Summary
Burada kornea endotel hücrelerinin (MSK) neodimyum kullanarak Descemet zarından (DM) ayrılması için bir protokol sunuyoruz:YAG (Nd:YAG) lazer, büllöz keratopati (BK) için eksvivo hastalık modeli olarak.
Abstract
Nd:YAG lazerler noninvaziv göz içi cerrahisi gerçekleştirmek için kullanılmaktadır, kapsulotomi gibi şimdi birkaç on yıldır. Kesi etkisi lazer odaklama optik arıza dayanır. Akustik şok dalgaları ve kavitasyon kabarcıkları üretilir, doku yırtılmasına neden olur. Kabarcık boyutları ve basınç genlikleri darbe enerjisi ve odak noktasının konumuna göre değişir. Bu çalışmada, enükleatlı domuz gözleri ticari olarak mevcut nd:YAG lazerin önüne yerleştirilmiştir. Değişken darbe enerjileri ve korneaya arka fokal noktaların farklı konumları test edildi. Ortaya çıkan lezyonlar iki foton mikroskobu ve histoloji ile değerlendirildi ve kornea endotel hücrelerinin (MSK) en az ikincil hasarla özel bir ayrılması için en iyi parametreler belirlendi. Bu yöntemin avantajları, CEC'nin kesin ablasyon, azaltılmış ikincil hasar ve hepsinden önemlisi temassız tedavidir.
Introduction
Korneanın saydamlığı, ışığın retinaya ve fotoreseptörlerine iletilmesi için gereklidir1. Bu bağlamda, dehidratasyon göreceli bir devlet kornea stroma içinde kollajen lifleri doğru hizalanmış tutmak için önemlidir. Bu homeostaz Descemet membran (DM)2üzerinde bulunan kornea endotel hücreleri (MSK) tarafından korunur. Endotel en içteki kornea tabakasıdır. Bu kornea şeffaflık için çok önemli bir bariyer ve pompa fonksiyonu vardır3. Epitelaksine, endotel kendini yenilemek mümkün değildir4. Bu nedenle, hastalık veya travma nedeniyle herhangi bir hücre hasarı büyütmek ve göç, ortaya çıkan kusurları kapsayacak ve kornea işlevselliğini korumak için kalan endotel hücrelerini uyarır5. Ancak, CEC yoğunluğu kritik bir eşiğin altına düşerse, endotel dekompansasyonu bir ödem yol açar, bulanık görme ve rahatsızlık ve hatta şiddetli ağrı ile sonuçlanan4. Semptomları hafifletmek için ilaçların mevcudiyetine rağmen, şu anda bu durumlarda tek kesin tedavi kornea naklidir, tam kalınlıkta greft veya lamellar endotel transplantasyonu şeklinde yapılabilir. İkinci prosedür Descemet membran endotel keratoplasti olarak kullanılabilir (DMEK) yanı sıra Descemet's sıyırma otomatik endotel keratoplasti (DSAEK)6. Ancak, kalan MK'nin korunması ve hayatta kalmalarının artırılması alternatif bir hedef olabilir, potansiyel terapötik ilaçları test etmek için yeterli bir hastalık modeline ihtiyaç vardır.
Mevcut CEC kaybı hastalığı modelleri toksik ajanların enjeksiyonu yoluyla endotel imha odaklanmak (örneğin, benzalkonyum klorür) ön hazneiçine veya bir invaziv descemetorheks tekniği kullanarak hücrelerin mekanik aşınma ile7,8. Bu modeller iyi kurulmuş olmakla birlikte, genel inflamatuar yanıt ve kesin olmayan ikincil hasar gibi dezavantajları var. Bu nedenle, bu modeller daha fazla hastalığın son aşamalarında temsil etmek olasıdır, yukarıda belirtilen cerrahi seçenekler kaçınılmaz olduğunda.
Kök hücre ve gen tedavisi gibi hücresel tedavi stratejilerindeki gelişmelerle, bu hücresel tedavilerin uygulanması MK kaybının erken evrelerinde yararlı olabilir9. Daha sonra, hastalığın bu erken evrelerini daha yeterli bir şekilde temsil eden bir modele ihtiyacımız vardır. Bu bağlamda, hücre kültürü modelleri son on yılda geliştirilmiş ama yine de geçerliliği sınırlıdır, in vitro hücreleri kornea içinde farklı hücre türleri arasında meydana gelen karmaşık etkileşimleri çoğaltma yakın gelemez gibi10. Bu nedenle, ex vivo ve in vivo hastalık modelleri hala yüksek talep ve mevcut olanları iyileştirilmesi son derece ilgi çekicidir.
Noninvaziv, göz içi cerrahisi bir neodimyum kullanarak fotoaksilik:YAG (Nd:YAG) lazer geç 1970'lerin sonlarında piyasaya sunulmasından bu yana dünya çapında göz doktorları için rutin bir prosedür haline gelmiştir11. Photodisruption plazma oluşumuna yol açan doğrusal olmayan ışık emilimi dayanır, akustik şok dalgaları üretimi, ve kavitasyon kabarcıkları oluşturulması, uygulama sitesi sıvı bir ortamda bulunduğunda12. Genel olarak, bu süreçler hassas doku kesme amaçlanan etkiye katkıda bulunur. Ancak, onlar da lazer cerrahisi13yerel hapsi sınırlayan gereksiz teminat hasar kaynağı olabilir.
Ortaya çıkan mekanik etkilerin tahmini, şok dalgası yayılımı ve kavitasyon rotasının karakterizasyonu ile önemli ölçüde iyileşmiştir. Amacımız MSK kaybının erken evreleri için noninvaziv, lazer destekli deneysel bir hastalık modeli sağlamak için çevre dokulara mümkün olduğunca az hasar ile MSK hedef. Bu amaçla lazerin odak noktalarının optimum darbe enerjilerini ve konumlarını belirlemek gerekir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Hayvan dokusu ile ilgili tüm prosedürler yerel Hayvan Bakım ve Etik Komitesi yönergelerine uyar.
1. Organ kültürünün hazırlanması ve lazer tedavisi
- Yerel mezbaha dan taze enükleated domuz gözleri elde edin. Onları serin tutun (4 °C) Dulbecco modifiye Eagle orta (DMEM) yüksek glikoz ile, L-glutamin ile takviye, sodyum pirüuvat, penisilin / streptomisin (%1), ve domuz serumu (%10), bundan böyle tam orta olarak bu makalede belirtilen.
- Makas ile ekstrasellüler dokuları çıkarın ve kullanıma kadar sterilfosfat tamponlu salin (PBS) yerleştirmeden önce 5 dakika boyunca% 5 povione-iyot oftalmik çözelti gözleri ıslatın.
- Spektral etki alanı optik koherens tomografi cihazı(Tablo Of Materials)ile kornea skar, ödem ve diğer opakentler gibi ana anterior segment patolojileri için ekran gözleri.
- Gözleri, dalga boyu 1.064 nm ve havada 10 μm odak noktası çapına sahip Nd:YAG lazeri(Malzeme Tablosu)ile donatılmış bir lamba ünitesinin önüne yerleştirin.
NOT: En iyi konumlandırma için 3D baskılı bir tutma aparatı kullanılır, bu da göz firmasını tutmak için tasarlanmıştır, üzerinde çok fazla baskı olmadan(Şekil 1). - 12x büyütme kullanın ve tek tek kornea katmanları görselleştirmek için aydınlatma saptırmak.
- Endotel hücrelerinin seçici ablasyonunu ayarlamak için darbe enerjisini (örn. 1,6 mJ) ve odak noktasını (örn. 0,16 mm) ayarlayın.
- Limbus yakın net bir kornea paracentesis yerleştirin ve ön oda stabilize etmek için viskoelastik enjekte(Malzeme Tablosu).
- Lazerle tedavi edilen merkezi korneayı 8 mm trephine kullanarak çıkar.
- Eksintise korneayı 12 kuyulu bir tablaya yerleştirin ve endotel bölgesi yukarı bakacak şekilde 3 mL'lik tam orta 3 mL'lik bir alanda 3 7 °C'ye kadar 3 gün kuluçkaya yatırın.
NOT: Bu adımda ortama potansiyel sitoprotektif maddeler eklenebilir.
2. Histolojiye hazırlık
- 133 mM KH2PO4 19,6 mL içeren 7,4 pH ile Sorensen tampon hazırlayın ve 133 mM Na2HPO480,4 mL .
- Metanoliçermeyen paraformaldehit (%4) kullanarak kornea içeren kuyudan ortayı çıkarın ve 20 dakika oda sıcaklığında (RT) dokuyu sabitle Sorensen'in tamponunda.
- Doku battı kadar PBS% 20 sakaroz yerleştirin (1 saat) ve daha sonra% 30 sakaroz PBS bir gecede RT. Kabarcıklar ve hava yüzeyi arayüzü ile temas önlemek için dikkat edin. Dokuyu optimum kesme sıcaklığına (OCT) yerleştirin ve -80 °C'de saklayın.
- -27 °C'de bir kriyostat kullanarak 10 μm kalınlığında kesin.
NOT: Bir deve saç fırçası bıçak bıçak üzerinde ortaya çıkan bölüm rehberlik yardımcı olmak için yararlıdır. - Dokuyu dondurup kurutmaktan kaçınmak için kesişten 1 dakika sonra kaydırağa dokunarak bölümü mikroskop slaytına aktarın. Slaytları -80 °C'de saklayın.
3. Hematoksilin ve eozin (H&E) boyama
- Hava kuru bölümleri birkaç dakika nem kaldırmak için.
- 50 mL tüpte 10 dk boyunca %0.1 Mayers hematoksinilin ile leke.
- Bir Coplin kavanozda, 5 dakika boyunca serin çalışan ddH2O durulayın ve % 0.5 eozin 10x daldırma.
- DDH2O'ya din eozin çizgileri durdurana kadar daldırın ve %50 (10x) ve %70 (10x) EtOH'a daldırın.
- Ksilene birkaç kez daldırma önce% 95 EtOH (30 s) ve% 100 EtOH (60 s) dengeleyin.
- Son olarak, hafif bir mikroskop kullanarak görüntü almadan önce numuneyi monte edin ve kapağını kapatın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Burada sunulan prosedürü kullanarak, uygun parametreleri bulmak için farklı darbe enerjilerini (1.0−4.6 mJ) ve odak noktalarının (korneanın arka yüzeyinden uzaklık: 0.0−0.2 mm) konumlarını değerlendirerek gözleri Nd:YAG lazerile tedavi ettik. Lazer parametrelerinin her takımyıldızı için birden fazla çoğaltma (n = 3) değerlendirildi (12 x 21).
Yukarıda belirtilen protokole ek olarak, numune fiksasyon ve H&E boyamadan önce iki foton mikroskop la analiz edildi. İki fotonmikroskop, 690−1b040 nm ayarı ve ışık kaynağı olarak 800 nm'de ortalama >900 mW lazer çıkışı ile katı hal, mod kilitlenmiş 80 MHz Ti:safir lazer kullanabilmiş. Numuneye yaklaşık 150 fs genişliğinde darbeler teslim etti. Görüntüler 730 nm ve 30 mW lazer gücünde mikroskop hedefiyle (20x/0.95) alınmıştır.
İki foton lu ışık mikroskobu görüntüleri, deneysel ayarlara kör olan ve görüntüleri üç kategoriye atamak zorunda kalan 3 gözden geçiren tarafından bağımsız olarak gözden geçirildi: (1) hasar yok, (2) çok fazla hasar veya (3) doğru miktarda hasar(Şekil 2 ve Şekil 3). Değerlendirmelerine göre Bir ısı haritası hesaplanmıştır (Şekil 4). Bu ısı haritasını kullanarak, cec'i çevreleyen dokuya en az hasar (yeşil) ile seçici olarak ablate etmek için doğru lazer parametreleri takımyıldızını seçmek mümkündür. Sonuçlar, lazerin odak noktasının en düşük darbe enerjisi (1,0 mJ) için kornea endotel arkasında en az 0,15 mm olması gerektiğini göstermektedir. 2,9 mJ'den yüksek darbe enerjileri için test edilen en uzun odak uzaklığı (0,2 mm) hala endotel'e çok yakındır.
Şekil 1: Deneysel kurulum. (A) Gözler kısmen 3D baskılı bir tutma aparatıyla sabitlenmiştir, bu da lazer ışınıile ilgili hassas bir hizalama yada izin verebilmiştir. (B) Lazer tedavisinden önce doku, majör anterior segment patolojilerini kontrol etmek için ön segment optik koherens tomografi cihazı ile değerlendirildi. Odak lazer noktalarının pozisyonları 0,0 mm (siyah yıldız), 0,1 mm (kırmızı yıldız) ve 0,2 mm (mavi yıldız) için örnek olarak gösterilir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: İki fotonlu mikroskopi. Sonuçlar hiçbir hasar(A),geniş yan hasar(B) endotel hücrelerinin seçici ablasyon(C)arasında değişmektedir. Kırmızı ok ucu yırtık Descemet zarını gösterir, ve yeşil ok uçları CEC kümelerinin seçici ablasyonunu gösterir. Ölçek çubuğu = 100 μm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3: Histoloji. Hematoksilin ve eozin boyama hiç hasar(A),geniş teminat hasarı(B)endotel hücrelerinin seçici ablasyon(C)hasar aralığı doğruladı. Kırmızı ok ucu yırtık Descemet zarını gösterir, ve yeşil ok uçları CEC kümelerinin seçici ablasyonunu gösterir. Ölçek çubuğu = 100 μm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 4: Seçici CEC hasarı olasılığını gösteren bir ısı haritası. Bu bağlamda, darbe enerjisi nin yanı sıra ND:YAG lazer odak noktasının konumu da dikkate alınmalıdır. Aşırı hasar kırmızı ile gösterilir ve hasarın istenilen kısmı yeşil renkte gösterilir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu pilot çalışmanın sonuçları, enerji dozu ve odak noktası pozisyonu için uygun parametreler seçildiğinde kornea endotel hücrelerini seçici olarak ablate etmek için nd:YAG lazerin kullanılabileceğini göstermektedir.
Endotel fonksiyonu kornea şeffaflığı ve korneanın stromal ödemden korunması açısından önemli olduğundan, endotel disfonksiyonu modelleri ödem önleyici ilaçların veya cerrahi işlemlerin geliştirilmesinde önemli rol oynamaktadır. In vivo durum taklit etmek için çeşitli in vitro modelleri vardır10,14,15, ama genel olarak bilindiği gibi, in vitro modeller tamamen enzimler ve sitokinler veya hücre-hücre etkileşimi etkisi etkilerini taklit edemez. Buna karşılık, endotel hücre kaybı bu yeni geliştirilen ex vivo modeli doğal ortamda hastalığın farklı durumları ve kornea dekompansasyon izlemek için imkanı sunuyor.
Modelimizdeki kornea lazer işleminden sonra trephine ile insidansı, korneanın fizyolojisi değiştiği nden ve in vitro duruma benzer şekilde bölgesel etkileşimler önemli ölçüde engellenir. Ancak, yerel arayüzü bozulmamış kalır ve kornea içinde diğer hücrelere özellikle hücresel iletişim devam eder. Çalışmamız, bu şartlar altında korneanın kültürde üç gün boyunca işlevini sürdürderken, potansiyel terapötik ajanları gözlemlemek ve değerlendirmek için yeterli zaman sunduğunu ortaya koymuştur. Öte yandan, uzun süreli iyileşme süreçleri araştırılamaz.
Modelimizde, domuz gözlerini daha büyük miktarlarda kolayca elde edilebildiği için kullandık. Ayrıca, domuz gözleri çok iyi insan gözlerini taklit. Düzenli deney için kullanılan tavşan aksine, domuz gözleri bowman membran var. Bununla birlikte, domuz gözünün kornea kalınlığı insan gözünden önemli ölçüde farklıdır. Özellikle, domuz stroma çok daha kalın ve domuz kornea merkezi ve periferik kalınlığı arasında bir fark yoktur16. Bu rejeneratif özellik domuz ve tavşan 17 ,,18gibi bazı hayvanlarda rapor ederken17aynı zamanda insan CEC herhangi bir iyileşme yeteneğine sahip olmadığı düşünülmelidir. Çalışmamız yara iyileşme süreçlerine odaklanmadı, ancak sonuçları çevirirken bu fark akılda tutulmalıdır. Hayvan MK'nin yara iyileşmesi dört günü geçmediği için, sadece üç gün sürseler bile kültürlü dokularımızda görülebilebilir.
Deneysel kurulumumuzu önceki çalışmalarla karşılaştırdık, uygulanan enerji seviyeleri19'abenzerdi. Sadece endotel üzerinde durularak odaklanmak yerine odak noktalarının farklı yerleri değerlendirildi. Bu nedenle, kurulumuzun daha önceki çalışmalarla olan temel farkı, DM veya stromal dokuya zarar vermeden spesifik endotel hasarına neden olta potansiyelidir. Enerji dozu ve odak pozisyonunun doğru izlenmesi korneanın diğer kısımlarında şok dalgası hasarına neden olmadan seçici MSK ablasyonunu sağlar. Ayrıca lazer tedavisinden hemen sonra stromal veya subepitelyal ödem fark etmedik20.
Daha önceki bir çalışma ~ 40 °C sıcaklıklar CEC hasara yol açabilir gösterdi21. İndüklenen sıcaklığı ölçmedik, ama daha ileri çalışmalar için ilgi çekici olabilir. Ayrıca farklı lazer sistemlerinin etkileri de değerlendirilmelidir. Daha önceki çalışmalar lazer indüklenen sezaryen hasarı ve diğer CEC yaralanmaları arasında bir fark gösterdi19,22. Lazer kaynaklı hasar farklı hastalık geliştirme süreçleri tarafından takip gibi görünüyor, çünkü bu da insan dokusu ve hastalıkları ile karşılaştırılabilirsınırolabilir. İlginçtir, lazer uygulaması sonrası yara iyileşmesi daha önceki çalışmalarda yanmış DM durdu19. DM bozulmadan kalırsa yaralanma kaynağı daha az önemli olabilir.
Daha yüksek enerji seviyeleri uzun yaralanma daha yüksek bir risk oluşturabilir22. Sonuçlarımız, seçici CEC hasarı için daha yüksek enerji seviyelerinin (<2.9 mJ) kullanılmasının daha sıkı bir odak aralığı gerektirdiğini göstermektedir. Önceki çalışmalarda Mekanik olarak uygulanmış olsa da17,burada kullanılan lazer kaynaklı hasar lezyonun daha hassas bir şekilde dosalanmasına sahiptir ve in vivo çalışmalarda rahatlıkla kullanılabilir.
Bu protokole göre çok az sayıda gözün tedavi edildiği ve incelendiği unutulmamalıdır. Yukarıda da belirtildiği gibi, lazer tedavisine yanıt olarak bireyler arası farklılıklar yanı sıra farklı hayvan türlerinin korneaları arasında farklılıklar olabilir. CeC hasarı farklı odak konumlarında üretilebildiği için, uzun süreli hasarı önlemek için bazı eşikler aşılmamalıdır.
Son olarak bu çalışmada oluşan lezyonlar orta kısma yerleştirildi. Domuz gözleri daha önceki bir çalışmada kornea çevresinde hızlandırılmış yara iyileşmesi gösterdi, domuz gözlerinde kornea kalınlığı bölgeler arasında farklılık göstermez gibi limbal kök hücrelere yakınlığı nedeniyle olabilir17. Korneanın merkezinden çevreye geçerken lazer parametrelerinin ayarlanıp ayarlanmayacağı ileride yapılacak çalışmalarda değerlendirilmelidir.
Sonuç olarak, çalışmamız MSK disfonksiyonu daha fazla araştırma için noninvaziv bir model tanıttı. Ex vivo veya in vivo çalışmaların insan dokusu yerine hayvan kullanımı açısından sınırlamaları kalır ve sonuçları yorumlarken göz önünde bulundurulmalıdır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Acknowledgments
Christine Örün ve Jan A. M. Sochurek'e deneysel yöntemlerdeki yardımları için teşekkür ederiz.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| BARRON VACUUM TREPHINE | Katena | K20-2058 | |
| Cryostat | Leica | CM 3050S | |
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium - high glucose | PAA | E-15009 | |
| Eye holder | Self | N/A | |
| Inverted Microscope | Leica | DMI 6000 B | |
| KH2PO4 | Merck | 529568 | |
| Na2HPO4 | Merck | 1065860500 | |
| Nd:YAG laser | Zeiss Meditec | visuLAS YAG II plus | |
| OCT Tissue Tek | Sakura Finetechnical | 4583 | |
| Penicillin-Streptomycin | Sigma-Aldrich | P4333 | |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Gibco | 10010056 | |
| Porcine serum | Sigma-Aldrich | 12736C | |
| Spectral-domain optical coherence tomograph | Heidelberg Engineering | Spectralis | |
| Tissue culture plate 12-well | Sarstedt | 833921 | |
| Two-Photon Microscope | JenLab | DermaInspect | |
| Viscoelastic | OmniVision | Methocel |
References
- DelMonte, D. W., Kim, T.
- Edelhauser, H. F. The balance between corneal transparency and edema: the Proctor Lecture. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 47 (5), 1754-1767 (2006).
- Tuft, S. J., Coster, D. J.
- Bourne, W. M. Biology of the corneal endothelium in health and disease. Eye. 17, 912-918 (2003).
- He, Z., et al. 3D map of the human corneal endothelial cell. Scientific Reports. 6, 29047 (2016).
- Gain, P., et al. Global Survey of Corneal Transplantation and Eye Banking. JAMA Ophthalmology. 134 (2), 167-173 (2016).
- Schwartzkopff, J., Bredow, L., Mahlenbrey, S., Boehringer, D., Reinhard, T. Regeneration of corneal endothelium following complete endothelial cell loss in rat keratoplasty. Molecular Vision. 16, 2368-2375 (2010).
- Bredow, L., Schwartzkopff, J., Reinhard, T. Regeneration of corneal endothelial cells following keratoplasty in rats with bullous keratopathy. Molecular Vision. 20, 683-690 (2014).
- Bartakova, A., Kunzevitzky, N. J., Goldberg, J. L. Regenerative Cell Therapy for Corneal Endothelium. Current Ophthalmology Reports. 2 (3), 81-90 (2014).
- Zhao, B., et al. Development of a three-dimensional organ culture model for corneal wound healing and corneal transplantation. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 47 (7), 2840-2846 (2006).
- Aron-Rosa, D., Aron, J. J., Griesemann, M., Thyzel, R. Use of the neodymium-YAG laser to open the posterior capsule after lens implant surgery: a preliminary report. Journal - American Intra-Ocular Implant Society. 6 (4), 352-354 (1980).
- Vogel, A., Hentschel, W., Holzfuss, J., Lauterborn, W. Cavitation bubble dynamics and acoustic transient generation in ocular surgery with pulsed neodymium: YAG lasers. Ophthalmology. 93 (10), 1259-1269 (1986).
- Vogel, A., Schweiger, P., Frieser, A., Asiyo, M. N., Birngruber, R. Intraocular Nd:YAG laser surgery: laser-tissue interaction, damage range, and reduction of collateral effects. IEEE Journal of Quantum Electronics. 26 (12), 2240-2260 (1990).
- Zhu, Q., Zhu, Y., Tighe, S., Liu, Y., Hu, M. Engineering of Human Corneal Endothelial Cells In Vitro. International Journal of Medical Sciences. 16 (4), 507-512 (2019).
- Li, Z., et al. Nicotinamide inhibits corneal endothelial mesenchymal transition and accelerates wound healing. Experimental Eye Research. 184, 227-233 (2019).
- Pescina, S., et al. Development of a convenient ex vivo model for the study of the transcorneal permeation of drugs: histological and permeability evaluation. Journal of Pharmaceutical Sciences. 104 (1), 63-71 (2015).
- Smeringaiova, I., et al. Endothelial Wound Repair of the Organ-Cultured Porcine Corneas. Current Eye Research. 43 (7), 856-865 (2018).
- Yamashita, K., et al. A Rabbit Corneal Endothelial Dysfunction Model Using Endothelial-Mesenchymal Transformed Cells. Scientific Reports. 8 (1), 16868 (2018).
- Schubert, H. D., Trokel, S. Endothelial repair following Nd:YAG laser injury. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 25 (8), 971-976 (1984).
- Zhang, W., et al. Rabbit Model of Corneal Endothelial Injury Established Using the Nd: YAG Laser. Cornea. 36 (10), 1274-1281 (2017).
- McCally, R. L., Bonney-Ray, J., de la Cruz, Z., Green, W. R. Corneal endothelial injury thresholds for exposures to 1.54 micro m radiation. Health Physics. 92 (3), 205-211 (2007).
- Nash, J. P., Wickham, M. G., Binder, P. S. Corneal damage following focal laser intervention. Experimental Eye Research. 26 (6), 641-650 (1978).
