Summary
Her præsenterer vi en metode til at rense fibroblaster og Schwann celler fra sensoriske og motoriske nerver in vitro.
Abstract
De vigtigste celler i det perifere nervesystem er Schwann celler (SCs) og fibroblaster. Begge disse celler tydeligt udtrykke sensoriske og motoriske fænotyper involveret i forskellige mønstre af neurotrofisk faktor genekspression og andre biologiske processer, der påvirker nerve regenerering. Denne undersøgelse har etableret en protokol for at opnå højt rensede rotte sensoriske og motor SCs og fibroblaster hurtigere. Den ventrale rod (motornerven) og dorsale rod (sensorisk nerve) af neonatal rotter (7-dage gamle) blev dissocieret og cellerne blev dyrket i 4-5 dage, efterfulgt af isolering af sensoriske og motoriske fibroblaster og SCs ved at kombinere differentialfordøjelse og differentieret overholdelse metoder sekventielt. Resultaterne af immunocytokemi- og flowcytometrianalyser viste, at renheden af de sensoriske og motoriske SCs og fibroblaster var >90%. Denne protokol kan bruges til at opnå et stort antal sensoriske og motoriske fibroblaster / SCs hurtigere, bidrager til udforskning af sensoriske og motoriske nerve regenerering.
Introduction
I det perifere nervesystem består nervefibrene hovedsageligt af axoner, Schwann-celler (SCs) og fibroblaster og indeholder også et lille antal makrofager, mikrovaskulære endotelceller og immunceller1. SCs wrap axoner i en 1:1 forholdet og er omgivet af et bindevæv lag kaldet endoneurium. Axoner er derefter bundtet sammen til at danne grupper kaldet fascicles, og hver fascicle er pakket ind i et bindevæv lag kendt som perineurium. Endelig er hele nervefiberen pakket ind i et lag af bindevæv, der betegnes som epineurium. I endoneurium, hele cellepopulationen består af 48% SCs, og en betydelig del af de resterende celler indebærer fibroblaster2. Desuden er fibroblaster vigtige komponenter i alle nerverum, herunder epineurium, perineurium, og endoneurium3. Mange undersøgelser har vist, at SC og fibroblaster spiller en afgørende rolle i regenereringsprocessen efter perifere nerveskader4,5,6. Efter transection af den perifere nerve, den perineuriale fibroblaster regulere celle sortering via ephrin-B/EphB2 signalering vej mellem SCs og fibroblaster, yderligere vejlede axonal genvækst gennem sår5. Perifere nerve fibroblaster udskiller tenascin-C-protein og forbedrer migrationen af SCs under nerveregenerering gennem β1-integrinsignalvej7. Men, SCs og fibroblaster, der anvendes i ovennævnte undersøgelser blev afledt af iskiasnerven, som omfatter både sensoriske og motoriske nerver.
I det perifere nervesystem, de sensoriske nerver (afferente nerver) foretage sensoriske signalering fra receptorer til centralnervesystemet (CNS), mens de motoriske nerver (efferent nerver) føre signaler fra CNS til musklerne. Tidligere undersøgelser har vist, at SC'er udtrykker forskellige motoriske og sensoriske fænotyper og udskiller neurotrofiske faktorer til støtte for perifer nerveregenerering8,9. Ifølge en nylig undersøgelse, fibroblaster også udtrykke forskellige motoriske og sensoriske fænotyper og påvirke migration af SCs10. Således udforskning af forskelle mellem motoriske og sensoriske nerve fibroblaster / SCs giver os mulighed for at studere de komplicerede underliggende molekylære mekanismer perifere nerve specifik regenerering.
På nuværende tidspunkt er der mange måder at rense SCs og fibroblaster, herunder anvendelse af antimitotiske midler, antistof-medieret cytolyse11,,12,sekventiel immunopanning13 og laminin substrat14. Men alle de ovennævnte metoder fjerne fibroblaster og bevare kun SCs. Højt rensede SCs og fibroblaster kan opnås ved flow cytometri sortering teknologi15,men det er en tidskrævende og dyrt teknik. Derfor, i denne undersøgelse, en simpel differentiale fordøjelse og differentieret overholdelse metode til rensning og isolere sensoriske og motoriske nerve fibroblaster og SCs blev udviklet for at opnå et stort antal fibroblaster og SCs hurtigere.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Denne undersøgelse blev gennemført i overensstemmelse med De Europæiske Råds retningslinjer for pasning af dyr på Nantong Universitet. Alle procedurer, herunder de dyreemner blev etisk godkendt af Administration Committee of Experimental Animals, Jiangsu-provinsen, Kina.
1. Isolering og kultur af motoriske og sensoriske nerve fibroblaster og SCs
- Brug syv dage gamle Sprague-Dawley (SD) rotter (n = 4) fra Experimental Animal Center i Nantong University of China. Placer rotterne i en tank, der indeholder 5% isofluran i 2-3 minutter, lad dyrene ånde langsomt og har ingen selvstændig aktivitet, og derefter desinficer ved hjælp af 75% ethanol før halshugning.
- Brug en saks til at skære baghuden i ca 3 cm og fjern rygsøjlen. Åbn rygmarvskanalen omhyggeligt for at eksponere rygmarven.
- Rygmarven fastholdes i en 60 mm petriskål med 2-3 ml iskold D-Hanks' afbalancerede saltopløsning (HBSS).
- Baseret på den anatomiske struktur, punktafgifter den ventrale rod (motornerven) og derefter dorsale rod (sensorisk nerve) under en dissekere mikroskop. Derefter placeres dem i en iskold D-Hanks' afbalancerede saltopløsning (HBSS).
- Efter fjernelse af HBSS skæres nerverne i 3-5 mm stykker med en saks og fordøjes med 1 ml 0,25% (w/v) trypsin ved 37 °C i 18-20 min. Dernæst supplere med 3-4 ml DMEM indeholder 10% føtal kvæg serum (FBS) for at stoppe fordøjelsen.
- Pipette blandingen op og ned forsigtigt omkring 10 gange og centrifuge ved 800 x g i 5 min. Derefter kasseres supernatanten, og bundfaldet suspenderes i 2-3 ml DMEM suppleret med 10% FBS.
- Cellesuspensionen filtreres ved hjælp af et 400-maskefilter, og cellerne podes derefter i 60 mm petriskål og dyrkning ved 37 °C ved tilstedeværelse af 5% CO2. Efter 4-5 dages dyrkning, isolere passage 0 (p0) fibroblaster og SCs efter at have nået 90% sammenløb.
- Isolering og kultur af SCs (Figur 1)
- Vask cellerne én gang med 1x PBS. Der tilsættes 1 ml 0,25% (w/v) trypsin (37 °C) pr. 60 mm petriskål for at fordøje cellerne i 8-10 s ved stuetemperatur. Derefter tilsættes 3 ml DMEM suppleret med 10% FBS for at stoppe fordøjelsen.
- Pust forsigtigt blandingen for at løsne SCs med en pipette. Derefter indsamles og centrifugeres SCs på 800 x g i 5 min.
- Supernatanten kasseres, og bundfaldet suspenderes i 3 ml DMEM med 10% FBS, 1% penicillin/streptomycin, 2 μM forskolin og 10 ng/ml HRG, og derefter podes cellerne i ubestrøget 60 mm petriskål. Efter dyrkning ved 37 °C i 30-45 min, fibroblaster (et par antal fibroblaster er fordøjet med SCs) tillægger bunden af skålen.
- Supernatanten (herunder SC'erne) overføres til en anden poly-L-lysin (PLL)-belagt mediumskål og -kultur ved 37 °C i 2 dage.
- Isolation og dyrkning af fibroblaster (figur 1)
- Når SC'erne er fjernet (som vist i trin 1.8), vaskes de resterende fibroblaster i skålene med 1x PBS, og der tilsættes derefter 1 ml 0,25% (w/v) trypsin for at fordøje fibroblasterne i 2 min ved 37 °C.
- Tilføj DMEM suppleret med 10% FBS at afslutte fordøjelsen. Blæse fibroblaster ved hjælp af en pipette, og derefter indsamle og centrifuge dem på 800 x g i 5 min.
- Supernatanten kasseres, bundfaldet suspenderes med 2 ml DMEM, der indeholder 10% FBS, og derefter podes cellerne i ubestrøget 60 mm petriskål. Fibroblasterne efter dyrkning i 30-45 min ved 37 °C fastgøres til bunden af skålen. Kassér supernatanten (herunder et par antal SCs). Derefter tilsættes 3 ml DMEM suppleret med 10% FBS i fibroblaster fad og kultur ved 37 °C i 2 dage.
- Passage af p1 celler, indtil de nåede 90% sammenløb. Rens dem derefter ved differentialfordøjelse og differentialhændelse igen som beskrevet i punkt 1.8 og 1.9.
- Bruderne p2 fibroblaster og SCs efter dyrkning i 2 dage, og derefter indsamle cellerne, tælle og podes i 1 x10 5 numre / godt på PLL-belagte dias til immunocytokemi (ICC).
2. ICC til identifikation af cellerenhed
- Cellerne dyrkes i 24 timer ved 37 °C, og ICC-farvningen udføres efter differentialfordøjelse og differentialtætning af motor- og sensoriske fibroblaster og SC'er.
- Motor- og sensoriske fibroblaster og SC'er vaskes med 1x PBS og fastgør dem i 200 μL/brønd på 4% paraformaldehyd (pH 7,4) i 18 minutter ved stuetemperatur.
- Prøve-SC'er med blokerende buffer (0,1% Triton X-100 i 0,01 M PBS indeholdende 5% gedeserum) og bloker prøven fibroblaster med blokerende buffer (0,01 M PBS indeholdende 5% gedeserum) i 45 min ved 37 °C efter vask af dem med PBS tre gange.
- Blokeringsbufferen fjernes og inkuberes med følgende primære antistoffer: musemonoklonale anti-CD90-antistoffer (en specifik markør for fibroblaster) (1:1000) for fibroblaster og mus anti-S100-antistof (en specifik markør for SC'er) (1:400) for SC'er ved 4 °C natten over.
- De primære antistoffer kasseres med PBS tre gange og inkuberes med følgende sekundære antistoffer: Alexa Fluor 594 gedeantimus-IgG (1:400) for fibroblaster og 488-konjugerede gedantimus-IgG (1:400) for SC'er ved stuetemperatur i 1,5 timer.
- Prøverne vaskes tre gange med PBS, og kernerne plettes med 5 μg/ml Hoechst 33342 farvestof i 10 minutter ved stuetemperatur. Prøven vaskes med 1x PBS tre gange, og de monteres med monteringsmediet (20 μL/slide) på glasrutsjebanen.
- Tag cellefotografierne ved konfokal laserscanning mikroskop i tre tilfældige felter for hver brønd. Vurder det samlede antal kerner og CD90-positive celler, S100-positive celler, og beregn derefter procentdelen af cd90-positive celler og S100-positive celler. Udfør farvningen i tre eksemplarer.
3. Flow cytometri analyse (FCA) til identifikation af celle renhed
- Vurder renheden af motoriske og sensoriske fibroblaster og SCs som beskrevet tidligere af FCA16. Kort, fordøje p2 motor og sensorisk fibroblaster og SCs med 0,25% (w / v) trypsin, opslæmme cellen pellets og inkubere dem i fiksering medium ved stuetemperatur i 15 min.
- Cellerne inkuberes med permeabiliseringsmedium og sonde ved hjælp af musemonoklonalt anti-CD90-antistof (0,1 μg/106 celler, 200 μL) for fibroblaster og mus anti-S100-antistof (1:400, 200 μL) for SC'er ved stuetemperatur i henholdsvis 30 min.
- Inkuber cellerne med 488-konjugerede ged anti-mus IgG i 30 min. Brug FACS kaliber til at udføre flow cytometri, og analysere data ved hjælp af Cell Quest software.
- Cellerne kun med 488-konjugerede ged anti-mus IgG (fibroblasts Group) og mus IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype kontrol (SCs gruppe), der tjener som negativ kontrol.
4. Statistisk analyse
- Præsentere alle data som middel ± SEM. Vurder statistiske forskelle i dataene ved ikke-parrede t-testved hjælp af GraphPad Prism 6.0. Angiv statistisk signifikans til p<0,05. Udfør alle analyser i tre eksemplarer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Lys mikroskopisk observation
SCs og fibroblaster er de to vigtigste cellepopulationer opnået i den primære cellekultur fra nervevæv. Efter inokulering i 1 time, de fleste af cellerne klæbet til bunden af skålen, og cellen morfologi ændret fra runde til ovale. Efter dyrkning i 24 timer udviste SC'erne en bipolar eller tripolar morfologi, og længden af disse varierede fra 100 til 200 μm. Efter 48 timer forekom aggregering og spredning af celler, hvor mange celler blev samlet i en end-to-end, skulder-til-skulder, boblebad eller hegn-lignende arrangement. De andre fibroblaster, der er større end SCs udstillet flad og uregelmæssig form. Med lang kulturtid blev antallet af SCs og fibroblaster gradvist øget. SC'erne var grupperet mellem rum af fibroblaster eller placeret på overfladen af fibroblaster (Figur 2A, 2B). Cellerne udsættes for differentialfordøjelse og differentialhæmning for at isolere fibroblaster og SCs. Efter fordøjelsen i 8-10 s, SCs syntes som runde og er blæst ud let, mens fibroblaster er flade og fastgjort til bunden af skålen (Figur 2C, 2D). Efter differentialfordøjelse og differentialhæmning to gange blev de primære dyrkede SCs og fibroblaster isoleret, og den typiske cellemorfologi af motor- og sensoriske SCs og fibroblaster blev observeret (Figur 2E-2H).
ICC's vurdering af renheden af motoriske og sensoriske fibroblaster og SC'er af ICC
De sensoriske og motoriske fibroblaster blev mærket ved hjælp af CD90 og visualiseret ved hjælp af en konfokal laser scanning mikroskop (Figur 3A, 3D). Hoechst 33342 farvestof blev brugt til at mærke cellekernen (Figur 3B, 3E). De fusionerede billeder af fibroblastimmunsækning og nuklearfarvning (figur 3C, 3F) viste, at 92,51 % og 92,64 % af cd90- og Hoechst-dekomærkede celler var til stede i henholdsvis motor- og sensoriske fibroblaster ( figur3G).
De sensoriske og motoriske SCs blev mærket ved hjælp af S100 og visualiseret ved hjælp af en konfokal laser scanning mikroskop (Figur 4A, 4D), hhv. Hoechst 33342 farvestof blev brugt til at mærke cellekernen (Figur 4B, 4E). De fusionerede billeder af SC-immunfarvning og nuklearfarvning (figur 4C, 4F) viste, at der var 91,61 % og 93,56 % af S100- og Hoechst-komærkede celler i henholdsvis motoriske og sensoriske SC'er (figur 4G).
Evaluering af renheden af sensoriske og motoriske fibroblaster og SCs af FCA
Efter differentialfordøjelse og differentialhændet to gange blev de primære dyrkede fibroblaster og SC'er isoleret. Som vist i figur 5Avar næsten >90 % af cellerne i den motoriske og sensoriske Fb-kultur fibroblaster, som blev angivet med M2, mens de resterende <10% (angivet ved M1) var SCs. Figur 5B viste, at >92% af alle celler i motor- og sensorisk SC-kultur var SC'er, hvilket blev angivet med M2, mens de resterende <8% (angivet ved M1) var fibroblaster.
Figur 1: Det skematiske diagram, der viser adskillelses- og rensningstrinene for sensoriske og motoriske fibroblaster og SCs. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Mikrograf med fasekontrast, der viser cellemorfologien (A) primær dyrket motor og (B) sensoriske fibroblaster og SC'er. Efter fordøjelsen i 10 s, cellen morfologi af SCs var rund (som angivet af pilene), mens fibroblaster forblev flad og var fastgjort i bunden af skålen (C: Motor Fibroblasts og SCs; D: Sensoriske fibroblaster og SCs). Efter differentialfordøjelse og differentialebæring blev SCs og Fibroblasts isoleret, og den typiske cellemorfologi af motoriske og sensoriske fibroblaster(E: Motor Fibroblaster; F: Sensoriske fibroblaster) og SCs (G: Motor SCs; H: Sensoriske SCs) blev vist. (Vægtstang: 50 μm). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: ICC's identifikation af motor- og sensoriske fibroblaster. Fluorescens mikroskopiske fotografier af dyrket motor (A-C) og sensoriske fibroblaster (D-F), der viser immunstaining med antistoffer mod CD90 (A og D, rød), Hoechst 33342 nuklearfarvning (B og E, blå), og sammenlægning af både farvning (C og F). (G) Statistisk analyse af renheden af dyrkede fibroblaster. (Vægtstang: 100 μm). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: ICC's identifikation af renheden af motoriske og sensoriske SC'er. Fluorescens mikroskopiske fotografier af dyrket motor (A-C) og sensoriske SCs (D-F) viser immunstaining med antistoffer mod S100 (A og D, rød), Hoechst 33342 nuklearfarvning (B og E, blå), og sammenlægning af både farvning (C og F). (G) Statistisk analyse af de dyrkede SC'ers renhed (målestok: 100 μm). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: Identifikation af renheden af sensoriske og motoriske fibroblaster og SCs af FCA. FCA-grafen, der viser procentdelen af CD90-positive celler/S100-positive celler (M2) af dyrkede motoriske og sensoriske fibroblaster/SCs. Statistisk analyse af renheden af dyrkede fibroblaster (A) og SCs (B). Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De to store cellepopulationer af perifere nerver omfattede SCs og fibroblaster. De primært dyrkede fibroblaster og SCs kan præcist hjælpe med modellering af fibroblasternes og SCs's fysiologi under perifer nerveudvikling og regenerering. Undersøgelsen viste, at P7 rotte iskiasnerven celler indeholdt omkring 85% af S100-positive SCs, 13% af OX7-positive fibroblaster og kun 1,5% af OX42-positive makrofager13. Selv om antallet af fibroblaster er mindre end SCs, den oprindelige spredning sats af fibroblaster er hurtigere end scs. Derfor, Ara-C er den mest almindeligt anvendte antimitotiske middel til at fjerne fibroblaster i mange undersøgelser. Men, Ara-C er ikke specifik for cellmimose, og det kan også hæmme spredningen af SCs under kraftig fase af division. Med antistof-medieret cytolyse eller immunopanning metode, fibroblaster enten var tabt eller døde. Selvom flow cytomery sortering teknologi kan bruges til at opnå høj renhed fibroblaster og SCs på samme tid, det har brug for et stort antal celler, og cellen erhvervelse sats forblev lav. Så vidt vi ved, var dette den første undersøgelse, der viste rensningsmetoden for sensoriske og motoriske SCs og fibroblaster.
I denne undersøgelse, et stort antal sensoriske og motoriske fibroblaster og SCs blev opnået på samme tid ved at kombinere differentialfordøjelse samt differential overholdelse sekventielt, forårsager ingen skade på cellerne. Resultaterne af ICC farvning og FCA viste, at alle de sensoriske og motoriske SCs / fibroblaster var af høj renhed (>90%). Det kritiske trin i denne metode er at kontrollere tidspunktet for differentialfordøjelse. Hvis tiden er for kort, det gør SCs svært at frigøre, og hvis tiden er for lang, det forårsager nogle fibroblaster til at fordøje med SCs. I Weiss's undersøgelse, iskold Accutase bruges til at frigøre SCs fra fibroblaster, men det er dyrere end trypsin17. Differential fordøjelse med trypsin effektivt kan hjælpe med at adskille SCs og fibroblaster. Begrænsningen af denne protokol er, at det ikke er let at punktafgifter sensoriske og motoriske nerver fra neonatal rotter, som kræver mere praksis med dissekere mikroskop. Protokollen for dyrkning er meget nyttig til at studere de biologiske egenskaber af sensoriske og motoriske nerve fibroblaster og SCs, og for mekanismen for sensorisk og motorisk nerve regenerering eller fibroblaster og SCs transplantation for at fremme nerve regenerering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Denne undersøgelse blev støttet af Det Nationale Centrale Forsknings- og Udviklingsprogram i Kina (Grant No. 2017YFA0104703), National Natural Foundation of China (Grant No. 31500927).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG(H+L) | Life Technologies | A11005 | Dilution: 1:400 |
| CoraLite488-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L) | Proteintech | SA00013-1 | Dilution: 1:400 |
| Confocal laser scanning microscope | Leica Microsystems | TCS SP5 | |
| Cell Quest software | Becton Dickinson Biosciences | ||
| D-Hank's balanced salt solution | Gibco | 14170112 | |
| DMEM | Corning | 10-013-CV | |
| Dissecting microscope | Olympus | SZ2-ILST | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Gibco | 10099-141C | |
| Forskolin | Sigma | F6886-10MG | |
| Fluoroshield Mounting Medium | Abcam | ab104135 | |
| Fixation medium/Permeabilization medium | Multi Sciences (LIANKE) Biotech, Co., LTD | GAS005 | |
| Flow cytometry | Becton Dickinson Biosciences | FACS Calibur | |
| Mouse IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype Control | Abcam | ab106163 | Dilution: 1:400 |
| Mouse monoclonal anti-CD90 antibody | Abcam | ab225 | Dilution: 1:1000 for ICC, 0.1 µg for 106 cells for Flow Cyt |
| Mouse anti-S100 antibody | Abcam | ab212816 | Dilution: 1:400 |
| Polylysine (PLL) | Sigma | P4832 | |
| Recombinant Human NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain Protein | R&D Systems | 396-HB-050 | |
| 0.25% (w/v) trypsin | Gibco | 25200-072 |
References
- Stierli, S., et al. The regulation of the homeostasis and regeneration of peripheral nerve is distinct from the CNS and independent of a stem cell population. Development (The Company of Biologists). , (2018).
- Schubert, T., Friede, R. L. The role of endoneurial fibroblasts in myelin degradation. Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 40 (2), 134-154 (1981).
- Dreesmann, L., Mittnacht, U., Lietz, M., Schlosshauer, B. Nerve fibroblast impact on Schwann cell behavior. European Journal of Cell Biology. 88 (5), 285-300 (2009).
- Lavdas, A. A., et al. Schwann cells engineered to express the cell adhesion molecule L1 accelerate myelination and motor recovery after spinal cord injury. Experimental Neurology. 221 (1), 206-216 (2010).
- Parrinello, S., et al. EphB signaling directs peripheral nerve regeneration through Sox2-dependent Schwann cell sorting. Cell. 143 (1), 145-155 (2010).
- Benito, C., Davis, C. M., Gomez-Sanchez, J. A. STAT3 Controls the Long-Term Survival and Phenotype of Repair Schwann Cells during Nerve Regeneration. Journal of Neuroscience Research. 37 (16), 4255-4269 (2017).
- Zhang, Z. J., Jiang, B. C., Gao, Y. J. Chemokines in neuron-glial cell interaction and pathogenesis of neuropathic pain. Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (18), 3275-3291 (2017).
- Hoke, A., et al. Schwann cells express motor and sensory phenotypes that regulate axon regeneration. Journal of Neuroscience. 26 (38), 9646-9655 (2006).
- Brushart, T. M., et al. Schwann cell phenotype is regulated by axon modality and central-peripheral location, and persists in vitro. Experiment Neurology. 247, 272-281 (2013).
- He, Q., et al. Differential Gene Expression in Primary Cultured Sensory and Motor Nerve Fibroblasts. Frontiers in Neuroscience. 12, 1016 (2018).
- Weinstein, D. E., Wu, R. Chapter 3, Unit 17: Isolation and purification of primary Schwann cells. Current Protocols in Neuroscience. , (2001).
- Palomo Irigoyen, M., et al. Isolation and Purification of Primary Rodent Schwann Cells. Methods in Molecular Biology. 1791, 81-93 (2018).
- Cheng, L., Khan, M., Mudge, A. W. Calcitonin gene-related peptide promotes Schwann cell proliferation. Journal of Cell Biology. 129 (3), 789-796 (1995).
- Pannunzio, M. E., et al. A new method of selecting Schwann cells from adult mouse sciatic nerve. Journal of Neuroscience Methods. 149 (1), 74-81 (2005).
- Shen, M., Tang, W., Cao, Z., Cao, X., Ding, F. Isolation of rat Schwann cells based on cell sorting. Molecular Medicine Reports. 16 (2), 1747-1752 (2017).
- He, Q., Man, L., Ji, Y., Ding, F. Comparison in the biological characteristics between primary cultured sensory and motor Schwann cells. Neuroscience Letters. 521 (1), 57-61 (2012).
- Weiss, T., et al. Proteomics and transcriptomics of peripheral nerve tissue and cells unravel new aspects of the human Schwann cell repair phenotype. Glia. 64 (12), 2133-2153 (2016).
