في هذا البروتوكول ، يتم وصف طريقة عزل الجزر التورانية وزرعها في الأنسجة الدهنية البيضاء تحت الجلد الجلدية. يتم زرع الجزر التورينية المعزولة في متلقي المورين باستخدام هيدروجيل غشاء الطابق السفلي. يتم مراقبة مستوى السكر في الدم من المتلقين، ويتم إجراء تحليل الأنسجة من الطعوم السبوة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الاعلية الجلدية الجلدية الأنسجة الدهنية البيضاء (ISWAT) نموذج زرع الجزر المورين
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
زرع زلاب البنكرياس هو علاج علاجي راسخ لمرض السكري من النوع 1. كبسولة الكلى هو الموقع الأكثر استخداما لزرع الجزر في نماذج القوارض. ومع ذلك ، فإن كبسولة الكلى الضيقة تحد من زرع جزر كافية في الحيوانات الكبيرة والبشر. تم العثور على الأنسجة الدهنية البيضاء تحت الجلد الجلدية (ISWAT) ، وهي مساحة جديدة تحت الجلد ، لتكون موقعًا قيمًا محتملًا لزرع الجزر. هذا الموقع لديه إمدادات الدم أفضل من المساحات الأخرى تحت الجلد. وعلاوة على ذلك، فإن ISWAT يستوعب كتلة أكبر من الجزر كبسولة الكلى، وزرع في ذلك هو بسيط. تصف هذه المخطوطة إجراء عزل الجزر وزراعة الفئران في موقع ISWAT لمتلقي فأرالسكري المنسّج. باستخدام هذا البروتوكول، تم عزل الجزر البنكرياس ية المورين من قبل هضم الكولاجين القياسية واستخدمت هيدروجيل مصفوفة غشاء الطابق السفلي لتحديد الجزر المنقى في موقع ISWAT. تم رصد مستويات السكر في الدم للفئران المتلقية لأكثر من 100 يوم. تم استرداد الطعوم الجليسية في اليوم 100 بعد زرعها للتحليل النسيجي. بروتوكول زرع الجزلات في موقع ISWAT الموصوف في هذه المخطوطة بسيط وفعال.
المقدمة
ارتفاع معدل انتشار وانتشار مرض السكري من النوع 1 (T1DM) في جميع أنحاء العالم بسرعة ، وفقًا للبيانات الإحصائية للاتحاد الدولي للسكري (IDF)1. زرع الجزر هي واحدة من النهج الواعدة لعلاج T1DM4. منذ اختراق كبير المحرز في زرع جزيرة سريرية باستخدام بروتوكول ادمونتون2 تم الإبلاغ عنها، يعمل البقاء على قيد الحياة الكسب غير المشروع الجزيرة في المتلقين T1DM بعد 5 سنوات الآن تصل إلى حوالي 50٪3.
في الماضي ، تم استكشاف العديد من مواقع زرع الأعضاء ، مثل الكبد ، كبسولة الكلى ، الطحال ، المنطقة العضلية ، الفضاء تحت الجلد ، نخاع العظام ، والحقيبة omental لزرع الجزر ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
اتبعت جميع الإجراءات الواردة في هذا البروتوكول مبادئ رعاية الحيوان من لجنة مراجعة الأخلاقيات في مستشفى الشعب الثاني في شنتشن. كان متلقو الكسب غير المشروع والمتبرعين من بين 8 إلى 10 أسابيع من العمر C57BL/6 فئران ذكر تم شراؤها من مركز الحيوانات الطبية في مقاطعة قوانغدونغ. تم إجراء عملية الحصاد أو العزلة أو الثقافة أو إدارة الخلايا التي تم حصادها في ظروف معقمة.
1- إعداد السُيب
- إعداد حل الكولاجين نوع الخامس العمل. وزن الكولاجين نوع الخامس وتذوب مع العازلة D-هانك إلى تركيز نهائي من 1 ملغ / مل، تصفية باستخدام وحدة تصفية 0.22 ميكرومتر المحاقن يحركها وحقنة 60 مل وprecool في الجليد. مطلوب حجم 5 مل لكل متلقي من المانحين.
- القتل الر....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يتم إدخال إجراءين في هذا البروتوكول: إعداد الجزر المورين وزرع الجزر في موقع ISWAT. في الإجراء الأول ، بعد التجانب والهضم مع محلول الكولاجين من النوع الخامس ، والتنقية باستخدام Histopaque-1119 و Histopaque-1077 وخطوة إضافية لانتقاء اليد ، ستكون الجزر التورينة المعزولة نقية بما فيه الكفاية للزرع (كما هو موضح في الشكل 1)وسيتم استخدام الجزر المعزولة التي لديها قابلية صلاحية عالية للزرع (كما هو موضح في الشكل 2). في الإجراء الثاني ، يكون تحريض مرض السكري مع مادة STZ ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
زرع البنكرياس الجسّة هو علاج واعد لعلاج T1DM. يتأثر تأثير هذا العلاج بالعديد من العوامل واختيار موقع مثالي لزرع الزلاق أمر مهم للغاية. يجب أن يكون الموقع التشريحي المثالي لزرع الجزلات الخصائص التالية: إمكانية الوصول إلى عمليات الزرع البسيطة والخزعة وإجراءات استرجاع الكسب غير المشروع؛ انخفاض المضاعفات؛ ارتفاع معدل النجاح في السيطرة على السكر في الدم؛ والبقاء على قيد الحياة على المدى الطويل من الطعوم الجزيرة15،16.
وصف فريقنا سابقًا بروتو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ولا يبلغ المؤلفون عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من خلال منح من البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2017YFC1103704) صناديق خاصة لبناء مستشفيات عالية المستوى في مقاطعة قوانغدونغ (2019)، مشروع سانمينغ للطب في شنتشن (SZSM201412020)، صندوق المستوى العالي بناء الانضباط الطبي في شنتشن (2016031638)، مؤسسة شنتشن للعلوم والتكنولوجيا (JCJY20160229204849975، GJHZ20170314171357556)، مؤسسة شنتشن للجنة الصحة وتنظيم الأسرة (SZXJ2017021SZXJ2018059)، طبي مؤسسة البحث العلمي في مقاطعة قوانغدونغ الصينية (A2019218)، المؤسسة الصينية لعلوم ما بعد الدكتوراه (2018M633218).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.22 & m وحدة التصفية التي تعمل بالحقنة | Merck Millipore | SLHV033RB | |
| أنبوب الطرد المركزي 1.5 مل | Axygen | MCT-150-C | |
| 5 مل ماصة باستور | JingAn البيولوجية ، الصين | J00085 | |
| 5 مل حقنة | Szboon ، الصين | 20170829 | |
| 50 مل أنبوب مخروطي | Corning | 430829 | |
| 5-0 خياطة | جراحية sh-Jinhuan ، الصين | CR537 | |
| 60 مل حقنة | Szboon ، الصين | 20170623 | |
| 75٪ إيثانول | LIRCON ، الصين | 9180527 | |
| Alexa Fluor 488 حمار مضاد للفأر IgG (H + L) | Invitrogen | A21202 | التخفيف (1: 200) |
| الأجسام المضادة للجلوكاجون المضادة للفأر | Abcam | ab10988 | التخفيف (1: 100) |
| خلية الأجسام المضادة للأنسولين المضادة للفأر | تقنية الإشارات | 3014s | التخفيف (1:100) |
| إبرة التروية غير الحادة | Oloey ، الصين | 005 | 32G ، BSA Meilune |
| الأصفر ، الصين | MB4219 | ||
| C57BL / 6 | مركز الفئران الطبية للحيوانات بمقاطعة | 8 ~ 10 أسابيع | |
| طبق ثقافة الخلية | BIOFIL ، الصين | TCD000100 | عام ، غير معالج ، قطر 87.8 مم |
| جهاز طرد مركزي | Thermo Scientific | ST16R | |
| سيفالوسبورين | لوكانج الطبية ، الصين | 150303 | |
| CMRL-1066 | Sigma-Aldrich | C0422 | |
| Codos Pet Clipper | Szcodos ، الصين | CP-8000 | |
| كولاجيناز النوع الخامس | Sigma | C9262 | |
| DAPI | Thermo Fisher | D1306 | |
| العازلة D-hank | Coolaber ، الصين | PM5140-10 | |
| dithizone | Sigma-Aldrich | D5130 | |
| Dnase I | Sigma-Aldrich | D4263 | |
| وسائط تلطيخ الإيوسين | Beyotime Biotech ، الصين | C0109 | |
| FBS | GE Healthcare Life Sciences | SH30084 | |
| ثنائي أسيتات الفلوريسين (FDA) | ثيرمو فيشر | F1303 | |
| مجهر الفلورسنت | Leica | DMIL | |
| هلام تحميل نصائح الماصة | Corning | CLS4884 | |
| HBSS | Coolaber ، الصين | PM5150-10 | |
| وسائط تلطيخ الهيماتوكسيلين | تقنية إشارات الخلية | 14166S | |
| HISTOPAQUE-1077 | Sigma-Aldrich | RNBG0522 | |
| HISTOPAQUE-1119 | Sigma-Aldrich | RNBG0536 | |
| Hydrogel | BD Biosciences | 356234 | مصفوفة غشاء الطابق |
| السفلي Iodophor | LIRCON ، الصين | 5190313 | |
| طبق ثقافي محكم | الغلق DVS ، الصين | AN-5058548 | زجاجي عصامي الصنع مرشوش بشريط |
| لاصق طبي | أسود Cofoe ، الصين | K12001 | |
| الملقط الدقيق غير الغازي | RWD Life Science | F11033-11 و F12016-15 | |
| بلمسة واحدة فائقة السرعة نظام مراقبة نسبة الجلوكوز في الدم الأساسي | جونسون آند جونسون | 33391713 | |
| مقص العيون | RWD Life Science | S12012-12 و S11001-08 | |
| P / S (البنسلين / الستربتومايسين) | Gibco | 15140-122 | |
| البنتوباربيتال الصوديوم | سيجما ألدريتش | P-010 | |
| بروبيديوم يوديد | سيجما ألدريتش | P4864 | |
| STZ (الستربتوزوتوسين) | سيجما ألدريتش | S0130 | |
| شريط اختبار | GenUltimate | 100-50 | |
| TRITC الماعز المترافق المضاد للأرانب IgG (H + L) | proteintech | SA00007-2 | التخفيف (1: 200) |
| المشبك الوعائي | RWD علوم الحياة | R31006-04 |
المراجع
- Cho, N. H., et al. IDF Diabetes Atlas: Global estimates of diabetes prevalence for 2017 and projections for 2045. Diabetes Research and Clinical Practice. 138, 271-281 (2018).
- Shapiro, A. M., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
