Summary
Här presenterar vi en metod för att rena fibroblaster och Schwann celler från sensoriska och motoriska nerver in vitro.
Abstract
De viktigaste cellerna i det perifera nervsystemet är Schwann cellerna (SCs) och fibroblaster. Båda dessa celler uttrycker tydligt sensoriska och motor fenotyper som deltar i olika mönster av neurotrofisk faktor genuttryck och andra biologiska processer, som påverkar nervregenerering. Den aktuella studien har etablerat ett protokoll för att få mycket renad råtta sensoriska och motoriska SCs och fibroblaster snabbare. Ventrala roten (motor nerv) och dorsala roten (sensorisk nerv) av neonatal råttor (7 dagar gamla) var separerade och cellerna odlades i 4-5 dagar, följt av isolering av sensoriska och motoriska fibroblaster och SCs genom att kombinera differentiell matsmältning och differentiell följsamhet metoder sekventiellt. Resultaten av immunocytokemi och flöde cytometri analyser visade att renhet sensoriska och motor SCs och fibroblaster var >90%. Detta protokoll kan användas för att få ett stort antal sensoriska och motoriska fibroblaster /SCs snabbare, vilket bidrar till utforskning av sensorisk och motorisk nerv regenerering.
Introduction
I det perifera nervsystemet består nervfibrerna huvudsakligen av axoner, Schwannceller (SCs) och fibroblaster, och innehåller också ett litet antal makrofager, mikrovaskulära endotelceller och immunceller1. SCs linda axoner i en 1:1 förhållande och omges av en bindväv lager som kallas endoneurium. Axoner buntas sedan ihop för att bilda grupper som kallas fascicles, och varje fascicle är insvept i ett bindvävsskikt som kallas perineurium. Slutligen är hela nervfiber insvept i ett lager av bindväv, som kallas epineurium. I endoneurium, hela cellpopulationen består av 48% SCs, och en betydande del av de återstående cellerna innebär fibroblaster2. Dessutom är fibroblaster viktiga komponenter i alla nervfack, inklusive epineurium, perineurium och endoneurium3. Många studier har visat att SCs och fibroblaster spelar en avgörande roll i regenereringsprocessen efter perifera nervskador4,,5,6. Efter transection av perifera nerv, perineurial fibroblaster reglera cellsortering via ephrin-B/EphB2 signalering väg mellan SCs och fibroblaster, ytterligare styra axonal återväxt genom sår5. Perifera nervfibraruts utsöndra tenascin-C protein och öka migrationen av SCs under nervregenerering genom β1-integrin signalväg7. Emellertid, SCs och fibroblaster som används i ovanstående studier härrörde från ischiasnerven, som omfattar både sensoriska och motoriska nerver.
I det perifera nervsystemet, de sensoriska nerverna (afferent nerver) genomföra sensoriska signalering från receptorerna till centrala nervsystemet (CNS), medan de motoriska nerverna (efferent nerver) genomföra signaler från CNS till musklerna. Tidigare studier har visat att SCs uttrycka distinkta motoriska och sensoriska fenotyper och utsöndra neurotrofa faktorer för att stödja perifer nervregenerering8,9. Enligt en färsk studie, fibroblaster också uttrycka olika motoriska och sensoriska fenotyper och påverka migrationen av SCs10. Således gör utforskning av skillnader mellan motoriska och sensoriska nerv fibroblaster/SCs oss att studera komplicerade underliggande molekylära mekanismer för perifer nerv specifik regenerering.
För närvarande finns det många sätt att rena SCs och fibroblaster, inklusive tillämpning av antimitotiska medel, antikropp-medierad cytolys11,12, sekventiell immunpanering13 och laminin substratum14. Men alla ovanstående metoder bort fibroblaster och bevara endast SCs. Mycket renade SCs och fibroblaster kan erhållas genom flöde cytometri sortering teknik15, men det är en tidskrävande och kostsam teknik. Därför utvecklades i denna studie, en enkel differentialnedsmältning och differential följsamhet metod för rening och isolera sensoriska och motoriska nerv fibroblaster och SCs för att få ett stort antal fibroblaster och SCs snabbare.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Denna studie genomfördes i enlighet med institutionsvårdsriktlinjerna vid Nantong University. Alla förfaranden inklusive djurämnen godkändes etiskt av administrationskommittén för försöksdjur, Jiangsu-provinsen, Kina.
1. Isolering och kultur av motoriska och sensoriska nervfiber och SCs
- Använd sju dagar gamla Sprague-Dawley (SD) råttor (n = 4) som tillhandahålls av Experimental Animal Center i Nantong University of China. Placera råttorna i en tank som innehåller 5% isofluran i 2-3 minuter, låt djuren andas långsamt och har ingen oberoende aktivitet, och sedan sanera med 75% etanol före halshuggning.
- Använd sax för att skära den bakre huden i ca 3 cm och ta bort ryggraden. Öppna kotkanalen försiktigt för att exponera ryggmärgen.
- Håll ryggmärgen i en 60 mm petriskål med 2-3 ml iskall D-Hanks balanserade saltlösning (HBSS).
- Baserat på den anatomiska strukturen, punktskattepliktiga ventrala roten (motornerven) och sedan dorsala roten (sensorisk nerv) under ett dissekerande mikroskop. Placera dem sedan i en iskall D-Hanks balanserade saltlösning (HBSS).
- Efter att ha tagit bort HBSS, skiva nerverna i 3-5 mm bitar med sax och smälta med 1 ml 0,25% (w / v) trypsin vid 37 °C för 18-20 min. Därefter, komplettera med 3-4 ml DMEM som innehåller 10% fetala nötkreatur serum (FBS) för att stoppa matsmältningen.
- Pipett blandningen upp och ner försiktigt ca 10 gånger och centrifug på 800 x g i 5 min. Efter det, kasta supernatant och avbryta fällningen i 2-3 ml DMEM kompletteras med 10% FBS.
- Filtrera cellfjädringen med ett 400-nätfilter och inokulera sedan cellerna i 60 mm petriskål och odling vid 37 °C i närvaro av 5 % CO2. Efter 4-5 dagar av odling, isolera passagen 0 (p0) fibroblaster och SCs efter att ha nått 90% sammanflödet.
- Isolering och kultur av de rådgivande nämnderna (figur 1)
- Tvätta cellerna en gång med 1x PBS. Tillsätt 1 ml 0,25 % (w/v) trypsin (37 °C) per 60 mm petriskål för att smälta cellerna i 8-10 s vid rumstemperatur. Efter det, tillsätt 3 ml DMEM kompletteras med 10% FBS att stoppa matsmältningen.
- Blås försiktigt blandningen för att lossa sc:erna med en pipett. Samla sedan in och centrifugera SCs på 800 x g i 5 min.
- Kasta supernatanten och suspend fällningen i 3 ml DMEM med 10% FBS, 1% penicillin/streptomycin, 2 μM forskolin och 10 ng/mL HRG, och inokulera sedan cellerna i obestruken 60 mm petriskål. Efter odling vid 37 °C i 30-45 min, fibroblaster (ett par antal fibroblaster rötas med SCs) fäst på botten av skålen.
- Överför supernatanten (inklusive SCs) till en annan poly-L-lysin (PLL)-belagd medium skål och kultur vid 37 °C i 2 dagar.
- Isolering och kultur av fibroblaster (figur 1)
- Efter att ha tagit bort SCs (som visas i steg 1.8), tvätta de återstående fibroblaster i disken med 1x PBS och tillsätt sedan 1 ml 0,25% (w / v) trypsin att smälta fibroblaster i 2 min vid 37 °C.
- Tillsätt DMEM kompletterat med 10% FBS för att avsluta matsmältningen. Blås fibroblaster med hjälp av en pipett, och sedan samla in och centrifugera dem på 800 x g i 5 min.
- Kassera supernatanten, suspend fällningen med 2 ml DMEM innehållande 10% FBS och inokulera sedan cellerna i obestruket 60 mm petriskål. Den fibroblaster efter odling i 30-45 min vid 37 °C fäst på botten av skålen. Kasta supernatanten (inklusive några få antal SCs). Tillsätt sedan 3 ml DMEM kompletterat med 10% FBS i fibroblaster skålen och kultur vid 37 °C i 2 dagar.
- Passage p1-cellerna tills de nådde 90% sammanflödet. Rena dem sedan genom differentialrötning och differentialsammanfattning igen enligt beskrivningen i avsnitten 1.8 och 1.9.
- Smält p2 fibroblaster och SCs efter odling i 2 dagar, och sedan samla cellerna, räkna och vaccinera i 1 x 105 nummer / väl på PLL-belagda diabilder för immuncytokemi (ICC).
2. ICC för identifiering av cellrenhet
- Odla cellerna för 24 h vid 37 °C och utföra ICC färgning efter differentiell matsmältning och differentiell följsamhet av motoriska och sensoriska fibroblaster och SCs.
- Tvätta motor och sensoriska fibroblaster och SCs med 1x PBS och fixera dem i 200 μL/brunn på 4% paraformaldehyd (pH 7.4) i 18 min vid rumstemperatur.
- Blockera provkontrollanterna med blockerande buffert (0,1 % Triton X-100 i 0,01 M PBS som innehåller 5 % getserum) och blockera provfibroblaster med blockerande buffert (0,01 M PBS som innehåller 5 % getserum) i 45 min vid 37 °C efter tvättning av dem med PBS tre gånger.
- Ta bort blockeringsbufferten och inkubera med följande primära antikroppar: mus monoklonal anti-CD90-antikropp (en specifik markör för fibroblaster) (1:1000) för fibroblaster och musanti-S100-antikroppar (en specifik markör för SCs) (1:400) för SCs vid 4 °C över natten.
- Kassera de primära antikropparna, tvätta med PBS tre gånger och inkubera med följande sekundära antikroppar: Alexa Fluor 594 get anti-mus IgG (1:400) för fibroblaster och 488-konjugerad get anti-mus IgG (1:400) för SCs vid rumstemperatur i 1,5 h.
- Tvätta proverna tre gånger med PBS och färga kärnorna med 5 μg/mL Hoechst 33342 färgämne i 10 min vid rumstemperatur. Tvätta provet med 1x PBS tre gånger och montera dem med monteringsmediet (20 μL/slide) på glasrutschbanan.
- Ta cellfotografierna genom att konfokala laserscanning mikroskop i tre slumpmässiga fält för varje brunn. Utvärdera det totala antalet kärnor och CD90-positiva celler, S100-positiva celler och beräkna sedan procentandelen CD90-positiva celler respektive S100-positiva celler. Utför färgningen i tre exemplar.
3. Flödescytometrianalys (FCA) för identifiering av cellrenhet
- Utvärdera renhetsgraden hos motoriska och sensoriska fibroblaster och SCs enligt beskrivningen tidigare av FCA16. Kort, smälta p2 motor och sensoriska fibroblaster och SCs med 0,25% (w / v) trypsin, återsuspend cellen pellets och inkubera dem i fixering medium vid rumstemperatur i 15 min.
- Inkubera cellerna med permeabiliseringsmedium och sond med hjälp av monoklonal anti-CD90-antikroppar (0,1 μg/106 celler, 200 μL) för fibroblaster och musanti-S100-antikroppar (1:400, 200 μL) för SCs vid rumstemperatur i 30 minuter respektive.
- Inkubera cellerna med 488-konjugerad get anti-mus IgG i 30 min. Använd FACS kaliber för att utföra flödescytometri, och analysera data med hjälp av Cell Quest programvara.
- Inkubera cellerna endast med 488-konjugerad get anti-mus IgG (fibroblaster Grupp) och mus IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype kontroll (SCs grupp), som fungerar som negativ kontroll.
4. Statistisk analys
- Presentera alla data som medel ± SEM. Bedöma statistiska skillnader i data genom obetalt t-testmed GraphPad Prism 6.0. Ange statistisk signifikans till p<0,05. Utför alla analyser i tre exemplar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Lätt mikroskopisk observation
SCs och fibroblaster är de två viktigaste cell populationer som erhållits i den primära cellkulturen från nervvävnader. Efter inokulering i 1 h, de flesta av cellerna följde botten av skålen, och cellmorfologin ändras från runda till ovala. Efter odling i 24 timmar ställde SCs ut en bipolär eller tripolar morfologi och längden på dessa varierade från 100 till 200 μm. Efter 48 h, aggregering och spridning av celler inträffade, där många celler var aggregerade i en end-to-end, skuldra-till-skuldra, bubbelpool eller staket-liknande arrangemang. De andra fibroblaster som är större än SCs uppvisade platt och oregelbunden form. Med långvarig kulturtid ökade antalet SCs och fibroblaster gradvis. De sc-grupperna var grupperade mellan utrymmen av fibroblaster eller placerade på ytan av fibroblaster (figur 2A, 2B). Cellerna utsätts för differentiell matsmältning och differentiell följsamhet för att isolera fibroblaster och SCs. Efter matsmältningen för 8-10 s, SCs dök upp som runda och blåses bort lätt, medan fibroblaster är platt och fäst på botten av skålen(Figur 2C, 2D). Efter differentialnedsmältning och differentiell följsamhet två gånger isolerades de primära odlade SCs och fibroblaster och den typiska cellmorfologi av motoriska och sensoriska SCs och fibroblaster observerades (Figur 2E-2H).
Utvärdering av renhet av motoriska och sensoriska fibroblaster och SCs av ICC
De sensoriska och motoriska fibroblaster var märkta med CD90 och visualiseras med hjälp av en confocal laser scanning mikroskop (Figur 3A, 3D). Hoechst 33342 färgämne användes för att märka cellkärnan (figur 3B, 3E). De sammanslagna bilderna av fibroblastimmunfärgning och kärnfläckning (figur 3C, 3F) visade att 92,51% och 92,64% av CD90 och Hoechst co-märkta celler fanns i motoriska och sensoriska fibroblaster (figur 3G), respektive.
De sensoriska och motoriska SCs var märkta med hjälp av S100 och visualiseras med hjälp av en confocal laser scanning mikroskop (Figur 4A, 4D), respektive. Hoechst 33342-färg användes för att märka cellkärnan (figur 4B, 4E). De sammanslagna bilderna av SC-immunfärgning och kärnfärgning (figur 4C, 4F) visade förekomst av 91,61 % respektive 93,56 % av S100 och Hoechst-märkta celler i motor- respektive sensoriska SCs(figur 4G).
Fcas utvärdering av renhet av sensorisk och motorisk fibroblaster och scs
Efter differentiell matsmältning och differentiell följsamhet två gånger, den primära odlade fibroblaster och SCs isolerades. Som visas i figur 5Avar nästan 90 % av cellerna i den motoriska och sensoriska Fb-kulturen fibroblaster, som angavs av M2, medan de återstående <10% (anges av M1) var SCs. Figur 5B visade att >92% av alla celler i motoriska och sensoriska SC kultur var SCs, vilket angavs av M2, medan de återstående <8% (anges av M1) var fibroblaster.
Figur 1: Det schematiska diagrammet som visar separations- och reningsstegen för sensoriska och motoriska fibroblaster och scs. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: Faskontrastmikrograf som visar cellmorfologin hos (A) primärkulturell motor och (B) sensoriska fibroblaster och SCs. Efter matsmältningen för 10 s, cell morfologi av SCs var rund (som anges av pilarna), medan fibroblaster förblev platt och var fästa längst ner i skålen (C: Motor Fibroblaster och SCs; D: Sensorisk fibroblaster och SCs). Efter differentiell matsmältning och differentiell följsamhet, scs och fibroblaster isolerades och den typiska cell morfologi av motoriska och sensoriska fibroblaster (E: Motor Fibroblaster; F: Sensorisk fibroblaster) och SCs(G: Motor SCs; H. Sensoriska SCs) visades. (Skalstång: 50 μm). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: Identifiering av renhet hos motoriska och sensoriska fibroblaster av ICC. Fluorescens mikroskopiska fotografier av odlade motor(A-C)och sensoriska fibroblaster(D-F)som visar immunfärgning med antikroppar mot CD90 (A och D, röd), Hoechst 33342 kärnfärgning (B och E, blå), och sammanslagning av både färgning (C och F). (G)Statistisk analys av renhet odlade fibroblaster. (Skalstång: 100 μm). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: Identifiering av renhet hos motoriska och sensoriska SCs av ICC. Fluorescens mikroskopiska fotografier av odlad motor(A-C)och sensoriska SCs(D-F)som visar immunfärgning med antikroppar mot S100 (A och D,röd), Hoechst 33342 kärnfärgning (B och E, blå), och sammanslagning av både färgning (C och F). G)Statistisk analys av renheten hos odlade nationella och regionala råd (skalan: 100 μm). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5: Identifiering av renhet hos sensoriska och motoriska fibroblaster och SCs av FCA. Fca-grafen som visar procentandelen CD90-positiva celler/S100-positiva celler (M2) av odlade motoriska och sensoriska fibroblaster/scs. Statistisk analys av renhet av odlade fibroblaster (A) och SCs (B). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De två stora cell populationer av perifera nerver ingår SCs och fibroblaster. De främst odlade fibroblaster och SCs kan exakt hjälpa till att modellera fysiologi fibroblaster och SCs under perifera nerv utveckling och regenerering. Studien visade att P7 råtta ischias nervceller innehöll cirka 85% av S100-positiva SCs, 13% av OX7-positiva fibroblaster och endast 1,5% av OX42-positiva makrofager13. Även om antalet fibroblaster är mindre än SCs, är den ursprungliga spridningen av fibroblaster snabbare än för SCs. Därför är Ara-C det vanligaste antimitotiska medlet för att ta bort fibroblaster i många studier. Emellertid, Ara-C är inte specifik för cell mitos, och det kan också hämma spridningen av SCs under kraftig delning skede av division. Med antikropp-medierad cytolys eller immunpanning metod, fibroblaster antingen förlorades eller dog. Även om flöde cytometri sortering teknik kan användas för att få hög renhet fibroblaster och SCs samtidigt, det behöver ett stort antal celler, och cellen förvärvsfrekvensen förblev låg. Såvitt vi vet var detta den första studien som visade reningsmetoden för sensoriska och motoriska SCs och fibroblaster.
I denna studie erhölls ett stort antal sensoriska och motoriska fibroblaster och SCs samtidigt genom att kombinera differentiell matsmältning samt differentiell följsamhet sekventiellt, orsakar ingen skada på cellerna. Resultaten av ICC färgning och FCA visade att alla sensoriska och motoriska SCs/fibroblaster var av hög renhet (>90%). Det kritiska steget för denna metod är att kontrollera tiden för differentialrötning. Om tiden är för kort, gör det SCs svårt att lossa, och om tiden är för lång, orsakar det vissa fibroblaster att smälta med SCs. I Weiss studie, iskall Accutase används för att frigöra SCs från fibroblaster, men detta är dyrare än trypsin17. Differentialnedsmältning med trypsin kan effektivt hjälpa till att separera SCs och fibroblaster. Begränsningen av detta protokoll är att det inte är lätt att punktskattera sensoriska och motoriska nerver från neonatalråttor, vilket kräver mer övning med dissekering mikroskop. Protokollet för odling är mycket användbart för att studera de biologiska egenskaperna hos sensoriska och motoriska nervfibrlaster och SCs, och för mekanismen för sensorisk och motorisk nervregenerering eller fibroblaster och SCs transplantation för att främja nervregenerering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Denna studie stöddes av National Key Research and Development Program of China (Grant No. 2017YFA0104703), National Natural Foundation of China (Grant No. 31500927).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG(H+L) | Life Technologies | A11005 | Dilution: 1:400 |
| CoraLite488-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L) | Proteintech | SA00013-1 | Dilution: 1:400 |
| Confocal laser scanning microscope | Leica Microsystems | TCS SP5 | |
| Cell Quest software | Becton Dickinson Biosciences | ||
| D-Hank's balanced salt solution | Gibco | 14170112 | |
| DMEM | Corning | 10-013-CV | |
| Dissecting microscope | Olympus | SZ2-ILST | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Gibco | 10099-141C | |
| Forskolin | Sigma | F6886-10MG | |
| Fluoroshield Mounting Medium | Abcam | ab104135 | |
| Fixation medium/Permeabilization medium | Multi Sciences (LIANKE) Biotech, Co., LTD | GAS005 | |
| Flow cytometry | Becton Dickinson Biosciences | FACS Calibur | |
| Mouse IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype Control | Abcam | ab106163 | Dilution: 1:400 |
| Mouse monoclonal anti-CD90 antibody | Abcam | ab225 | Dilution: 1:1000 for ICC, 0.1 µg for 106 cells for Flow Cyt |
| Mouse anti-S100 antibody | Abcam | ab212816 | Dilution: 1:400 |
| Polylysine (PLL) | Sigma | P4832 | |
| Recombinant Human NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain Protein | R&D Systems | 396-HB-050 | |
| 0.25% (w/v) trypsin | Gibco | 25200-072 |
References
- Stierli, S., et al. The regulation of the homeostasis and regeneration of peripheral nerve is distinct from the CNS and independent of a stem cell population. Development (The Company of Biologists). , (2018).
- Schubert, T., Friede, R. L. The role of endoneurial fibroblasts in myelin degradation. Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 40 (2), 134-154 (1981).
- Dreesmann, L., Mittnacht, U., Lietz, M., Schlosshauer, B. Nerve fibroblast impact on Schwann cell behavior. European Journal of Cell Biology. 88 (5), 285-300 (2009).
- Lavdas, A. A., et al. Schwann cells engineered to express the cell adhesion molecule L1 accelerate myelination and motor recovery after spinal cord injury. Experimental Neurology. 221 (1), 206-216 (2010).
- Parrinello, S., et al. EphB signaling directs peripheral nerve regeneration through Sox2-dependent Schwann cell sorting. Cell. 143 (1), 145-155 (2010).
- Benito, C., Davis, C. M., Gomez-Sanchez, J. A. STAT3 Controls the Long-Term Survival and Phenotype of Repair Schwann Cells during Nerve Regeneration. Journal of Neuroscience Research. 37 (16), 4255-4269 (2017).
- Zhang, Z. J., Jiang, B. C., Gao, Y. J. Chemokines in neuron-glial cell interaction and pathogenesis of neuropathic pain. Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (18), 3275-3291 (2017).
- Hoke, A., et al. Schwann cells express motor and sensory phenotypes that regulate axon regeneration. Journal of Neuroscience. 26 (38), 9646-9655 (2006).
- Brushart, T. M., et al. Schwann cell phenotype is regulated by axon modality and central-peripheral location, and persists in vitro. Experiment Neurology. 247, 272-281 (2013).
- He, Q., et al. Differential Gene Expression in Primary Cultured Sensory and Motor Nerve Fibroblasts. Frontiers in Neuroscience. 12, 1016 (2018).
- Weinstein, D. E., Wu, R. Chapter 3, Unit 17: Isolation and purification of primary Schwann cells. Current Protocols in Neuroscience. , (2001).
- Palomo Irigoyen, M., et al. Isolation and Purification of Primary Rodent Schwann Cells. Methods in Molecular Biology. 1791, 81-93 (2018).
- Cheng, L., Khan, M., Mudge, A. W. Calcitonin gene-related peptide promotes Schwann cell proliferation. Journal of Cell Biology. 129 (3), 789-796 (1995).
- Pannunzio, M. E., et al. A new method of selecting Schwann cells from adult mouse sciatic nerve. Journal of Neuroscience Methods. 149 (1), 74-81 (2005).
- Shen, M., Tang, W., Cao, Z., Cao, X., Ding, F. Isolation of rat Schwann cells based on cell sorting. Molecular Medicine Reports. 16 (2), 1747-1752 (2017).
- He, Q., Man, L., Ji, Y., Ding, F. Comparison in the biological characteristics between primary cultured sensory and motor Schwann cells. Neuroscience Letters. 521 (1), 57-61 (2012).
- Weiss, T., et al. Proteomics and transcriptomics of peripheral nerve tissue and cells unravel new aspects of the human Schwann cell repair phenotype. Glia. 64 (12), 2133-2153 (2016).
