Intubazione orotrachea ripetuta nei topi
Summary
L’obiettivo di questo articolo è quello di descrivere un metodo raffinato di intubazione del topo di laboratorio. Il metodo non è invasivo e, quindi, ideale per studi che richiedono il monitoraggio seriale della funzione respiratoria e/o l’instillazione di trattamenti nel polmone.
Abstract
La letteratura descrive diversi metodi per l’intubazione del topo che richiedono la visualizzazione della glottide attraverso la cavità orale o l’incisione nel collo ventrale per la conferma diretta del posizionamento della cannula nella trachea. La difficoltà relativa o il trauma tissutale indotto al soggetto da tali procedure può essere un ostacolo alla capacità di un ricercatore di eseguire studi longitudinali. Questo articolo illustra una tecnica in cui la manipolazione fisica del topo dopo l’uso di un depilatorio per rimuovere i capelli dal collo ventrale consente la visualizzazione transcutanea della trachea per l’intubazione orotracheale indipendentemente dal grado di pelle Pigmentazione. Questo metodo è innocuo per il soggetto e facilmente raggiungibile con una comprensione limitata dell’anatomia murina. Questo approccio raffinato facilita l’intubazione ripetuta, che può essere necessaria per monitorare la progressione della malattia o l’instillazione dei trattamenti. L’utilizzo di questo metodo può comportare una riduzione del numero di animali e abilità tecniche necessarie per misurare la funzione polmonare nei modelli murini delle malattie respiratorie.
Introduction
Il topo di laboratorio è un modello animale comune per le malattie respiratorie umane. Così, ci sono diversi metodi pubblicati per l’intubazione del topo allo scopo sia di instillazione dei trattamenti e misurazione della meccanica respiratoria. La maggior parte delle procedure descritte richiede la visualizzazione della glottide attraverso la cavità orale con attrezzature specializzate come un largoscopio o una fonte di luce in fibraottica 1,2,3,4,5,6,7. Tuttavia, questo può essere difficile quando è necessaria una cannula relativamente grande, in quanto può oscurare la visione del ricercatore. Limjunyawong et al.8 hanno affrontato questa preoccupazione con un metodo di intubazione in cui una piccola incisione cutanea viene fatta lungo la linea mediana del collo ventrale che consente la visualizzazione della trachea. Dopo la procedura, l’incisione è chiusa con adesivo tissutale.
Per gli studi che richiedono frequenti intubazioni ripetute, incisione e chiusura successive di questo sito richiede il debridement dei margini della pelle e il trauma tissutale al collo ventrale. Lo scopo dell’approccio di visualizzazione tracheale transcutanea all’intubazione orale è quello di fornire una tecnica raffinata e non invasiva specificamente adatta per ripetuti studi di intubazione, nonché singoli eventi di intubazione nei topi.
Protocol
Representative Results
Discussion
L’intubazione mediante la tecnica di visualizzazione tracheale transcutanea offre un approccio raffinato al metodo standard di incisione cutanea. Con particolare attenzione a diversi passaggi chiave, l’intubazione può essere facilmente e rapidamente raggiunta. L’animale deve essere posizionato esattamente in recumbency dorsale sulla piattaforma di intubazione con il mouse fissato in delicata retrazione. Questo estenderà l’animale in allineamento verticale e corretto posizionamento per l’intubazione. Inoltre, la crema d…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli autori ringraziano Lucia Rosas, Lauren Doolittle, Lisa Joseph e Lindsey Ferguson per la loro assistenza tecnica e il Laboratorio universitario Animal Resources per il loro supporto alla cura degli animali. Questo lavoro è finanziato da NIH T35OD010977 e R01-HL102469.
Materials
| 18Gx1 1/4" intravenous catheter, Safelet | Fisher Scientific | #14-841-14 | Cannula for intubation |
| 70% ethanol, 10L | Fisher Scientific | 25467025 | Cleaning cannula |
| Abrasive paper (sandpaper) | Porter-Cable | 74001201 | Cannula preparation |
| AnaSed (xylazine sterile solution) injection (100 mg/ml) | Akorn Animal Health | NDC# 59399-111-50 | Anesthesia |
| Blue labeling tape (0.5 in x 14 yds) | Fisher Scientific | 15966 | Restraint on intubation platform |
| Braided silk suture without needle, nonsterile, (3-0) | Henry Schein | Item #1007842 | Intubation platform |
| Deltaphase Isothermal Pad | Braintree Scientific | 39DP | Mouse thermoregulation and recovery |
| Deltaphase Operating Board | Braintree Scientific | 39OP | Mouse recovery (prior to extubation) |
| Distilled water | ThermoFisher | 15230253 | Cleaning mouse following depilation |
| Eye Scissors, angled, sharp/sharp | Harvard Apparatus | 72-8437 | Cannula preparation |
| FlexiVent (FX Module 2) | Scireq | N/A | Record lung function data (not required to perform procedure, used in this study to validate procedure) |
| Gauze sponges | Fisher scientific | 13-761-52 | Hair removal |
| Heavy-Duty 3" 3-Ring View Binders | Staples | 24690CT | Intubation platform |
| Instat Software | Graphpad | N/A | Statistical analysis software |
| Insulin syringe (0.5 cc, U100) | Fisher Scientific | 329461 | Anesthesia administration |
| Ketamine HCl Injection, USP (100 mg/ml) | Llyod Laoratories | List No. 4871 | Anesthesia |
| Lung inflation bulb | Harvard Apparatus | 72-9083 | Confirm cannula placement |
| Micro Forceps, Curved, Smooth | Harvard Apparatus | 72-0445 | Retract tongue and create tension on neck for cannula visualization |
| Nair (hair removal lotion), 9 oz bottle | Church & Dwight | 42010440 | Hair removal |
| Sterile saline (0.9%), 10 ml | Fisher Scientific | NC9054335 | Anesthesia, cleaning skin following hair removal |
References
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