekrose resultatene viser de ulike toksisitet av ulike Aeromonas arter å C. elegans. På (A) 24 h, (B) 48t, og (C) 72 h post Aeromonas infeksjon, C. elegans muskel skader er den alvorligste fra infeksjon med A. dhakensis. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
| Løsning | Forberedelse |
| Fosfatbuffer | Oppløse 119.35 g av KH2PO4 og 21.43 g av K2HPO4, i 1 L vaskebuffer vann. Autoclave 121 ° c for 20 min Justere pH verdien til pH = 6.0 med KOH. Vent til kjølt ned til romtemperatur |
| S basale | Oppløse 5,85 g NaCl, 6 g KH2PO4og 1 g K2HPO4 i 1 L deionisert vann. Autoclave ved 121 ° C i 20 min. Vent til kjølt ned til romtemperatur. |
| 1 M kalium citrate | Oppløse 4 g sitronsyre acid•H2O og 58,7 g tri-kalium citrate•H2O i 0,2 mL deionisert vann. Justere pH verdien til pH = 6.0. Autoclave ved 121 ° C i 20 min. Vent til kjølt ned til romtemperatur. |
| Spore metaller løsning | Oppløse 1,86 g disodium EDTA, 0,69 g FeSO4•7 H2O, 0.2 g MnCl2•4 H2O, 0.29 g ZnSO4•7 H2O, 0.025 g CuSO4•5 H2O i 1 L vaskebuffer vann. Autoclave ved 121 ° C i 20 min. Vent til kjølt ned til romtemperatur Holde løsningen i mørket. |
| LB kjøttkraft | Oppløse 10 g NaCl 10 g tryptone og 5 g gjærekstrakt i 1 L deionisert vann. Autoclave ved 121 ° C i 20 min. Vent til kjølt ned til romtemperatur. |
Tabell 1: Løsning forberedelse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
C. elegans er en bacterivorous Rundormer som naturlig inntak bakterier som mat og har utviklet en komplisert medfødt immunitet mot bakterier under sin utviklingsprosess. To av de store organene opprettholde og støtte immunitet er epidermis og tarmen9,13. Overhuden og band av muskel C. elegans ligner bløtvev strukturer i pattedyr og mennesker6. Disse egenskapene er C. elegans som en modell organisme for å studere patogenesen av Aeromonas infeksjon.
Her presenterer vi tre metoder for å undersøke Aeromonas infeksjon i C. elegans som representant for mangfoldig toksisitet blant 4 Aeromonas arter og er korrelert med klinisk observasjon7. Disse praktiske metoder skille de ulike gradene av toksisitet blant Aeromonas arter. Benytter disse metoder, kan forskerne studere virulens ulike Aeromonas arter og forsvare mekanismen for verter ved Aeromonas infeksjon.
I disse tre metodene fungerer C. elegans ikke bare som en predator, men også som et byttedyr av Aeromonas. Hvis ormer ikke er i sunne tilstand før testen, blir resultatene av vert-patogen samhandling forskjellige. Derfor er det viktig å være svært forsiktig når du manipulerer C. elegans. For å unngå overdreven skade eggene C. elegans i synkronisering trinn, må du observere utgivelsen av egg kontinuerlig. Når eggene er skadet, minker hovedsakelig klekking antall C. elegans egg. Selv om skadet eggene klekkes vellykket, er ormer sannsynligvis utviklingsmessige problemer. Derfor er det avgjørende å fullfører trinn 2.3 innen 6 min etter ormene er utsatt for NaOCl og KOH.
De tre metodene beskrevet ovenfor vise sammenhengende resultater på Aeromonas toksisitet til C. elegans, inkludert to forskjellige eksperimenter måle overlevelse C. elegans under Aeromonas infeksjon og en observere morfologiske endring av muskler. Virulens testen bruker utviklet metoder kan gi forskjellige resultater. For eksempel forskere har tidligere observert ulike resultatene i C. elegans plate og flytende søk14. I vår forskning fant vi også var det avvik mellom disse to analyser9eksisterende. Det antas at eksterne miljøet vil påvirke virulens av patogen, og forskerne må finne de optimale forholdene å utforske virulens mekanismen. Fra et annet perspektiv er det verdt å studere og forstå de underliggende mekanismene i spesifikke tilstand infeksjon.
I dette arbeidet etablert vi en infeksjon modell i C. elegans å studere virulens Aeromonas og den tilsvarende vert svaret etter smitte. Disse tre metodene kan brukes for å studere andre Aeromonas arter utover 4 arter i studien. Dessuten, vil disse gi en plattform å studere den underliggende mekanismen ansvarlig for muskel nekrose forårsaket av bakteriell infeksjon og utvikle mulige behandlinger for å forbedre de kliniske utfallet av alvorlig bløtvev infeksjoner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Vi er takknemlige for hjelp fra C. elegans kjernen anlegget i Taiwan og diagnostiske mikrobiologi og antimikrobielle motstand laboratorium av National Cheng Kung University Hospital for å gi Aeromonas isolerer. Vi erkjenner også Caenorhabditis genetikk Center (CGC) og WormBase. Vi takker også Savana Moore for redigering manuskriptet.
Denne studien ble delvis støttet av tilskudd fra departementet for vitenskap og teknologi av Taiwan (mest 105-2628-B-006-017-MY3) og National Cheng Kung University Hospital (NCKUH-10705001) til P.L. Chen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Shaker incubator | YIH DER | LM-570R | Bacteria incubation |
| K2HPO4 | J.T.Baker | MP021519455 | Culture medium preparation |
| KH2PO4 | J.T.Baker | 3246-05 | Culture medium preparation |
| Na2HPO4 | J.T.Baker | MP021914405 | Culture medium preparation |
| NaCl | SIGMA | 31434 | Culture medium preparation |
| MgSO4 | SIGMA | M7506 | Culture medium preparation |
| agar | Difco | 214530 | Culture medium preparation |
| CaCl2 | SIGMA | C1016 | Culture medium preparation |
| cholesterol | SIGMA | C8503 | Culture medium preparation |
| ethanol | SIGMA | 32205 | Culture medium preparation |
| KOH | SIGMA | P5958 | Culture medium preparation |
| 6 cm Petri plate | ALPHA PLUS | 46 | agar plate preparation |
| 96-well plate | FALCON | 353072 | liquid assay |
| bacterial peptone | Affymetrix/USB | AAJ20048P2 | Culture medium preparation |
| yeast extract | SIGMA | 92144 | Culture medium preparation |
| citric acid•H2O | SIGMA | C1909 | Culture medium preparation |
| tri-potassium citrate•H2O | SIGMA | 104956 | Culture medium preparation |
| FudR | SIGMA | 1271008 | Culture medium preparation |
| disodium EDTA | SIGMA | E1644 | Culture medium preparation |
| FeSO4•7 H2O | SIGMA | 215422 | Culture medium preparation |
| MnCl2•4 H2O | SIGMA | 221279 | Culture medium preparation |
| ZnSO4•7 H2O | SIGMA | 204986 | Culture medium preparation |
| CuSO4•5 H2O | SIGMA | C8027 | Culture medium preparation |
| tryptone | SIGMA | 16922 | Culture medium preparation |
| Microscope system | Nikon | Eclipase Ti inverted | microscope imaging |
| Scientific CCD Camera | QImaging | Retiga-2000R Fast 1394 | microscope imaging |
References
- Parker, J. L., Shaw, J. G. Aeromonas spp. clinical microbiology and disease. Journal of Infection. 62 (2), 109-118 (2011).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Skin and soft-tissue infections caused by Aeromonas species. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 32 (4), 543-547 (2013).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Biliary tract infections caused by Aeromonas species. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 32 (2), 245-251 (2013).
- Chuang, H. C., et al. Different clinical characteristics among Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii biovar sobria and Aeromonas caviae monomicrobial bacteremia. Journal of Korean Medical Science. 26 (11), 1415-1420 (2011).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Gau, S. J., Hsueh, P. R. Skin and soft tissue infection caused by Aeromonas species in cancer patients. Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 46 (2), 144-146 (2013).
- Chen, P. L., et al. A Disease Model of Muscle necrosis caused by Aeromonas dhakensis infection in Caenorhabditis elegans. Frontiers in Microbiology. 7, 2058 (2016).
- Chen, P. L., et al. Virulence diversity among bacteremic Aeromonas isolates: ex vivo, animal, and clinical evidences. PLoS One. 9 (11), 111213 (2014).
- Saraceni, P. R., Romero, A., Figueras, A., Novoa, B. Establishment of infection models in zebrafish larvae (Danio rerio) to study the pathogenesis of Aeromonas hydrophila. Frontiers in Microbiology. 7, 1219 (2016).
- Chen, Y. W., Ko, W. C., Chen, C. S., Chen, P. L. RIOK-1 Is a Suppressor of the p38 MAPK Innate Immune Pathway in Caenorhabditis elegans. Frontiers in Immunology. 9, 774 (2018).
- Powell, J. R., Ausubel, F. M. Models of Caenorhabditis elegans infection by bacterial and fungal pathogens. Methods in Molecular Biology. 415, 403-427 (2008).
- Chou, T. C., et al. Enterohaemorrhagic Escherichia coli O157:H7 Shiga-like toxin 1 is required for full pathogenicity and activation of the p38 mitogen-activated protein kinase pathway in Caenorhabditis elegans. Cellular Microbiology. 15 (1), 82-97 (2013).
- Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. WormBook. , 1-11 (2006).
- Engelmann, I., Pujol, N. Innate immunity in C. elegans. Advances in Experimental Medicine and Biology. 708, 105-121 (2010).
- Feinbaum, R. L., et al. Genome-wide identification of Pseudomonas aeruginosa virulence-related genes using a Caenorhabditis elegans infection model. PLoS Pathogens. 8 (7), 1002813 (2012).
