Summary
이 문서는 모기 midgut 경작 미생물의 격리 및 식별, 모기 창자 박테리아의 항생제 고갈을 포함하여 개별 모기 창자 박테리아의 효력을 조사하고, 1개의 특정 박테리아 종을 재소개하기 위하여 프로토콜을 제시합니다.
Abstract
모기 midgut 호스트 신진 대사에 영향을 미치는 매우 동적 미생물군유전체를 항구, 재생, 피트 니스, 그리고 벡터 능력. 연구 는 창 자 미생물의 효과 전체적으로 조사 하기 위해 실시 되었습니다.; 그러나, 다른 미생물 호스트쪽으로 뚜렷한 효력을 발휘할 수 있었습니다. 이 문서는 각 특정 모기 창 자 미생물및 잠재적인 기계장치의 효력을 연구하는 방법론을 제공합니다.
이 프로토콜에는 두 부분이 포함되어 있습니다. 첫 번째 부분은 모기 midgut를 해부하는 방법을 소개합니다, 재배 박테리아 식민지를 분리하고, 박테리아 종을 확인하는 방법. 두 번째 부분은 항생제 처리된 모기를 생성하고 1개의 특정 박테리아 종을 다시 소개하는 절차를 제공합니다.
Introduction
모기는 Zika 바이러스, 뎅기열 바이러스 및 플라스모듐 기생충1을포함하여 백 개의 병원체를 통해 전송하는 인간 병원성 질병의 가장 중요한 벡터로 간주됩니다. 모기가 외란에 대한 영양분을 얻기 위해 혈액 식사를 할 때, 그들은 실수로 소화관을 통해 감염된 호스트에서 병원균을 섭취 할 수있습니다 2. 중요한 것은, 혈액 식사 소화와 병원체 입구 둘 다에 있는 중추적인 역할을 하는 모기 midgut는, 높게 다이내믹한 microbiome3를항구합니다.
여러 연구는 배양 의존적 방법 또는 박테리아 염기서열 분석4,,5,,6을사용하여 실험실 사육 및 현장 수집 모기 미생물을 특징으로한다. 판토에아, 세라티아, 클레브시엘라, 엘리자베스키아, 엔테로코커스를 포함한 종은 다양한 연구에서 모기로부터 일반적으로 분리된다5,,7,,8,,9. 흥미롭게도, 모기 장 내 미생물은 발달 단계, 종, 지리적 기원 및 수유 행동4에의해 영향을 받는 지역 사회의 다양성과 박테리아 종의 양 모두에서 동적으로 변동한다. 연구에 따르면 혈액 공급은 Enterobacteriaceae에서 종의 급속한 확장과 전반적인 다양성10,,11의감소와 함께 총 세균 부하를 극적으로 증가시킨다. 또한, 애벌레 단계의 모기 장내 미생물은 일반적으로 곤충이 새끼와 백과 기 전에 변형을 겪을 때 근절된다; 따라서 새로 등장한 성인 모기는 미생물4를다시 채워야 합니다.
장내 미생물은 영양 흡수, 면역, 발달, 번식 및 벡터역량(12)을포함한 다양한 측면에서 곤충 생리학을 조절한다. 악악 모기 유충은 박테리아 구강 공급이 발달하는 동안 첫 번째 인스타 를 넘어 개발하지 못하며, 이는 모기 장내 미생물이 애벌레 발달에 필수적임을 나타낸다13,,14. 게다가, 창 자 박테리아의 고갈 혈액 식사 소화 및 영양 흡수를 지연, oocyte 성숙에 영향을 미치는, 그리고 oviposition감소 15. 또한, 장내 미생물을 가진 모기는 항생제 처리한 모기에 비해 더 높은 면역 반응을 유도하고,16을감염시키기 위하여 그밖 병원체에 대하여 지속적으로 상승된 항균 펩티드 발현을 가진. 항생제는 일반적으로 이러한 연구에서 팬 창 자 박테리아를 제거 하기 위해 구두 관리, 다음 실험 은 축 축 모기와 모기와 대학 미생물의 차이 비교 하기 위해 실시. 그러나, 모기 midgut는 세균의 다양한 지역 사회를 항구하고, 각 박테리아 종은 호스트 생리학을 향해 명백한 효력을 발휘할 수 있었습니다.
모기 미생물은 다양한 효과로 벡터 역량을 조절합니다. 뎅기열 의 필드 유래 모기로부터 분리된 프로테우스에 의한 식민지화는 뎅기열 바이러스 감염에 대한 조절된 항균 펩티드 발현 및 저항을 부여한다16. 내모병원성 곰팡이 보베리아 bassiana는 arbovirus 감염에 대하여 통행료 및 JAK-STAT 면역 통로를 활성화합니다17. 대조적으로, Aedes aegypti midgut에서 분리된 곰팡이 탈라로미세스는 창자 트립신활동(18)을조절하여 뎅기열 바이러스 감염을 용이하게 한다. 또한, 세라티아 마르케센은 19모기의 장 상피에 있는 뮤신 층을소화하는 SmEnhancin에게 불린 분비 단백질을 통해 arbovirus 전송을 승진시다.
이 절차는 모기 미드구트의 해부, 재배 가능한 박테리아 식민지의 격리, 박테리아 종의 식별 및 구강 수유를 통한 재도입을 위한 체계적이고 직관적인 방법을 제공합니다. 그것은 모기 난소 발달 및 oviposition에, commensal 박테리아, Chryseobacterium meningosepticum와혈액 공급의 대표적인 결과를 제공합니다.
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Protocol
1. 미드구트 해부 및 재배 가능한 박테리아 격리
- 해부를 위해 모기를 준비하십시오.
- 모기를 수집 7-9 아스피라기와 출현 후 일. 수집된 모기를 3-5분 동안 4°C의 온도로 조절하여 마취하고 해부전까지 얼음차가운 페트리 접시에 모기를 마취시합니다.
- 실험실 기기와 모기 표면을 살균합니다.
- 실험 벤치를 살균하고, 현미경, 집게 및 유리 슬라이드를 75% 에탄올을 분사하여 환경으로부터 박테리아에 의한 오염을 방지합니다.
- 멸균 1x 인산완충식식염(1x PBS)을 함유한 멸균 페트리 접시와 페트리 접시 2개를 함유한 멸균 페트리 접시를 준비한다.
- 표면에 살균하여 모기를 75% 에탄올로 3분 동안 담그고 흔들어서, 에탄올이 해부된 장 식물에 영향을 미치는 경우 1x PBS 버퍼로 두 번 헹구는다.
- 모기 미드구트를 해부합니다.
- 표면 멸균 모기를 멸균 1x PBS 버퍼한 방울로 유리 슬라이드에 옮기. 해부 현미경으로 해부.
- 해부 현미경의 하부 배율하에서, 조심스럽게 탈출을 방지하기 위해 모기의 다리, 날개 및 머리를 제거합니다. 모기의 마지막 소미트를 직접 절단하여 제거하여, 그것을 당기기보다는, 파손에서 소화관을 방지하기 위해.
- 모기의 흉부와 복부의 끝을 집게로 고정하십시오. 모기의 소화관을 부드럽게 꺼냅니다. 취득한 소화관에는 보통 작물, 전구, 미드구트, 힌구트 및 말피기히안 튜브가 포함되어 있습니다.
- 해부 현미경을 더 높은 배율로 조정합니다. 모기의 미드구트를 얻기 위해 해부 소화관에서 작물, 전동, 힌구트, 말피기히안 튜브를 제거합니다.
- 작물이 팽창하고 모기가 설탕 식사를 한 후 미드구트와 유사하기 때문에 작물을 제거하는 동안주의하십시오. 길고 얇은 배설관 그룹인 말피기히안 튜브는 미드구트와 힌구트 사이의 경계에 있습니다.
- 창 자 박테리아를 분리.
- 해부된 미드구트를 멸균 1.5mL 튜브에 멸균 1x PBS 버퍼 200 μL로 전달합니다.
- 멸균 유봉으로 멸균 벤치에 미드구트를 완전히 갈아 버퍼에 장내 세균을 완전히 방출할 수 있도록 합니다.
- 직렬은 동종모를 10배 희석 3개로 희석합니다. LB(루리아 국물) 한마판에 각 희석의 50μL을 추가한 다음 접시에 펴놓습니다. 미드구트가 높은 농도의 장내 식물을 함유하고 있다면, 단일 식민지를 골라내기 위해 더 많은 직렬 희석을 하는 것이 필수적입니다.
- 단일 식민지가 보일 때까지 플레이트를 37°C에서 1-2일 동안 배양합니다.
- 종 식별
- 단일 콜로니를 선택하고 LB 국물 배지 의 50 mL을 포함하는 150 mL 원추형 플라스크로 각각 접종한다.
- 하룻밤 사이에 37 °C에서 박테리아를 흔들어.
- 세균성 게놈 DNA 추출 키트에 의해 총 DNA를 추출합니다. 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 의한 16S rDNA 증폭.
참고: 16S rDNA에는 여러 세그먼트가 보존됩니다. 이러한 보존 된 지역에 따라 박테리아에 대한 보편적 인 프라이머는 모든 박테리아의 16S rDNA 조각을 증폭하도록 설계 될 수 있습니다. 이들 프라이머는 박테리아에 특이적이며, 16S rDNA의 가변 영역의 차이는 상이한 박테리아를 구별하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 16S rDNA는 세균성 식별을 위해 널리 사용된다. - 아가로즈 젤 전기포고및 상업용 젤 회수 키트에 의해 PCR 제품에서 DNA 조각을 복구하고 정화합니다.
- 정제된 DNA 단편에 DNA 시퀀싱을 수행하여 세균성 유전자 서열을 얻습니다.
- GenBank에서 제공되는 세균 성 서열과 16S rRNA 유전자 서열을 비교합니다. 박테리아 및 고고학 데이터베이스를 선택합니다.
참고: 종 수준에 대한 식별은 가장 가까운 GenBank 항목에 대한 ≥99% 16S rDNA 서열 유사성으로 정의되었다. 분리는 16S rDNA 서열 유사성이 &99% 및 ≥95%였을 때 해당 속에 할당되었다.
2. 항생제 치료 및 박테리아 재도입
- 항생제 용액을 준비합니다.
- 필요한 양의 자당, 페니실린 및 연쇄 절제술을 계량하여 mL당 페니실린 20 단위 및 20 μg의 연쇄상 구균을 포함하여 10 % 자당 용액을 준비합니다.
- 항생제 용액으로 모기에게 먹이를 주세요.
- 모기를 4°C에서 3-5분 동안 마취시화합니다. 모기를 종이 컵으로 옮기습니다. 거즈로 상단을 덮고 모기가 탈출하지 못하도록 테이프로 거즈를 감습니다.
- 멸균 면공을 항생제 용액에 담그고 모기컵에 조심스럽게 넣습니다. 모기가 떨어지는 면공에 익사하는 것을 방지하기 위해 사용하기 전에 면공을 짜내세요.
- 수분 증발을 방지하기 위해 10cm 페트리 접시로 면공을 덮습니다. 면봉을 하루에 두 번 교체하여 3일 연속 교체합니다.
- 항생제 치료의 효과를 확인합니다.
- 위의 방법에 따르면 항생제 치료 모기의 미드구트를 해부하십시오.
- 해부된 미드구트를 멸균 1.5mL 튜브에 멸균 1x PBS 버퍼 200 μL로 이송합니다.
- 멸균 유봉으로 멸균 된 벤치에서 미드구트를 완전히 갈아서 완충제에 장내 세균이 완전히 방출되도록하십시오.
- 세균성 게놈 DNA 추출 키트에 의해 창자 미생물 DNA를 추출합니다.
- 범용 유박테리아 프라이머(16S rRNA F: TCCTACGGGAGGCAGAGCAGT 및 R: GGACTACCAGGTATCTAATCCTGTT)를 사용하여 게놈 DNA에 대한 실시간 정량적 PCR(qPCR)에 의한 세균수량을 수행한다.
- 세균 현탁액 준비
- 분광계로 세균용 용액을 측정합니다. 1mL 튜브에 OD(OD600) 세균 현탁액 1개추가. 4°C에서 5분 동안 5,000 x g의 현탁액을 원심분리합니다.
- 상체를 폐기하고 정지 침전을 위해 1.5mL 튜브에 멸균 1x PBS 버퍼1mL을 추가합니다.
- 원심분리기에서 5,000 x g에서 5분 동안 4°C; 상부체를 폐기합니다.
- 2.4.2 및 2.4.3 단계를 반복합니다.
- 세균성 강수량에 멸균 1x PBS 버퍼 200 μL을 추가합니다.
- 10% 자당 용액의 600 μL, 10mm ATP의 200 μL(식자극제 의 작용), 세균 현탁액 200 μL을 멸균 1.5mL 튜브에 넣습니다. 소용돌이에 의해 혼합. 또는 열 불활성화 혈액에서 세균성 펠렛을 중단하십시오.
- 열 불활성화 혈액의 준비
- 항응고제 튜브로 신선한 혈액을 수집합니다.
- 신선한 혈액의 2-3 mL을 가져 가라. 4°C에서 10분 동안 1,000 x g의 원심분리기에서 혈장 및 혈액 세포를 분리합니다. 혈액은 원심 분리 및 세척 과정에서 손실됩니다; 사용량을 미리 계산해야 합니다.
- 플라즈마를 새로운 1.5mL 튜브로 수집하고 1시간 동안 56°C에서 열 비활성화합니다.
- 혈액 세포의 현탁액을 위해 멸균 1x PBS 버퍼 500 μL을 1.5 mL 튜브에 추가하십시오. 원심분리기는 4°C에서 10분 동안 1,000 x g의 원심분리기를 한 다음 상체를 폐기합니다.
- 두 번 반복 단계 2.4.7.4.
- 열 불활성화 된 혈장으로 혈액 세포를 다시 중단하여 열 불활성화 혈액을 얻습니다.
- 걸음 2.4.1 에서 2.4.4 단계를 수행하여 1 개의 OD 세균 펠릿을 얻습니다.
- 열 불활성화 혈액의 1 mL로 펠렛 박테리아를 다시 중단.
- 박테리아 현탁액으로 모기에 먹이.
- 24 시간 동안 모기를 굶주리고, 항생제가 박테리아를 먹이기 전에 대사할 수 있게 합니다.
- 멤브레인 공급 시스템을 조립합니다.
- 멸균 된 피더 유닛을 파라필름, 또는 콜라겐 멤브레인으로 밀봉하십시오.
- 플라스틱 링을 착용하고 먹이 중 마찰로 인해 파손되지 않도록 파라필름으로 고정하십시오.
- 준비된 세균용 용액을 피더 유닛에 천천히 추가합니다. 2웰 피더 유닛 중 하나만 용액으로 채워지고 시약 낙하 측에서만 피더 유닛을 덮을 수 있습니다.
- 피더 유닛을 37°C로 예열된 먹이 시스템에 연결하여 모기를 유치하기 위해 인간의 온도를 시뮬레이션합니다. 먹이 장치를 모기로 가득 찬 종이 컵에 놓고 90 분 동안 먹습니다.
- 먹이기 후에는 모기를 3-5분 동안 4°C의 온도로 복종하여 마취하고 얼음차가운 페트리 접시에 모기를 마취시합니다.
- 추가 연구를 위해 완전히 기만된 모기를 선택하십시오.
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Representative Results
항생제로 치료된 모기의 중간구와 항생제 없이 DNA 추출을 위해 꺼내졌고, qPCR은 보편적인 세균성 프라이머로 수행되었다. 도 1은 대조군 및 항생제 치료 군에서 세균성 16S rRNA의 발현을 나타낸다. 결과는 창자 박테리아의 대략 98%가 제거되고, 페니실린과 연쇄상 구균의 창자 살균이 성공했다는 것을 보여줍니다.
설명된 방법으로, 박테리아 긴장은 고립되고 확인되었습니다. C. meningosepticum은 크리서박테리움에속하는 비발효, 산화제 양성 그람 음성 호기성 유산균이다. 도 2는 C. meningosepticum와항생제 처리 모기의 혈액 공급 후 모기 당 누워 평균 계란을 보여줍니다. 도 3은 C. meningosepticum을포함하는 혈액 식사 후에 난소 발달 관련 유전자 24 h의 발현을 나타낸다. 난소 발달 관련 유전자 및 프라이머 서열에 대한 개요는 표 1에나열됩니다.
장 내 세균에서 분리된 균주는 장 내 세균을 제거하고 완전히 입개한 모기는 3개의 그룹으로 나뉘었습니다. 제1군과 제2군에 있는 5명의 암컷은 산란량을 계산하기 위해 사용되었고, 제3군에 있는 10명의 암컷은 각각 수유 후 각 여성 모기의 24시간 후에 난소 발달과 관련된 유전자 발현을 검출하는 데 사용되었다. 결과는 대조군과 공급 군의 계란 생산에 있는 중요한 변경이 없다는 것을 보여줍니다.
도 1: 항생제 치료 후 16S rRNA의 발현. 치료되지 않은 항생제를 가진 모기는 대조군으로 봉사했습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2:모기 배란에 대한 장 내 미생물의 효과. 표시된 박테리아 긴장은 혈액과 혼합하고 항생제 처리한 모기에게 공급되었습니다. 치료되지 않은 창자 기만 미생물을 가진 모기는 대조군으로 봉사했습니다. 데이터는 평균 ±SEM으로 표시됩니다.
그림 3: 혈액 공급 후 재생관련 유전자의 발현. 카테프신 B(A),미토콘드리아 ATPase 억제제(B),리보솜 생물 발생 단백질 브릭스(C),그리고 세린 / 트레오닌 단백질 키나아제 리오2(D)의혈액 공급 후 24 시간 동안 항생제 처리 모기를 나타내는 박테리아 균주와 함께 발현. 치료되지 않은 장 장 기만 미생물을 가진 모기는 대조군으로 봉사했습니다. 각 점은 모기를 나타내고 각 선은 그룹의 중앙값을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
| 이름 | 유전자 수 | 프라이머 시퀀스 |
| 카테핀 B | AAEL009642 | 포워드 프라이머-개게가아그타그GTGGGGA |
| 역프라이머-AATCCCACATCCACCCAGTA | ||
| 미토콘드리아 ATPase 억제제 | AAEL004284 | 포워드 프라이머-CAACTGCACAAGAGAGAGA |
| 역 프라이머 -ACGTGCGATAGCTCTCTCTCTCTCTCTTCGT | ||
| 리보솜 생물 발생 단백질 브릭스 | AAEL001917 | 포워드 프라이머-GAACAGCAGCGAATGAA |
| 리버스 프라이머-TTGGCCTT가가그CGCTT | ||
| 세린/스레오닌 단백질 키나제 리오2 | AAEL011114 | 포워드 프라이머-가가가아가카카카카카카카카카카카카카카카카카카카카카카카카카카카카카카카카 |
| 역프라이머-TCGAATGGCTTCCATTTC |
표 1: 난소 발달 관련 유전자 및 프라이머 서열.
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Discussion
숙주 세균 상호 작용에 대 한 연구는 다른 창 자 미생물 다양 한 메커니즘을 통해 그들의 호스트 생리학에 영향을 발견. 이 기사에서는 모기 미드구트 해부, 재배장 세균 배양, 항생제 치료, 관심 있는 박테리아 재도입 등 모기 장내 미생물의 각 역할을 조사하는 방법을 소개합니다.
성공적인 항생제 치료를 위해, 다음과 같은 세부 사항은 실험을 수행에서 고려되어야한다. 본 프로토콜에서, 모기는 3일11,,16일동안 mL당 페니실린 20단위 및 연쇄상구균 20μg를 포함하여 10% 자당 용액으로 촉촉한 면공을 사용하여 치료하였다. 페니실린은 그람 양성 박테리아에 대한 광범위한 항생제로 봉사하고, 연쇄상 구균은 그람 음성 박테리아에 대한 광범위한 항생제로 봉사20. 항생제의 적절한 보존은 효율적인 항생제 치료에 필수적이다(21). -18°C에 저장하면 페니실린 G의 안정성이 최소 3m입니다. 연쇄상 구균은 4 °C 22에 저장하면 적어도12m동안 안정적입니다. 항생제 브랜드 나 저장 시간의 차이는 미생물 통관에 약간의 차이를 일으킬 수 있지만, 각 항생제 치료 후 효율성을 확인할 필요가있다. qPCR 이외에, 플레이트를 확산하거나 PCR을 사용하는 것은 일반적으로 항생제 치료의 효율을 평가하는 데사용된다(23,,24). 더욱이, 항생제 치료 후 다른 박테리아로 오염되는 모기를 방지하기 위해, 수유 분석은 슈퍼 깨끗한 벤치 아래에 조립 살균 장비로 수행 될 필요가있다.
세균성 구강 수유 전에, 모기는 항생제가25대사될수 있도록 24 시간 동안 굶어져야 합니다. 이것은 모기가 박테리아 액체를 섭취하는 것을 돕을 만할뿐만 아니라 항생제가 박테리아를 죽이는 것을 방지합니다.
명백하게, 이 프로토콜은 주로 재배 박테리아의 효과를 조사하기위한 것입니다. 척추동물 및 무척추 동물 숙주의 장내 미생물을 연구하기 위해, 항생제 치료 숙주로 재배 가능한 박테리아의 재도입은 최근 연구에서88,26,,27에서일반적으로 사용된다. 또한, 배양된 장내 세균의 초기 식별은 일반적으로 식민지 크기, 모양, 색, 가장자리, 불투명도, 높이 및일관성(28)의특성에 기초한다. 비-컬터링 균의 경우, 높은 처리량 시퀀싱 계 메타노믹 접근법은 미드구트미생물(29),30,,31의총 조성에 대한 포괄적인 정보를 제공할 가능성이 높다. 그러나, 비 culturable 박테리아와 호스트 사이 상호 작용은 크게 미개척 남아.
이 문서는 모기 oviposition에 창 자 미생물의 효과 연구 하는 두 가지 대체 옵션을 제공 합니다., 열 불 활성화 혈액 또는 설탕 공급 다음 혈액 공급 다음 박테리아의 이식 박테리아와 박테리아의 혼합. 이 원고의 대표적인 결과 첫 번째 옵션을 채택하고 후자의 메서드는 유사한 결과를 생성합니다. 1개의 특정 박테리아 긴장으로 경구 수유 후에 각종 연구 결과는 행해질 수 있었습니다. 후속 분석은 미생물 인자가 모기 운동 동작을 조절하는 방법을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 단백질 정량화 분석은 소화에 다른 박테리아의 효력을 연구하기 위하여 따를 수 있었습니다. 사소한 수정으로, 이 방법은 영양 흡수, 면역, 발달, 생식 및 벡터 능력을 포함하여 모기 생리학을 향한 다양한 미생물의 각각의 효력을 연구하기 위하여 이용될 수 있었습니다.
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Disclosures
저자는 공개 할 이해 상충이 없습니다.
Acknowledgments
이 작품은 중국 국립 자연과학 재단(81902094, 81600497)과 후난성 과학 기술 계획 프로젝트(2019RS1036)의 지원을 받았습니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Adenosine 5′-triphosphate disodium salt hydrate | Sigma | A2383 | Adenosine 5′-triphosphate disodium salt hydrate has been used to prepare adenosine triphosphate (ATP) standard solutions |
| Aedes aegypti | Female mosquitoes | ||
| Anticoagulant tube | BD Vacutainer | 363095 | Collect fresh blood |
| Centrifuge tube | Sangon Biotech | F601620-0010 | 1.5 ml, Natural, Graduated, Sterile |
| Cotton balls | |||
| Disposable Tissue Grinding Pestle | Sangon Biotech | F619072-0001 | 70 mm Long, Conical, Blue, Sterile |
| Ethanol absolute | Paini | Dilute it to 75% ethanol | |
| Forceps | RWD | F11029 | Dissection |
| Hemotek Membrane Feeding System | Hemotek | Components of the feeding system, including Hemotek temperature controller, feeder-housing assembly, metal feeder assembled. | |
| Incubator shaker | ZQZY-78AN | ||
| Inoculation Loops | Sangon Biotech | F619312-0001 | 10 μl, Yellow |
| LB Agar Powder | Sangon Biotech | A507003 | Tryptone 10.0 g, Yeast Extract 5.0 g, NaCl 10.0 g, Agar 15.0 g. |
| LB Broth Powder | Sangon Biotech | A507002 | Tryptone 10.0 g, Yeast Extract 5.0 g, NaCl 10.0 g. |
| Microscope | Zeiss | Stemi508 | |
| Paper cup | Place mosquito | ||
| Parafilm | Sangon Biotech | F104002 | 4 inx 125 ft |
| Petri dish | Sangon Biotech | F611203 | |
| Penicillin G procaine salt hydrate | Sangon Biotech | A606248 | White powder. Soluble in water, soluble in methanol, slightly soluble in water, ethanol |
| Single Channal Pipettor | Gilson | ||
| Streptomycin sulfate | Sangon Biotech | A610494 | Streptomycin sulfate is a glucosamine antibiotic that interferes with the synthesis of prokaryotic proteins. |
| Sucrose | Sangon Biotech | A502792 | Soluble in water, ethanol and methanol, slightly soluble in glycerol and pyridine. |
| TIANamp Bacteria DNA Kit | TIANGEN | DP302 | Extract DNA |
| Utility Fabric-Mosquito Netting White | |||
| Vortex mixer | Scintic Industries | S1-0246 | |
| 1.5ml EP tube | Sangon Biotech | F600620 | |
| 10X PBS buffer | Sangon Biotech | E607016 | This product is a 10X solution. Please dilute it 10 times before use. The pH value is 7.4. |
References
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