Summary
Здесь мы представляем метод очищения фибробластов и клеток Шванн от сенсорных и моторных нервов in vitro.
Abstract
Основными клетками периферической нервной системы являются клетки Шванн (СК) и фибробласты. Обе эти клетки отчетливо выражают сенсорные и моторные фенотипы, участвующие в различных моделях экспрессии генов нейротрофического фактора и других биологических процессов, влияющих на регенерацию нервов. В настоящем исследовании установлен протокол для получения высокоочищенных крыс сенсорных и моторных ОВ и фибробластов быстрее. Вентральный корень (моторный нерв) и спинной корень (сенсорный нерв) неонатальных крыс (7-дней) были разобщены и клетки были культивируются в течение 4-5 дней, а затем изоляции сенсорных и моторных фибробластов и SC путем сочетания дифференциального пищеварения и дифференциальных методов последовательно. Результаты иммуноцитохимии и анализа цитометрии потока показали, что чистота сенсорных и моторных ОК и фибробластов составила 90%. Этот протокол может быть использован для получения большого количества сенсорных и моторных фибробластов / SCs быстрее, способствуя исследованию сенсорной и регенерации моторных нервов.
Introduction
В периферической нервной системе нервные волокна в основном состоят из аксонов, клеток Шванн (СК) и фибробластов, а также содержит небольшое количество макрофагов, микрососудистых эндотелиальных клеток и иммунных клеток1. SCs обернуть аксоны в соотношении 1:1 и заключены с помощью слоя соединительной ткани, называемого эндонеуриум. Аксоны затем в комплекте вместе, чтобы сформировать группы, называемые fascicles, и каждая фасцикля завернутый в слой соединительной ткани, известный как промежности. Наконец, все нервное волокно завернуто в слой соединительной ткани, который называется эпинеури. В эндонеуриум, вся популяция клеток состоит из 48% ОК, и значительная часть оставшихся клеток включает фибробласты2. Кроме того, фибробласты являются важными компонентами всех нервных отсеков, включая эпинеуриум, промежную и эндонеуриум3. Многие исследования показали, что ХК и фибробласты играют решающую роль в процессе регенерации после травмы периферического нерва4,,5,,6. После трансекции периферического нерва, проницаемые фибробласты регулируют сортировку клеток через эпирин-B/EphB2 сигнальный путь между ОК и фибробластами, дальнейшее руководство аксональным отрастанием через раны5. Периферические нервные фибробласты выделяют белок тенасцин-С и усиливают миграцию ХК во время регенерации нервов через сигнальный путь71-интегрин. Тем не менее, ТС и фибробласты, используемые в вышеуказанных исследованиях, были получены из седалищного нерва, который включает в себя как сенсорные, так и моторные нервы.
В периферической нервной системе сенсорные нервы (афферентные нервы) проводят сенсорную сигнализацию от рецепторов к центральной нервной системе (ЦНС), в то время как моторные нервы (эфферентные нервы) проводят сигналы от ЦНС к мышцам. Предыдущие исследования показали, что РК выражают различные моторные и сенсорные фенотипы и выделяют нейротрофические факторы для поддержки периферической регенерации нервов8,,9. Согласно недавнему исследованию, фибробласты также выражают различные двигательные и сенсорные фенотипы и влияют на миграцию SCs10. Таким образом, изучение различий между моторными и сенсорными фибробластами нервов/ТС позволяет нам изучать сложные основные молекулярные механизмы периферической регенерации нервов.
В настоящее время существует множество способов очищения ОВ и фибробластов, включая применение антимитических агентов, антител-опосредованного цитолиза11,,12,последовательного иммунопанирования13 и ламинина субстратом14. Однако все вышеперечисленные методы удаляют фибробласты и сохраняют только НК. Высоко очищенные РК и фибробласты могут быть получены с помощью технологии сортировки цитометриипотока 15,но это трудоемкая и дорогостоящая техника. Таким образом, в этом исследовании, простой дифференциальный пищеварения и дифференциального присоединения метод для очистки и изоляции сенсорных и моторных фибробластов нерва и РС был разработан для того, чтобы получить большое количество фибробластов и ОВ быстрее.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Данное исследование было проведено в соответствии с Руководящими принципами институционального ухода за животными Университета Нантонга. Все процедуры, включая животных субъектов были этически одобрены Административным комитетом экспериментальных животных, провинция Цзянсу, Китай.
1. Изоляция и культура двигательных и сенсорных фибробластов нерва и НК
- Используйте семидневных крыс Sprague-Dawley (SD) (n'4), предоставленных Экспериментальным центром животных Нантонгского университета Китая. Поместите крыс в бак, содержащий 5% изофлуран в течение 2-3 минут, дайте животным медленно дышать и не имеют самостоятельной деятельности, а затем дезинфицировать с помощью 75% этанола до обезглавливания.
- Используйте ножницы, чтобы сократить заднюю кожу около 3 см и удалить позвоночник. Откройте позвоночный канал тщательно, чтобы разоблачить спинной мозг.
- Поддерживайте спинной мозг в 60 мм чашке Петри с 2-3 мл сбалансированным солевым раствором D-Hanks (HBSS).
- Основываясь на анатомической структуре, отведение вентральный корень (моторный нерв), а затем спинной корень (сенсорный нерв) под рассекающим микроскопом. Затем поместите их в ледяной раствор соли D-Hanks (HBSS).
- После удаления HBSS, нарезать нервы на 3-5 мм штук с ножницами и переварить с 1 мл 0,25% (w/v) трипсин при 37 градусов по Цельсию в течение 18-20 мин. Далее, дополнение с 3-4 мЛ DMEM содержащие 10% плода бычьей сыворотки (FBS), чтобы остановить пищеварение.
- Pipette смесь вверх и вниз осторожно около 10 раз и центрифуги на 800 х г в течение 5 минут. После этого отбросьте супернатант и приостановите осадку в 2-3 мл DMEM, дополненном 10% FBS.
- Фильтр клеточной подвески с помощью фильтра 400 сетки, а затем привить клетки в 60 мм Петри блюдо и культуры при 37 градусов по Цельсию в присутствии 5% CO2. После 4-5 дней культивирования, изолировать проход 0 (p0) фибробластов и ОВ после достижения 90% слияния.
- Изоляция и культура ТС(рисунок 1)
- Вымойте клетки один раз с помощью 1x PBS. Добавьте 1 мл 0,25% (w/v) трипсина (37 градусов по Цельсию) на 60 мм чашку Петри, чтобы переварить клетки в течение 8-10 с при комнатной температуре. После этого, добавить 3 мЛ DMEM дополняется 10% FBS, чтобы остановить пищеварение.
- Аккуратно взорвать смесь, чтобы отсоединить SCs с пипеткой. Затем собирайте и центрифужщите SCs при 800 х г в течение 5 минут.
- Отбросьте супернатант и приостановите осадок в 3 мл DMEM с 10% FBS, 1% пенициллином/стрептомицином, 2 мл форсколина и 10 нг/мл HRG, а затем привить клетки в неокрашенной 60 мм чашке Петри. После культивирования при 37 градусах в течение 30-45 мин фибробласты (несколько фибробластов перевариваются с помощью ОК) прикрепляются к нижней части блюда.
- Перенесите супернатант (включая SCs) в другой поли-L-лизин (PLL) со покрытием среднего блюда и культуры при 37 градусов по Цельсию в течение 2 дней.
- Изоляция и культура фибробластов(рисунок 1)
- После удаления ТС (как показано в шаге 1.8), мыть оставшиеся фибробласты в блюдах с 1x PBS, а затем добавить 1 мл 0,25% (w/v) trypsin переварить фибробласты в течение 2 минут при 37 градусов по Цельсию.
- Добавить DMEM дополнен 10% FBS, чтобы положить конец пищеварению. Удар фибробластов с помощью пипетки, а затем собирать и центрифуг их на 800 х г в течение 5 минут.
- Отбросьте супернатант, приостановите осадок с 2 мЛ DMEM, содержащим 10% FBS, а затем привить клетки в неокрашенном 60 мм чашке Петри. Фибробласты после культивирования в течение 30-45 мин при 37 градусах Цельсия прикрепляются к нижней части блюда. Откажитесь от супернатанта (в том числе нескольких номеров SCs). Затем добавьте 3 мЛ DMEM, дополненный 10% FBS в блюдо фибробластов и культуры при 37 градусов по Цельсию в течение 2 дней.
- Прохождение ячеек p1 до тех пор, пока они не достигнут 90% слияния. Затем очистить их дифференциальным пищеварением и дифференциальным присоединением снова, как описано в разделах 1.8 и 1.9.
- Переварить p2 фибробластов и СК после культивирования в течение 2 дней, а затем собирать клетки, считать и прививать в 1 х 105 чисел / хорошо на PLL покрытием слайды для иммуноцинохимии (ICC).
2. МУС для определения чистоты клеток
- Культура клеток для 24 ч при температуре 37 градусов по Цельсию и выполнять ICC окрашивания после дифференциального пищеварения и дифференциального соблюдения двигательных и сенсорных фибробластов и SCs.
- Вымойте двигательные и сенсорные фибробласты и SCs с 1x PBS и исправить их в 200 мл/ хорошо 4% параформальдегида (рН 7,4) в течение 18 мин при комнатной температуре.
- Блокируйте образец SCs с блокирующим буфером (0.1% Triton X-100 в 0.01 M PBS, содержащий 5% козью сыворотку) и блокируйте образец фибробластов с блокирующим буфером (0.01 M PBS, содержащим 5% козьей сыворотки) в течение 45 минут при 37 градусах после мытья их с помощью PBS трижды.
- Удалите блокирующий буфер, и инкубировать со следующими первичными антителами: мышь моноклональных анти-CD90 антитела (специфический маркер для фибробластов) (1:1000) для фибробластов и мыши анти-S100 антитела (специфический маркер для SCs) (1:400) для SCs на 4 кк ночь.
- Откажитесь от первичных антител, мыть с PBS трижды, и инкубировать со следующими вторичными антителами: Alexa Fluor 594 козы анти-мышеловки IgG (1:400) для фибробластов и 488-конъюгированных коз анти-мышь IgG (1:400) для SCs при комнатной температуре для 1,5 ч.
- Вымойте образцы трижды с PBS, и пятно ядер с 5 мкг / мл Hoechst 33342 красителя в течение 10 минут при комнатной температуре. Вымойте образец с 1x PBS трижды и смонтировать их с помощью монтажа среды (20 мл/ слайд) на стеклянной слайде.
- Возьмите фотографии клеток с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа в трех случайных полях для каждого колодца. Оцените общее количество ядер и CD90-положительных клеток, S100-положительных клеток, а затем рассчитать процент CD90-положительных клеток и S100-положительных клеток, соответственно. Выполните окрашивание в трипликате.
3. Анализ цитометрии потока (FCA) для определения чистоты клеток
- Оцените чистоту моторных и сенсорных фибробластов и ОК, как описано ранее FCA16. Кратко переварить p2 двигатель и сенсорные фибробласты и SCs с 0,25% (w/v) трипсин, повторно клеточных гранул и инкубировать их в среде фиксации при комнатной температуре в течение 15 мин.
- Инкубировать клетки с permeabilization среды и зонда с помощью мыши моноклональных анти-CD90 антитела (0,1 мкг/106 клеток, 200 мл) для фибробластов и мыши анти-S100 антитела (1:400, 200 мл) для SCs при комнатной температуре в течение 30 мин, соответственно.
- Инкубировать клетки с 488-конъюгированных коза анти-мышь IgG в течение 30 мин. Используйте калибр FACS для выполнения потока цитометрии, и анализировать данные с помощью программного обеспечения Cell Квест.
- Инкубировать клетки только с 488-конъюгированных коз анти-мышей IgG (фибробласты группы) и мыши IgG1 каппа (MOPC-21) (FITC) - Изотип управления (группа ТС), который служит в качестве отрицательного контроля.
4. Статистический анализ
- Представить все данные в качестве средства - SEM. Оцените статистические различия в данных с помощью неспаренных т-тестовс помощью GraphPad Prism 6.0. Установить статистическую значимость на уровне р-л;0,05. p Выполните все анализы в трипликате.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Световое микроскопическое наблюдение
SCs и фибробласты являются двумя основными группами клеток, полученных в первичной клеточной культуре из нервных тканей. После прививки на 1 ч, большинство клеток придерживались нижней части блюда, и морфология клетки изменилась от круглого к овальному. После культивирования в течение 24 ч, РК выставлены биполярной или триполской морфологии и длина этих варьировалась от 100 до 200 мкм. После 48 ч произошло агрегирование и пролиферация клеток, в которых многие клетки были агрегированы в сквозном, плечом к плечу, водовороте или заборе, как расположение. Другие фибробласты, которые больше, чем ОК выставлены плоские и нерегулярные формы. С длительным временем культуры количество ОВ и фибробластов постепенно увеличивалось. SCs были сгруппированы вместе между пространствами фибробластов или расположены на поверхности фибробластов(рисунок 2A, 2B). Клетки подвергаются дифференциального пищеварения и дифференциального присоединения к изолировать фибробласты и ХК. После пищеварения в течение 8-10 с, РК появились как круглые и сдуваются легко, в то время как фибробласты плоские и прилагается к нижней части блюда(Рисунок 2C, 2D). После дифференциального пищеварения и дифференциального присоединения дважды были изолированы первичные культивируемые ТС и фибробласты, а также наблюдалась типичная морфология клеток моторных и сенсорных ОК и фибробластов(рисунок 2Е-2H).
Оценка чистоты двигательных и сенсорных фибробластов и ОК по МЦК
Сенсорные и моторные фибробласты были помечены с помощью CD90 и визуализированы с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа(Рисунок 3A, 3D). Hoechst 33342 краситель был использован для обозначения ядра клетки(Рисунок 3B, 3E). Слитые изображения фибробластов иммуностиминга и ядерного окрашивания(Рисунок 3C, 3F) показали, что 92,51% и 92,64% CD90 и Hoechst со-маркированных клеток присутствовали в двигательных и сенсорных фибробластов (Рисунок 3G), соответственно.
Сенсорные и моторные SCs были помечены с помощью S100 и визуализированы с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа(Рисунок 4A, 4D), соответственно. Hoechst 33342 краситель был использован для обозначения ядра клетки (Рисунок 4B, 4E). Слитые изображения SC иммуносеинерирования и ядерного окрашивания(Рисунок 4C, 4F) указали на наличие 91,61% и 93,56% S100 и Hoechst совместно помечены клетки в двигательных и сенсорных SCs (Рисунок 4G), соответственно.
Оценка чистоты сенсорных и моторных фибробластов и ОК FCA
После дифференциального пищеварения и дифференциального присоединения дважды, первичные культурные фибробласты и ОК были изолированы. Как показано на рисунке 5А, почти 90% клеток в двигательной и сенсорной культуре Fb были фибробласты, которая была указана M2, в то время как остальные йтл;10% (указано M1) были SCs. Рисунок 5B показал, что 92% всех клеток в двигательной и сенсорной культуре SC были СК, которые были указаны M2, в то время как остальные йтт;8% (указано M1) были фибробласты.
Рисунок 1: Схематическая диаграмма, показывающая шаги разделения и очистки сенсорных и моторных фибробластов и ОК. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2: Фазовая контрастная микрограф, показывающая морфологию клеток (A) первичного культивируемого двигателя и (B) сенсорных фибробластов и ОК. После пищеварения в течение 10 с, морфология клеток РС была круглой (как указано на стрелки), в то время как фибробласты остались плоскими и были прикреплены в нижней части блюда(C: Мотор фибробласты и SCs; D: Сенсорные фибробласты и ХК). После дифференциального пищеварения и дифференциального присоединения, РС и фибробласты были изолированы и типичная морфология клеток моторных и сенсорных фибробластов(E: Мотор фибробласты; F: Сенсорные фибробласты) и SCs(G: Моторные РК; H: Сенсорные SCs) были показаны. (Масштабная планка: 50 мкм). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3: Определение чистоты двигательных и сенсорных фибробластов ПО МЦК. Флуоресценция микроскопические фотографии культивируемого двигателя (A-C) и сенсорных фибробластов(D-F), показывающие иммуносхеи с антителами против CD90( И D, красный), Hoechst 33342 ядерного окрашивания(B и E, синий), и слияние обоих окрашивания(C и F). (G) Статистический анализ чистоты культивируемых фибробластов. (Масштабная планка: 100 мкм). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4: Определение чистоты двигательных и сенсорных ОК ПО МЦК. Флуоресценция микроскопические фотографии культивируемого двигателя (A-C) и сенсорных SCs(D-F), показывающие иммуносхеи с антителами против S100 (A и D, красный), Hoechst 33342 ядерного окрашивания (B и E, синий), и слияние обоих окрашивания(C и F). (G) Статистический анализ чистоты культурных SCs. (Scale bar: 100 мкм). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 5: Определение чистоты сенсорных и моторных фибробластов и ОК FCA. График FCA, показывающий процент CD90-положительных клеток/S100-положительных клеток (M2) культивируемых моторных и сенсорных фибробластов/SCs. Статистический анализ чистоты культивируемых фибробластов(A)и SCs(B). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Две основные популяции клеток периферических нервов включали ХК и фибробласты. В первую очередь культивируемые фибробласты и ТЦ могут точно помочь в моделировании физиологии фибробластов и ОК во время развития и регенерации периферических нервов. Исследование показало, что P7 крысиный седалищный нервный клеток содержит около 85% S100-положительных ХК, 13% OX7-положительных фибробластов и только 1,5% OX42-положительных макрофагов13. Хотя число фибробластов меньше, чем ХК, первоначальный уровень распространения фибробластов быстрее, чем у ОВ. Таким образом, Ара-С является наиболее часто используемым антимитическим агентом для удаления фибробластов во многих исследованиях. Тем не менее, Ara-C не является специфическим для клеточного митоза, и он также может препятствовать распространению ХК во время энергичной стадии деления. С антителами опосредованного цитолиза или иммунопаннинга метод, фибробласты либо были потеряны или умерли. Хотя технология сортировки цитометрии потока может быть использована для получения фибробластов высокой чистоты и SCs в то же время, она нуждается в большом количестве клеток, и скорость приобретения клеток остается низкой. Насколько нам известно, это было первое исследование, чтобы показать метод очистки сенсорных и моторных ОК и фибробластов.
В этом исследовании, большое количество сенсорных и моторных фибробластов и РС было получено в то же время путем объединения дифференциального пищеварения, а также дифференциальное соблюдение последовательно, не причиняя никакого вреда клеткам. Результаты окрашивания ICC и FCA показали, что все сенсорные и моторные ТС/фибробласты были высокой чистоты (90%). Критическим шагом этого метода является контроль времени дифференциального пищеварения. Если время слишком короткое, это делает SCs трудно отделить, и если время слишком долго, это вызывает некоторые фибробласты, чтобы переварить с SCs. В исследовании Вайса, ледяной Аккутаза используется, чтобы отделить ХК от фибробластов, но это дороже, чем трипсин17. Дифференциальное пищеварение с трипсином может эффективно помочь в разделении ХК и фибробластов. Ограничение этого протокола заключается в том, что не так-то просто вывести сенсорные и моторные нервы от неонатальных крыс, что требует дополнительной практики с рассекающим микроскопом. Протокол культивирования очень полезен для изучения биологических характеристик сенсорных и моторных фибробластов и ОК, а также для механизма регенерации сенсорного и моторного нерва или фибробластов и трансплантации ОВ для содействия регенерации нервов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторам нечего раскрывать.
Acknowledgments
Это исследование было поддержано Национальной программой ключевых исследований и разработок Китая (Грант No 2017YFA010104703), Национальным природным фондом Китая (Грант No 31500927).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG(H+L) | Life Technologies | A11005 | Dilution: 1:400 |
| CoraLite488-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L) | Proteintech | SA00013-1 | Dilution: 1:400 |
| Confocal laser scanning microscope | Leica Microsystems | TCS SP5 | |
| Cell Quest software | Becton Dickinson Biosciences | ||
| D-Hank's balanced salt solution | Gibco | 14170112 | |
| DMEM | Corning | 10-013-CV | |
| Dissecting microscope | Olympus | SZ2-ILST | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Gibco | 10099-141C | |
| Forskolin | Sigma | F6886-10MG | |
| Fluoroshield Mounting Medium | Abcam | ab104135 | |
| Fixation medium/Permeabilization medium | Multi Sciences (LIANKE) Biotech, Co., LTD | GAS005 | |
| Flow cytometry | Becton Dickinson Biosciences | FACS Calibur | |
| Mouse IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype Control | Abcam | ab106163 | Dilution: 1:400 |
| Mouse monoclonal anti-CD90 antibody | Abcam | ab225 | Dilution: 1:1000 for ICC, 0.1 µg for 106 cells for Flow Cyt |
| Mouse anti-S100 antibody | Abcam | ab212816 | Dilution: 1:400 |
| Polylysine (PLL) | Sigma | P4832 | |
| Recombinant Human NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain Protein | R&D Systems | 396-HB-050 | |
| 0.25% (w/v) trypsin | Gibco | 25200-072 |
References
- Stierli, S., et al. The regulation of the homeostasis and regeneration of peripheral nerve is distinct from the CNS and independent of a stem cell population. Development (The Company of Biologists). , (2018).
- Schubert, T., Friede, R. L. The role of endoneurial fibroblasts in myelin degradation. Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 40 (2), 134-154 (1981).
- Dreesmann, L., Mittnacht, U., Lietz, M., Schlosshauer, B. Nerve fibroblast impact on Schwann cell behavior. European Journal of Cell Biology. 88 (5), 285-300 (2009).
- Lavdas, A. A., et al. Schwann cells engineered to express the cell adhesion molecule L1 accelerate myelination and motor recovery after spinal cord injury. Experimental Neurology. 221 (1), 206-216 (2010).
- Parrinello, S., et al. EphB signaling directs peripheral nerve regeneration through Sox2-dependent Schwann cell sorting. Cell. 143 (1), 145-155 (2010).
- Benito, C., Davis, C. M., Gomez-Sanchez, J. A. STAT3 Controls the Long-Term Survival and Phenotype of Repair Schwann Cells during Nerve Regeneration. Journal of Neuroscience Research. 37 (16), 4255-4269 (2017).
- Zhang, Z. J., Jiang, B. C., Gao, Y. J. Chemokines in neuron-glial cell interaction and pathogenesis of neuropathic pain. Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (18), 3275-3291 (2017).
- Hoke, A., et al. Schwann cells express motor and sensory phenotypes that regulate axon regeneration. Journal of Neuroscience. 26 (38), 9646-9655 (2006).
- Brushart, T. M., et al. Schwann cell phenotype is regulated by axon modality and central-peripheral location, and persists in vitro. Experiment Neurology. 247, 272-281 (2013).
- He, Q., et al. Differential Gene Expression in Primary Cultured Sensory and Motor Nerve Fibroblasts. Frontiers in Neuroscience. 12, 1016 (2018).
- Weinstein, D. E., Wu, R. Chapter 3, Unit 17: Isolation and purification of primary Schwann cells. Current Protocols in Neuroscience. , (2001).
- Palomo Irigoyen, M., et al. Isolation and Purification of Primary Rodent Schwann Cells. Methods in Molecular Biology. 1791, 81-93 (2018).
- Cheng, L., Khan, M., Mudge, A. W. Calcitonin gene-related peptide promotes Schwann cell proliferation. Journal of Cell Biology. 129 (3), 789-796 (1995).
- Pannunzio, M. E., et al. A new method of selecting Schwann cells from adult mouse sciatic nerve. Journal of Neuroscience Methods. 149 (1), 74-81 (2005).
- Shen, M., Tang, W., Cao, Z., Cao, X., Ding, F. Isolation of rat Schwann cells based on cell sorting. Molecular Medicine Reports. 16 (2), 1747-1752 (2017).
- He, Q., Man, L., Ji, Y., Ding, F. Comparison in the biological characteristics between primary cultured sensory and motor Schwann cells. Neuroscience Letters. 521 (1), 57-61 (2012).
- Weiss, T., et al. Proteomics and transcriptomics of peripheral nerve tissue and cells unravel new aspects of the human Schwann cell repair phenotype. Glia. 64 (12), 2133-2153 (2016).
