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JoVE Journal Neuroscience
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Neuroscience

在体内卡诺哈布德炎电子神经元微管动力学和方向评估

Published: November 20, 2021 doi: 10.3791/62744
Automatic Translation
1, 1
1DBT-National Brain Research Centre

Summary

提出了一种使用荧光标记的末端结合蛋白对 体内 动态微管进行成像的协议。我们描述了标记、图像和分析 C.elegans后脊柱（PLM）神经元中的动态微管的方法。

Abstract

在神经元中，微管方向一直是识别轴突的关键评估器，轴突具有加端的微管和树突，通常具有混合方向。在这里，我们描述标记、图像和分析 C. elegans 中触摸神经元发育和再生过程中的微管动力学和生长的方法。我们使用微管尖的基因编码荧光记者，对轴状微管进行成像。使用此协议可以量化在轴切术后启动轴素再生的微管行为的局部变化。这种测定适应其他神经元和遗传背景，以研究微管动力学在各种细胞过程中的调节。

Introduction

神经元有一个精心设计的结构，具有专门的隔间，如树突、细胞体、轴突和突触。神经元细胞骨骼由微管、微丝和神经丝组成，其独特的组织在结构上和功能上支持神经元隔间1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 .多年来，微管组织被确定为神经元极性和功能的关键决定因素。当神经元在发育或再生过程中进行结构改造时，微管动力学和方向决定各种神经元隔间7的身份、偏振传输、生长和发展。因此，评估体内的微管动力学和方向与神经元重塑过程相关是当务之急。

微管由α和β图布林异质体的原体组成，具有动态加端和相对稳定的负端11，12。加尖复合蛋白和相关端结合蛋白的发现，使一个平台能够评估微管组织13。端结合蛋白（EBP）与微管的生长增益端短暂关联，其关联动力学与微管蛋白14、15的生长相关。由于加尖复合物与微管的频繁关联和分离，GFP 标记的 EBP 的点传播功能在计时电影15、16中显示为"彗星"。自从在哺乳动物神经元16中率先观察以来，用荧光蛋白标记的端结合蛋白已经用于确定不同模型系统和神经元类型17、18、19、20、21、22、23的微管动力学。

由于其简单的神经系统和透明的身体 ，C.elegans 已被证明是一个优秀的模型系统，研究神经元改造期间的发展和再生 在体内。在这里，我们描述标记、图像和分析 C. elegans 中触摸神经元发育和再生过程中的微管动力学和生长的方法。使用基因编码的EBP-2：GFP，我们成像PLM神经元的微管，这使我们能够确定微管的极性在这个神经元24的两种不同的神经质。这种方法允许观察和量化EBP彗星作为测量不同细胞环境中的微管动力学，例如，在轴切术后启动轴素再生的微管行为的局部变化可以使用我们的协议进行评估。此检测可以适应不同细胞类型和遗传背景中不同细胞过程中微管动力学的调控。

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Protocol

1. 记者应变：文化与维护

注：为了测量PLM神经元的微管动力学和方向，我们使用蠕虫菌株表达EBP-2：GFP下触摸神经元特异性促进物mec-4（juIs338等位基因）18，25，26。我们使用标准蠕虫培养和维护方法为这个菌株27。

  1. 在水中准备线虫生长介质（3.0克/升氯化钠、2.5克/升肽、20.0克/升阿加、10毫克/升胆固醇（从10毫克/毫升的库存溶液中稀释）并自动清洁混合物。
  2. 在补充1mM氯化钙、1mM硫酸镁和25.0mM磷酸钾单基pH 6.0之前，将混合物短暂冷却10-15分钟。
  3. 使用无菌分配器将混合物约 9 mL 倒入 60 mm Petri 盘中，然后在室温和无菌条件下储存一天，随后在 4 °C 下储存。
  4. 准备50mL的B Broth（5.0克/升氯化钠，10.0克/升巴托-特里普通），高压灭菌器，冷却后再接种单一菌群 大肠杆菌 （OP50菌株）。
  5. 在 37 °C 下培养细菌 12 小时。将冷藏的 NGM 板带到室温下播种，并使用消毒玻璃扩散器将 OP50 细菌涂抹到 NGM 板上。
  6. 将接种的 NGM 板保持在 37 °C 下 12 小时，从而形成细菌草坪，用于培养 C. elegans。这些板可以存储在 20 °C 孵化器中，直到使用。
  7. 在种子的 NGM 板上后方转基因菌株。
  8. 在火焰上消毒铂线采摘，并挑选20-25个葡萄成年草本植物转移到新鲜种子的盘子。
  9. 转移后，将板移至 20 °C 孵化器 1 小时。然后，从这些盘子中提取成人。这些盘子现在将含有与年龄匹配的鸡蛋。
  10. 将板材移到 20 °C 孵化器进行饲养，直到它们达到感兴趣的发育阶段，在这种情况下，在产卵后 43.5 小时是 L4 阶段。对于更多的蠕虫，后方多个板，以避免拥挤。
  11. 在所需的发育阶段，这些蠕虫可以安装用于EBP-2：GFP彗星的成像。

2. 样品准备：安装蠕虫以成像EBP-2彗星

注：为了能够对PLM神经元的EBP彗星进行实时观察，我们将蠕虫安装在玫瑰垫上，以尽量减少它们的移动性，同时不损害神经元的生理。在各种固定方法中，我们选择了 0.1 μm 聚苯乙烯珠解决方案，这些解决方案在商业上随处可见。我们概述了专门用于EBP-2：GFP观测的安装程序。

  1. 在 5 mL 玻璃测试管中熔化 0.2 克 1x M9 缓冲器（0.02 M KH2PO4、0.02 M Na2HPO 4、0.008 M NaCl、0.02 M NH4Cl）中的氧化物溶解 10% 的玫瑰。这种试管可以很容易地安装到加热块中，使气融状态一直保持在使用之前。
  2. 使用宽嘴滴管，在 35 mm x 25 mm 尺寸的清洁玻璃滑梯上分配这种熔融气泡的掉落（约 100 μL）。
  3. 当它处于熔融状态时，用另一个玻璃滑梯按下掉落物，以创建玻璃滑梯之间的玫瑰花薄膜。在大约30秒内，阿加罗斯凝固成厚度约为0.5-1.0毫米的薄膜。
  4. 一旦阿加罗斯凝固，在非占主导地位的手和顶部滑动在占主导地位的手举行底部滑动。翻转顶部幻灯片，同时保持底部滑动稳定，结果，玫瑰垫粘在两个幻灯片之一。
  5. 如果形成的 agarose 垫大于覆盖唇尺寸（18 mm x 18 mm），则修剪垫的边缘以获得所需的尺寸，以确保盖唇的正确放置。这些玫瑰垫可立即使用，不得存储。
  6. 目视检查玫瑰垫，以获得光滑的表面，湿润且适合安装。如果玫瑰垫暴露在空气中并变干，则玫瑰垫的表面会出现皱纹。在这种情况下，准备本节第 2-6 步中提到的新鲜玫瑰垫。
  7. 在 agarose 垫上，将 2 μL 的 0.1 μm 聚苯乙烯珠溶液作为安装介质。
  8. 使用铂金线拾取挑选 3-4 蠕虫，并将其转移到非种子 NGM 板上。此过程确保去除在安装过程中阻碍固定的表面细菌。
  9. 一旦蠕虫从表面细菌中爬出来，用铂线拾取它们，然后用聚苯乙烯珠滴在玫瑰垫上重新固定它们。
  10. 小心地，在蠕虫上放置一个 18 mm x 18 mm 的盖片。为了防止安装的蠕虫被移除，放置后不要移动盖唇。
  11. 将准备好的幻灯片安装在显微镜上进行成像。

3. 成像设置和采集

注：EBP彗星以大约0.22μm/s的速度旅行，如在C.elegans16、18的哺乳动物和PLM神经元中观察到的。要根据奈奎斯特标准28以时间差获取最佳采样事件，需要空间和时间尺度分别为 0.09 μm 和 0.43 s。为了防止光毒性或光出血，我们使用旋转磁盘采集。我们描述了下面的成像设置和采集设置。

  1. 使用装有旋转磁盘单元和摄像头的倒置显微镜捕捉图像。根据制造商的指示打开设置。
  2. 打开控制设置的软件。
  3. 由于这是一个倒置显微镜，将滑梯与安装的蠕虫放在舞台上，具有低放大倍数（5 倍或 10 倍），封面朝下。
  4. 设置光路径到眼睛或可见模式，使用卤素灯的照明传输光和汞弧灯反射光。
  5. 聚焦和中心在明亮的视野下的视野蠕虫。
  6. 将浸入油和放大倍数更改为 63 倍（1.4NA/Oil），并将蠕虫尾巴重新聚焦在 PLM 神经元的明亮场中。
  7. 打开汞弧灯的荧光，短暂地重新聚焦PLM神经元。将正确的反射器集 （AF488） 置于光路中，以便 GFP 的可视化。
  8. 通过将光路引导到摄像机，将显微镜设置为摄像机采集。
    注：通过显微镜的薄膜晶体管 （TFT） 屏幕控制上述步骤 4-7 的速度很快，可防止不必要的照明暴露。或者，通过软件控制照明、反射器。
  9. 在视图场中对焦后，在软件界面中选择功率为 30% 的 488 nm 激光的照明和具有电子乘法 （EM） 增益值 70 的相机 300 ms 曝光。根据记者的表达方式，根据需要更改这些参数。将设置存储为后续成像会话的配置。
  10. 通道选项卡存储每个轨道具有特定的照明和摄像机设置。高亮轨道允许实时可视化，而对于获取图像，需要勾选轨道。突出显示具有亮场 （DIC） 的通道，以便在工作空间中实时可视化蠕虫尾部。样品以工作空间的实时成像窗口为中心。
  11. 用 488 nm 激光激发突出通道，以便在现场成像窗口中快速聚焦 PLM 神经元。一旦集中注意力，通过设置下一步中提到的时间系列参数开始时间推移获取。
  12. 使用 488 nm 激光照明，设置一个时间系列的实验，时间系列为 2 分钟，帧之间没有时间间隔。为了保持图像采集的时间尺度，我们只获取 GFP 荧光。
  13. 使用 "开始"实验 选项卡，开始获取。使用 63 倍放大倍数将空间分辨率限制为 0.21 μm，相机以 0.09 μm 的像素大小对该分辨率进行采样。以 3.3 帧/s 的速度获取时间差，以便以最佳方式采样事件。延时图像在 2 分钟内获取了 396 个时间框架。收购后，以默认格式保存图像，默认软件或 ImageJ 可稍后访问该图像。

4. 观察和分析

  1. 预览默认软件中的超时采集，或通过其 Bioformat 插件在 Image J 中打开它。
    注：我们描述了图像 J 中的图像分析过程。
  2. 安装生物形态插件插入图像J。
    1. 或者，将默认格式文件导出到.tif，以便在 ImageJ 中进行文件兼容性。ZEN2 中的输出功能将图像的单个帧作为离散.tif文件。我们避免使用这种方法来防止大量文件的形成。
  3. 通过"生物形式"插件直接以".czi"格式打开图像。图像以多图像堆栈打开。如果使用默认软件的"输出"功能，则使用"图像 J：ImageJ 程序>图像菜单>堆叠子菜单>图像堆叠"中的以下工作流程将图像重组为多图像堆栈。
  4. 使用图像窗口左下角的 Play 图标将图像预览为电影。彗星可以被看作是明亮的移动穿刺在细胞体和PLM神经元的过程。如果彗星清晰可见，请继续第 8 步，否则将遵循本节的第 5-7 步。
  5. 使用查找表 （LUT） 将图像的颜色配置文件转换为灰度图像： 图像J程序>图像菜单>查找表子菜单>选择灰色。
  6. 倒置图像的LUT配置文件，便于可视化：图像J程序>图像菜单>查找表子>倒置LUT。
  7. 调整图像的亮度和对比度，以看到彗星： 图像J程序>图像菜单>调整子菜单>亮度/对比度。
    1. 移动 最小、最大、亮度 和对 比 度的滑块，以达到整个图像强度的预期缩放。我们用明显可见的彗星来量化图像。
  8. ImageJ 的基本版本具有以图标表示的启动工具。找到并右键单击图标与行打开一个下拉菜单，并选择 细分线。在感兴趣的区域 （ROI） 上绘制细分线，其起源在神经元细胞体上或附近。
    1. 对于以后的考虑，请使用以下工作流程通过 ROI 经理保存细分行投资回报率 ：ImageJ >分析>工具>投资回报率经理 >选择图像中的绘制痕迹，然后单击 "添加 "投资投资管理器"窗口> 更多 在 ROI 经理窗口中> 保存。
  9. 在生成 kymograph 之前，由于空间和时间尺度不同，因此通过以下方法删除缩放以以像素获取测量结果：
    图片J>分析>设置刻度>单击删除刻度>确定。
  10. 使用图像>堆栈下拉菜单下的遗物功能，生成基姆图。基姆图是分段投资回报率的及时表示。水平轴表示距离，垂直轴代表时间。对角线的痕迹代表移动的彗星。通常，kymograph 采用图像的颜色轮廓，否则将前一步 5-6 中描述的颜色轮廓分配给对角线痕迹的可视化。
  11. 使用 Line 工具的下拉菜单中的 直线 功能（请参阅此部分的第 9 步）在每个对角线痕迹上绘制直线，并在 ROI 管理器中附加直线。
  12. 在 分析 选项卡下，请访问 "设置测量" 并选择 平均强度 和 边界矩形 参数以测量痕迹。
  13. 在 ROI 管理器窗口中，单击 "测量"，该"测量" 将打开一个结果窗口，该窗口将产生 ROI 的平均强度、线路痕迹的 X 和 Y 坐标、宽度、高度、角度和线条痕迹的长度。此窗口可以保存为.csv格式，然后导入到数据分析程序中。
  14. 在电子表格程序中，结果窗口打开，以行和列分布值。相关值是痕迹的宽度、高度和角度。宽度给出了痕迹的位移，高度给出了持续时间，角度代表向量。由于宽度和高度值以像素为单位，因此将它们与空间和时间尺度相乘，分别用于获取标准可测量参数。
  15. 由于基姆图的左侧接近细胞体，根据角度，将彗星分类为加端或减端（即分别远离细胞体或朝向细胞体）。将 1° 到 -89° 和 -91° 到 -179° 之间的角度分别分类为加端和减端。将来自多个 kymograph 的数据整理在电子表格中进行研究，并进行统计学表示。

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Representative Results

作为一个具有代表性的例子，我们在对EBP彗星的体内观察中描述了PLM神经元的稳定状态和再生轴突。PLM神经元位于蠕虫的尾部区域，具有很长的前过程，形成突触和短后过程。PLM 神经元生长在靠近表皮的前后方向，并负责蠕虫的温和触觉。由于其简化的结构，以及成像和显微外科的便利性，PLM神经元被广泛调查为其微管细胞骨骼29，轴向运输30，31，再生19，32，神经元极性24，33，34，行为和老化35，36 和许多其他神经元过程。我们使用PLM神经元在mec-4促进器下，在转基因表达EBP-2：：GFP下评估微管动力学和体内方向。

为了检查微管的稳定状态动态，我们挑选了表达Pmec-4-EBP-2：GFP记者的蠕虫。蠕虫被安装在 0.1 μm 聚苯乙烯珠子上 10% 的玫瑰垫上。轻轻添加盖唇，在旋转的圆盘显微镜上对蠕虫进行成像。PLM 神经元以 63 倍为中心，成像速率为每秒 3.3 帧。PLM的前过程显示大多数彗星离开细胞体，而后过程显示彗星的双向运动（图1）。根据彗星的方向，PLM的前过程包含单极加端出微管，而后体过程有微孔（图2）24的极性（正负端）混合。

作为测定应用，我们探索了PLM神经元再生轴突中的微管动力学和方向。先前的研究已经建立了激光调解轴切除术的方法，使用各种类型的激光，包括紫外线，纳秒，皮秒和飞秒激光31，37，38，39，40，41，42，43。在这项研究中，我们使用飞秒激光切断PLM神经元43的前过程。受伤后，蠕虫被恢复到种子的NGM板。然后，在EBP-2：GFP彗星的观测中受伤后，蠕虫在多个时间点被成像。受伤后2小时，可以看见断断的轴素，但与未受伤的轴素相比，彗星的数量大大减少。受伤后11小时，轴突以轴突再生的形式引起再生反应，观察到大量EBP-2：GFP彗星（图3）。

Figure 1
图1：EBP彗星的观测与分析。 （A） PLM 神经元的示意图显示其对蠕虫解剖学的位置。（B） 参照点根据神经元类型进行选择。在这种情况下，PLM 神经元的细胞体作为前过程或后过程感兴趣的区域的参考点。彗星（品红色圆圈）在PLM神经元的细胞体、前部和后部过程中以穿刺剂的身份可见。绘制一条分段线，跟踪兴趣的神经质（前过程），以提取基姆图。（C） 典型的投资回报率可以转换为基姆图，这是一个具有代表移动彗星的对角线痕迹的距离时间图像。关于细胞体，加端彗星以青色为追踪，而负端彗星以粉红色追踪。对于空间参考，分段投资回报率在原始基姆图上表示。（D） 测量参数包括可转换为微管参数的痕迹的宽度、高度、角度和长度。（E） 分析参数是从痕迹宽度、高度和角度的测量参数中提取的。请单击此处查看此图的较大版本。

Figure 2
图2：PLM轴向微管的稳定状态动力学。  （A） EBP-2：PLM神经元中具有代表性的时间系列的快照，显示PLM神经元的前和后过程中的一些EBP-2：：GFP彗星（彩色箭头）。（B） 前过程中的两个区域（ROI-A 和 ROI-B）转换为基姆图，其中跟踪与 2（A）标记的彗星对应。痕迹是颜色和编号编码有关移动的彗星在2（A）。较低的图形面板表示根据其运动方向区分的观察到的痕迹。另外，最终彗星以青色标记，而负端彗星以粉红色标记。供参考，细胞体的位置被描绘在底部。（C） 后过程的ROI-C转换为基姆图，在 图2（A）中，其痕迹与后过程的移动彗星相对应。最右面板表示与底部标记的细胞体位置的正端和减端端端痕迹。请注意，轴向区域（ROI-A 和 ROI-B）中的大多数痕迹正在远离代表加端微管（青色痕迹）的细胞体。相反，在后方过程 （ROI-C） 中，痕迹是双向的，表示加（青色痕迹）和减端（粉红色痕迹）微管的混合极性。请单击此处查看此图的较大版本。

Figure 3
图3：PLM神经元轴向再生过程中的微管。  （A）使用飞秒激光器对轴切手术进行示意图表示。激光造成伤害，然后开始再生。主要再生响应得分为 1 型融合、2 型融合和再生轴突。（B）表示EBP-2：GFP在未受伤（0小时）、轴切除术（2小时轴切除术后）和再生条件（11小时后轴切除术）中表达EBP-2：GFP的代表图像。追踪到的基姆图的 ROI 已标记在图像上。（C）轴突区域的代表 kymograph 追踪到未受伤、受伤、再生和 1 型融合轴突。请注意，EBP-2：GFP彗星的数量在受伤的轴突中显著减少，随后在再生轴突中具有强大的运动（增加生长长度和持续时间）。单个痕迹可以根据其方向进行量化和分类（青色和粉红色痕迹）。请单击此处查看此图的较大版本。

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Discussion

多年来，了解微管动力学一直是细胞骨骼研究领域的一个关键焦点。微管经历核化和灾难，以及一个连续的动态不稳定过程44，45，46，47。这些信息大部分是通过体外测定获得的，如自由与聚合的tubulin的光散射读数、荧光管蛋白的微管生长检测等。虽然在薄细胞中对荧光和非荧光微管进行实时观察是可行的，但在微管动力学的体内测量中却具有挑战性。

使用这种转基因菌株，也可以评估其他触摸神经元，如PVM、ALM和AVM的微管方向。此处描述的成像和分析程序可以适应C. elegans中的其他神经元类型，并具有适当的射电图转基因，但是，不同神经元的彗星动力学中的变异性预计为 49、50、51、52。这种方法也适用于非神经细胞类型的C.elegans53，54，55，56。在表皮或胚胎等非神经元细胞类型中，微管动力学在两个维度中观察到53、54、55、56。对于此类事件，时间系列的图像使用 Z 投影或堆栈差图像投影到单个图像中，以提取 kymograph 的 ROI。

我们观察到，像盐酸莱瓦米索尔、利特拉米索尔等商业上可用的麻醉剂不适合蠕虫固定，因为它们会大大衰减彗星的动力学。10%的玫瑰垫上的微珠是成像57，58期间固定的合适选择。然而，长期接触较高比例的藻糖和微珠可能导致蠕虫的身体压力。此外，建议在安装前将微珠溶液置于室温，因为冷冲击可能导致微管动力学 59、60、61、62、63 的变化。气垫中的水分是固定的敏感因素，因为蠕虫可能会在干燥器的玫瑰垫中干燥，潮湿的玫瑰垫可能不会限制蠕虫的移动性。实验者可以在安装64之前，目视检查玫瑰垫的光滑和平坦的表面。安装过程可以通过减少与蠕虫相关的细菌进一步改善。表面粘附细菌阻碍蠕虫的固定，而肠道细菌导致自发光，可能遮挡EBP-2：GFP彗星的信号。因此，最好在新鲜种子的OP50板上种植蠕虫，并将蠕虫放在非种子的NGM板上，或用M9缓冲器清洗，或在蔗糖溶液65、66中漂浮，去除表面细菌。

在观测参数中，空间尺度和时间尺度对于最佳地采样彗星28至关重要。EBP-2：GFP对光照发光很敏感，因此应防止不必要的光线暴露。荧光探针的实时成像也会导致光毒性损伤，由于自由基的产生。这可能妨碍微管动力学，并可能对蠕虫致命。低曝光采集设置可用于规避光出血和光毒性问题。分析参数也适用于多维彗星运动，但是，人们需要正确确定参考点。

本研究中描述的每个模块都可以适应其他检测微管减端的记者，轴突或树突内的车辆细胞器等。该技术还可用于具有适当转基因和成像系统的其他生物体或组织。微管动力学的信息在其他细胞过程中有效，如细胞分裂、细胞迁移、细胞结构维护和其他基于微管的过程。各种临床条件都与微管组织和动力学有关，其准确信息可以加强药理学方法。

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Disclosures

作者声明没有利益冲突。

Acknowledgments

我们感谢金一石和安德鲁·奇斯霍尔姆在研究中给予的最初支持和治疗。细菌菌株OP50由美国国家卫生研究院研究基础设施项目办公室（P40 OD010440）资助，由卡诺哈布迪炎遗传学中心（CGC）提供商业利用。我们还感谢达曼德拉·普里对实验程序的标准化。这项研究由国家大脑研究中心的核心赠款资助（由生物技术部支持， 印度政府）、DBT/Wellcome信托印度联盟早期职业补助金（赠款/E/E/18/1/504331）给S.D.，韦康信托-DBT印度联盟中期赠款（赠款#IA/I/13/1/500874）给A.G.-R，以及科学和工程研究委员会（SERB： CRG/2019/002194） 至 A.G.-R.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
CZ18975 worm strain Yishi Jin lab CZ18975 Generated by Anindya Ghosh-Roy
Agarose Sigma A9539 Mounting worms
Coverslip (18 mm x 18 mm) Zeiss 474030-9010-000 Mounting worms
Dry bath with heating block Neolab Mounting worms
Glass slides (35 mm x 25 mm) Blue Star Mounting worms
Polystyrene bead solution (4.55 x 10^13 particles/ml in aqueous medium with minimal surfactant) Polysciences Inc. 00876 Mounting worms
Test tubes Mounting worms
OP50 bacterial strain Caenorhabditis Genetics Center (CGC) OP50 Worm handling
60mm petri plates Praveen Scientific 20440 Worm handling
Aspirator/Capillary VWR 53432-921 Worm handling
Incubator Panasonic MIR554E Worm handling
Platinum wire Worm handling
Stereomicroscope with fluorescence attachment Leica M165FC Worm handling
0.3% Sodium Chloride Sigma 71376 Nematode Growth Medium
0.25% Peptone T M Media 1506 Nematode Growth Medium
10mg/mL Cholesterol Sigma C8667 Nematode Growth Medium
1mM Calcium chloride dihydrate Sigma 223506 Nematode Growth Medium
1mM Magnesium sulphate heptahydrate Sigma M2773 Nematode Growth Medium
2% Agar T M Media 1202 Nematode Growth Medium
25mM Monobasic Potassium dihydrogen phosphate Sigma P9791 Nematode Growth Medium
0.1M Monobasic Potassium dihydrogen phosphate Sigma P9791 1X M9 buffer
0.04M Sodium chloride Sigma 71376 1X M9 buffer
0.1M Ammonium chloride Fisher Scientific 21405 1X M9 buffer
0.2M Dibasic Disodium hydrogen phosphate heptahydrate Sigma S9390 1X M9 buffer
Glass bottles Borosil Buffer storage
488 nm laser Zeiss Imaging
5X objective Zeiss Imaging
63X objective Zeiss Imaging
Camera Photometrics Evolve 512 Delta Imaging
Computer system for Spinning Disk unit HP Intel ® Xeon CPU E5-2623 3.00GHz Imaging
Epifluorescence microscope Zeiss Observer.Z1 Imaging
Halogen lamp Zeiss Imaging
Mercury Arc Lamp Zeiss Imaging
Spinning Disk Unit Yokogawa CSU-X1 Imaging
ZEN2 software Zeiss Imaging
Image J (Fiji Version) Image analysis and processing
Adobe Creative Cloud Adobe Image analysis and processing
Computer system for Image Analysis Dell Intel ® Core ™ i7-9700 CPU 3.00GHz Image processing/Representation

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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神经科学，第177期，
<em>在体内</em><em>卡诺哈布德炎电子</em>神经元微管动力学和方向评估
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Dey, S., Ghosh-Roy, A. In vivo Assessment of Microtubule Dynamics and Orientation in Caenorhabditis elegans Neurons. J. Vis. Exp. (177), e62744, doi:10.3791/62744 (2021).

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