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Developmental Biology

विकासात्मक कार्डियोटॉक्सिकिटीज के मूल्यांकन में एक शक्तिशाली उपकरण के रूप में चिकन भ्रूण का उपयोग करना

Published: March 21, 2021 doi: 10.3791/62189
Automatic Translation
1, 1, 2, 1
1School of Public Health, Qingdao University, 2Department of Pharmacology & Toxicology, Brody School of Medicine, East Carolina University

Summary

चिकन भ्रूण, एक शास्त्रीय विकास मॉडल के रूप में, विभिन्न पर्यावरणीय प्रदूषकों के संपर्क में आने के बाद विकासात्मक कार्डियोटॉक्सिकिटी का आकलन करने के लिए हमारी प्रयोगशाला में उपयोग किया जाता है। इस पांडुलिपि में एक्सपोजर विधियों और स्थापित रूपात्मक/कार्यात्मक मूल्यांकन विधियों का वर्णन किया गया है ।

Abstract

चिकन भ्रूण विकास के अध्ययन में एक शास्त्रीय मॉडल हैं। चिकन भ्रूण के विकास के दौरान, दिल के विकास की समय खिड़की अच्छी तरह से परिभाषित है, और यह अपेक्षाकृत कई तरीकों के माध्यम से सटीक और समय पर जोखिम प्राप्त करने के लिए आसान है । इसके अलावा, चिकन भ्रूण में दिल के विकास की प्रक्रिया स्तनधारियों के समान है, जिसके परिणामस्वरूप चार-कक्षों वाला दिल भी है, जिससे यह विकासात्मक कार्डियोटॉक्सिकिटीज के आकलन में एक मूल्यवान वैकल्पिक मॉडल बन जाता है। हमारी प्रयोगशाला में, चिकन भ्रूण मॉडल नियमित रूप से विकासात्मक कार्डियोटॉक्सिस के आकलन में प्रति और पॉलीफ्लोरोल्किल पदार्थ (पीएफएएस), पार्टिकुलेट मैटर (पीएमएस), डीजल निकास (डीई) और नैनो सामग्री सहित विभिन्न पर्यावरणीय प्रदूषकों के संपर्क में उपयोग किया जाता है। जोखिम समय स्वतंत्र रूप से जरूरत के आधार पर चुना जा सकता है, विकास की शुरुआत से (भ्रूण दिन 0, ED0) दिन के लिए सभी तरह से पहले हैच । प्रमुख एक्सपोजर विधियों में एयर-सेल इंजेक्शन, डायरेक्ट माइक्रोइंजेक्शन, और एयर-सेल साँस लेना (मूल रूप से हमारी प्रयोगशाला में विकसित) शामिल है, और वर्तमान में उपलब्ध एंडपॉइंट्स में कार्डियक फंक्शन (इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी), आकृति विज्ञान (हिस्टोलॉजिकल असेसमेंट) और आणविक जैविक आकलन (इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री, क्यूआरटी-पीसीआर, वेस्टर्न ब्लॉटिंग आदि) शामिल हैं। बेशक, चिकन भ्रूण मॉडल की अपनी सीमाएं हैं, जैसे एंटीबॉडी की सीमित उपलब्धता। फिर भी, इस मॉडल का उपयोग करना शुरू करने वाली अधिक प्रयोगशालाओं के साथ, इसका उपयोग विकासात्मक कार्डियोटॉक्सिकिटी के अध्ययन में महत्वपूर्ण योगदान देने के लिए किया जा सकता है।

Introduction

चिकन भ्रूण एक क्लासिक विकास मॉडल है, जिसका उपयोग 200 से अधिक वर्षों से कियागयाहै। चिकन भ्रूण मॉडल पारंपरिक मॉडल की तुलना में विभिन्न फायदे हैं। सबसे पहले, 70 साल पहले, चिकन भ्रूण के सामान्य विकास को हैम्बर्गर-हैमिल्टन मचान गाइड2में बहुत स्पष्ट रूप से चित्रित किया गया था, जिसमें चिकन भ्रूण विकास के दौरान कुल 46 चरणों को सटीक समय और रूपात्मक विशेषताओं के साथ परिभाषित किया गया था, जिससे असामान्य विकास का पता लगाने में सुविधा हुई। इसके अतिरिक्त, चिकन भ्रूण मॉडल में अपेक्षाकृत कम लागत और मात्रा में बेमानी होने, अपेक्षाकृत सटीक एक्सपोजर-डोज नियंत्रण, खोल के भीतर एक स्वतंत्र, बंद प्रणाली और विकासशील भ्रूण के आसान हेरफेर जैसी अन्य विशेषताएं हैं, जिनमें से सभी अपनी क्षमता को एक शक्तिशाली विषविज्ञानी मूल्यांकन मॉडल के रूप में उपयोग करने की गारंटी देते हैं।

कार्डियोटॉक्सिसिटी में, चिकन भ्रूण में चार चैंबरेड हार्ट की सुविधा है, जो स्तनधारी दिलों के समान है, लेकिन मोटी दीवारों के साथ, आसान रूपात्मक आकलन की अनुमति देता है। इसके अतिरिक्त, चिकन भ्रूण विकासात्मक साँस लेना जोखिम के लिए अनुमति देता है, जो स्तनधारी मॉडलों में संभव नहीं है: विकास के बाद के चरण के दौरान, चिकन भ्रूण आंतरिक श्वसन से बाहरी श्वसन (फेफड़ों के माध्यम से ऑक्सीजन प्राप्त करना) में संक्रमण करेगा; उत्तरार्द्ध की आवश्यकता होती है कि भ्रूण चोंच के साथ वायु कोशिका झिल्ली में प्रवेश करता है, और हवा3में सांस लेना शुरू कर देता है, जिससे वायु कोशिका को एक मिनी साँस लेना कक्ष बन जाता है। इस घटना का उपयोग करते हुए, हृदय (और अन्य अंगों) पर गैस संदूषकों के विषविज्ञानी प्रभावों का मूल्यांकन समर्पित साँस लेने वाले कक्ष उपकरणों की आवश्यकता के बिना किया जा सकता है।

इस पांडुलिपि में, कई एक्सपोजर/एंडपॉइंट मूल्यांकन विधियों का वर्णन किया गया है, जिनमें से सभी पर्यावरण प्रदूषकों के संपर्क में आने के बाद चिकन भ्रूण को विकास कार्डियोटॉक्सीसिटी के आकलन में एक शक्तिशाली उपकरण बनाने की सेवा करते हैं ।

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Protocol

वर्णित सभी प्रक्रियाओं को चिंगदाओ विश्वविद्यालय की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया था । हमारी प्रयोगशाला में, अंडे दो इनक्यूबेटर में इनक्यूबेटेड थे। अंडे इनक्यूबेटर में सीधे आयोजित किए गए थे और बेतरतीब ढंग से अलमारियों पर रखा गया था। अंडों के लिए इनक्यूबेशन की स्थिति इस प्रकार थी: इनक्यूबेशन तापमान 37.9 डिग्री सेल्सियस पर शुरू हुआ, और धीरे-धीरे इनक्यूबेशन आगे बढ़ने पर 37.1 डिग्री सेल्सियस तक कम हो गया; आर्द्रता 50% से शुरू हुई और धीरे-धीरे बढ़कर 70% हो गई।

1. एक्सपोजर तरीके

नोट: चिकन भ्रूण के लिए पर्यावरण संदूषकों के जोखिम कई मायनों में प्राप्त किया जा सकता है । इस खंड में, नियमित रूप से उपयोग किए जाने वाले तीन तरीकों को विस्तार से वर्णित किया गया है।

  1. एयर सेल इंजेक्शन(चित्रा 1)
    नोट: यह चिकनभ्रूण4,5,6,सामग्री की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए उपयुक्त करने के लिए शास्त्रीय जोखिम विधि है, और विकास की शुरुआत से एक बहुत व्यापक समय खिड़की पर किया जा सकता है (भ्रूण दिवस शून्य, ED0) हैच (ED20) से पहले दिन के लिए सभी तरह से । सूरजमुखी के तेल का उपयोग वाहन के रूप में किया जाता है। पिछले अध्ययनों से पता चला है कि मृत्यु दर, हैच क्षमता, या शरीर के वजन में कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन अनुपचारित भ्रूण और सूरजमुखी के तेल 7 के साथ इंजेक्शन भ्रूण के बीचदेखागया है ।
    1. निम्नलिखित आवश्यक अभिकर्मक/उपकरण तैयार करें: 75% इथेनॉल, ऊतक पेपर, धातु जांच (किसी भी तेज धातु सुई/छड़ी/awl के साथ स्थानापन्न कर सकते हैं), पिघला पैराफिन, ब्रश, पोविडोन आयोडाइड समाधान, पिपेट, पिपेट टिप्स, कैंडीडलिंग लैंप, डोजिंग मिश्रण। सूरजमुखी के तेल(अनुशंसित) 4के साथ डोजिंग मिश्रण तैयार करें। अन्य मंद का उपयोग करने के लिए, वाहन नियंत्रण (बनाम अनुपचारित भ्रूण) करें।
    2. पोविडोन आयोडाइड समाधान के साथ अंडे की सतह को साफ करें (व्यावसायिक रूप से उपलब्ध पोविडोन आयोडाइड समाधान 1:5 डिओनाइज्ड पानी से पतला), और स्क्रबिंग के बिना ऊतक कागज के साथ अंडे के खोल को डुबोएं। स्क्रबिंग से खोल के बाहर सुरक्षात्मक परत कोटिंग टूट जाएगी।
    3. एक अंधेरे कमरे में अंडे मोमबत्ती और पेंसिल के साथ एयर सेल चिह्नित। खोल पर दरारों के साथ अंडे को बाहर करें। कुंद टिप के बजाय पक्ष पर हवा कोशिकाओं के साथ अंडे को बाहर, के रूप में उन बहुत से सामांय रूप से हैच की संभावना नहीं है ।
    4. 75% इथेनॉल के साथ वायु कोशिका क्षेत्र को साफ करें, और फिर धातु की जांच के साथ एयर सेल क्षेत्र के केंद्र में एक छोटे से छेद को ड्रिल करें। जांच को वायु कोशिका में गहरी न करें या आंतरिक झिल्ली क्षतिग्रस्त हो सकती है, इसके बजाय, केवल जांच की नोक के साथ खोल को तोड़ें। यदि छेद एक ठीक पिपेट टिप में फिट करने के लिए पर्याप्त बड़ा नहीं है, तो मौजूदा छेद के आसपास फिर से खोल तोड़ दें, जब तक कि छेद 10 माइक्रोल पिपेट टिप के सम्मिलन की अनुमति देने के लिए पर्याप्त नहीं है।
    5. भंवर डोजिंग मिश्रण को सख्ती से, और तुरंत पिपेट टिप का समाधान आकर्षित करें। अनुशंसित इंजेक्शन की मात्रा अंडे के 10 ग्राम प्रति 10 ग्राम (उदाहरण के लिए, 5 माइक्रोन इंजेक्शन की मात्रा 50 ग्राम अंडे के लिए) है क्योंकि बड़े इंजेक्शन की मात्रा विकासशील भ्रूण के लिए हाइपोक्सिक या एनोक्सिक स्थितियां पैदा कर सकती है। वांछित मिलीग्राम/अंडे के किलो की खुराक के लिए खुराक समाधान की एकाग्रता की गणना करें।
    6. भीतरी झिल्ली को छूने वाली नोक के साथ, छेद में पिपेट टिप डालें। धीरे-धीरे डोजिंग मिश्रण को बाहर निकालें, कम से कम दस सेकंड तक पकड़ें (चिपचिपा तेल को पूरी तरह से तिरस्कृत होने दें), और फिर टिप को हटा दें।
    7. एक ब्रश और पिघल पैराफिन की एक बूंद के साथ छेद सील। आंतरिक झिल्ली पर पिघले हुए पैराफिन को ड्रिप न करें।
    8. एक बार सील होने के बाद, अंडे को इनक्यूबेटर में तब तक रखें जब तक कि वे वांछित भ्रूणीय चरण तक न पहुंच जाएं। पहले से ही भ्रूण के विकास पर, कम पर्यावरण के तापमान के कारण संभावित भ्रूण हानि को रोकने के लिए जितनी जल्दी हो सके पूरी प्रक्रिया प्रदर्शन करते हैं ।
  2. माइक्रोइंजेक्शन(चित्रा 2)
    नोट: यह एक अधिक प्रत्यक्ष एक्सपोजर विधि है, जिसके परिणामस्वरूप पदार्थ-ब्याज के लिए निश्चित जोखिम होता है, और विशेष रूप से कार्रवाई की थोड़ी अवधि (जैसे, लेंटीवायरस) के साथ यौगिकों के लिए उपयुक्त होता है, क्योंकि शास्त्रीय वायु कोशिका इंजेक्शन को यौगिकों के लिए आंतरिक झिल्ली में प्रवेश करने के लिए समय की आवश्यकता होती है। यदि वायु कोशिका इंजेक्शन द्वारा संतोषजनक परिणाम प्राप्त नहीं किए जा सकते हैं तो इस विधि को भी आजमाया जा सकता है। यह विधि प्रारंभिक भ्रूण (ED2 तक) के लिए सबसे उपयुक्त है, लेकिन पुराने भ्रूण (भ्रूण हानि के उच्च जोखिम के साथ) पर भी किया जा सकता है।
    1. निम्नलिखित आवश्यक अभिकर्मक/उपकरण तैयार करें: 75% इथेनॉल, पोविडोन आयोडाइड समाधान, माइक्रो इंजेक्टर (5 माइक्रोल), धातु जांच (किसी भी तेज धातु सुई के साथ विकल्प कर सकते हैं/ बाँझ खारा है, जो भी काफी हैच क्षमता को प्रभावित किए बिना एक इंजेक्शन नियंत्रण के रूप में कार्य करता है के साथ डोजिंग मिश्रण तैयार करते हैं । खारा की बंध्याकरण सुनिश्चित करें, एक दूषित इंजेक्शन के रूप में नाटकीय रूप से मृत्यु दर में वृद्धि होगी।
    2. 1.1.2 में वर्णित अंडे को साफ करें।
    3. 1.1.3 में वर्णित अंडे को मोमबत्ती करें।
    4. 75% इथेनॉल के साथ वायु कोशिका क्षेत्र को साफ करें, और फिर धातु की जांच के साथ एयर सेल क्षेत्र के केंद्र में एक छोटे से छेद को ड्रिल करें। जांच को वायु कोशिका में गहरी न करें या आंतरिक झिल्ली क्षतिग्रस्त हो सकती है, इसके बजाय, केवल जांच की नोक के साथ खोल को तोड़ें। फिर छेद को ध्यान से बड़ा करने के लिए ठीक संदंश का उपयोग करें जब तक कि व्यास लगभग 2 मिमी न हो, जिससे आंतरिक झिल्ली की दृश्य पुष्टि हो सके।
    5. समाधान को माइक्रोइंजेक्टर में लोड करें (अधिकतम इंजेक्शन की मात्रा: 0.5 माइक्रोल/ (उदाहरण के लिए, 50 ग्राम अंडे के लिए 2.5 माइक्रोन) और ध्यान से लगभग 2-3 मिमी के लिए आंतरिक झिल्ली में छेद के माध्यम से सुई डालें। धीरे-धीरे समाधान बांटें और सुई निकाल दें। सुई को यथासंभव झिल्ली के लंबवत रखें।
    6. छेद को टेप के एक छोटे से टुकड़े के साथ सील करें। बाद के इनक्यूबेशन के दौरान भ्रूण निर्जलीकरण और मृत्यु को रोकने के लिए छेद को पूरी तरह से कवर करें। फिर भी, हाइपोक्सिया को रोकने के लिए बहुत बड़े टेप के टुकड़ों से बचें।
    7. एक बार सील होने के बाद, अंडे को इनक्यूबेटर में तब तक रखें जब तक कि वे वांछित भ्रूणीय चरण तक न पहुंच जाएं। पहले से ही भ्रूण के विकास पर, कम पर्यावरण के तापमान के कारण संभावित भ्रूण हानि को रोकने के लिए जितनी जल्दी हो सके पूरी प्रक्रिया प्रदर्शन करते हैं ।
  3. एयर सेल साँस लेना(चित्रा 3)
    नोट: यह एक उपन्यास साँस लेना विधि हवा सेल का लाभ ले रही है, जिसमें से देर से चरण चिकन भ्रूण हवा में सांस लेने के लिए शुरू हो जाएगा । यह गैस या एयरोसोल एक्सपोजर के लिए उपयुक्त है और बहुत जल्दी जीवन में साँस लेना जोखिम प्राप्त कर सकते हैं, और लक्ष्य गैस के साथ फेफड़ों को भरने/
    1. निम्नलिखित आवश्यक अभिकर्मकों/उपकरण तैयार करें: सैंपलिंग बैग (पीवीएफ बैग, गैस/एरोसोल नमूने के भंडारण के लिए एक्सपोजर से पहले), कैथेटर सुई, सिरिंज, धातु जांच (किसी भी तेज धातु सुई के साथ स्थानापन्न कर सकते हैं/
    2. अंडे को 1.1.2 में वर्णित साफ करें और उन्हें 1.1.3 में वर्णित के रूप में मोमबत्ती करें (इनक्यूबेशन से पहले वायु कोशिका को चिह्नित करना आवश्यक नहीं है), और फिर ED17 तक उपचार के बिना अंडे को इनक्यूबेट करें।
    3. एयर सेल क्षेत्र को चिह्नित करने के लिए ED17 में अंडे को मोमबत्ती करें।
    4. ED18 में, इनक्यूबेटर से एक अंडा लें, 75% इथेनॉल के साथ वायु कोशिका क्षेत्र को साफ करें, और फिर ध्यान से वायु कोशिका के दो किनारों पर दो छोटे छेद ड्रिल करें। एक गैस/एयरोसोल के इंजेक्शन के लिए है, दूसरा हवा को निष्कासित करने के लिए है । ध्यान से छेद के आकार को नियंत्रित इतना है कि इंजेक्शन छेद का आकार कैथेटर सुई डाला जा करने के लिए बस पर्याप्त है, जबकि निष्कासित छेद का व्यास थोड़ा बड़ा (लगभग 1 मिमी) है ।
    5. कैथेटर सुई से जुड़ी सिरिंज के साथ इंजेक्शन छेद से धीरे से लक्ष्य गैस/एयरोसोल के 10 एमएल इंजेक्ट करें । एक साँस लेना नियंत्रण समूह है, जो एक नकारात्मक नियंत्रण समूह8के लिए कोई महत्वपूर्ण अंतर होना चाहिए के लिए हवा सुई । इंजेक्शन छेद से रिसाव को कम करने के लिए कैथेटर सुई के खिलाफ दबाव लागू करें (दबाव की उचित मात्रा के साथ लोचदार सुई को खोल के खिलाफ धकेला जा सकता है)। बाद में टेप के साथ तुरंत दोनों छेद सील, और इनक्यूबेटर के लिए अंडे वापस ।
      नोट: यह प्रक्रिया ऑपरेटर द्वारा गैस/एयरोसोल के साँस लेने को रोकने के लिए एक धुएं हुड में किया जाना चाहिए ।
    6. यह सुनिश्चित करने के लिए एक घंटे के बाद वर्णित प्रक्रिया दोहराएं कि पूरी एयर सेल लक्ष्य गैस/एयरोसोल (वैकल्पिक) से भरी हुई है ।
    7. ED19 पर वर्णित प्रक्रिया को फिर से दोहराएं (वैकल्पिक)। एक्सपोजर दोहराने से हैच तक लगातार एक्सपोजर सुनिश्चित करने में मदद मिलती है। एक्सपोजर अवधि के अनुमानित अनुमान के लिए हैच समय रिकॉर्ड करें।
    8. एक बार वांछित एक्सपोजर प्रदर्शन किया गया है और सील कर दिया गया है, हैचिंग के लिए इनक्यूबेटर में अंडे जगह है। कम पर्यावरण के तापमान से मौत को रोकने के लिए अंडा इनक्यूबेटर के बाहर खर्च करता है समय को कम से कम करें।

2. एंडपॉइंट मूल्यांकन विधियां

नोट: विकासशील भ्रूण के लिए संदूषक-ब्याज के जोखिम के बाद, कार्डियोटॉक्सिसिटी सहित कई विषाक्तता मापदंडों का मूल्यांकन किया जा सकता है। इस खंड में, दो अक्सर उपयोग किए जाने वाले विशिष्ट तरीकों को विस्तार से वर्णित किया गया है।

  1. इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी(चित्र 4)
    नोट: पंखों की उपस्थिति के कारण मुर्गियों को हैचलिंग में गैर-इनवेसिव इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी करना असंभव है। इस प्रकार, इलेक्ट्रोड के चमड़े के नीचे प्रत्यारोपण आवश्यक है, संज्ञाहरण की आवश्यकता होती है। प्रयोगशाला में उपयोग की जाने वाली खुराक इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन के माध्यम से 33 मिलीग्राम/किलो पेंटोबार्बिटल है (कुछ मुर्गियों को 50% खुराक वृद्धि तक की आवश्यकता हो सकती है)। इस विधि के परिणामस्वरूप 90% से अधिक जानवरों में स्थिर इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी होगी, जिससे हृदय गति का विश्लेषण होगा।
    1. निम्नलिखित आवश्यक रिएजेंट/टूल तैयार करें: खारा, सिरिंज, विद्युत संतुलन, हीटर (यदि आवश्यक हो), दो-चैनल धातु सुई इलेक्ट्रोड के साथ एक इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी उपकरण संलग्न (जैसे, बीएल-420E +) में 1% (10 मिलीग्राम/एमएल) पेंटोबार्बिटल समाधान।
    2. मुर्गियों को संतुलन के साथ तौलें और पेंटोबार्बिटल समाधान की आवश्यक मात्रा की गणना करें और मुर्गियों को इंजेक्ट करें। एक चिकन के लिए जिसका वजन 30 ग्राम है, पेंटोबार्बिटल समाधान के 0.1 मिलील की आवश्यकता है। सुनिश्चित करें कि इंजेक्शन पेट के पार्श्व पक्ष पर किया जाता है, क्योंकि जर्दी बीच में स्थित है और इंजेक्शन प्रभावी नहीं हो सकता है।
    3. जब तक इंजेक्शन मुर्गियों को एनेस्थेटाइज्ड न हो जाए तब तक प्रतीक्षा करें (चिकन को हाथ में रखें, अगर गर्दन में कोई तनाव नहीं है और सिर को स्वतंत्र रूप से आ सकता है, तो एनेस्थेटाइजेशन पर्याप्त है)। ऑपरेशन टेबल पर मुर्गियों को रखें (कमरे का तापमान 20 डिग्री सेल्सियस से नीचे होने पर हीटर आवश्यक हैं)।
    4. पेट के दो किनारों से दो सुई इलेक्ट्रोड डालें, चमड़े के नीचे। सुनिश्चित करें कि सुई त्वचा को थोड़ा सा उठाने और वहां से सुई डालने से पेट की गुहा में प्रवेश नहीं करती है। एक बार डालने के बाद, सुई को तब तक आगे बढ़ाएं जब तक कि यह छाती गुहा के किनारे तक न पहुंच जाए। सुनिश्चित करें कि सुई शरीर में गहरी नहीं जाती है या त्वचा से बाहर चिपक जाती है।
    5. इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी यंत्र के साथ माप बनाओ। इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी में सक्षम अन्य समान उपकरणों का उपयोग किया जा सकता है।
    6. यदि मुर्गियों की बलि दी जानी है, तो इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी के बाद इच्छामृत्यु करें क्योंकि वे पहले से ही संज्ञाहरण के अधीन हैं। यदि मुर्गियों को जीवित रहना है, तो उन्हें वापस अपने पिंजरों में रखें और जागने तक गर्म करें। उन्हें इनक्यूबेटर में लौटना एक और विकल्प है।
  2. हिस्टोमॉर्मोमेट्री(अंक 5)
    नोट: दिल के ट्रांसवर्स वर्गों में सही वेंट्रिकुलर दीवार की मोटाई का आकलन करने के लिए एक विशिष्ट विधि विकसित की गई है। इकोकार्डियोग्राफी के माध्यम से सही वेंट्रिकल आयाम का रूपात्मक मूल्यांकन सही वेंट्रिकल के अनियमित आकार के कारण 100% सटीक नहीं है, और यह विधि सही वेंट्रिकल के लिए रूपात्मक आकलन में एक अच्छे पूरक के रूप में काम कर सकती है।
    1. निम्नलिखित आवश्यक अभिकर्मक/उपकरण तैयार करें: 4% फॉस्फेट बफर फॉर्मेल्डिहाइड, तेज ब्लेड, फॉस्फेट बफर नमकीन, पेपर तौलिया, विद्युत संतुलन, छोटी कैंची, सामान्य हिस्टोलॉजिकल प्रोसेसिंग एजेंट (ग्रेडेड इथेनॉल, जाइलीन, पैराफिन)।
    2. एक बार जानवरों की बलि देने के बाद पंखों को गीला करने के लिए पानी का इस्तेमाल करें। यह छाती खोलने के दौरान पंख उड़ने के कारण संभावित संदूषण को कम करने के लिए है।
    3. दिल को नुकसान पहुंचाए बिना छाती की गुहा को सावधानी से खोलें। वैक्यूलेचर को काटने के लिए छोटी कैंची का प्रयोग करें और धीरे-धीरे छाती के गुहा से दिल को हटा दें। दिल से जुड़े वाक्यूलेचर का एक छोटा सा टुकड़ा (लगभग 1-2 मिमी) छोड़ दें क्योंकि यह दिल को नुकसान पहुंचाए बिना दिल की बाद की हैंडलिंग के लिए सुविधाजनक हो सकता है।
    4. एक बार हटा दिए जाने के बाद, रक्त को हटाने और मांसपेशियों को आराम देने के लिए ठंडे फॉस्फेट बफर नमकीन में दिल कुल्ला करें। फिर सही वजन पढ़ने के लिए वजन से पहले कागज तौलिया पर दिल सूखी डुबकी । कमरे के तापमान पर 24 घंटे के लिए दिल को 10x वॉल्यूम फिक्सेटिव (4% फॉस्फेट बफर फॉर्मेल्ड फॉर्मेल्डाइड) में रखें। फिक्स्ड ऊतकों को बाद में पैराफिन ब्लॉकों में संसाधित किया जा सकता है, या वर्षों तक 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है (यदि इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री की योजना बनाई जाती है तो अनुशंसित नहीं है)।
    5. एम्बेड करने से पहले, आसान बाद के प्रसंस्करण के लिए, शीर्ष(चित्रा 5A)से दिल की गिनती की लगभग 60% लंबाई में ऊतकों को काटें। एक त्वरित और ऊर्ध्वाधर साफ कटौती के लिए एक माइक्रोटॉम ब्लेड की सिफारिश की जाती है। एक दिन से अधिक उम्र के मुर्गियों के लिए, आसान पैराफिन प्रवेश के लिए शीर्ष से लगभग 25-30% लंबाई में एक और कटौती करें और ऊतक को ऊतक कैसेट में फिट करने की अनुमति दें।
    6. निम्नलिखित शर्तों के साथ ऊतकों को संसाधित करें (आवश्यकतानुसार समायोजित करें): 1 घंटे के लिए 70% इथेनॉल, 1 एच के लिए 80% इथेनॉल, 1 एच x2 के लिए 95% इथेनॉल, 30 मिनट x2 के लिए 100% इथेनॉल, 5 मिनट x2 के लिए जाइलीन, 1.5 घंटे के लिए पैराफिन (पिघलने बिंदु 52-54 डिग्री सेल्सियस), पैराफिन (पिघलने बिंदु 62-64 डिग्री सेल्सियस) के लिए 1 घंटे के लिए, और फिर पैराफिन (पिघलने बिंदु 62-644 डिग्री सेल्सियस) और पैराफिन (पिघलने बिंदु 52-54 डिग्री सेल्सियस) के 3:1 मिश्रण में ऊतकों को एम्बेड करें।
    7. 6 माइक्रोन मोटाई पर ऊतक अनुभाग। सही वेंट्रिकल में शारीरिक मील का पत्थर (सेप्टोमरजिनियल ट्राबेकुला) की उपस्थिति और आकार की पुष्टि करके क्रॉस-सेक्शन की समान सापेक्ष स्थिति को सावधानीपूर्वक बनाए रखें। प्रत्येक खंड(चित्रा 5B,तीर) पर मध्यम लंबाई के साथ एक मील का पत्थर की पुष्टि करें।
    8. लोगो प्रोग्रामर के साथ दो इलेक्ट्रॉनिक शासकों बनाओ: शासक 1 7 त्रिज्या उपाय मध्य बिंदु से जुड़ी लाइनों के साथ एक सीधी रेखा है, दो आसन्न उपाय लाइनों के बीच में २२.५ डिग्री के साथ । शासक 2 एक टी आकार(चित्रा 5B)में सिर्फ दो लंबवत लाइनें है ।
    9. दो सॉफ्टवेयर प्रोग्राम के साथ उपाय: एडोब फोटोशॉप और ImageJ।
      1. फोटोशॉप में, शासक 1 (कोई नया आकार नहीं) को मुक्त सही वेंट्रिकुलर दीवार के दो सिरों पर शासक के दो सिरों पर रखने के लिए आकार देगा, ताकि शासक 1 पर सात उपाय रेखाएं प्रत्येक आंतरिक दाईं वेंटिकुलर दीवार से पूरी हों। फिर शासक 2 का उपयोग भीतरी से बाहरी वेंट्रिकुलर दीवार(चित्रा 5B)तक लंबवत माप बनाने के लिए करें।
      2. प्रत्येक दिल के लिए सात माप बनाने के लिए ImageJ का प्रयोग करें।
    10. विशिष्ट आवश्यकताओं के आधार पर, एक प्रतिनिधि सही वेंट्रिकुलर दीवार मोटाई के लिए सात माप या औसत का विश्लेषण करें। विशिष्ट वेंट्रिकुलर दीवार मोटाई परिवर्तन के लिए पूरे दिल के वजन को सामान्य करें।

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Representative Results

एक्सपोजर परिणाम
एयर सेल इंजेक्शन
एयर सेल इंजेक्शन प्रभावी रूप से विभिन्न एजेंटों के लिए चिकन भ्रूण के विकास का पर्दाफाश कर सकते हैं, जो बाद में एकत्र नमूनों (सीरम, ऊतक, आदि) भ्रूण/हैचलिंग मुर्गियों में पता लगाया जा सकता है । यहां एक उदाहरण दिया गया है, जिसमें परफ्लोरोऑक्टानोइक एसिड (पीएफओए) को एयर-सेल इंजेक्ट किया गया था, और सीरम पीएफओए सांद्रता को अल्ट्रा-परफॉर्मेंस लिक्विड क्रोमेटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री के साथ निर्धारित किया गया था। सीरम सांद्रता इंजेक्शन खुराक के साथ मेल खाती है, जो इस प्रक्रिया की प्रभावशीलता(चित्र 6)का संकेत देती है।

माइक्रोइंजेक्शन
माइक्रोइंजेक्शन उन एजेंटों को विकासशील भ्रूणों का पर्दाफाश कर सकता है जो आंतरिक झिल्ली में प्रभावी रूप से प्रवेश नहीं कर सकते हैं, या कार्रवाई की एक छोटी अवधि के साथ, जैसे लेंटीवायरस। यहां एक उदाहरण है, जिसमें लेंटीवायरस को इस विधि के साथ भ्रूणीय दिन दो में इंजेक्ट किया गया था और फिर भ्रूणीय दिन 15 भ्रूणों के दिल में महत्वपूर्ण हरे रंग की फ्लोरेसेंस देखी गई थी, जो लेंटीवायरस ट्रांसफैक्शन(चित्रा 7)की प्रभावशीलता का संकेत है।

एयर सेल जलसेक
एयर सेल जलसेक एक उपन्यास विधि है, जो बाहरी श्वसन के दीक्षा चरण के दौरान गैस/एयरोसोल इनहेलेशन एक्सपोजर की छोटी मात्रा के लिए बहुत अच्छी तरह से काम कर सकती है । यहां एक उदाहरण है, जिसमें डीजल निकास भ्रूण दिन 18 और 19 में वायु कोशिका में संचार किया गया था, जिसके परिणामस्वरूप हृदय के साथ-साथ फेफड़े के ऊतकों(चित्रा 8)में महत्वपूर्ण फाइब्रोटिक परिवर्तन हुए ।

एंडपॉइंट मूल्यांकन परिणाम
इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी के परिणाम
दो इलेक्ट्रोड की सीमा के कारण, इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी के केवल 3 चैनल दिखाए जा सकते हैं। लेकिन वे आर तरंगों को अलग करने के लिए पर्याप्त हैं, इस प्रकार उनका उपयोग कार्यात्मक मूल्यांकन के लिए किया जा सकता है। वास्तविक जीवन के उदाहरण में, डीजल निकास के संपर्क में आने वाली मुर्गियों की इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी ने आर-आर अंतराल को काफी छोटा कर दिया, जो कार्यात्मक परिवर्तनों(चित्रा 9) का संकेत देता है।

हिस्टोपैथोलॉजी परिणाम
5, 7 ,8,9, 11 , 11,12के कई अध्ययनों में सही वेंट्रिकुलर वॉलमोटाईमूल्यांकन की हमारी विधि का सफलतापूर्वक उपयोग किया गया । हमारे पिछले अध्ययनों में से एक में, डीजल निकास जोखिम के परिणामस्वरूप मोटा सही वेंट्रिकुलर दीवार(चित्रा 10)हुई।

Figure 1
चित्रा 1:एयर सेल इंजेक्शन का प्रदर्शन। तस्वीर में एक अविकसित उपजाऊ अंडा दिखाया गया है, लेकिन सभी विभिन्न चरणों में भ्रूण इस विधि के साथ उजागर हो सकता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2:माइक्रोइंजेक्शन का प्रदर्शन। तस्वीर में एक प्रारंभिक भ्रूण दिखाया गया है, जो इस विधि के लिए पसंदीदा एक्सपोजर टाइम पॉइंट है, लेकिन अन्य समय अंक भी आजमाए जा सकते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3:वायु प्रकोष्ठ जलसेक का प्रदर्शन। एक देर चरण भ्रूण आंतरिक पाइपिंग के दौर से गुजर चित्र में दिखाया गया है, जो इस विधि के लिए पसंदीदा जोखिम समय बिंदु है । ऑपरेशन के चार चरण दिखाए गए । 1: बरकरार भ्रूण। 2: दो छेद किए गए हैं। 3: जलसेक किया जा रहा है। पीवीएफ सैंपलिंग बैग भी नीचे बाईं ओर दिखाया गया है। 4: जलसेक समाप्त हो गया है, छेद टेप के साथ बंद कर दिया। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्र 4:इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी का प्रदर्शन। शीर्ष बाएं पैनल से पता चला कि कैसे एक हैचलिंग चिकन एनेस्थेटाइज्ड और इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी माप के दौर से गुजर रहा था । टॉप राइट पैनल इलेक्ट्रोड के साथ इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी इंस्ट्रूमेंट को दिखाता है। नीचे पैनल मुर्गियों से प्राप्त एक प्रतिनिधि इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी दिखाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 5
चित्र 5:सही वेंट्रिकुलर दीवार की मोटाई (हेमटॉक्सीलिन और ियोसिन स्टेनिंग) के हिस्टोपैथोलॉजिकल मूल्यांकन का प्रदर्शन।(ए)एम्बेडिंग से पहले चिकन दिलों की काटने की स्थिति का प्रदर्शन। (ख)सही वेंट्रिकुलर वॉल मोटाई माप का प्रदर्शन। स्केल बार 1000 माइक्रोन का प्रतिनिधित्व करते हैं। नीले घेरे आंतरिक सही वेंट्रिकुलर दीवार पर सात माप अंक प्रदर्शित करते हैं। लाल सर्कल बाहरी सही वेंट्रिकुलर दीवार पर एक माप बिंदु को दर्शाता है। तीर उपयुक्त क्रॉस-सेक्शन स्थिति के लिए शारीरिक मील का पत्थर दर्शाता है। इस आंकड़े को जियांग एट अल टॉक्सिकोलॉजीसे संशोधित किया गया है । २९३ (1-3), 97-106 (२०१२)7। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 6
चित्रा 6:इनक्यूबेशन से पहले 0, 0.5, 1 या 2 मिलीग्राम/अंडे के किलोग्राम परफ्लोरोऑक्टानोइक एसिड के साथ एयर सेल इंजेक्शन के बाद मुर्गियों को हैचलिंग से परफ्लोरोऑक्टानोइक एसिड की सीरम एकाग्रता। परिणामस्वरूप सीरम सांद्रता इंजेक्शन खुराक के साथ मेल खाती है, जो वायु कोशिका इंजेक्शन की प्रभावशीलता का संकेत देती है। इस आंकड़े को जियांग एट अल टॉक्सिकोलॉजीसे संशोधित किया गया है । २९३ (1-3), 97-106 (२०१२)7। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 7
चित्रा 7:माइक्रोइंजेक्शन एक्सपोजर (क्रायो-सेक्शनिंग के बाद प्रत्यक्ष अवलोकन) के बाद लेंटीवायरस ट्रांसफेक्शन प्रभावकारिता का प्रदर्शन। बाएं पैनलों प्रकाश क्षेत्र छवियों को दिखाया, जबकि सही पैनलों एक ही ऊतक वर्गों के लिए हरी फ्लोरेसेंस दिखाया । भ्रूणीय दिन दो चिकन भ्रूण लेंटीवायरस या नियंत्रण के साथ इंजेक्शन थे, और फिर भ्रूण दिन 15 तक इनक्यूबेटेड । दिल जमे हुए थे और सीधे फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत कल्पना की । }कंट्रोल ग्रुप, लिटिल ग्रीन फ्लोरेसेंस मौजूद था। (ख)लेंटीवायरस उजागर समूह, महत्वपूर्ण हरे रंग की फ्लोरेसेंस देखी गई, जो माइक्रोइंजेक्शन के बाद लेंटीवायरस ट्रांसफैक्शन की प्रभावशीलता को दर्शाती है । स्केल बार 125 माइक्रोन का प्रतिनिधित्व करते हैं। इस आंकड़े को झाओ एट अल पर्यावरण विष विज्ञान और फार्माकोलॉजीसे संशोधित किया गया है । ५६,136-144 (२०१७)11। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 8
चित्रा 8:वायु कोशिका जलसेक की प्रभावशीलता का प्रदर्शन। चिकन भ्रूण भ्रूण दिन 18 और 19 में डीजल निकास के साथ संचार किया गया, और फिर रची मुर्गियों 0, 1 या 2 सप्ताह के लिए रखा गया था और फिर बलिदान । दिल के ऊतकों को फाइब्रोटिक घावों के लिए मैसन ट्राइक्रोम धुंधला के साथ मूल्यांकन किया गया । तीर फाइब्रोटिक घावों (नीले धुंधला) दिखाया। *: सांख्यिकीय नियंत्रण से अलग (P<0.05 विचरण और कम से कम महत्वपूर्ण अंतर परीक्षणों के विश्लेषण से)। स्केल बार 150 माइक्रोन का प्रतिनिधित्व करते हैं। इस आंकड़े को जियांग एट अल पर्यावरण प्रदूषणसे संशोधित किया गया है । २६४, 114718 (२०२०)8। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 9
चित्र 9:इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी की प्रभावशीलता का प्रदर्शन। चिकन भ्रूण भ्रूण दिन 18 और 19 में डीजल निकास के साथ संचार किया गया, और फिर रची मुर्गियों 0, 1 या 2 सप्ताह के लिए रखा गया था और फिर इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी किया गया था । महत्वपूर्ण रूप से छोटा आर-आर अंतराल एयर सेल जलसेक के माध्यम से डीजल निकास के संपर्क में आने वाली मुर्गियों में देखा गया था, जो विधि की प्रभावशीलता का संकेत देता है। *: सांख्यिकीय नियंत्रण से अलग (P<0.05 विचरण और कम से कम महत्वपूर्ण अंतर परीक्षणों के विश्लेषण से)। इस आंकड़े को जियांग एट अल पर्यावरण प्रदूषणसे संशोधित किया गया है । 264, 114718 (20208. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 10
चित्रा 10:सही वेंट्रिकुलर दीवार मोटाई माप (हेमटॉक्सीलिन और ियोसिन स्टेनिंग) की प्रभावशीलता का प्रदर्शन। चिकन भ्रूण भ्रूण दिन 18 और 19 में डीजल निकास के साथ संचार किया गया, और फिर रची मुर्गियों 1 सप्ताह के लिए रखा गया था, और फिर सही वेंट्रिकुलर दीवार मोटाई का हिस्टोलॉजिकल आकलन किया गया था । एक: दिल पार वर्गों के प्रतिनिधि चित्र । सभी सही वेंट्रिकल्स में शारीरिक मार्कर की उपस्थिति पर ध्यान दें (पुरानी मुर्गियों में, मार्कर वांछित स्थिति में थोड़ा लंबा हो जाता है, जो माप की सटीकता को प्रभावित नहीं करता है)। बी: सही वेंट्रिकुलर दीवार मोटाई है, जो सबसे पहले मानक स्लाइड के साथ वास्तविक लंबाई में परिवर्तित किया गया की मात्राकरण, और फिर पूरे दिल के वजन के साथ सामान्यीकृत इस प्रकार उम के रूप में प्रतिनिधित्व किया गया/ नीले तीर: मुक्त सही वेंट्रिकुलर दीवार के दो सिरों। लाल तीर: सही वेंट्रिकुलर दीवार के मध्य बिंदु। काले तीर: शारीरिक मार्कर। *: सांख्यिकीय नियंत्रण से अलग (P<0.05 विचरण और कम से कम महत्वपूर्ण अंतर परीक्षणों के विश्लेषण से)। स्केल बार 1000 माइक्रोन का प्रतिनिधित्व करते हैं। इस आंकड़े को जियांग एट अल पर्यावरण प्रदूषणसे संशोधित किया गया है । २६४, 114718 (२०२०)8। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

चिकन भ्रूण 200 साल1के लिए विकास के अध्ययन में एक शास्त्रीय मॉडल रहा है। इस पांडुलिपि में प्रस्तुत हमारे तरीकों का उपयोग कई पर्यावरणीय संदूषकों के आकलन में किया गया है, जिनमें परफ्लोरोऑक्टानोइक एसिड, पार्टिकुलेट मैटर और डीजल निकास शामिल हैं, जो सफलता5,7,8,9,10,11,12हैं। इन तरीकों के साथ, विकासात्मक कार्डियोटॉक्सिसिटी को लागत प्रभावी और स्पष्ट रूप से इंगित किया गया था। इसके अलावा, यह मुश्किल नहीं है अंय यौगिकों के साथ चिकन भ्रूण का पर्दाफाश-ब्याज और संभावित विकास कार्डियोटॉक्सिसिटी का आकलन ।

एयर-सेल इंजेक्शन विधि एक शास्त्रीय विधि है जिसका उपयोग पहले कईअध्ययनों 13, 14,15में कियाजाताहै, जो सुविधाजनक और प्रभावी है। कृंतक मॉडल16, 17, 18जैसे अन्य विकासात्मक एक्सपोजर विधियों की तुलना में, यह एक बंद प्रणाली में प्रत्यक्ष जोखिम की सुविधा देता है, जो मातृ प्रभावों और विभिन्न उत्सर्जन के कारण वेरिबिलिटी को बहुत कम करता है। माइक्रोइंजेक्शन एयर-सेल इंजेक्शन विधि की वृद्धि है, जो प्रारंभिक भ्रूण के विकास के आसपास या उसके आसपास निश्चित जोखिम सुनिश्चित करता है, जो कृंतक मॉडल19,20में गर्भाशय इंजेक्शन के समान प्रभाव प्राप्त कर सकता है। गर्भाशय इंजेक्शन की तुलना में, हमारी विधि अपेक्षाकृत आसान हेरफेर चरणों के साथ इंजेक्शन की दृश्य पुष्टि की अनुमति देती है, और सटीक इंजेक्शन आसानी से अंडे के वजन के लिए नियंत्रित करके प्राप्त किया जाता है, जो गर्भाशय इंजेक्शन में संभव नहीं है, जहां भ्रूण की वास्तविक मात्रा और वजन आसानी से प्राप्त नहीं होता है। जलसेक विधि मुख्य रूप से फेफड़े की प्रणाली पर सांस एजेंटों के आकलन के लिए है, लेकिन कार्डियोटॉक्सिसिटी और फेफड़े की विषाक्तता अक्सर सह होते हैं । यह विधि वायु कोशिका का लाभ उठाती है, जिसमें गैस या एयरोसोल की एक छोटी मात्रा में संचार किया जाता है, जिससे विशिष्ट साँस लेने कक्षों की आवश्यकता के बिना गैस/एयरोसोल के निरंतर साँस लेना की अनुमति होती है । समकक्ष कृंतक मॉडलों को अपेक्षाकृत बड़ी मात्रा में गैस/एयरोसोल और बड़े, महंगे साँस लेने के उपकरणों का उपयोग करने की आवश्यकता है21,22।

हमारी प्रयोगशाला में नियमित रूप से परीक्षण किए गए दो अंत बिंदु, इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी और सही वेंट्रिकुलर दीवार की मोटाई के हिस्टोमॉर्फोमेट्रिकल मूल्यांकन, क्रमशः विषाक्त जोखिम के बाद कार्यात्मक और रूपात्मक परिवर्तनों का प्रतिनिधित्व करते हैं। सही वेंट्रिकुलर दीवार की मोटाई का आकलन सही वेंट्रिकुलर दीवार की व्यापक समझ प्राप्त करने में विशिष्ट लाभ है, क्योंकि सही वेंट्रिकल पर पारंपरिक इकोकार्डियोग्राफी-आधारित मूल्यांकन आमतौर पर चुनौतीपूर्ण और बहुत सटीक नहीं होता है, सही वेंट्रिकल23के विषम और जटिल वर्धमान आकार के कारण। हमारी विधि एक प्रतिनिधि स्थिति में सही वेंट्रिकुलर दीवार मोटाई के बारे में अतिरिक्त जानकारी के साथ पूरक द्वारा इस अशुद्धि को दूर करने में मदद कर सकती है। वर्तमान में यह सब मैनुअल है, भविष्य में, माप स्वचालित रूप से किया जा सकता है और माप अंकों की संख्या में काफी वृद्धि हो सकती है, इस विधि की सटीकता में और सुधार हो सकता है।

चिकन भ्रूण आधारित विकास मॉडल विष विज्ञान अध्ययन में कई फायदे हैं, जैसे एक अपेक्षाकृत सटीक जोखिम खुराक देने की क्षमता, खोल के भीतर एक स्वतंत्र जोखिम प्रणाली, और विकासशील भ्रूण के आसान हेरफेर । कार्डियोटॉक्सिसिटी के संबंध में, मुर्गियों में अपेक्षाकृत बड़े दिल और मोटी वेंट्रिकुलर दीवारें होती हैं, जो आसान हिस्टोमॉर्फोमेट्रिकल आकलन की अनुमति देती हैं। कुछ कमियां हैं, जैसे एंटीबॉडी/प्राइमर की उपलब्धता और एक्सटें कृंतक की तुलना में अतिरिक्त पिंजरे की जगह आवश्यकताएं यदि हैच के बाद मुर्गियों को पालने । फिर भी, चिकन भ्रूण अभी भी संभावित विकासात्मक कार्डियोटॉक्सिकिटी आकलन के लिए उपयोग किया जाने वाला एक अच्छा वैकल्पिक विषविज्ञानी मॉडल है।

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Disclosures

लेखक हितों के टकराव की घोषणा नहीं करते हैं ।

Acknowledgments

इस काम को नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना (ग्रांट नंबर 91643203, 91543208, 81502835) ने सपोर्ट किया ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
4% phosphate buffered formaldehydefixative Biosharp, Hefei, China REF: BL539A
75% ethanol Guoyao,Shanghai,China CAS:64-17-5
Biosignaling monitor BL-420E+ Taimeng, Chengdu, China BL-420E+
Candling lamp Zhenwei, Dezhou, China WZ-001
Disposable syringe Zhiyu, Jiangsu, China
Egg incubator Keyu,Dezhou, China KFX
Electrical balance OHAUS, Shanghai, China AR 224CN
Electro-thermal incubator Shenxian, Shanghai, China DHP-9022
Ethanol absolute Guoyao,Shanghai,China CAS:64-17-5
Fertile chicken egg Jianuo, Jining, China
Hematoxylin and Eosin Staining Kit Beyotime, Bejing, China C0105
Histology paraffin Aladdin, Shanghai, China P100928-500g Melt point 52~54°C
Histology paraffin Aladdin, Shanghai, China P100936-500g Melt point 62~64°C
IV catheter KDL, Zhejiang, China The catheters have to be soft, plastic ones.
Lentivirus Genechem, Shanghai, China The lentivirus were individually designed/synthesized by Genechem.
Masson's trichrome staining kit Solarbio, Beijing, China G1340
Metal probe Jinuotai, Beijing, China
Microinjector (5 uL) Anting,Shanghai, China
Microscope CAIKON, Shanghai, China XSP-500
Microtome Leica, Germany HistoCore BIOCUT
Microtome blade Leica,Germany Leica 819
Pentobarbitual sodium Yitai Technology Co. Ltd.,  Wuhan, China CAS: 57-33-0
Pipetter(10ul) Sartorius, Germany
Povidone iodide Longyuquan, Taian, China
Scissor Anqisheng,Suzhou, China
Sterile saline Kelun,Chengdu, China
Sunflower oil Mighty Jiage, Jiangsu, China Any commerical sunflower oil for human consumption should work
Tape M&G, Shanghai, China
Tedlar PVF Bag (5L) Delin, Dalian, China
Vortex mixer SCILOGEX, Rocky Hill, CT, US MX-F
Xylene Guoyao,Shanghai,China CAS:1330-20-7

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References

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विकासात्मक जीव विज्ञान अंक 169 एयर सेल इंजेक्शन माइक्रोइंजेक्शन लेंटिवायरस-ओवो सिलेक्टिंग में मध्यस्थता एयर सेल साँस लेना सही वेंट्रिकुलर दीवार मोटाई
विकासात्मक कार्डियोटॉक्सिकिटीज के मूल्यांकन में एक शक्तिशाली उपकरण के रूप में चिकन भ्रूण का उपयोग करना
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Jiang, Q., Xu, X., DeWitt, J. C., Zheng, Y. Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities. J. Vis. Exp. (169), e62189, doi:10.3791/62189 (2021).

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