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Behavior

युवा जंगली प्रकार के चूहों में संज्ञानात्मक घाटे और चिंता की तरह व्यवहार को प्रेरित करने के लिए हिल ऑर्बिटल रोटर का उपयोग करके एक पुरानी नींद विखंडन मॉडल

Published: September 22, 2020 doi: 10.3791/61531
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1,2, 1,3
1Department of Neurology, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430000, China, 2Key Laboratory of Neurological Diseases of Chinese Ministry of Education, The School of Basic Medicine, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430000,China, 3Department of Pharmacology, School of Basic Medical Science; State Key Laboratory of Medical Neurobiology, Institutes of Brain Science and Collaborative Innovation Center for Brain Science, Fudan University, Shanghai 200032, China

Summary

यहां प्रस्तुत पुरानी नींद विखंडन (CSF) मॉडल के लिए एक विद्युत नियंत्रित कक्षीय रोटर द्वारा प्राप्त मॉडल है, जो युवा जंगली प्रकार चूहों में पुष्टि संज्ञानात्मक घाटे और चिंता की तरह व्यवहार प्रेरित कर सकता है । इस मॉडल को पुरानी नींद अशांति और संबंधित विकारों के रोगजनन का पता लगाने के लिए लागू किया जा सकता है।

Abstract

नींद में गड़बड़ी आम तौर पर एक पुरानी बीमारी या एक शिकायत की घटना के रूप में आबादी में आम है । पुरानी नींद अशांति को बीमारियों, विशेष रूप से न्यूरोडीजेनेरेटिव बीमारियों के रोगजनन से निकटता से जोड़ा जाना प्रस्तावित है। हमने हाल ही में पाया कि 2 महीने की नींद विखंडन ने अल्जाइमर रोग (विज्ञापन) शुरू किया- जैसे व्यवहार और युवा जंगली प्रकार के चूहों में रोग परिवर्तन। इसके साथ ही, हम पुरानी नींद विखंडन (सीएसएफ) को प्राप्त करने के लिए एक मानकीकृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। संक्षेप में, सीएसएफ को 110 आरपीएम पर एक कक्षीय रोटर कंपन द्वारा प्रेरित किया गया था और 2 महीने तक लगातार प्रकाश-ऑन चरण (8:00 AM-8:00 PM) के दौरान 10 एस-ऑन, 110 एस-ऑफ के दोहराव वाले चक्र के साथ काम किया गया था। स्थानिक सीखने और स्मृति की हानि, चिंता की तरह लेकिन सीएसएफ मॉडलिंग के परिणामों के रूप में चूहों में अवसाद की तरह व्यवहार नहीं, मॉरिस पानी भूलभुलैया (MWM), उपन्यास वस्तु मांयता (NOR), ओपन फील्ड टेस्ट (OFT) और मजबूर तैराकी परीक्षण (FST) के साथ मूल्यांकन किया गया । अन्य नींद जोड़तोड़ की तुलना में, यह प्रोटोकॉल हैंडलिंग लाठियों को कम करता है और मॉडलिंग दक्षता को अधिकतम करता है। यह युवा जंगली प्रकार के चूहों में स्थिर फेनोटाइप पैदा करता है और संभावित रूप से विभिन्न प्रकार के अनुसंधान उद्देश्यों के लिए उत्पन्न किया जा सकता है।

Introduction

नींद में गड़बड़ी नींद से परेशान करने वाली स्थितियों और नींद से परेशान होने वाली घटनाओं के साथ स्वस्थ लोगों के साथ रोगियों में तेजी से आम है । यह देखा गया है कि न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों, पुराने दर्द, भावनात्मक तनाव, श्वसन प्रणाली रोगों, मूत्र प्रणाली रोगों आदि के रोगियों को आमतौर पर अप्रिय नींद के अनुभवों के बारे में शिकायत1,2,3,4,5. ऑब्सट्रक्टिव स्लीप एपनिया (ओएसए), नींद में आवधिक अंग आंदोलन (पीएलएएमएस), अन्य नींद विकारों के बीच नींद रखरखाव अनिद्रा सबसे आम कारण हैं, जो नींद विखंडन6,7को प्रेरित करते हैं। विकसित देशों में, ओएसए वयस्क आबादी में 5% से 9% से अधिक व्यापकता है और बाल आबादी में 2%8,9,10। इस बीच, स्मार्ट फोन, अनियमित नींद की आदतों, कष्टप्रद शोर, और देखभाल करने वालों के लिए रात की पाली जैसे काम कर्तव्यों के कारण नींद अशांति का सामना कर रहे स्वस्थ आबादी का एक बढ़ता अनुपात है। कई अन्य शारीरिक प्रक्रियाओं के बीच मस्तिष्क अपशिष्ट निकासी11,12,स्मृति समेकन13,14,मेटाबोलिक बैलेंस15,16केलिए नींद को महत्वपूर्ण माना जाता है। फिर भी, यह अभी भी काफी हद तक अज्ञात है कि क्या दीर्घकालिक नींद अशांति स्वस्थ मनुष्यों में अपरिवर्तनीय रोगजनक परिवर्तन को जन्म देती है, और चाहे वह एटियोलॉजी हो या सड़क के नीचे कुछ वर्षों में न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों जैसे केंद्रीय तंत्रिका तंत्र रोगों के विकास का एक योगदान कारक हो । हमारा लक्ष्य एक प्रयोगात्मक मॉडल है कि एक 2 महीने की नींद विखंडन उपचार के बाद युवा जंगली प्रकार चूहों में स्थिर और स्पष्ट संज्ञानात्मक घाटे और चिंता की तरह व्यवहार उत्पन्न रिपोर्ट करने के लिए है । इस मॉडल के ऊपर सूचीबद्ध वैज्ञानिक सवालों का जवाब देने के लिए लागू किया जाएगा ।

नींद में गड़बड़ी अल्जाइमर रोग (विज्ञापन) या मनोभ्रंश के विकास के लिए एक संभावित जोखिम कारक के रूप में सूचीबद्ध है । कांग एट अल. पहले पाया और 6 घंटे तीव्र नींद अभाव17द्वारा विज्ञापन विकृति के तीव्रता का वर्णन किया । इसके बाद, कई अन्य अध्ययनों में बताया गया कि नींद के अभाव या विखंडन से ट्रांसजेनिक विज्ञापन चूहों मॉडल18,19,20में रोगजनकता बढ़ सकती है । हालांकि, बहुत कम शोधकर्ताओं ने युवा जंगली प्रकार चूहों में नींद अशांति के परिणाम का अध्ययन किया है; यही है, क्या नींद में गड़बड़ी विज्ञापन जैसे व्यवहार या युवा जंगली प्रकार के चूहों में रोग परिवर्तन को जन्म देती है। हमारे हाल के प्रकाशन में, हमने बताया कि नींद विखंडन के 2 महीने स्पष्ट स्थानिक स्मृति घाटे और चिंता की तरह व्यवहार प्रेरित, साथ ही साथ इंट्रासेल्युलर एमिलॉयड-β (A.a. दोनों प्रांतस्था और हिप्पोकैम्पस में 2-3 महीने पुराने जंगली प्रकार के चूहों21में संचय में वृद्धि हुई । हमने एंडोसोम-ऑटोफैगोसोम-लाइसोसोम पाथवे मार्कर और माइक्रोग्लिया एक्टिवेशन के बदले हुए अभिव्यक्ति स्तर को भी देखा, जो एपीपी/पीएस1 चूहों21, 22में सूचित पैथोलॉजिकल बदलावों के समान था ।

इस प्रस्तुत नींद विखंडन (एस एफ) प्रोटोकॉल सिंटन एट अल द्वारा मान्य किया गया था23 और ली एट अल द्वारा संशोधित24। संक्षेप में, ११० आरपीएम पर कंपन एक कक्षीय रोटर प्रकाश-पर चरण (8:00 AM-8:00 PM) के दौरान हर 2 मिनट में 10 एस के लिए नींद में बाधा डालता है । इस मॉडल में नींद संरचना परिवर्तन पहले इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल स्लीप रिकॉर्डिंग के साथ विशेषता थी और ली एट अल द्वारा रिपोर्ट की गई थी।24,जो प्रकाश-ऑन चरण के दौरान तेजी से आंखों के आंदोलन (आरईएम) नींद में उल्लेखनीय वृद्धि और कमी का संकेत देता है, कुल नींद और जागने के समय (24 घंटे में) 4 सप्ताह से अधिक मॉडलिंग24के बाद अप्रभावित है। वर्तमान में, कुल नींद या आंशिक नींद अभाव सबसे अधिक इस्तेमाल किया नींद हेरफेर मॉडल हैं । कुल नींद का अभाव आमतौर पर पशु को उपन्यास वस्तुओं के लिए निरंतर कोमल हैंडलिंग या उजागर करके किया जाता है, वैकल्पिक रूप से एक बार या चल रहे ट्रेडमिल25, 26,27,28,29को लगातार घुमाकर। नैतिक कारणों के कारण, कुल नींद अभाव आमतौर पर 24 घंटे से कम है । सबसे अधिक लागू आंशिक नींद अभाव मॉडल पानी मंच विधि है, जो मुख्य रूप से रेमनींद30, 31,32को एब्लेटिंग करता है। ट्रेडमिल या पिंजरे के नीचे झाडू लगाने वाले बार का उपयोग करने वाले अन्य दृष्टिकोण,33 , 34 , 35,37, 37,38के निश्चित अंतराल पर सेट होने पर नींद के विखंडन को प्रेरित करसकतेहैं। यह उल्लेखनीय है कि एस एफ नींद में बाधा डालता है और रुक - रुककर सभी नींद चरणों में पैदा होता है24. कक्षीय रोटर लगाने वाले इस सीएसएफ मॉडल के प्रमुख फायदों में से एक यह है कि इसे मशीनों द्वारा स्वचालित रूप से नियंत्रित महीनों तक लगातार किया जा सकता है, जो नियमित निगरानी के अलावा दैनिक रूप से लगातार प्रसंस्करण श्रम से बचता है। इसके अलावा, उपकरण एक साथ वर्दीधारी हस्तक्षेप के तहत चूहों के कई पिंजरों मॉडल की अनुमति होगी । पूरे मॉडलिंग सत्रों के दौरान, चूहों को सामान्य बिस्तर और घोंसले की सामग्री के साथ अपने घर के पिंजरों में रखा जाता है, जबकि कुछ अन्य तरीकों से विविध वातावरण और अपरिहार्य तनाव के संपर्क की आवश्यकता होती है।

नींद विखंडन पहले नींद हेरफेर विधि है, जो नींद चरण के दौरान लगातार उत्तेजनाओं की नकल और जगा चरण के दौरान पर्याप्त नींद खुशहाली लौटने लगी द्वारा विशेषता थी । कुछ साहित्यों में, सीएसएफ को ओएसए39,40के लिए पशु मॉडल माना जाता था। इस अध्ययन में, उत्तेजना की चुनी हुई आवृत्ति का औचित्य प्रति घंटे 30 गुना होना मध्यम से गंभीर स्लीप एपनिया वाले रोगियों में उत्तेजना सूचकांकों के अवलोकन पर आधारित है। यह देखा गया कि 4 सप्ताह की नींद विखंडन काफी हाइपरकैप्निक उत्तेजना विलंबता और स्पर्श उत्तेजना दहलीज है, जो वसूली24के बाद कम से कम 2 सप्ताह सकता है वृद्धि हुई है । इस फेनोटाइप को हाइपरकैप्निया के जवाब में नोराड्रेनर्जिक, ओरेसिनसेर्गिक, हिस्टामिनेर्गिक और कोलिनेर्जिक वेक-एक्टिव न्यूरॉन्स में सी-फोस एक्टिवेशन में कमी का खुलासा करके समझाया गया था, साथ ही साथ सिंगुलेट कॉर्टेक्स24में कैटेकोलमिनेर्गिक और ओरेक्सिनर्जिक अनुमानों को कम किया गया था। हालांकि, यह ध्यान रखना आवश्यक है कि ओएसए में सबसे महत्वपूर्ण विशेषता वायुमार्ग बाधा के कारण हाइपोक्सिया है, जिसके परिणामस्वरूप नींद में व्यवधान41,42है। नींद में गड़बड़ी और दोहराव हाइपोक्सिया ओसा रोगजनकता में एक दूसरे के साथ पारस्परिक रूप से बातचीत करते हैं। इसलिए, अकेले नींद विखंडन चूहों में ओएसए की सभी प्रमुख विशेषताओं को पूरी तरह से प्रदर्शित करने में सक्षम नहीं हो सकता है।

इसके साथ, हम युवा जंगली प्रकार के चूहों में पुरानी नींद विखंडन मॉडल के लिए एक मानकीकृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। संज्ञानात्मक घाटे और चिंता की तरह के रूप में के रूप में अच्छी तरह से अवसाद की तरह व्यवहार के बाद CSF उपचार मॉरिस पानी भूलभुलैया, उपन्यास वस्तु मांयता, ओपन फील्ड परीक्षण, और मजबूर तैराकी परीक्षण द्वारा मूल्यांकन किया गया । यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि इस मॉडल को पूरे रूप में लिया जाना चाहिए जो डिवुलेनियमित नींद पैटर्न, संज्ञानात्मक घाटे और चिंता जैसे व्यवहार के फेनोटाइप उत्पन्न करता है। वर्तमान मॉडल संभावित रूप से लागू किया जा सकता है, लेकिन सीमित नहीं है, निम्नलिखित प्रयोजनों के लिए: 1) आनुवंशिक गड़बड़ी के बिना युवा चूहों में पुरानी नींद अशांति से प्रेरित कार्यात्मक या आणविक रोगजनक तंत्र की जांच, 2) नींद में गड़बड़ी द्वारा शुरू किए गए न्यूरोडिजेनरेशन के लिए अग्रणी प्रत्यक्ष मार्ग की पहचान करना, 3) पुरानी नींद अशांति से प्रेरित फेनोटाइप में सुधार के लिए चिकित्सीय की खोज, 4) पुरानी नींद अशांति पर जंगली प्रकार के चूहों में आंतरिक सुरक्षात्मक/प्रतिपूरक तंत्र का अध्ययन करना, 5) स्लीप-वेक रेगुलेशन और राज्य-संक्रमण तंत्र का अध्ययन करने के लिए लागू किया जाना।

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Protocol

इस प्रोटोकॉल को तोंगजी अस्पताल, तोंगजी मेडिकल कॉलेज, ह्यूझेंग यूनिवर्सिटी ऑफ साइंस एंड टेक्नोलॉजी की इंस्टीट्यूशनल एनिमल केयर एंड यूज कमेटी ने मंजूरी दी थी ।

1. चूहों स्क्रीनिंग और प्रयोग के लिए तैयारी

  1. पूरे प्रयोग के लिए 20-28 ग्राम के वजन वाले जंगली प्रकार के वयस्क (8-10 सप्ताह पुराने) पुरुष चूहों का चयन करें।
    नोट: जंगली प्रकार C57BL/6 चूहों प्रयोगशाला पशु, हुबेई, चीन के लिए हुबेई अनुसंधान केंद्र से प्राप्त कर रहे हैं ।
  2. बेतरतीब ढंग से सीएसएफ और नियंत्रण समूह के लिए सभी चूहों को आवंटित करें। सामाजिक अलगाव तनाव से बचने के लिए प्रत्येक पिंजरे में 3-5 चूहों घर। नियंत्रण पिंजरों में रखे चूहों की संख्या बनती सीएसएफ पिंजरों में रखे उस के साथ मिलान किया जाता है ।
    नोट: एक ही समूह पिंजरों में चूहों अनुवर्ती व्यवहार प्रयोगों प्रदर्शन करने के लिए जमा कर रहे हैं ।
  3. आसपास के वातावरण और श्रम प्रभाव समान रखने के लिए, सीएसएफ पिंजरों के साथ एक ही कमरे में नियंत्रण पिंजरों का पता लगाएं।
  4. संख्या और निगरानी प्रयोजनों के लिए एक कान टैग का उपयोग कर उनके कानों पर प्रत्येक समूह में चूहों को चिह्नित करें।
  5. 21-23 डिग्री सेल्सियस और 35%-60% के बीच परिवेशी तापमान और आर्द्रता बनाए रखें।
  6. चूहों में सामान्य नींद की लय पर पक्षपातपूर्ण प्रभाव से बचने के लिए 12 घंटे के हल्के-अंधेरे चक्र (8:00 बजे से 8:00 बजे तक प्रकाश-ऑन, 8:00 बजे-8:00 AM लाइट-ऑफ) में परिवेशी वातावरण बनाए रखें ।
  7. शोर और हस्तक्षेप को कम से कम करें जबकि शोधकर्ता मॉडलिंग कक्ष में मौजूद है।
  8. चूहों को पर्याप्त भोजन और पानी प्रदान करें। मंच आंदोलनों पर पानी के रिसाव को रोकने के लिए, पानी की बोतलों पर बॉल वाल्व सुझावों के साथ लंबे समय तक नोजल का उपयोग करें। रोटर चलाने के दौरान बोतल की अव्यवस्था से बचने के लिए एक वसंत के साथ पिंजरे के शीर्ष पर पानी की बोतल जकड़ना।

2. कक्षीय रोटर की तैयारी और स्थापना

  1. बढ़े हुए मंच (67 सेमी x 110 सेमी) के साथ एक विद्युत नियंत्रित कक्षीय रोटर तैयार करें, जिस पर 10 पिंजरों को सबसे अधिक रखा जा सकता है।
  2. प्रकाश-ऑन चरण (8:00 AM-8:00 PM) के दौरान कक्षीय रोटर सेट करें, जिसे एक प्रोग्राम टाइमर द्वारा नियंत्रित किया जाता है, जो वह समय होता है जब चूहे अपनी दैनिक नींद का अधिकांश प्रदर्शन करते हैं।
  3. कक्षीय रोटर को 110 आरपीएम की गति और 10 एस-ऑन, 110 एस-ऑफ के दोहराव वाले चक्र के साथ सेट करें जो ठोस-राज्य टाइमर के साथ नियंत्रित है।
    नोट: मंच की भार क्षमता 50 किलो है। रोटर क्षितिज कंपन का निश्चित आयाम 2.5 सेमी है।
  4. मंच घूर्णन पर पिंजरों की अव्यवस्था को रोकने के लिए मोटी स्प्रिंग्स द्वारा रोटर मंच के शीर्ष पर CSF पिंजरों जकड़ना।

3. पुरानी नींद विखंडन मॉडलिंग और निगरानी

  1. प्रयोगों से पहले एक सप्ताह के लिए मॉडलिंग कमरे में CSF और नियंत्रण चूहों के पिंजरों प्लेस, चूहों परिवेश वातावरण के लिए अनुकूल जाने के लिए ।
  2. मॉडलिंग की शुरुआत में, यह सुनिश्चित करें कि सभी चूहों को कक्षीय घूर्णन के दौरान भोजन और पानी तक मुफ्त पहुंच प्राप्त हो।
  3. मॉडलिंग की शुरुआत में, गियर में संचालित कक्षीय रोटर सुनिश्चित करने के लिए कम से कम 1 घंटे के लिए निरीक्षण करें।
  4. मॉडलिंग की अवधि के दौरान, जांच करें कि कक्षीय रोटर ठीक से काम कर रहा है और चूहों की स्थिति हर 2 दिनों में चूहों को सुनिश्चित करने के लिए पर्याप्त भोजन और पानी है। पिंजरों के बिस्तरों को साप्ताहिक रूप से बदलें।
  5. मॉडलिंग की अवधि के दौरान, बिस्तर बदलते समय चूहों को साप्ताहिक रूप से 8:00 बजे तौलें। मॉडलिंग से महत्वपूर्ण वजन घटाने के साथ चूहों को हटा दें, और प्रयोगात्मक समूहों से भी।
    नोट: महत्वपूर्ण वजन घटाने को 2 सप्ताह तक चलने वाले 20 ग्राम से कम वजन के रूप में परिभाषित किया गया है।
  6. पूरे मॉडलिंग सत्रों के दौरान, हमलावर को हटा दें, यदि कोई हो, पिंजरे से और, प्रायोगिक समूहों से भी।
  7. मॉडलिंग की समाप्ति के बाद, मूल कमरे में चूहों को बनाए रखना और खिलाना जारी रखें।

4. मॉरिस पानी भूलभुलैया (MWM) परीक्षण

  1. परीक्षा की तैयारी
    1. गर्म पानी (20-23 डिग्री सेल्सियस) से भरे एक गोलाकार टैंक का उपकरण तैयार करें।
    2. दूर दृष्टि संदर्भ के रूप में चार चतुर्भुज दिशाओं में टैंक के आसपास के पर्दे पर विभिन्न आकार और रंगों के साथ चार संकेत निलंबित करें। पाउडर दूध के अलावा पानी को अपारदर्शी दिखाई दें।
    3. दक्षिण पश्चिम चतुर्भुज के बीच में एक मंच का पता लगाएं।
  2. प्रशिक्षण परीक्षण
    1. विषय चूहों के बीच लगातार चार परीक्षणों के लिए 8:00 AM और 12:00 एक 5 दिन के प्रशिक्षण की अवधि में प्रत्येक दिन हूं ।
    2. चार परीक्षणों में चार क्वाड्रंट्स में से एक पर साइडवॉल का सामना कर रहे पानी में प्रत्येक माउस को छोड़ें। प्रत्येक परीक्षण में, माउस को मंच खोजने के लिए 60 एस के लिए तैरने की अनुमति दें। यदि माउस 60 एस के भीतर मंच पर पहुंचने में असमर्थ है, तो इसे मंच पर मार्गदर्शन करें और 15 एस के लिए वहां रहें।
    3. छिपे हुए प्लेटफ़ॉर्म को खोजने के लिए चूहों की एस्केप विलंबता को स्वचालित रूप से रिकॉर्ड करने के लिए वीडियो ट्रैकिंग सिस्टम का उपयोग करें।
  3. जांच परीक्षण
    1. 5 प्रशिक्षण दिवसों के बाद छठे दिन जांच परीक्षा आयोजित करें।
    2. मंच हटा दें। पूर्वोत्तर चतुर्भुज से प्रत्येक माउस को छोड़ें और इसे 60 एस के लिए तैरने की अनुमति दें
    3. चूहों के ट्रैक डेटा को स्वचालित रूप से रिकॉर्ड करने के लिए वीडियो ट्रैकिंग सिस्टम का उपयोग करें।

5. उपन्यास वस्तु मान्यता (NOR) परीक्षण

  1. परिचित चरण
    1. अनुक्रम में चूहों को एक टैंक (लंबाई 30 सेमी, चौड़ाई 28 सेमी, ऊंचाई 35 सेमी) में रखें, जिसमें वस्तुओं की दो प्रतियां (A1 और A2) शामिल हैं। चूहों को स्वतंत्र रूप से पता लगाने की अनुमति दें (प्रति परीक्षण 10 मिनट)।
    2. चूहों के ट्रैक डेटा को स्वचालित रूप से रिकॉर्ड करने के लिए वीडियो ट्रैकिंग सिस्टम का उपयोग करें।
  2. परीक्षण चरण
    1. परिचित चरण की 1 घंटे की देरी के बाद परीक्षण परीक्षण का संचालन करें। एक उपन्यास वस्तु ("उपन्यास") द्वारा मूल वस्तुओं में से एक को टैंक में बदलें, दूसरे को अपरिवर्तित रखते हुए। चूहों को टैंक में लौटाएं और इसे प्रति परीक्षण 5 मिनट के लिए तलाशने की अनुमति दें।
    2. प्रत्येक माउस द्वारा प्रत्येक वस्तु की खोज में बिताए गए समय को स्वचालित रूप से रिकॉर्ड करने के लिए वीडियो ट्रैकिंग सिस्टम का उपयोग करें।
      नोट: वस्तु की खोज चाट, सूंघने, चबाने, या चलती वाइब्रेसा द्वारा निर्धारित की जाती है, जबकि वस्तु से नाक की ओर और 1 सेमी से कम ओर उन्मुख होती है। भेदभाव सूचकांक (डीआई) की गणना समीकरण (टीएन − टीएफ)/(टीएन + टीएफ) के साथ की जाती है, जहां टीएन = समय "उपन्यास" वस्तु की खोज में बिताया जाता है और टीएफ = समय "परिचित" वस्तु की खोज में बिताया जाता है।

6. ओपन फील्ड टेस्ट (ओएफटी)

  1. एक टैंक (30 सेमी x 28 सेमी x 35 सेमी) का उपकरण तैयार करें।
  2. परीक्षण के दौरान, प्रत्येक माउस को टैंक के केंद्र में रखें और इसे 5 मिनट के लिए स्वतंत्र रूप से तलाशने की अनुमति दें। पिछले माउस के बचे हुए प्रभावों से बचने के लिए प्रत्येक परीक्षण के बाद 75% इथेनॉल के साथ टैंक को साफ करें।
  3. चूहों के ट्रैक डेटा को स्वचालित रूप से रिकॉर्ड करने के लिए वीडियो ट्रैकिंग सिस्टम का उपयोग करें।

7. जबरन तैराकी परीक्षण (एफएसटी)

  1. एक खुले बेलनाकार पोत का उपकरण तैयार करें, जिसमें पानी (20-23 डिग्री सेल्सियस) होता है जो 15 सेमी गहरा होता है।
  2. परीक्षण के दौरान, प्रत्येक माउस को सिलेंडर में रखें और इसे 6 मिनट तक वहां रहने दें।
  3. प्रत्येक माउस द्वारा परीक्षण के अंतिम 4 मिनट के दौरान गतिहीनता समय को स्वचालित रूप से रिकॉर्ड करने के लिए वीडियो ट्रैक सिस्टम का उपयोग करें।
    नोट: माउस स्थिर होने के लिए निर्धारित है जब यह संघर्ष बंद हो जाता है और पानी में तैरता है, केवल आंदोलनों जो पानी के ऊपर अपने सिर रखने के लिए आवश्यक है बना रही है ।

8. डेटा विश्लेषण

  1. सांख्यिकीय विश्लेषण सॉफ्टवेयर (जैसे, ग्राफपैड चश्मे 6.0) का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण करें।
  2. सभी डेटा को एसईएम के ± मतलब के रूप में व्यक्त करें।
  3. बोनफेरोनी पोस्टटेस्ट के बाद दोहराए गए उपायों के साथ दो तरह के ANOVA का उपयोग कर दो समूहों के बीच MWM परीक्षण में भागने विलंबता की तुलना करें । सीएसएफ और नियंत्रण समूहों के बीच अन्य तुलनाएं अकर्षित टी परीक्षणों द्वारा निर्धारित की जाती हैं।
  4. सभी परीक्षणों में पी एंड एलटी; 0.05 पर विचार करें।

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Representative Results

हमारे हाल के प्रकाशनसेसभी प्रतिनिधि परिणाम और आंकड़े पुन: प्रस्तुत किए गए थे । आंकड़ों के पुन: उपयोग की अनुमति मूल पत्रिका द्वारा दी गई थी ।

पूरे प्रयोगात्मक डिजाइन समय के क्रम में सचित्र है, जो सीएसएफ मॉडलिंग के समय, MWM के व्यवहार परीक्षण, न ही, ओएफटी, और FST(चित्रा 1A)इंगित करता है । हमने मॉडलिंग सत्रों के दौरान उनकी सामान्य स्थितियों की निगरानी करने के लिए सीएसएफ और नियंत्रण समूहों से हर हफ्ते चूहों के वजन प्राप्त किए। मॉडलिंग(चित्रा 1B)के दौरान दो समूहों के बीच चूहों में वजन वृद्धि में कोई स्पष्ट अंतर नहीं पाया गया था ।

स्थानिक सीखने और स्मृति प्रदर्शन पर सीएसएफ के प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए, हमने एमडब्ल्यूएम व्यवहार परीक्षण43,44आयोजित किया। सीएसएफ समूह ने नियंत्रण समूह(चित्रा 2 ए)की तुलना में 5 प्रशिक्षण दिनों में मंच खोजने के लिए गरीब भागने की क्षमता प्रदर्शित की। जांच परीक्षण में, सीएसएफ चूहों ने लक्षित चतुर्भुज में काफी कम समय अनुपात बिताया और पिछले प्लेटफ़ॉर्म स्थान को कम बार(चित्रा 2बी, सी),बिना स्विमिंग स्पीड अंतर(चित्रा 2डी)से पार कर लिया। इन उपरोक्त परिणामों ने संकेत दिया कि सीएसएफ के बाद चूहों की स्थानिक शिक्षा और स्मृति पुनर्प्राप्ति क्षमताएं बिगड़ी हुई थीं।

हमने सीएसएफ45के बाद ऑब्जेक्ट रिकग्निशन और शॉर्ट-टर्म वर्किंग मेमोरी का आकलन करने के लिए न ही टेस्ट किया । परिचित चरण में, सीएसएफ और नियंत्रण समूह(चित्रा 3 ए)के बीच कुल अन्वेषण समय में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था। तदनुसार, दो समूहों(चित्रा 3B)में क्रमशः वस्तुओं A1 और A2 के बीच अन्वेषण समय में कोई अंतर नहीं पाया गया। उपरोक्त परिणामों ने गारंटी दी कि स्थान के लिए अन्वेषण और वरीयताओं के लिए चूहों की क्षमताओं में कोई अंतर नहीं था। परीक्षण चरण में, सीएसएफ चूहों के भेदभाव सूचकांक (डीआई) को नियंत्रण(चित्रा 3 सी)बनाम काफी कम कर दिया गया था, जिसने स्पष्ट रूप से सीएसएफ के बाद ऑब्जेक्ट रिकग्निशन और अल्पकालिक कामकाजी मेमोरी में घाटे का संकेत दिया था।

हमने चूहों के चिंता जैसे और अवसाद जैसे व्यवहारों की जांच करने के लिए क्रमशः ओएफटी और एफएसटी का प्रदर्शन किया46,47। दिलचस्प बात यह है कि ओएफटी में, यह पाया गया कि सीएसएफ समूह ने नियंत्रण समूह(चित्रा 4 ए)की तुलना में केंद्रीय क्षेत्र में कम समय बिताया, जिसमें यह स्पष्ट किया गया था कि नींद विखंडन एक निश्चित सीमा तक चिंता जैसे व्यवहार को प्रेरित कर सकता है। इसके अतिरिक्त, सीएसएफ चूहों ने मॉडलिंग के बाद बढ़ी हुई सहज गतिविधि का सुझावदेते हुए टैंक (चित्रा 4B)में स्थानांतरित लंबी कुल दूरी का प्रदर्शन किया। फिर भी, यह सीएसएफ मॉडलिंग अवसाद जैसे व्यवहार को प्रेरित नहीं कर सकी, जो एफएसटी(चित्र 4 सी)के अधीन दो समूहों के बीच गतिहीनता के समय में गैर-महत्वपूर्ण अंतर से सत्यापित है।

Figure 1
चित्रा 1: प्रायोगिक डिजाइन प्रक्रिया का प्रवाह। (क)प्रायोगिक डिजाइन प्रक्रिया जो सीएसएफ मॉडलिंग और व्यवहार परीक्षणों (यानी एमडब्ल्यूएम, न ही, ओएफटी और एफएसटी) के समय को दर्शाती है । (ख)सीएसएफ मॉडल स्थापित होने के बाद पहले महीने के दौरान सीएसएफ के शरीर के वजन घटता और नियंत्रण चूहों । इस आंकड़े को Xie et al.21से संशोधित किया गया हैकृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: सीएसएफ बिगड़ा स्थानिक सीखने और स्मृति क्षमताओं MWM परीक्षण द्वारा मूल्यांकन किया । (क)सीएसएफ चूहों ने 5 दिवसीय प्रशिक्षण परीक्षण के दौरान नियंत्रण चूहों की तुलना में लंबे समय तक भागने की विलंबता का प्रदर्शन किया । **p< 0.01। (ख)जांच परीक्षण में, सीएसएफ चूहों नियंत्रण चूहों के विपरीत मंच चतुर्भुज में बिताए गए कम प्रतिशत समय का प्रदर्शन किया । ऊपरी पैनल दो समूहों के प्रतिनिधि ट्रेसिंग दिखाता है। पी एंड एलटी; 0.0001। (ग)जांच परीक्षण में, सीएसएफ समूह ने नियंत्रण समूह की तुलना में प्लेटफार्म स्थान को पार करने के कम समय का प्रदर्शन किया । * पी एंड लेफ्टिनेंट; 0.05। (घ)जांच परीक्षण में दो समूहों की तैराकी की गति । n.s. इंगित करता है कि विभिन्न समूहों के बीच परिवर्तन महत्वपूर्ण नहीं थे । डेटा सभी मतलब ± SEM. n = 10 प्रति समूह के रूप में प्रस्तुत किया गया । इस आंकड़े को Xie et al.21से संशोधित किया गया हैकृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3: CSF बिगड़ा वस्तु मांयता और कम समय काम स्मृति NOR परीक्षण द्वारा मूल्यांकन किया । (क)सीआइएसएफ और नियंत्रण चूहों के बीच की कुल खोज का समय परिचित चरण में, एन एस विभिन्न समूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन इंगित करता है । (ख)परिचित चरण में दो समूहों के बीच क्रमशः वस्तुओं A1 और A2 के लिए अन्वेषण समय । n.s. विभिन्न समूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन इंगित करता है। (ग)परीक्षण चरण में नियंत्रण समूह की तुलना में सीएसएफ समूह के भेदभाव सूचकांक (डीआई) में काफी कमी आई । * पी एंड लेफ्टिनेंट; 0.05। डेटा सभी मतलब ± SEM. n = 10 प्रति समूह के रूप में प्रस्तुत किया गया । इस आंकड़े को Xie et al.21से संशोधित किया गया हैकृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्रा 4: CSF चिंता की तरह बढ़ा लेकिन अवसाद की तरह नहीं व्यवहार OFT और FST द्वारा मूल्यांकन किया । (क)सीएसएफ चूहों ने ओएफटी में नियंत्रण चूहों की तुलना में मनाया 5 मिनट के दौरान मध्य क्षेत्र में कम समय बिताया । * पी एंड लेफ्टिनेंट; 0.05। (ख)सीएसएफ समूह ने ओएफटी में नियंत्रण समूह बनाम टैंक में लंबी कुल दूरी प्रदर्शित की । * पी एंड लेफ्टिनेंट; 0.05। (ग)एफएसटी में सीएसएफ और नियंत्रण समूहों के बीच गतिहीनता का समय । n.s. विभिन्न समूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन इंगित करता है। डेटा सभी मतलब ± SEM. n = 10 प्रति समूह के रूप में प्रस्तुत किया गया । इस आंकड़े को Xie et al.21से संशोधित किया गया हैकृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

वर्तमान प्रोटोकॉल में महत्वपूर्ण कदमों में अध्ययन उद्देश्य के अनुसार अनुकूलित मापदंडों के साथ नींद विखंडन मशीनों की स्थापना और पूरे मॉडलिंग सत्रों में आरामदायक और शांत रहने वाले वातावरण में चूहों को बनाए रखना शामिल है। नींद विखंडन को बाधित करने या रोकने और उन चूहों के लिए व्यवहार परीक्षणों की व्यवस्था करने के लिए उचित समय तय करना भी महत्वपूर्ण है। अन्य नींद हेरफेर मॉडल की तरह, नियंत्रित प्रकाश चक्र और सभी संभव अनावश्यक हस्तक्षेप के शून्य के साथ एक समर्पित कमरे में प्रोटोकॉल प्रदर्शन करना महत्वपूर्ण है। शोर को उत्प्रेरण से बचने और शोधकर्ताओं द्वारा जांच, भोजन और पानी की आपूर्ति को फिर से भरने, बिस्तरों को बदलने आदि के लिए किए गए ऑपरेटिंग समय को कम करने के लिए प्रयास किए जाने चाहिए । दुर्लभ अवसरों में, वहां हमलावरों कूड़े के साथियों पर हमला कर रहे हैं, विशेष रूप से असहज नींद व्यवधान सत्र की दीक्षा पर । हमलावर जब मौजूद घर पिंजरों के साथ ही प्रयोगात्मक समूहों से बाहर हटा दिया जाना चाहिए । हमारे अनुभव के लिए कुछ के अलावा प्रयोगात्मक जानवरों के अधिकांश, उपचार के लिए अनुकूल है और जरूरत के रूप में पानी और भोजन का उपयोग करने के लिए प्रबंधन होगा । आंतरिक समस्याओं के साथ चूहों, जैसे विकृत दांत, कम वजन और त्वचा के घावों वजन घटाने या कमजोरी का कारण हो सकता है । उन्हें मॉडलिंग के लिए इस्तेमाल किए जाने से भी बचने की जरूरत है । चूंकि यह प्रोटोकॉल संभावित रूप से पुराने तनाव और मेटाबोलिक डिस्रेगुलेशन को प्रेरित कर सकता है, इसलिए मॉडलिंग और प्रयोगों के लिए वर्दीधारी मानदंडों, जैसे शरीर के वजन के साथ जांच किए गए चूहों का उपयोग करना आवश्यक है।

वर्णित प्रोटोकॉल में, कक्षीय रोटर स्वचालित रूप से 8:00 AM-8:00 PM (लाइट-ऑन) के दौरान दैनिक रूप से चालू हो जाएगा, जो वह समय है जब चूहे अपने अधिकांश दैनिक जीवन का प्रदर्शन करते हैं । लगातार उत्तेजनाओं को प्रेरित करने के लिए लाइट-ऑन चरण के दौरान 10 एस-ऑन, 110 एस-ऑफ के दोहराव वाले चक्र पर रोटर चलाया गया था। विभिन्न मॉडलिंग अवधि विभिन्न फेनोटाइप को जन्म देगी। तीव्र नींद विखंडन के परिणामस्वरूप नींद की अवधि में पूर्ण कमी आ सकती है, सहानुभूति तंत्रिका तंत्र की गतिविधियों में वृद्धि हो सकती है, जैसे कि ऊंचा कॉर्टिसोन का स्तर और बिगड़ा हुआ इंसुलिन संवेदनशीलता23,24। हालांकि, पुरानी नींद विखंडन अप्रभावित कॉर्टिसोन का स्तर, और संतुलित कुल नींद समय24दिखाया । वर्तमान प्रोटोकॉल के आधार पर कोई भी संशोधन, जैसे प्रकाश चक्र, मिलान कंपन सेटिंग्स (गति, आयाम, दोहराव चक्र, आदि) और मॉडलिंग अवधि, संभावित रूप से फेनोटाइप को बदल सकता है। नींद फेनोटाइप की पहचान करने के लिए विभिन्न मॉडलिंग सेटिंग्स के तहत स्लीप रिकॉर्डिंग और स्लीप स्ट्रक्चर विश्लेषण करना आवश्यक है। इसके परिणामस्वरूप विशिष्ट व्यवहार और रोग संबंधी परिवर्तन भी हो सकते हैं। जैसा कि हम लंबे समय के बाद संज्ञानात्मक घाटे का पता लगाया बजाय एक रात की नींद विखंडन और MWM में चूहों व्यवहार पर आंतरायिक नींद विखंडन के पक्षपातपूर्ण प्रभाव से बचने के लिए खड़ा है और न ही, हम ६० दिन पर CSF प्रोटोकॉल समाप्त करने के बाद इन दो व्यवहार परीक्षणों का प्रदर्शन किया । हालांकि, अनिवार्य रूप से, चूहों में वसूली नींद के प्रभाव MWM के लिए परिणाम चकित हो सकता है और न ही दिखाया ।

हालांकि यह मॉडल नींद विखंडन मॉडल के साथ हकदार है, यह वास्तव में प्रकाश-ऑन चरण के दौरान खंडित नींद पैटर्न से बना है, सर्कैडियन ताल का डिस्रेगुलेशन, और प्रकाश-बंद चरण के दौरान प्रतिपूरक नींद खुशहाली लौटने लगी है। यह प्रोटोकॉल न केवल नींद के पैटर्न में परिवर्तन को प्रेरित कर सकता है, बल्कि पर्याप्त न्यूरोइंफ्लेमेशन, मेटाबोलिक असंतुलन, प्रतिरक्षा प्रणाली में गड़बड़ी, आदि21,23,24को भी प्रेरित कर सकता है। ये सभी रोग प्रक्रियाएं एक दूसरे के साथ बातचीत कर सकती हैं और ऑर्केस्ट्रा की तरह फेनोटाइप मध्यस्थता कर सकती हैं। इस मॉडल को एक पूरे के रूप में लिया जाना चाहिए डिस्गुनियमित नींद पैटर्न, संज्ञानात्मक घाटे, और युवा जंगली प्रकार के चूहों में चिंता की तरह व्यवहार के फेनोटाइप के साथ चूहों उत्पन्न करने के लिए । जैसा कि पिछले खंड में उल्लेख किया गया है, दोहराव वाले हाइपोक्सिया की कमी के कारण यह मॉडल ओएसए को बिल्कुल प्रतिबिंबित नहीं कर रहा है। एक और सीमा यह है कि एक ही चूहों में सटीक रोग परिवर्तन और नींद फेनोटाइप उत्पन्न करना मुश्किल है। नींद रिकॉर्डिंग के लिए व्यापक रूप से लागू ईईजी/ईएमजी इलेक्ट्रोड प्रत्यारोपण कॉर्टेक्स48में अपरिहार्य रूप से प्रेरित गंभीर ग्लियोसिस। हाल के वर्षों में, नींद के अध्ययन में कृत्रिम बुद्धि पर आधारित वीडियो निगरानी और छवि विश्लेषण तकनीकों को लागू किया गया था, जो आक्रामक इलेक्ट्रोड प्रत्यारोपण49,50,51के बिना सटीक नींद की जानकारी एकत्र करेगा।

मौजूदा तरीकों की तुलना में इस सीएसएफ विधि के महत्व में शामिल हैं: 1) नींद के अभाव प्रोटोकॉल से अलग है कि आम तौर पर घंटे या दिनों के लिए किया जाता है, वर्तमान प्रोटोकॉल बेहतर स्वस्थ मनुष्यों में दीर्घकालिक नींद अशांति की नकल करता है । नींद के खंडित चूहों में प्रतिपूरक नींद में खुशहाली लौटने लगती है , जो रात52,53के दौरान खराब नींद की गुणवत्ता वाले लोगों में दिन के सोमनोलेंस और मंदबुद्धि कामकाजी प्रदर्शन को पूरी तरह से प्रतिबिंबित करती है । 2) यह अब तक युवा जंगली प्रकार चूहों में केवल पुरानी नींद विखंडन मॉडल की पुष्टि संज्ञानात्मक घाटे और चिंता की तरह लेकिन नहीं अवसाद की तरह व्यवहार फेनोटाइप, साथ ही मस्तिष्क के ऊतकों में स्पष्ट आणविक रोग परिवर्तन के साथ है । 3) यह उपचार चूहों को मामूली जलन का कारण बनता है ताकि मॉडलिंग महीनों तक चल सके, यहां तक कि समय की लंबी अवधि में किए जाने की संभावना के साथ भी। 4) उचित सेटिंग्स के साथ, यह मॉडल नींद में गड़बड़ी, संज्ञानात्मक घाटे और चिंता जैसे व्यवहार के स्थिर फेनोटाइप उत्पन्न कर सकता है, जिसका उपयोग या तो रोग मॉडल या विभिन्न अध्ययन डिजाइनों के लिए हस्तक्षेप के रूप में किया जा सकता है। 5) कुछ नींद अभाव मॉडल कोमल हैंडलिंग या उपन्यास वस्तुओं को लागू करने के लिए शोधकर्ताओं द्वारा पूर्ण सत्र हस्तक्षेप की आवश्यकता होती है । नियमित निगरानी के अलावा, यह विधि हैंडलिंग लाठियों को कम करती है, जो कृत्रिम पूर्वाग्रह को भी समाप्त करती है।

यह सीएसएफ प्रोटोकॉल कई प्रमुख वैज्ञानिक सवालों का जवाब देने का अवसर प्रदान करता है, जैसे कि पुरानी नींद में गड़बड़ी न्यूरोडीजेनेरेटिव बीमारियों का कारण या परिणाम है? क्या युवा उम्र के दौरान पुरानी नींद में गड़बड़ी प्रेरित रोगजनकता प्रतिवर्ती है? क्या पुरानी नींद अशांति पर प्रतिपूरक तंत्र युवा और बड़े लोगों, स्वस्थ लोगों और रोगियों के बीच भिन्न होते हैं? इस प्रोटोकॉल को व्यवहार और आणविक फेनोटाइप की गंभीरता और सुधार का आकलन करके चिकित्सीय का पता लगाने के लिए भी लागू किया जा सकता है। यह भी कार्यात्मक रिकॉर्डिंग के लिए पुरानी क्रैनेक्टोमी, ऑप्टिक फाइबर प्रत्यारोपण तैयारी के साथ चूहों मॉडल के लिए लागू किया जाएगा । इसके अलावा, यह संभवतः पहले से मौजूद स्थितियों के शीर्ष पर फेनोटाइप को प्रेरित करने या बढ़ाने के लिए हस्तक्षेप रणनीति के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। अंत में, इसका उपयोग नींद-जागो राज्य संक्रमणकालीन तंत्रों का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है। दिलचस्प बात यह है कि वर्तमान सीएसएफ मॉडल चूहों में अवसाद जैसे व्यवहार के बजाय चिंता को प्रेरित कर सकता है, जो नैदानिक अवलोकन के अनुरूप है कि रोगियों में नींद की अशांति की संभावना अवसाद54,55की तुलना में चिंता के साथ बहुत अधिक जुड़ी होगी। यह कृंतक में भावनात्मक विकारों का अध्ययन करने के लिए एक व्यावहारिक मॉडल प्रदान करता है।

संक्षेप में, हम एक हिल कक्षीय रोटर के उपयोग से पुरानी नींद विखंडन मॉडलिंग का प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं, जो युवा जंगली प्रकार के चूहों में स्थिर फेनोटाइप का उत्पादन कर सकता है और उच्च दक्षता के साथ मॉडलिंग लाठियों को कम कर सकता है। यह संभावित रूप से विभिन्न प्रकार के अनुसंधान उद्देश्यों के लिए उत्पन्न किया जा सकता है।

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Disclosures

लेखकों की घोषणा है कि वे कोई प्रतिस्पर्धी वित्तीय हितों की है ।

Acknowledgments

इस काम को नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना (61327902-6 से डब्ल्यू वांग और 81801318 से एफएफ डिंग) ने सपोर्ट किया। हम एसएफ प्रायोगिक प्रणाली की स्थापना और कृपया तकनीकी विवरण प्रदान करने के लिए डॉ सिग्रिड वेसी को स्वीकार करते हैं । हम संबंधित प्रयोगों के लिए शिक्षाप्रद टिप्पणियों के लिए डॉ मैकेन नेडरगार्ड को स्वीकार करते हैं ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Any-maze behavior tracking system Stoelting,Inc,USA - A video-tracking system which was used to record the behavior track of mice.
C57BL/6J mice Hubei Research Center for Laboratory Animals, Hubei, China. - healthy male C57BL/6J mice aged 10-12 weeks were purchased from Hubei Research Center for Laboratory Animals
Graphpad Prism 6.0 Software Graphpad Software,Inc.USA - Graphpad Prism 6.0 software was used to draw statistical graphs.
Morris water maze system Shanghai XinRuan Information Technology Co.,Ltd,China XR-XM101 The system was used to perform Morris water maze test
Orbial rotor Shanghai ShiPing Laboratory Equipment Co.,Ltd,China SPH-331 The orbital rotor was used to establish the chronic sleep fragmentation model
Solid state timer OMRON Corporation, Kyoto, Japan H3CR-F8-300 The solid state time was used to control the frequency and time of the rotor running
Wooden Lusterless Tank - - length 30 cm, width 28 cm, height 35 cm The tank was used to perform open field test and novel object recognition test

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व्यवहार अंक १६३ पुरानी नींद विखंडन कक्षीय रोटर संज्ञानात्मक घाटा चिंता की तरह व्यवहार ऑब्सट्रक्टिव स्लीप एपनिया न्यूरोडीजेनेरेटिव रोग
युवा जंगली प्रकार के चूहों में संज्ञानात्मक घाटे और चिंता की तरह व्यवहार को प्रेरित करने के लिए हिल ऑर्बिटल रोटर का उपयोग करके एक पुरानी नींद विखंडन मॉडल
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Xie, Y., Deng, S. Y., Chen, S. M., Chen, X. J., Lai, W. W., Huang, L. F., Ba, L., Wang, W., Ding, F. F. A Chronic Sleep Fragmentation Model using Vibrating Orbital Rotor to Induce Cognitive Deficit and Anxiety-Like Behavior in Young Wild-Type Mice. J. Vis. Exp. (163), e61531, doi:10.3791/61531 (2020).

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