וחזר אורוקנה אל בעכברים
Summary
המטרה של מאמר זה היא לתאר שיטה מעודנת של צנרור העכבר המעבדה. השיטה אינה פולשנית, ולכן אידיאלית למחקרים הדורשים ניטור סדרתי של תפקודי הנשימה ו/או הערכת טיפולים בריאה.
Abstract
הספרות מתארת מספר שיטות לצנרור העכבר המחייב הדמיה של הגלוטיס דרך חלל הפה או החתך בצוואר הגחוני לאישור ישיר של צינורית המיקום בקנה הנשימה. הקושי היחסי או טראומת הרקמה הנגרמת לנושא על ידי הליכים כאלה יכול להיות מכשול ליכולת של חוקר לבצע לימודי אורך. מאמר זה ממחיש טכניקה שבה מניפולציה פיזית של העכבר בעקבות השימוש דפילציה כדי להסיר שיער מפני הצוואר הגחוני היתרי ויזואליזציה של קנה הנשימה עבור צנרור הקנה מידה ללא קשר למידת העור פיגמנטציה. שיטה זו אינה מזיק לנושא ומושגת בקלות בהבנה מוגבלת של אנטומיה מורבית. גישה מעודנת זו מקלה על צנרור חוזר, אשר עשוי להיות נחוץ לניטור ההתקדמות של המחלה או החוסר הטיפול בטיפולים. שימוש בשיטה זו עלול לגרום לירידה של מספר בעלי החיים והמיומנות הטכנית נדרש למדוד את תפקוד הריאות בדגמי העכבר של מחלת הנשימה.
Introduction
עכבר המעבדה הוא מודל נפוץ בעלי חיים למחלת הנשימה האנושית. לפיכך, ישנן מספר שיטות שפורסמו עבור צנרור העכבר לצורך הן החוסר של טיפולים ומדידה של מכניקת הנשימה. רוב ההליכים המתוארים דורשים ויזואליזציה של glottis דרך חלל הפה עם ציוד מיוחד כגון לרינגוסקופ או מקור האור סיבים אופטיים1,2,3,4,5,6,7. עם זאת, זה יכול להיות קשה כאשר צינורית גדולה יחסית נדרש, כפי שהוא יכול לטשטש את ההשקפה של החוקר. לימוזין ואח ‘8 התייחסו דאגה זו עם שיטה של צנרור שבו חתך עורית קטן מורכב לאורך קו האמצע של הצוואר הגחוני המאפשר ויזואליזציה של קנה הנשימה. בעקבות ההליך, החתך סגור עם דבק רקמה.
למחקרים הדורשים הזנה חוזרת ונשנית של האתר, מחייב ביתור וסגירה רצופים של שולי העור ופגיעת רקמות בצוואר הגחון. מטרת הגישה ויזואליזציה של קנה הנשימה הטרנסעורית לצנרור אוראלי היא לספק טכניקה מעודנת, לא פולשנית המתאימה במיוחד למחקרי צנרור חוזרות ולאירועי צנרור בודדים בעכברים.
Protocol
Representative Results
Discussion
צנרור באמצעות טכניקת ההדמיה הטרנסעורית מציעה גישה מעודנת לשיטת חתך העור הסטנדרטית. בתשומת לב מיוחדת למספר שלבים מרכזיים, ניתן להשיג צנרור בקלות ובמהירות. החיה חייבת להיות ממוקם הגון בתוך שכיבה על פלטפורמת הצנרור עם העכבר מאובטח בנסיגה עדינה. זה יהיה להאריך את בעל החיים ליישור אנכי מיקום ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים מודים לוצ Rosas, לורן דוליטל, ליסה ג’וזף ולינדזי פרגוסון על הסיוע הטכני שלהם ועל משאבי בעלי חיים מעבדה באוניברסיטה עבור תמיכה בבעלי חיים שלהם. עבודה זו ממומנת על ידי NIH T35OD010977 ו-R01-HL102469.
Materials
| 18Gx1 1/4" intravenous catheter, Safelet | Fisher Scientific | #14-841-14 | Cannula for intubation |
| 70% ethanol, 10L | Fisher Scientific | 25467025 | Cleaning cannula |
| Abrasive paper (sandpaper) | Porter-Cable | 74001201 | Cannula preparation |
| AnaSed (xylazine sterile solution) injection (100 mg/ml) | Akorn Animal Health | NDC# 59399-111-50 | Anesthesia |
| Blue labeling tape (0.5 in x 14 yds) | Fisher Scientific | 15966 | Restraint on intubation platform |
| Braided silk suture without needle, nonsterile, (3-0) | Henry Schein | Item #1007842 | Intubation platform |
| Deltaphase Isothermal Pad | Braintree Scientific | 39DP | Mouse thermoregulation and recovery |
| Deltaphase Operating Board | Braintree Scientific | 39OP | Mouse recovery (prior to extubation) |
| Distilled water | ThermoFisher | 15230253 | Cleaning mouse following depilation |
| Eye Scissors, angled, sharp/sharp | Harvard Apparatus | 72-8437 | Cannula preparation |
| FlexiVent (FX Module 2) | Scireq | N/A | Record lung function data (not required to perform procedure, used in this study to validate procedure) |
| Gauze sponges | Fisher scientific | 13-761-52 | Hair removal |
| Heavy-Duty 3" 3-Ring View Binders | Staples | 24690CT | Intubation platform |
| Instat Software | Graphpad | N/A | Statistical analysis software |
| Insulin syringe (0.5 cc, U100) | Fisher Scientific | 329461 | Anesthesia administration |
| Ketamine HCl Injection, USP (100 mg/ml) | Llyod Laoratories | List No. 4871 | Anesthesia |
| Lung inflation bulb | Harvard Apparatus | 72-9083 | Confirm cannula placement |
| Micro Forceps, Curved, Smooth | Harvard Apparatus | 72-0445 | Retract tongue and create tension on neck for cannula visualization |
| Nair (hair removal lotion), 9 oz bottle | Church & Dwight | 42010440 | Hair removal |
| Sterile saline (0.9%), 10 ml | Fisher Scientific | NC9054335 | Anesthesia, cleaning skin following hair removal |
References
- Spoelstra, E. N., et al. A novel and simple method for endotracheal intubation of mice. Laboratory Animals. 41 (1), 128-135 (2007).
- Rivera, B., Miller, S. R., Brown, E. M., Price, R. E. A Novel Method for Endotracheal Intubation of Mice and Rats Used in Imaging Studies. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 44 (2), 52-55 (2005).
- Sparrowe, J., Jimenez, M., Rullas, J., Martinez, A. E., Ferrer, S. Refined Intratracheal Intubation Technique in the Mouse, Complete Protocol Description for Lower Airway Models. Global Journal of Animal Scientific Research. 3 (2), 363-369 (2015).
- Deyo, D. J., Wei, J. A Novel Method of Intubation and Ventilation in Mice. Anesthesia & Analgesia. 88 (2), 179 (1999).
- Vergari, A., et al. A new method of orotracheal intubation in mice. European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 8 (3), 103-106 (2004).
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. Journal of Applied Physiology. 87 (6), 2362-2365 (1999).
- Das, S., MacDonald, K., Chang, H. S., Mitzner, W. A Simple Method of Mouse Lung Intubation. Journal of Visualized Experiments. (73), e50318 (2013).
- Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research. Journal of Visualized Experiments. (102), e52964 (2015).
- Qin, W., Baran, U., Wang, W. Lymphatic response to depilation-induced inflammation assessed with label-free optical lymphangiography. Lasers in Surgery and Medicine. 47 (8), 669-676 (2015).
- McGovern, T. K., Robichaud, A., Fereydoonzad, L., Schuessler, T. F., Martin, J. G. Evaluation of Respiratory System Mechanics in Mice using the Forced Oscillation Technique. Journal of Visualized Experiments. (75), e50107 (2013).
