Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Behavior
Click here for the English version

Behavior

מודל פיצול שינה כרוני באמצעות רוטור מסלולי רוטט כדי לגרום לגירעון קוגניטיבי והתנהגות דמוית חרדה בעכברים צעירים מסוג בר

Published: September 22, 2020 doi: 10.3791/61531
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1,2, 1,3
1Department of Neurology, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430000, China, 2Key Laboratory of Neurological Diseases of Chinese Ministry of Education, The School of Basic Medicine, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430000,China, 3Department of Pharmacology, School of Basic Medical Science; State Key Laboratory of Medical Neurobiology, Institutes of Brain Science and Collaborative Innovation Center for Brain Science, Fudan University, Shanghai 200032, China

Summary

מוצג כאן הוא פרוטוקול עבור פיצול שינה כרונית (CSF) מודל מושגת על ידי רוטור מסלולית נשלט חשמלית, אשר יכול לגרום גירעון קוגניטיבי מאושר והתנהגות דמוית חרדה בעכברים צעירים מסוג פראי. מודל זה יכול להיות מיושם כדי לחקור את הפתוגנזה של הפרעת שינה כרונית והפרעות הקשורות.

Abstract

הפרעות שינה שכיחות בדרך כלל באוכלוסיות כמחלה כרונית או כאירוע שהתלונן. הפרעת שינה כרונית מוצעת להיות קשורה קשר הדוק לפתוגנזה של מחלות, במיוחד מחלות ניווניות. לאחרונה מצאנו כי חודשיים של פיצול שינה יזמו שינויים התנהגותיים ופתולוגיים דמויי אלצהיימר בעכברים צעירים מסוג פראי. בזאת, אנו מציגים פרוטוקול מתוקנן להשגת פיצול שינה כרוני (CSF). בקצרה, CSF נגרם על ידי רוטור מסלולית רוטט ב 110 סל"ד ופועל עם מחזור חוזר של 10 s-on, 110 s-off, במהלך שלב אור על (8:00 AM-8:00 PM) ברציפות במשך עד 2 חודשים. ליקויים של למידה מרחבית וזיכרון, התנהגות דמוית חרדה אך לא דיכאון בעכברים כתוצאה של דוגמנות CSF, הוערכו עם מבוך מים מוריס (MWM), זיהוי אובייקט חדש (NOR), מבחן שדה פתוח (OFT) ומבחן שחייה כפוי (FST). בהשוואה למניפולציות שינה אחרות, פרוטוקול זה ממזער את עבודת הטיפול ומגדיל את יעילות המידול. היא מייצרת פנוטיפים יציבים בעכברים צעירים מסוג פראי ויכולה להיווצר באופן פוטנציאלי למגוון מטרות מחקר.

Introduction

הפרעות שינה שכיחות יותר ויותר הן בחולים עם מצבים מטרידי שינה והן באנשים בריאים עם אירועים מטרידי שינה. זה נצפתה כי חולים עם מחלות ניווניות, כאב כרוני, מתח נפשי, מחלות מערכת הנשימה, מחלות מערכת השתן, וכו ', בדרך כלל להתלונן על חוויות שינה לא נעימות1,2,3,4,5. דום נשימה בשינה חסימתית (OSA), תנועות גפיים תקופתיות בשינה (PLMS), נדודי שינה תחזוקה בין הפרעות שינה אחרות הן הסיבות הנפוצות ביותר, אשר לגרום פיצול שינה6,7. במדינות מפותחות, OSA יש מעל 5% עד 9% שכיחות באוכלוסייה הבוגרת ו 2% באוכלוסיית הילדים8,9,10. בינתיים, יש שיעור גדל והולך של האוכלוסייה הבריאה חווה הפרעות שינה בשל שימוש יתר של טלפונים חכמים, הרגלי שינה לא סדירים, רעשים מעצבנים, חובות עבודה, כגון משמרות לילה למטפלים. שינה מוכרת להיות חשוב עבור סיווג פסולת המוח11,12, איחוד זיכרון13,14, איזון מטבולי15,16, בין תהליכים פיזיולוגיים רבים אחרים. עם זאת, עדיין לא ידוע אם הפרעת שינה ארוכת טווח מעוררת שינויים פתוגנזה בלתי הפיכים בבני אדם בריאים, והאם זה האטיולוגיה או גורם תורם לפתח מחלות מערכת העצבים המרכזית, כגון מחלות ניווניות בעוד כמה שנים בהמשך הדרך. המטרה שלנו היא לדווח על מודל ניסיוני שמייצר גירעון קוגניטיבי יציב וניכר והתנהגות דמוית חרדה בעכברים צעירים מסוג פראי לאחר טיפול פיצול שינה של חודשיים. מודל זה יחול כדי לענות על השאלות המדעיות המפורטות לעיל.

הפרעות שינה מופיע כגורם סיכון פוטנציאלי לפתח מחלת אלצהיימר (לספירה) או דמנציה. קאנג ואח 'מצאו ותיארו לראשונה את החרפת הפתולוגיה של AD על ידי 6 שעות מחסור חמור בשינה17. לאחר מכן, מחקרים רבים אחרים דיווחו כי מניעת שינה או פיצול יכול להחמיר פתוגנזה במודלים עכברי AD מהונדסים18,19,20. עם זאת, מעט מאוד חוקרים חקרו את התוצאה של הפרעת שינה בעכברים צעירים מסוג פראי; כלומר, האם הפרעת שינה מעוררת התנהגות דמוית AD או שינויים פתולוגיים בעכברים צעירים מסוג פראי. בפרסום האחרון שלנו, דיווחנו כי חודשיים של פיצול שינה גרמו לגירעון זיכרון מרחבי ניכר והתנהגות דמוית חרדה, כמו גם הצטברות מוגברת של עמילואיד-β תאיים (Aβ) הן בקליפת המוח והן בהיפוקמפוס בעכברים פראיים בני 2-3 חודשים21. ראינו גם רמות ביטוי משתנות של סמני מסלול אנדוזום-אוטופגוזום-lysosome והפעלת microglia, אשר היה דומה לשינויים הפתולוגיים שדווחו ב- APP / PS1 עכברים21,22.

זה הציג פיצול שינה (SF) פרוטוקול אומת על ידי סינטון ואח'23 ושונה על ידי Li et al.24. בקצרה, רוטור מסלולי רוטט במהירות של 110 סל"ד קוטע את השינה למשך 10 שניות כל 2 דקות במהלך שלב האור (8:00 עד 20:00). שינוי מבנה השינה במודל זה התאפיין בעבר בהקלטות שינה אלקטרופיזיולוגיות ודווח על ידי Li et al.24, המציין עלייה משמעותית בזמן ההתעוררות וירידה בתנועת עיניים מהירה (REM) שינה בשלב האור, עם זמני השינה וההתעוררות הכוללים (ב 24 שעות) מושפע לאחר יותר מ 4 שבועות' דוגמנות24. נכון לעכשיו, שינה מוחלטת או מניעת שינה חלקית הם המודלים הנפוצים ביותר מניפולציה שינה. מחסור מוחלט בשינה מבוצע בדרך כלל על ידי טיפול עדין מתמשך או חשיפת החיה לחפצים חדשניים, לחילופין על ידי סיבוב רציף של בר או הליכון ריצה25,26,27,28,29. מסיבות אתיות, מניעת שינה מוחלטת היא בדרך כלל קצרה מ 24 שעות. המודל הנפוץ ביותר ליישם מניעת שינה חלקית היא שיטת פלטפורמת המים, אשר בעיקר ablating REM שינה30,31,32. גישות אחרות המשתמשות בהליכון או בסרגל המטאטא לאורך תחתית הכלוב, עלולות לגרום לפיצול שינה כאשר הן מוגדרות במרווחי זמן קבועים33,34,35,36,37,38. ראוי לציין כי SF מפריע לשינה וגורם לסירוגין עוררות על פני כל שלבי השינה24. אחד היתרונות הבולטים של מודל CSF זה החלת רוטור מסלולית היא שזה יכול להתבצע ברציפות במשך חודשים נשלט באופן אוטומטי על ידי מכונות, אשר נמנע עיבוד תכופים עבודה מדי יום למעט ניטור קבוע. יתר על כן, המנגנון יאפשר בו זמנית מודל כלובים מרובים של עכברים תחת התערבויות במדים. במהלך כל מפגשי הדוגמנות, עכברים שוכנים בכלובי הבית שלהם עם מצעים וחומרי קינון רגילים, בעוד כמה שיטות אחרות דורשות חשיפה לסביבות מגוונות ומתח בלתי נמנע.

פיצול השינה התאפיין בעבר בשיטת מניפולציית השינה, המחקה עוררות תכופה במהלך שלב השינה וריבאונד שינה משמעותי בשלב ההתעוררות. בספרות מסוימת, CSF נחשב למודל החייתי של OSA39,40. במחקר זה, הרציונל של התדירות שנבחרה של עוררות להיות 30 פעמים בשעה מבוסס על תצפית של מדדי עוררות בחולים עם דום נשימה בשינה בינוני עד חמור. זה נצפתה כי פיצול שינה של 4 שבועות גדל באופן משמעותי השהיה עוררות hypercapnic ואת סף עוררות מישוש, אשר יכול להימשך לפחות 2 שבועות לאחר ההתאוששות24. פנוטיפ זה הוסבר על ידי חשיפת הפחתת הפעלת c-fos בנורדנרגי, אורקסינרגי, היסטאמינרגי, ונוירונים פעילים להתעוררות שימוש בתגובה hypercapnia, כמו גם הקרנות קטכולאמינרגיות מופחתת orexinergic לתוך קליפת המוח cingulate24. עם זאת, יש צורך לציין כי התכונה החשובה ביותר ב- OSA היא היפוקסיה הנגרמת על ידי חסימת דרכי הנשימה, מה שמוביל לשיבוש שינה41,42. הפרעות שינה והיפוקסיה חוזרת ונשנית אינטראקציה הדדית אחד עם השני בפתוגנזה OSA. לכן, פיצול שינה לבד לא יוכל להדגים באופן מלא את כל התכונות העיקריות של OSA בעכברים.

בזאת, אנו מציגים פרוטוקול מתוקנן כדי מודל פיצול שינה כרוני בעכברים צעירים מסוג פראי. גירעון קוגניטיבי וחרדה כמו גם התנהגויות דמויי דיכאון לאחר טיפול CSF הוערכו על ידי מבוך מים מוריס, זיהוי אובייקט רומן, מבחן שדה פתוח, ומבחן שחייה בכפייה. חשוב לציין כי מודל זה צריך להילקח בכללותו שמייצר פנוטיפים של דפוס שינה dysregulated, גירעון קוגניטיבי, והתנהגות דמוית חרדה. המודל הנוכחי יכול להיות מיושם, אך לא להיות מוגבל, למטרות הבאות: 1) חקירה נוספת של מנגנוני הפתוגנזה התפקודיים או המולקולריים הנגרמים על ידי הפרעת שינה כרונית בעכברים צעירים ללא נטייה גנטית, 2) זיהוי המסלול הישיר המוביל לניוון עצבי שיזם הפרעת שינה, 3) חקירת הטיפולים לשיפור פנוטיפים הנגרמים על ידי הפרעת שינה כרונית, 4) לימוד מנגנוני ההגנה/פיצוי המהותיים בעכברים מסוג בר על הפרעת שינה כרונית, 5) יש ליישם לחקר ויסות שינה ומנגנוני מעבר מדינה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

פרוטוקול זה אושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של בית החולים טונגג'י, המכללה הרפואית טונגג'י, אוניברסיטת Huazhong למדע וטכנולוגיה.

1. סינון והכנה של עכברים לניסוי

  1. בחר עכברים זכרים בוגרים מסוג בר (בני 8-10 שבועות) במשקל של 20-28 גרם לכל הניסוי.
    הערה: עכברי C57BL/6 מסוג בר מתקבלים ממרכז המחקר חוביי לחיות מעבדה, חוביי, סין.
  2. הקצה באופן אקראי את כל העכברים ל- CSF ולקבוצת הבקרה. בית 3-5 עכברים בכל כלוב כדי למנוע לחץ בידוד חברתי. מספר העכברים השוכנים בכלובי הבקרה תואם לזה השוכן בכלובי CSF הזוגיים.
    הערה: עכברים באותם כלובים קבוצתיים מחוברים לביצוע ניסויים התנהגותיים במעקב.
  3. אתר את כלובי הבקרה באותו חדר עם כלובי CSF, כדי לשמור על הסביבה שמסביב ואפקטי העבודה זהים.
  4. מספר ולסמן את העכברים בכל קבוצה על אוזניהם באמצעות תג האוזן למטרות ניטור.
  5. שמור על טמפרטורת הסביבה ולחות בין 21 °C (70 °F) ו 35%-60 %.
  6. שמרו על סביבת הסביבה במחזור 12 שעות של אור כהה (8:00 עד 20:00, 20:00 עד 20:00), כדי למנוע השפעה מוטה על קצב השינה הרגיל בעכברים.
  7. צמצם את הרעש וההפרעות בזמן שהחוקר נמצא בחדר הדוגמנות.
  8. לספק לעכברים מספיק מזון ומים. השתמש חרירים ארוכים עם טיפים שסתום כדור על בקבוקי מים, כדי למנוע דליפת מים על תנועות האסדה. הדקו את בקבוק המים על גבי הכלוב במעיין כדי למנוע את נקע הבקבוק במהלך ריצת הרוטור.

2. הכנה והגדרה של הרוטור מסלולית

  1. הכינו רוטור מסלולי מבוקר חשמלית עם פלטפורמה מוגדלת (67 ס"מ x 110 ס"מ), שעליה ניתן למקם 10 כלובים לכל היותר.
  2. הגדר את הרוטור מסלולית על במהלך שלב אור על (8:00 AM-8:00 PM) נשלט על ידי טיימר תוכנית, וזה הזמן שבו עכברים להפגין את רוב השינה היומית שלהם.
  3. הגדר את הרוטור מסלולית עם מהירות של 110 סל"ד ומחזור חוזר של 10 s-on, 110 s-off נשלט עם טיימר מצב מוצק.
    הערה: קיבולת העומס של הפלטפורמה היא 50 ק"ג. משרעת קבועה של אופק הרוטור רוטט הוא 2.5 ס"מ.
  4. הדקו את כלובי ה-CSF על גבי פלטפורמת הרוטור באמצעות קפיצים עבים כדי למנוע נקע בכלובים בסיבובי הפלטפורמה.

3. מידול וניטור כרוניים של פיצול שינה

  1. מניחים כלובים של CSF ועכברי הבקרה בחדר המידול במשך שבוע לפני הניסויים, כדי לאפשר לעכברים להסתגל לסביבת הסביבה.
  2. בתחילת המידול, ודא שלכל העכברים יש גישה חופשית למזון ומים במהלך סיבובים מסלוליים.
  3. בתחילת הדוגמנות, להתבונן לפחות 1 שעות כדי להבטיח את הרוטור מסלולית הפועל בהילוך.
  4. במהלך תקופת המידול, בדוק כי הרוטור מסלולית פועל כראוי תנאי עכברים כל 2 ימים כדי להבטיח עכברים יש מספיק מזון ומים. החלף מצעים של כלובים מדי שבוע.
  5. במהלך תקופת הדוגמנות, שוקלים את העכברים מדי שבוע בשעה 8:00 בבוקר בעת שינוי המצעים. הסר את העכברים עם ירידה משמעותית במשקל מן הדוגמנות, וגם מקבוצות הניסוי.
    הערה: ירידה משמעותית במשקל מוגדרת כמשקל של פחות מ-20 גרם שנמשך שבועיים.
  6. במהלך כל מפגשי הדוגמנות, הסר את התוקפן, אם בכלל, מהכלוב וגם מקבוצות הניסוי.
  7. לאחר סיום הדוגמנות, המשיכו לתחזק ולהאכיל את העכברים בחדר המקורי.

4. מבחן מבוך המים של מוריס (MWM)

  1. הכנה לבחינה
    1. מכינים את המנגנון של מיכל עגול מלא במים חמים (20-23 מעלות צלזיוס).
    2. להשעות ארבעה שלטים עם צורות וצבעים שונים על המסך המקיף את הטנק בארבעה כיוונים רבעים כהתייחסות ראייה רחוקה. הפוך את המים להיראות אטומים על ידי תוספת של אבקת חלב.
    3. אתר פלטפורמה באמצע הרבע הדרום-מערבי.
  2. מבחן ההכשרה
    1. בכפוף לארבעה מבחנים רצופים בין השעות 08:00 עד 12:00 בכל יום במהלך תקופת אימונים בת 5 ימים.
    2. שחרר כל עכבר למים הפונים אל הוול הצדדי באחד מארבעה רבעים בארבעה ניסויים. בכל ניסיון, לאפשר לעכבר לשחות במשך 60 שניות כדי למצוא את הפלטפורמה. אם העכבר אינו מסוגל להגיע לפלטפורמה בתוך 60 s, להדריך אותו לפלטפורמה ולהישאר שם במשך 15 s.
    3. השתמש במערכת מעקב וידאו כדי להקליט באופן אוטומטי את השהיית הבריחה של עכברים כדי למצוא את הפלטפורמה המוסתרת.
  3. מבחן הבדיקה
    1. ערוך את מבחן הבדיקה ביום השישי לאחר 5 ימי אימונים.
    2. הסר את הפלטפורמה. שחרר כל עכבר מהרביע הצפון-מזרחי ואפשר לו לשחות במשך 60 שניות
    3. השתמש במערכת מעקב וידאו כדי להקליט באופן אוטומטי את נתוני המעקב של עכברים.

5. בדיקת זיהוי אובייקטים חדשנית (NOR)

  1. השלב המוכר
    1. מניחים עכברים במיכל (אורך 30 ס"מ, רוחב 28 ס"מ, גובה 35 ס"מ) ברצף, המכיל שני עותקים של אובייקטים (A1 ו- A2). אפשר לעכברים לחקור בחופשיות (10 דקות לכל ניסיון).
    2. השתמש במערכת מעקב וידאו כדי להקליט באופן אוטומטי את נתוני המעקב של עכברים.
  2. שלב הבדיקה
    1. בצע את ניסוי הבדיקה לאחר עיכוב של שעה של השלב המוכר. החלף את אחד האובייקטים המקוריים על ידי אובייקט חדשני ("רומן") במיכל שמירה על השני ללא שינוי. להחזיר את העכברים למיכל ולאפשר לו לחקור במשך 5 דקות לכל ניסיון.
    2. השתמש במערכת מעקב וידאו כדי לתעד באופן אוטומטי את הזמן המושקע בחיפוש של כל אובייקט על-ידי כל עכבר.
      הערה: חקר האובייקט נקבע על-ידי ליקוק, רחרוח, לעיסה או הזזת ויבריסא תוך התמצאות האף לכיוון ופחות מ-1 ס"מ מהאובייקט. מדד האפליה (DI) מחושב עם המשוואה (TN - TF)/(TN + TF), שבה TN = זמן שהושקע בחקר האובייקט "הרומן" ו- TF = זמן שהושקע בחקר האובייקט "המוכר".

6. מבחן שדה פתוח (OFT)

  1. מכינים את המנגנון של מיכל (30 ס"מ x 28 ס"מ x 35 ס"מ).
  2. במהלך הבדיקה, מניחים כל עכבר במרכז הטנק ומאפשרים לו לחקור בחופשיות במשך 5 דקות. לנקות את הטנק עם 75% אתנול לאחר כל משפט, כדי למנוע את ההשפעות שנותרו של העכבר הקודם.
  3. השתמש במערכת מעקב וידאו כדי להקליט באופן אוטומטי את נתוני המעקב של עכברים.

7. מבחן שחייה כפוי (FST)

  1. הכינו את המנגנון של כלי גלילי פתוח, המכיל מים (20-23 מעלות צלזיוס) בעומק של 15 ס"מ.
  2. במהלך הבדיקה, מניחים כל עכבר לתוך הצילינדר ומאפשרים לו להישאר שם במשך 6 דקות.
  3. השתמש במערכת מעקב וידאו כדי להקליט באופן אוטומטי את זמן חוסר התנועה במהלך 4 דקות הבדיקה האחרונות על-ידי כל עכבר.
    הערה: העכבר נקבע להיות ללא תנועה כאשר הוא מפסיק נאבק צף במים, ביצוע רק תנועות אשר נחוצים כדי לשמור על ראשו מעל המים.

8. ניתוח נתונים

  1. לנתח נתונים באמצעות תוכנת ניתוח סטטיסטי (למשל, GraphPad פריזמה 6.0).
  2. בטא את כל הנתונים כ- SEM ± הממוצע.
  3. השווה את השהיית הבריחה במבחן MWM בין שתי קבוצות באמצעות ANOVA דו כיווני עם אמצעים חוזרים ונשנים ואחריו Bonferroni posttests. השוואות אחרות בין ה- CSF לבין קבוצות הבקרה נקבעות על-ידי בדיקות t שלא טופלו.
  4. שקול הבדלים משמעותיים אם P < 0.05 בכל הבדיקות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

כל התוצאות והנתונים הייצוגיות שוחזרו מהפרסום האחרון שלנו21. השימוש החוזר בנתונים הותר על ידי היומן המקורי.

העיצוב הניסיוני כולו מודגם לפי סדר הזמן, המציין את העיתוי של מידול CSF, בדיקות התנהגותיות של MWM, NOR, OFT ו- FST (איור 1A). השגנו משקולות של עכברים מדי שבוע מן CSF וקבוצות הבקרה, כדי לפקח על התנאים הכלליים שלהם במהלך מפגשי דוגמנות. לא נמצא הבדל ניכר בעליית המשקל בעכברים בין שתי קבוצות במהלך המידול (איור 1B).

כדי להעריך את ההשפעות של CSF על למידה מרחבית וביצועי זיכרון, ערכנו ניסוי התנהגותי MWM43,44. קבוצת CSF הציגה יכולות בריחה גרועות יותר כדי למצוא את הפלטפורמה לאורך 5 ימי אימונים בהשוואה לקבוצת הביקורת (איור 2A). במבחן הבדיקה, עכברי CSF בילו באופן משמעותי פחות זמן ברביע הממוקד וחצו את מיקום הפלטפורמה הקודם בפחות פעמים (איור 2B,C),ללא הפרש מהירות שחייה(איור 2D). תוצאות אלה לעיל הצביעו על כך שיכולות הלמידה המרחבית ואחזור הזיכרון של עכברים נפגעו לאחר CSF.

כמו כן, ערכנו בדיקת NOR להערכת זיהוי אובייקטים וזיכרון עבודה לטווח קצר לאחר CSF45. בשלב המוכר לא היה הבדל משמעותי בזמן החיפוש הכולל בין ה-CSF לקבוצת הביקורת (איור 3A). בהתאמה, לא נמצאו הבדלים בזמן החיפוש בין אובייקטים A1 ו-A2, בהתאמה בשתי קבוצות (איור 3B). התוצאות לעיל הבטיחו כי לא היו הבדלים ביכולות של העכברים לחקירה והעדפות למיקום. בשלב הבדיקה, מדד האפליה (DI) של עכברי CSF הופחת משמעותית לעומת פקדים (איור 3C), אשר הצביעו ככל הנראה על ליקויים בזיהוי אובייקטים וזיכרון עבודה לטווח קצר לאחר CSF.

ביצענו עוד OFT ו- FST, בהתאמה כדי לבחון התנהגויות כמו חרדה ודיכאון של עכברים46,47. מעניין, ב- OFT, נמצא כי קבוצת CSF בילתה פחות זמן באזור המרכזי מאשר קבוצת הביקורת (איור 4A), אשר המחישה כי פיצול שינה יכול לגרום להתנהגות דמוית חרדה במידה מסוימת. בנוסף, עכברי CSF הציגו מרחק כולל ארוך יותר במיכל (איור 4B), מה שמרמז על פעילות ספונטנית מוגברת לאחר המידול. עם זאת, מידול CSF זה לא יכול לגרום להתנהגות דמוית דיכאון, שאומתה על ידי הבדל לא משמעותי בזמן חוסר התנועה בין שתי קבוצות שנחשפו ל- FST (איור 4C).

Figure 1
איור 1: תרשים הזרימה של הליך תכנון ניסיוני. (A)הליך התכנון הניסיוני המציין את העיתוי של מידול CSF ובדיקות התנהגותיות (כלומר, MWM, NOR, OFT ו- FST). (B)עקומות משקל הגוף של CSF ועכברי הבקרה במהלך החודש הראשון לאחר מודל CSF הוקמה. נתון זה שונה מ Xie ואח '21אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של נתון זה.

Figure 2
איור 2: CSF לקוי למידה מרחבית ויכולות זיכרון מוערך על ידי מבחן MWM. (A)עכברי CSF ביצעו השהיית בריחה ארוכה יותר בהשוואה לעכברי הבקרה במהלך מבחן האימון בן 5 הימים. **p < 0.01. במבחןהבדיקה, עכברי CSF הציגו פחות אחוזי זמן שהושקעו ברביע הפלטפורמה בניגוד לעכברי הבקרה. הלוח העליון מציג מעקבים מייצגים של שתי קבוצות. p < 0.0001. במבחןהבדיקה, קבוצת CSF ביצעה פחות פעמים של חציית מיקום הפלטפורמה בהשוואה לקבוצת הביקורת. *p < 0.05. (D)מהירות השחייה של שתי קבוצות במבחן החללית. (ש') מציין ששינויים בין קבוצות שונות לא היו משמעותיים. כל הנתונים הוצגו כ ממוצעים ± SEM. n = 10 לכל קבוצה. נתון זה שונה מ Xie ואח '21אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של נתון זה.

Figure 3
איור 3: CSF פגע בזיהוי אובייקטים ובזיכרון עבודה לזמן קצר שהוערך על-ידי בדיקת NOR. (A)זמן החקירה הכולל בין CSF לעכברי הבקרה בשלב המוכר, נ.ש. מציין שאין שינויים משמעותיים בין קבוצות שונות. (B) זמן החיפוש עבור אובייקטים A1 ו- A2 בהתאמה בין שתי קבוצות בשלב המוכר. נ.ש. מציין שאין שינויים משמעותיים בין קבוצות שונות. (C) בשלב הבדיקה, מדד האפליה (DI) של קבוצת CSF ירד באופן משמעותי בהשוואה לזה של קבוצת הביקורת. *p < 0.05. כל הנתונים הוצגו כ ממוצעים ± SEM. n = 10 לכל קבוצה. נתון זה שונה מ Xie ואח '21אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של נתון זה.

Figure 4
איור 4: CSF החריף התנהגות דמוית חרדה אך לא דמוית דיכאון שהוערכה על ידי OFT ו- FST. (A)עכברי CSF בילו פחות זמן באזור המרכזי במהלך 5 דקות שנצפו בהשוואה לעכברי הבקרה ב- OFT. *p < 0.05. (B)קבוצת CSF הציגה מרחק כולל ארוך יותר שהועבר במיכל לעומת קבוצת הביקורת ב- OFT. *p < 0.05. (C) זמן חוסר התנועה בין CSF וקבוצות הבקרה ב- FST. נ.ש. מציין שאין שינויים משמעותיים בין קבוצות שונות. כל הנתונים הוצגו כ ממוצעים ± SEM. n = 10 לכל קבוצה. נתון זה שונה מ Xie ואח '21אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של נתון זה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

צעדים קריטיים בפרוטוקול הנוכחי כוללים הקמת מכונות פיצול שינה עם הפרמטרים הממוטבים בהתאם למטרת המחקר ושמירה על העכברים בסביבת מגורים נוחה ושקטה לאורך כל מפגשי המידול. זה גם חיוני כדי להחליט על העיתוי הנכון כדי להפריע או להפסיק פיצול שינה ולארגן בדיקות התנהגותיות עבור עכברים אלה. כמו מודלים אחרים של מניפולציה בשינה, חשוב לבצע את הפרוטוקול בחדר ייעודי עם מחזורי אור מבוקרים וריק של כל הפרעות מיותרות אפשריות. יש לנקוט מאמצים כדי למנוע גרימת רעשים ולצמצם את זמן הפעולה של החוקרים לבדיקה, מילוי מזון ואספקת מים, שינוי המצעים וכו '. במקרים נדירים, ישנם תוקפנים התוקפים את המלטה, במיוחד בעת החניכה של מפגשי שיבוש שינה לא נוחים. התוקפן כאשר קיים צריך להיות מוסר מתוך הכלובים הביתה, כמו גם את קבוצות הניסוי. רוב בעלי החיים הניסיוניים למעט מעטים מניסיוננו, יתאימו את עצמם לטיפול ויצליחו לגשת למים ולמזון לפי הצורך. עכברים עם בעיות מהותיות, כגון שיניים מעוותות, תת משקל ופצעים בעור עלולים לגרום לירידה במשקל או לחולשה. הם גם צריכים להימנע משימוש עבור דוגמנות. מכיוון שפרוטוקול זה עלול לגרום ללחץ כרוני ולדיסרגולציה מטבולית, חיוני להשתמש בעכברים המסוקרים בקריטריונים אחידים, כגון משקל גוף, למידול וניסויים.

בפרוטוקול המתואר, הרוטור מסלולית יופעל באופן אוטומטי במהלך 8:00 AM-8:00 PM (אור על) מדי יום, וזה הזמן שבו עכברים להפגין את רוב חיי היומיום שלהם. הרוטור הוגדר פועל על מחזור חוזר של 10 s-on, 110 s-off במהלך שלב אור על כדי לגרום עוררות תכופה. משכי מידול שונים היו מעוררים פנוטיפים שונים. פיצול שינה חריף עלול לגרום לירידה מוחלטת במשך השינה, פעילות מוגברת של מערכת העצבים הסימפתטית, כגון רמות קורטיזון גבוהות ורגישות לאינסוליןלקויה 23,24. עם זאת, פיצול שינה כרוני הראה רמות קורטיזון מושפעות, וזמן שינה כולל מאוזן24. כל שינוי המבוסס על הפרוטוקול הנוכחי, כגון מחזורי תאורה, הגדרות רוטטות תואמות (מהירות, משרעת, מחזור חוזר וכו') ומשכי מידול, עלול לשנות את הפנוטיפים. הוא נדרש לבצע הקלטת שינה וניתוח מבנה שינה תחת הגדרות מידול שונות כדי לזהות את פנוטיפים שינה. זה עלול גם לגרום לשינויים התנהגותיים ופתולוגיים ייחודיים. כשחקרנו את הגירעון הקוגניטיבי לאחר פיצול שינה לטווח ארוך ולא לילה אחד ונטו להימנע מההשפעות המוטות של פיצול שינה לסירוגין על התנהגויות עכברים ב- MWM וב- NOR, ביצענו את שני הבדיקות ההתנהגותיות הללו לאחר סיום פרוטוקול CSF ביום 60. עם זאת, באופן בלתי נמנע, ההשפעה של שינה התאוששות בעכברים אולי בלבל את התוצאות עבור MWM ו- NOR הראו.

למרות מודל זה זכאי עם מודל פיצול שינה, הוא מורכב למעשה דפוסי שינה מקוטעים במהלך שלב האור, dysregulation של השעון הביולוגי, וריבאונד שינה מפצה בשלב האור. פרוטוקול זה יכול לגרום לא רק שינויים בדפוס השינה, אלא גם נוירו-אינפלציה משמעותית, חוסר איזון מטבולי, הפרעה למערכת החיסון וכו'21,23,24. כל התהליכים הפתולוגיים האלה יכולים לקיים אינטראקציה אחד עם השני ולתווך פנוטיפים כמו תזמורת. מודל זה צריך להילקח בכללותו כדי ליצור את העכברים עם פנוטיפים של דפוס שינה dysregulated, גירעון קוגניטיבי, והתנהגות דמוית חרדה בעכברים צעירים מסוג פראי. כפי שצוין בסעיף הקודם, מודל זה הוא לא בדיוק שיקוף OSA בשל חוסר היפוקסיה חוזרת ונשנית. מגבלה נוספת היא שקשה ליצור שינויים פתולוגיים מדויקים ופנוטיפים לשינה באותם עכברים. השתלת האלקטרודה EEG/EMG המיושמת באופן נרחב להקלטה בשינה גרמה באופן בלתי נמנע לגליוזיס חמור בקליפת המוח48. בשנים האחרונות יושמו טכניקות ניטור וידאו וניתוח תמונה המבוססות על בינה מלאכותית במחקרי שינה, אשר יאספו מידע שינה מדויק ללא השתלת אלקטרודה פולשנית49,50,51.

המשמעויות של שיטת CSF זו בהשוואה לשיטות קיימות כוללות: 1) שונה מפרוטוקולי מניעת שינה המבוצעים בדרך כלל במשך שעות או ימים, הפרוטוקול הנוכחי מחקה טוב יותר הפרעות שינה ארוכות טווח בבני אדם בריאים. ריבאונד השינה המפצה בעכברים מקוטעים בשינה משקף בצורה מושלמת את ההסתבכות בשעות היום ואת ביצועי העבודה המפגרים אצל אנשים עם איכות שינה ירודה במהלך הלילה52,53. 2) זהו עד כה מודל פיצול השינה הכרוני היחיד בעכברים צעירים מסוג פראי עם גירעון קוגניטיבי מאושר ופנוטיפים התנהגותיים דמויי דיכאון אך לא דמויי דיכאון, כמו גם שינויים פתולוגיים מולקולריים ניכרים ברקמת המוח. 3) טיפול זה גורם לגירויים מתונים יותר לעכברים, כך שהדוגמנות יכולה להימשך חודשים, אפילו עם אפשרות להתבצע בתקופות זמן ארוכות יותר. 4) עם הגדרות נאותות, מודל זה יכול ליצור פנוטיפים יציבים של הפרעות שינה, גירעון קוגניטיבי והתנהגות דמוית חרדה, אשר ניתן להשתמש בהם כמודלים למחלות או התערבויות לעיצובי מחקר שונים. 5) מודלים מסוימים של מניעת שינה דורשים התערבות מלאה בפגישה על ידי חוקרים כדי ליישם טיפול עדין או חפצים חדשניים. למעט ניטור רגיל, שיטה זו ממזערת את הטיפול בעבודה, מה שגם מבטל את ההטיה המלאכותית.

פרוטוקול CSF זה מספק את ההזדמנות לענות על מספר שאלות מדעיות מרכזיות, כגון, האם הפרעת שינה כרונית היא הגורם או התוצאה של מחלות ניווניות? האם הפרעת שינה כרונית הנגרמת פתוגנזה בגיל צעיר הפיך? האם מנגנוני הפיצוי על הפרעות שינה כרוניות משתנים בין הצעירים והזקנים, אנשים בריאים וחולים? פרוטוקול זה יכול להיות מיושם גם כדי לחקור את הטיפולים על ידי הערכת חומרת ושיפור של פנוטיפים התנהגותיים ומולקולריים. זה יהיה מיושם גם מודל העכברים עם craniectomy כרונית, הכנות השתלת סיבים אופטיים להקלטות פונקציונליות. יתר על כן, זה יכול לשמש אסטרטגיה התערבותית כדי לגרום או להחמיר פנוטיפים על גבי תנאים קיימים. לבסוף, זה יכול לשמש לחקר מנגנוני מעבר מצב שינה-התעוררות. מעניין, המודל הנוכחי CSF יכול לגרום חרדה כמו ולא התנהגות דמוית דיכאון בעכברים, אשר עולה בקנה אחד עם התצפית הקלינית כי הפרעת שינה בחולים צפוי להיות קשור הרבה יותר עם חרדה מאשר עם דיכאון54,55. הוא מספק מודל מעשי ללמוד הפרעות רגשיות מכרסמים.

לסיכום, אנו מציגים את הפרוטוקול של מידול פיצול שינה כרוני על ידי שימוש ברוטור מסלולי רוטט, אשר יכול לייצר פנוטיפים יציבים בעכברים צעירים מסוג פראי ולמזער את עבודת המידול ביעילות גבוהה. זה יכול להיווצר באופן פוטנציאלי עבור מגוון רחב של מטרות מחקר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (61327902-6 לוואנג ו- 81801318 ל- F.F. Ding). אנו מכירים ד"ר סיגריד Veasy להקמת מערכת ניסיונית SF בחביבות מתן פרטים טכניים. אנו מכירים ד"ר Maiken Nedergaard להערות מאלפות לניסויים הקשורים.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Any-maze behavior tracking system Stoelting,Inc,USA - A video-tracking system which was used to record the behavior track of mice.
C57BL/6J mice Hubei Research Center for Laboratory Animals, Hubei, China. - healthy male C57BL/6J mice aged 10-12 weeks were purchased from Hubei Research Center for Laboratory Animals
Graphpad Prism 6.0 Software Graphpad Software,Inc.USA - Graphpad Prism 6.0 software was used to draw statistical graphs.
Morris water maze system Shanghai XinRuan Information Technology Co.,Ltd,China XR-XM101 The system was used to perform Morris water maze test
Orbial rotor Shanghai ShiPing Laboratory Equipment Co.,Ltd,China SPH-331 The orbital rotor was used to establish the chronic sleep fragmentation model
Solid state timer OMRON Corporation, Kyoto, Japan H3CR-F8-300 The solid state time was used to control the frequency and time of the rotor running
Wooden Lusterless Tank - - length 30 cm, width 28 cm, height 35 cm The tank was used to perform open field test and novel object recognition test

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Peter-Derex, L., Yammine, P., Bastuji, H., Croisile, B. Sleep and Alzheimer's disease. Sleep Medicine Reviews. 19, 29-38 (2015).
  2. Mathias, J. L., Cant, M. L., Burke, A. L. J. Sleep disturbances and sleep disorders in adults living with chronic pain: a meta-analysis. Sleep Medicine. 52, 198-210 (2018).
  3. Murphy, M. J., Peterson, M. J. Sleep Disturbances in Depression. Sleep Medicine Clinics. 10 (1), 17-23 (2015).
  4. Walter, L. M., et al. Sleep disturbance in pre-school children with obstructive sleep apnoea syndrome. Sleep Medicine. 12 (9), 880-886 (2011).
  5. Helfand, B. T., et al. The relationship between lower urinary tract symptom severity and sleep disturbance in the CAMUS trial. Journal of Urology. 185 (6), 2223-2228 (2011).
  6. Kimoff, R. J. Sleep fragmentation in obstructive sleep apnea. Sleep. 19 (9), Suppl 61-66 (1996).
  7. Dhondt, K., et al. Sleep fragmentation and periodic limb movements in children with monosymptomatic nocturnal enuresis and polyuria. Pediatric Nephrology. 30 (7), Berlin, Germany. 1157-1162 (2015).
  8. Young, T., Peppard, P. E., Gottlieb, D. J. Epidemiology of obstructive sleep apnea: a population health perspective. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 165 (9), 1217-1239 (2002).
  9. Peppard, P. E., et al. Increased prevalence of sleep-disordered breathing in adults. American Journal of Epidemiology. 177 (9), 1006-1014 (2013).
  10. Marcus, C. L., et al. Diagnosis and management of childhood obstructive sleep apnea syndrome. Pediatrics. 130 (3), 714-755 (2012).
  11. Xie, L., et al. Sleep drives metabolite clearance from the adult brain. Science. 342 (6156), New York, N.Y. 373-377 (2013).
  12. Benveniste, H., et al. The Glymphatic System and Waste Clearance with Brain Aging: A Review. Gerontology. 65 (2), 106-119 (2019).
  13. Stickgold, R., Walker, M. P. Memory consolidation and reconsolidation: what is the role of sleep. Trends in Neurosciences. 28 (8), 408-415 (2005).
  14. Stickgold, R. Sleep-dependent memory consolidation. Nature. 437 (7063), 1272-1278 (2005).
  15. Aalling, N. N., Nedergaard, M., DiNuzzo, M. Cerebral Metabolic Changes During Sleep. Current Neurology and Neuroscience Reports. 18 (9), 57 (2018).
  16. Rempe, M. J., Wisor, J. P. Cerebral lactate dynamics across sleep/wake cycles. Frontiers in Computational Neuroscience. 8, 174 (2014).
  17. Kang, J. E., et al. Amyloid-beta dynamics are regulated by orexin and the sleep-wake cycle. Science. 326 (5955), New York, N.Y. 1005-1007 (2009).
  18. Minakawa, E. N., et al. Chronic sleep fragmentation exacerbates amyloid beta deposition in Alzheimer's disease model mice. Neuroscience Letters. 653, 362-369 (2017).
  19. Qiu, H., et al. Chronic Sleep Deprivation Exacerbates Learning-Memory Disability and Alzheimer's Disease-Like Pathologies in AβPP(swe)/PS1(ΔE9) Mice. Journal of Alzheimer's Disease : JAD. 50 (3), 669-685 (2016).
  20. Holth, J. K., et al. The sleep-wake cycle regulates brain interstitial fluid tau in mice and CSF tau in humans. Science. 363 (6429), New York, N.Y. 880-884 (2019).
  21. Xie, Y., et al. Chronic sleep fragmentation shares similar pathogenesis with neurodegenerative diseases: Endosome-autophagosome-lysosome pathway dysfunction and microglia-mediated neuroinflammation. CNS Neuroscience & Therapeutics. 26 (2), 215-227 (2020).
  22. Ba, L., et al. Distinct Rab7-related Endosomal-Autophagic-Lysosomal Dysregulation Observed in Cortex and Hippocampus in APPswe/PSEN1dE9 Mouse Model of Alzheimer's Disease. Chinese Medical Journal (England). 130 (24), 2941-2950 (2017).
  23. Sinton, C. M., Kovakkattu, D., Friese, R. S. Validation of a novel method to interrupt sleep in the mouse. Journal of Neuroscience Methods. 184 (1), 71-78 (2009).
  24. Li, Y., et al. Effects of chronic sleep fragmentation on wake-active neurons and the hypercapnic arousal response. Sleep. 37 (1), 51-64 (2014).
  25. Misrani, A., et al. Differential effects of citalopram on sleep-deprivation-induced depressive-like behavior and memory impairments in mice. Progress Neuro-psychopharmacology & Biological Psychiatry. 88, 102-111 (2019).
  26. Xu, A., et al. Roles of hypothalamic subgroup histamine and orexin neurons on behavioral responses to sleep deprivation induced by the treadmill method in adolescent rats. Journal of Pharmacological Sciences. 114 (4), 444-453 (2010).
  27. Saito, L. P., et al. Acute total sleep deprivation potentiates amphetamine-induced locomotor-stimulant effects and behavioral sensitization in mice. Pharmacology, Biochemistry, and Behavior. 117, 7-16 (2014).
  28. Spano, G. M., et al. Sleep Deprivation by Exposure to Novel Objects Increases Synapse Density and Axon-Spine Interface in the Hippocampal CA1 Region of Adolescent Mice. The Journal of Neuroscience : The Official Journal of the Society for Neuroscience. 39 (34), 6613-6625 (2019).
  29. Morrow, J. D., Opp, M. R. Sleep-wake behavior and responses of interleukin-6-deficient mice to sleep deprivation. Brain, Behavior, and Immunity. 19 (1), 28-39 (2005).
  30. Arthaud, S., et al. Paradoxical (REM) sleep deprivation in mice using the small-platforms-over-water method: polysomnographic analyses and melanin-concentrating hormone and hypocretin/orexin neuronal activation before, during and after deprivation. Journal of Sleep Research. 24 (3), 309-319 (2015).
  31. Aleisa, A. M., Alzoubi, K. H., Alkadhi, K. A. Post-learning REM sleep deprivation impairs long-term memory: reversal by acute nicotine treatment. Neuroscience Letters. 499 (1), 28-31 (2011).
  32. Zagaar, M., Dao, A., Alhaider, I., Alkadhi, K. Regular treadmill exercise prevents sleep deprivation-induced disruption of synaptic plasticity and associated signaling cascade in the dentate gyrus. Molecular and Cellular Neurosciences. 56, 375-383 (2013).
  33. McKenna, J. T., et al. Sleep fragmentation elevates behavioral, electrographic and neurochemical measures of sleepiness. Neuroscience. 146 (4), 1462-1473 (2007).
  34. Tartar, J. L., et al. Hippocampal synaptic plasticity and spatial learning are impaired in a rat model of sleep fragmentation. The European Journal of Neuroscience. 23 (10), 2739-2748 (2006).
  35. Guzman-Marin, R., Bashir, T., Suntsova, N., Szymusiak, R., McGinty, D. Hippocampal neurogenesis is reduced by sleep fragmentation in the adult rat. Neuroscience. 148 (1), 325-333 (2007).
  36. Nair, D., et al. Sleep fragmentation induces cognitive deficits via nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase-dependent pathways in mouse. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 184 (11), 1305-1312 (2011).
  37. McCoy, J. G., et al. Experimental sleep fragmentation impairs attentional set-shifting in rats. Sleep. 30 (1), 52-60 (2007).
  38. Dumaine, J. E., Ashley, N. T. Acute sleep fragmentation induces tissue-specific changes in cytokine gene expression and increases serum corticosterone concentration. American Journal of Physiology. Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 308 (12), 1062-1069 (2015).
  39. Carreras, A., et al. Chronic sleep fragmentation induces endothelial dysfunction and structural vascular changes in mice. Sleep. 37 (11), 1817-1824 (2014).
  40. Khalyfa, A., et al. Circulating exosomes potentiate tumor malignant properties in a mouse model of chronic sleep fragmentation. Oncotarget. 7 (34), 54676-54690 (2016).
  41. Ferreira, C. B., Cravo, S. L., Stocker, S. D. Airway obstruction produces widespread sympathoexcitation: role of hypoxia, carotid chemoreceptors, and NTS neurotransmission. Physiological Reports. 6 (3), (2018).
  42. Tripathi, A., et al. Intermittent Hypoxia and Hypercapnia, a Hallmark of Obstructive Sleep Apnea, Alters the Gut Microbiome and Metabolome. mSystems. 3 (3), (2018).
  43. D'Hooge, R., De Deyn, P. P. Applications of the Morris water maze in the study of learning and memory. Brain Research. Brain Research Reviews. 36 (1), 60-90 (2001).
  44. Vorhees, C. V., Williams, M. T. Morris water maze: procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory. Nature Protocols. 1 (2), 848-858 (2006).
  45. Vogel-Ciernia, A., Wood, M. A. Examining object location and object recognition memory in mice. Current Protocols in Neuroscience. 69, 1-17 (2014).
  46. Kraeuter, A. K., Guest, P. C., Sarnyai, Z. The Open Field Test for Measuring Locomotor Activity and Anxiety-Like Behavior. Methods in Molecular Biology. 1916, Clifton, N.J. 99-103 (2019).
  47. Porsolt, R. D., Bertin, A., Blavet, N., Deniel, M., Jalfre, M. Immobility induced by forced swimming in rats: effects of agents which modify central catecholamine and serotonin activity. European Journal of Pharmacology. 57 (2-3), 201-210 (1979).
  48. Hauglund, N. L., Kusk, P., Kornum, B. R., Nedergaard, M. Meningeal Lymphangiogenesis and Enhanced Glymphatic Activity in Mice with Chronically Implanted EEG Electrodes. The Journal of Neuroscience : The Official Journal of the Society for Neuroscience. 40 (11), 2371-2380 (2020).
  49. Nguyen-Michel, V. H., et al. Rapid eye movement sleep behavior disorder or epileptic seizure during sleep? A video analysis of motor events. Seizure. 58, 1-5 (2018).
  50. Zimmerman, J. E., Raizen, D. M., Maycock, M. H., Maislin, G., Pack, A. I. A video method to study Drosophila sleep. Sleep. 31 (11), 1587-1598 (2008).
  51. Abad, J., et al. Automatic Video Analysis for Obstructive Sleep Apnea Diagnosis. Sleep. 39 (8), 1507-1515 (2016).
  52. Sandlund, C., Hetta, J., Nilsson, G. H., Ekstedt, M., Westman, J. Impact of group treatment for insomnia on daytime symptomatology: Analyses from a randomized controlled trial in primary care. International Journal of Nursing Studies. 85, 126-135 (2018).
  53. Shekleton, J. A., Rogers, N. L., Rajaratnam, S. M. Searching for the daytime impairments of primary insomnia. Sleep Medicine Reviews. 14 (1), 47-60 (2010).
  54. Dixon, L. J., Lee, A. A., Gratz, K. L., Tull, M. T. Anxiety sensitivity and sleep disturbance: Investigating associations among patients with co-occurring anxiety and substance use disorders. Journal of Anxiety Disorders. 53, 9-15 (2018).
  55. Press, Y., Punchik, B., Freud, T. The association between subjectively impaired sleep and symptoms of depression and anxiety in a frail elderly population. Aging Clinical and Experimental Research. 30 (7), 755-765 (2018).

Tags

התנהגות בעיה 163 פיצול שינה כרוני רוטור מסלולית גירעון קוגניטיבי התנהגות דמוית חרדה דום נשימה בשינה חסימתית מחלות ניווניות
מודל פיצול שינה כרוני באמצעות רוטור מסלולי רוטט כדי לגרום לגירעון קוגניטיבי והתנהגות דמוית חרדה בעכברים צעירים מסוג בר
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Xie, Y., Deng, S. Y., Chen, S. M.,… More

Xie, Y., Deng, S. Y., Chen, S. M., Chen, X. J., Lai, W. W., Huang, L. F., Ba, L., Wang, W., Ding, F. F. A Chronic Sleep Fragmentation Model using Vibrating Orbital Rotor to Induce Cognitive Deficit and Anxiety-Like Behavior in Young Wild-Type Mice. J. Vis. Exp. (163), e61531, doi:10.3791/61531 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter