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रेटिनोपैथी के माउस मॉडल के लिए ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी का अनुप्रयोग

Published: January 12, 2022 doi: 10.3791/63421
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1,2,3, 1
1Joint Shantou International Eye Center, Shantou University and the Chinese University of Hong Kong, 2Shantou University Medical College, 3Department of Ophthalmology and Visual Sciences, the Chinese University of Hong Kong
* These authors contributed equally

Summary

यहां, हम चूहों में रेटिनोपैथी के निदान और मात्रात्मक माप की सुविधा के लिए ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी का उपयोग करके एक इनविवो इमेजिंग तकनीक का वर्णन करते हैं।

Abstract

ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी (ओसीटी) रेटिनोपैथी के निदान के लिए एक गैर-आक्रामक विधि प्रदान करता है। ओसीटी मशीन रेटिना क्रॉससेक्शनल छवियों को कैप्चर कर सकती है जिससे रेटिना मोटाई की गणना की जा सकती है। यद्यपि ओसीटी का व्यापक रूप से नैदानिक अभ्यास में उपयोग किया जाता है, बुनियादी अनुसंधान में इसका आवेदन उतना प्रचलित नहीं है, खासकर चूहों जैसे छोटे जानवरों में। उनकी आंखों की पुतलियों के छोटे आकार के कारण, चूहों में फंडस इमेजिंग परीक्षा आयोजित करना चुनौतीपूर्ण है। इसलिए, छोटे जानवरों पर ओसीटी इमेजिंग को समायोजित करने के लिए एक विशेष रेटिना इमेजिंग सिस्टम की आवश्यकता होती है। यह लेख ओसीटी परीक्षा प्रक्रियाओं के लिए एक छोटी-पशु-विशिष्ट प्रणाली और छवि विश्लेषण के लिए एक विस्तृत विधि प्रदर्शित करता है। बहुत कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन रिसेप्टर (वीएलडीएलआर) नॉकआउट चूहों और सी 57बीएल / 6 जे चूहों के रेटिना ओसीटी परीक्षा के परिणाम प्रस्तुत किए गए हैं। सी57बीएल/6जे चूहों की ओसीटी छवियों में रेटिना परतें दिखाई दीं, जबकि वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों में सबरेटिनल नियोवैस्कुलराइजेशन और रेटिना पतलापन दिखा। सारांश में, ओसीटी परीक्षा माउस मॉडल में रेटिनोपैथी का गैर-आक्रामक पता लगाने और माप की सुविधा प्रदान कर सकती है।

Introduction

ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी (ओसीटी) एक इमेजिंग तकनीक है जो ऊतक 1,2,3,4,5,6,7,8 के लिए विवो उच्च रिज़ॉल्यूशन और क्रॉससेक्शनल इमेजिंग प्रदान कर सकती है, विशेष रूप से रेटिना 9,10,11,12 में गैर-आक्रामक परीक्षा के लिए। . इसका उपयोग कुछ महत्वपूर्ण बायोमाकर्स को निर्धारित करने के लिए भी किया जा सकता है, जैसे रेटिना मोटाई और रेटिना तंत्रिका फाइबर परत मोटाई। ओसीटी का सिद्धांत ऑप्टिकल सुसंगतता परावर्तकता है, जो एक नमूने से परावर्तित प्रकाश के सामंजस्य से क्रॉससेक्शनल ऊतक जानकारी प्राप्त करता है और इसे कंप्यूटर सिस्टम 7 के माध्यम से ग्राफिक या डिजिटल रूप में परिवर्तित करताहै। ओसीटी का व्यापक रूप से नेत्र विज्ञान क्लीनिकों में रेटिना विकारों वाले रोगियों के लिए निदान, अनुवर्ती और प्रबंधन के लिए एक आवश्यक उपकरण के रूप में उपयोग किया जाता है। यह रेटिना रोगों के रोगजनन में अंतर्दृष्टि भी प्रदान कर सकता है।

नैदानिक अनुप्रयोगों के अलावा, ओसीटी का उपयोग पशु अध्ययन में भी किया गया है। यद्यपि पैथोलॉजी रूपात्मक लक्षण वर्णन का स्वर्ण मानक है, ओसीटी में विवो इमेजिंग और अनुदैर्ध्य अनुवर्ती में गैर-आक्रामक का लाभ है। इसके अलावा, यह दिखाया गया है कि ओसीटी रेटिनोपैथी पशु मॉडल 11,13,14,15,16,17,18,19,20 में हिस्टोपैथोलॉजी के साथ अच्छी तरह से सहसंबद्ध है। माउस बायोमेडिकल अध्ययन में सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला जानवर है। हालांकि, इसकी छोटी आंखों की पुतलियां चूहों में ओसीटी इमेजिंग करने के लिए एक तकनीकी चुनौती पैदा करती हैं।

चूहों21,22 में रेटिना इमेजिंग के लिए पहली बार उपयोग किए जाने वाले ओसीटी की तुलना में, छोटे जानवरों में ओसीटी को अब हार्डवेयर और सॉफ्टवेयर सिस्टम के संबंध में अनुकूलित किया गया है। उदाहरण के लिए, ओसीटी, ट्रैकर के साथ संयोजन में, सिग्नल-टू-शोर अनुपात को काफी कम कर देता है; ओसीटी सॉफ्टवेयर सिस्टम अपग्रेड अधिक रेटिना परतों को स्वचालित रूप से पता लगाने की अनुमति देता है; और एकीकृत डीएलपी बीमर गति कलाकृतियों को कम करने में मदद करता है।

बहुत कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन रिसेप्टर (वीएलडीएलआर) एंडोथेलियल कोशिकाओं में एक ट्रांसमेम्ब्रेन प्रोटीन है। यह रेटिना संवहनी एंडोथेलियल कोशिकाओं, रेटिना वर्णक उपकला कोशिकाओं और बाहरी सीमित झिल्ली23,24 के आसपास व्यक्त किया जाता है। सबरेटिनल नियोवैस्कुलराइजेशन वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों का फेनोटाइप है। इसलिए, वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों का उपयोग रोगजनन और सबरेटिनल नियोवैस्कुलराइजेशन की संभावित चिकित्सा की जांच के लिए किया जाता है। यह लेख वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों में रेटिना घावों का पता लगाने के लिए ओसीटी इमेजिंग के आवेदन को प्रदर्शित करता है, छोटे पशु मॉडल में रेटिनोपैथी अनुसंधान के लिए कुछ तकनीकी संदर्भ प्रदान करने की उम्मीद करता है।

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Protocol

एसोसिएशन फॉर रिसर्च इन विजन एंड ओप्थाल्मोलॉजी से ओप्थाल्मिक और विजन रिसर्च में जानवरों के उपयोग पर बयान के बाद ऑपरेशन किए गए थे। प्रयोगात्मक डिजाइन को संस्थागत पशु आचार समिति (जेएसआईईसी की मेडिकल एथिक्स कमेटी, ईसी 20171213 (4) -पी 01) द्वारा अनुमोदित किया गया था। इस अध्ययन में दो महीने के सी57बीएल/6जे चूहों और वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों का इस्तेमाल किया गया। प्रत्येक समूह में 7 चूहे थे, जिनमें से सभी मादा थे और उनका वजन 20 ग्राम से 24 ग्राम था।

1. प्रायोगिक स्थितियां

  1. चूहों को दो समूहों में असाइन करें: एक प्रयोगात्मक समूह जिसमें वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहे शामिल हैं और एक नियंत्रण समूह जिसमें सी 57बीएल / 6 जे चूहे शामिल हैं।
  2. चूहों को पारंपरिक रूप से भोजन और पानी खिलाएं।
  3. कमरे के तापमान (22 डिग्री सेल्सियस), आर्द्रता (50-60%), प्रकाश-अंधेरे चक्र (12 घंटे -12 घंटे), और कमरे की रोशनी की तीव्रता (350-400 लक्स) की स्थिर परिस्थितियों में पशु प्रयोगशाला में चूहों को उठाएं।
  4. प्रयोगात्मक उपकरण तैयार करें: छोटे जानवरों के लिए कॉन्फोकल स्कैनिंग लेजर ऑप्थाल्मोस्कोप (सीएसएलओ) के साथ ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी (चित्रा 1 ए)।
  5. प्रयोग के लिए आवश्यक सभी सामग्री तैयार करें (चित्रा 1 बी) और चूहों का वजन करें (चित्रा 1 सी)।

2. सूचना रिकॉर्ड

  1. जानकारी रिकॉर्ड करें: समूह, कोड, जन्म तिथि, आयु, लिंग, वजन और एनेस्थेटिक खुराक।

3. इंस्ट्रूमेंट स्टार्टअप और परीक्षण

  1. कंप्यूटर पर स्विच करें और सॉफ्टवेयर शुरू करें।
  2. परीक्षण प्रोग्राम को पूरा करने के लिए परीक्षण प्रोग्राम बटन क्लिक करें।
  3. थर्मोस्टेट चालू करें और इसे 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर प्रीहीट करें।
  4. प्रोग्राम परीक्षण के बाद OCT मॉड्यूल प्रक्रिया प्रारंभ करें।
  5. एक नया विषय बनाएँ और माउस जानकारी भरें।
  6. इलेक्ट्रिक कंबल को पहले से गर्म करें और इसे सर्जिकल तौलिए से कवर करें।

4. एनेस्थीसिया

  1. एनेस्थेटिक मिश्रण तैयार करने के लिए टिलेटामाइन और ज़ोलाज़ेपाम युक्त लियोफिलाइज्ड एनेस्थेटिक पाउडर का उपयोग करें।
    नोट: संज्ञाहरण प्रशासन की पसंद, खुराक और मार्ग के लिए स्थानीय पशु नैतिकता समिति की सिफारिशों का पालन करें। एनेस्थेटिक के साथ जानवर को एनेस्थेटाइज करें जो कम से कम 1 घंटे के लिए गतिहीनता और दर्द की धारणा का नुकसान प्रदान करेगा, जिसके बाद जानवर जल्दी से ठीक हो जाता है। खुराक प्रयोग के समय, पशु वजन और अन्य कारकों की लंबाई पर आधारित होना चाहिए।
  2. तैयार एनेस्थेटिक मिश्रण का उपयोग करके जानवर को एनेस्थेटाइज करें। ठीक होने तक पूरी प्रक्रिया के दौरान जानवर को गर्म रखना सुनिश्चित करें।

5. माइड्रियाटिक बूंदों का अनुप्रयोग

  1. स्क्रफ द्वारा माउस के मैनुअल संयम को प्राप्त करें, नेत्रगोलक को थोड़ा सा फैलाएं, और माउस सिर को एक आंख के साथ ऊपर की ओर घुमाएं।
  2. विद्यार्थियों को पतला करने के लिए माइड्रियाटिक बूंदों को लागू करें (चित्रा 2 ए)।
  3. 10 मिनट के बाद पुतली फैलाव की जांच करें।

6. माउस का प्लेसमेंट

  1. एक इलेक्ट्रिक कंबल मंच पर एक माउस रखें।
  2. मेडिकल सोडियम हाइलूरोनेट जेल (चित्रा 2 बी) के साथ दोनों आंखों को कोट करें।
  3. सीएसएलओ डिवाइस पर एक 60 डी डबल गोलाकार लेंस (प्रीसेट लेंस) स्क्रू (चित्रा 1 ए -5, 6)।
  4. माउस कॉर्निया पर एक 100 डी संपर्क लेंस रखें जिसमें अवतल पक्ष कॉर्नियल सतह पर सोडियम हाइलूरोनेट जेल को छूता है (चित्रा 2 सी, डी और चित्रा 3 ए-II)।
  5. माउस को छोटे, निरंतर तापमान वाले पशु मंच पर रखें और आंख को सीएसएलओ डिवाइस (चित्रा 3 ए) के लेंस से 1-2 मिमी दूर रखें।
  6. पुतली को लेंस के केंद्र में रखने के लिए संपर्क लेंस के कोण को बल के साथ समायोजित करें।
  7. आंख के चेहरे को सीधे आगे बनाने के लिए सिर में समायोजन को ठीक करें।

7. कॉन्फोकल स्कैनिंग लेजर ऑप्थाल्मोस्कोप (सीएसएलओ)

  1. OCT बटन क्लिक करें, माउस मॉड्यूल चुनें, और cSLO प्रोग्राम (चित्रा 4B) प्रारंभ करें।
  2. आईआर मोड (प्रकाश स्रोत: लाल बत्ती) का चयन करें, और पैरामीटर (सीमा: 2047, चित्रा 4 डी) समायोजित करें।
  3. जांच की जाने वाली आंख का चयन करें (दाईं आंख: चित्रा 4 सी -1; बाईं आंख: चित्रा 4 सी -2)।
  4. लीवर को नियंत्रित करें और प्रीसेट लेंस को धीरे-धीरे संपर्क लेंस की ओर ले जाएं।
  5. डायप्टर मान को तब तक समायोजित करें जब तक कि पीछे की ध्रुव इमेजिंग स्पष्ट न हो (चित्रा 4 ई)।
  6. रेटिना पश्चवर्ती ध्रुव की छवि को संरेखित करने के लिए आगे समायोजन करें, इसे ऑप्टिक तंत्रिका सिर पर केंद्रित करें।

8. ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी (ओसीटी)

  1. OCT प्रोग्राम प्रारंभ करें (चित्रा 4G)।
  2. ओसीटी छवि दिखाई देने तक प्रगति पट्टी को ऊपर और नीचे क्लिक करें (चित्रा 4 एच)।
  3. पैरामीटर समायोजित करें: रेंज मिन (चित्रा 4 आई) = 0-20, रेंज मैक्स (चित्रा 4 जे) = 40-60।
  4. एक आदर्श ओसीटी छवि प्राप्त होने तक पूर्व निर्धारित लेंस दूरी और स्थिति दिशा को समायोजित करें।
  5. cSLO (चित्रा 4M) में मानक रेखा को स्थानांतरित करके स्कैनिंग स्थिति का चयन करें।
  6. ऑप्टिक तंत्रिका सिर से स्कैन करना शुरू करें।
  7. प्रत्येक आंख के लिए एक ही क्रम में छवियों को इकट्ठा करें: क्षैतिज रेखा: ऑप्टिक तंत्रिका सिर → बेहतर → हीन; ऊर्ध्वाधर रेखा: ऑप्टिक तंत्रिका सिर → नाक → अस्थायी।
  8. चार दिशाओं से चित्र एकत्र करें।
  9. सीएसएलओ और ओसीटी छवि संकेतों (चित्रा 4 एफ और चित्रा 4 ओ) को ओवरले करने के लिए औसत पर क्लिक करें।
  10. SLO-OCT छवि (चित्रा 4P) प्राप्त करने के लिए शॉट बटन पर क्लिक करें।
  11. सभी छवियों को सहेजें और निर्यात करें (चित्रा 4क्यू, आर)।

9. प्रयोग का अंत (ओसीटी परीक्षा के बाद)

  1. माउस को जागने तक गर्म रखने के लिए इलेक्ट्रिक कंबल पर रखें।
    नोट: माउस की निगरानी तब तक की जानी चाहिए जब तक कि यह उरोस्थि पुनरावृत्ति बनाए रखने के लिए पर्याप्त चेतना प्राप्त नहीं कर लेता। उज्ज्वल प्रकाश के पोस्टऑपरेटिव जोखिम को कम से कम किया जाना चाहिए।
  2. 100 डी संपर्क लेंस हटा दें।
  3. कॉर्निया की रक्षा के लिए लेवोफ़्लॉक्सासिन आई जेल लागू करें।
  4. जागने के बाद माउस को पिंजरे में वापस रखें।
    नोट: सुनिश्चित करें कि जांच किए गए माउस को पूरी तरह से ठीक होने तक अन्य चूहों की कंपनी में वापस नहीं किया जाता है।
  5. सॉफ़्टवेयर बंद करें और कंप्यूटर को बंद करें।
  6. पानी के साथ 100 डी संपर्क लेंस साफ करें; लेंस को सुखाएं।
  7. पर्यावरण को साफ और कीटाणुरहित करें।

10. छवि विश्लेषण

  1. सी 57बीएल / 6 जे चूहों के साथ वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों की ओसीटी छवियों की तुलना करें।
  2. कई स्थितियों का निरीक्षण करें: ऑप्टिक पैपिला से गुजरने वाले ऊर्ध्वाधर और क्षैतिज स्कैन; बेहतर, हीन, नाक और लौकिक स्कैन; और असामान्य प्रतिबिंब साइट स्कैन।
  3. प्रत्येक छवि में रेटिना की मोटाई, आकार, परत और असामान्य परावर्तनीयता घावों का निरीक्षण करें, साथ ही रेटिना और विट्रियस शरीर के विट्रियस इंटरफ़ेस का भी निरीक्षण करें।
  4. घावों के स्थानों, विशेषताओं और संख्याओं को रिकॉर्ड करें।

11. रेटिना स्तरीकरण सुधार

  1. OCT इंटरफ़ेस (चित्रा 5A) पर लोड परीक्षा पर क्लिक करें।
  2. पॉप-अप विंडो से माउस की OCT छवियों को कॉल करें।
  3. छवियों का चयन करें: ऑप्टिक पैपिला के माध्यम से ओसीटी छवि स्कैनिंग, क्षैतिज या लंबवत रूप से।
  4. स्क्रीन पर प्रदर्शित करने के लिए मीडिया कंटेनर में छवि को डबल-क्लिक करें (चित्रा 5 सी)।
  5. रेटिना पर स्वचालित लेयरिंग को पूरा करने के लिए लेयर डिटेक्शन पर क्लिक करें (चित्रा 5 डी)।
  6. विश्लेषण के लिए तैयार परत के दोनों किनारों पर विभाजन रेखाओं का चयन करें (चित्र 6 डी -10)।
  7. एक अलग विभाजन रेखा (चित्रा 6B-6) का चयन करें और लाल वृत्त दिखाई देने पर रेखा को सक्रिय करने के लिए परत (चित्र 6A-1) संपादित करें क्लिक करें (चित्र 6B-7).
  8. रिक्ति समायोजित करें (चित्रा 6 ए -4, उदाहरण के लिए, 50) और सीमा सीमा (चित्रा 6 ए -5, उदाहरण के लिए, 50)।
  9. लाल वृत्त को स्थानांतरित करके विभाजन रेखा को संशोधित करें ( चित्र 6 बी और चित्रा 6 सी में हरी विभाजन रेखा की तुलना करें; चित्रा 6 सी संशोधित परिणाम दिखाता है)।

12. रेटिना लैमिनेशन मोटाई

  1. माप मार्कर बटन पर क्लिक करें (चित्रा 6 डी -9)।
  2. ओसीटी छवि (चित्रा 6 डी -10) पर परत की सीमा प्रदर्शित करने के लिए विश्लेषण की जाने वाली परत की विभाजन रेखा का चयन करें (उदाहरण के लिए, बाहरी परमाणु परत में, सूची में 4वें और 5वें विभाजन रेखा का चयन करें)।
  3. लेयर के साथ कनेक्ट करें (चित्रा 6 डी -11) का चयन करें और चलते-फिरते जुड़े रहें (चित्रा 6 डी -12)।
  4. परिणाम प्रदर्शित करने के लिए क्षेत्र का चयन करें (चयनित स्तंभ रंगीन है, चित्र 6D-13).
  5. माप रेखा को प्रकट करने के लिए ओसीटी छवि पर विश्लेषण की जाने वाली स्थिति पर क्लिक करें (क्षैतिज अक्ष के लंबवत और परिणामी क्षेत्र के रंग के अनुरूप) (चित्रा 6 डी -14)।
  6. अगले माप के लिए अगले कॉलम पर क्लिक करें और पिछले डेटा को प्रकट करें (चित्रा 6 ई -15)।
  7. μm (ऊतक) पंक्ति (चित्रा 6E, लाल आयत) में लंबाई में वर्ट मान (मापी गई स्थिति की मोटाई) पढ़ें।
  8. पुन: परीक्षण करने के लिए मार्कर हटाएं (चित्रा 6E-16) और नया मार्कर (चित्रा 6E-17) क्लिक करें ताकि परिणाम मूल डेटा को कवर करेंगे (यदि पुन: माप आवश्यक है)।
  9. स्क्रीनशॉट सहेजने के लिए कुंजीपटल पर प्रिंट SCR दबाएँ, या सीधे सहेजने के लिए परीक्षा सहेजें क्लिक करें (चित्रा 5H).
  10. सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए डेटा को स्प्रेडशीट या सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर में इनपुट करें।

13. पूर्ण रेटिना मोटाई का मापन

  1. लाइन 1 (आईएलएम, आंतरिक सीमित झिल्ली, चित्रा 7 बी) और लाइन 7 (ओएस-आरपीई, ओएस: बाहरी फोटोरिसेप्टर सेगमेंट) का चयन करें; आरपीई: ऊपरी दाएं कोने में सूची में रेटिना वर्णक उपकला परत, चित्रा 7 सी)।
    नोट: पूर्ण रेटिना मोटाई का मतलब रेटिना न्यूरेपिथेलियम परत की मोटाई है, जो ओसीटी पर आईएलएम और ओएस-आरपीई के बीच रेटिना है)।
  2. ऑप्टिक पैपिला के दोनों किनारों पर रेटिना मोटाई को एक विशिष्ट अंतराल पर मापें।
    1. उदाहरण के लिए: ऑप्टिक पैपिला के किनारे पर रेटिना संरचना की उपस्थिति से, क्षैतिज शासक (चित्रा 7 जी, एच) के 200 μm स्पेसिंग के साथ 4 मानों को मापें।
  3. स्प्रेडशीट में सभी मापा मान रिकॉर्ड करें।
  4. दोनों समूहों में प्रत्येक संबंधित स्थिति के मापा मूल्यों की तुलना करने के लिए कई टी-परीक्षण (प्रति पंक्ति एक) का उपयोग करें।

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Representative Results

ओसीटी के उच्च-रिज़ॉल्यूशन स्कैन के लिए धन्यवाद, माउस रेटिना की परतों को देखा जा सकता है, और असामान्य प्रतिबिंब और उनके सटीक स्थानों की पहचान की जा सकती है। इस अध्ययन में वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों और सी 57बीएल / 6 जे चूहों की रेटिना ओसीटी छवियों की तुलना की गई थी। सभी C57BL/6J चूहों की OCT छवियों ने विभिन्न परावर्तकता के साथ विभिन्न रेटिना परतों को दिखाया, और सीमांकन स्पष्ट था (चित्रा 8 डी)। इसके विपरीत, सभी वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों ने ओसीटी छवियों (चित्रा 8 बी) पर असामान्य, हाइपररिफ्लेक्टिव घाव दिखाए।

Vldlr नॉकआउट चूहों में अपूर्ण विट्रीस डिटेचमेंट (PVD)

ओसीटी परिणामों ने वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों (चित्रा 8 बी, लाल तीर) की रेटिना सतहों पर कुछ मध्य प्रतिबिंबित बैंड दिखाए। इन मध्य चिंतनशील बैंड रेटिना पोत (चित्रा 8 बी, हरे तीर) का पालन करते हैं, जो सीएसएलओ छवि (चित्रा 8 ए, हरे तीर) के अनुरूप है। ये विशेषताएं अपूर्ण विट्रीस डिटेचमेंट की ओसीटी विशेषताओं के अनुरूप हैं।

वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों में सबरेटिनल नियोवैस्कुलराइजेशन

परिणामों से पता चला है कि वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों में सबरेटिनल नियोवैस्कुलराइजेशन के दो विकास मोड थे।

बाहरी परमाणु परत की भागीदारी के साथ

ओसीटी छवि पर नीचे-नीचे त्रिकोणीय आकार के साथ एक हाइपररिफ्लेक्टिव घाव, सबरेटिनल स्पेस पर दिखाई दिया और बाहरी परमाणु परत में फैल गया। घाव बाहरी प्लेक्सीफॉर्म परत (चित्रा 8 बी, सफेद तीर) के माध्यम से नहीं टूटा।

इस प्रकार के सबरेटिनल नियोवैस्कुलराइजेशन की ओसीटी उपस्थिति चित्रा 9 ए में दिखाए गए पैथोलॉजिकल निष्कर्षों के अनुरूप थी। पैथोलॉजिकल सेक्शन से पता चला कि नियोवैस्कुलराइजेशन (चित्रा 9 ए, मोटी हरी तीर) आरपीई, फोटोरिसेप्टर आंतरिक / बाहरी खंडों (आईएस / ओएस), और बाहरी सीमित झिल्ली (ईएलएम) के माध्यम से टूट गई। इसने बाहरी परमाणु परत (ओएनएल) पर आक्रमण किया, लेकिन बाहरी प्लेक्सीफॉर्म परत (ओपीएल) के माध्यम से नहीं टूटा।

बाहरी परमाणु परत की भागीदारी के बिना

ओसीटी छवि पर हाइपररिफ्लेक्टिव घाव का एक बैंड दिखाई दिया, जो सबरेटिनल स्पेस (चित्रा 8 बी, पीला तीर) पर स्थित था। CSLO छवि ने संबंधित स्थान दिखाया (चित्रा 8 ए, पीला तीर)। इस स्थान के आसपास रेटिना के अतिरिक्त स्कैन (चित्रा 8 ए, पीला तीर) ने एक ही निष्कर्ष दिखाया।

पैथोलॉजिकल सेक्शन में घाव (चित्रा 10 ए, मोटी नीली तीर) के अनुरूप, यह सबरेटिनल नियोवैस्कुलराइजेशन ईएलएम (चित्रा 10 ए, पतले पीले तीर) के माध्यम से नहीं टूटा, लेकिन आंशिक रूप से फोटोरिसेप्टर आईएस / ओएस को शामिल किया।

रेटिना मोटाई के परिणाम

सभी चूहों की दाईं आंख की रेटिना मोटाई ओसीटी के स्वचालित स्तरीकरण और मोटाई माप समारोह का उपयोग करके प्राप्त की गई थी। वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों की रेटिना मोटाई (200.94 ± 14.64 μm) C57BL/ 6J चूहों (217.46 ± 10.21 μm, P < 0.001, t-test, 7 दाईं आंखें / समूह) की तुलना में काफी कम थी। दो समूहों के बीच पीछे के ध्रुवीय की चार दिशाओं (अस्थायी, नाक, बेहतर और अवर) में रेटिना मोटाई की तुलना चित्र 11 में दिखाई गई है।

Figure 1
चित्र 1: प्रयोगात्मक सामग्री और जानवरों की तैयारी। (ए) उपकरण: 1. छोटे-पशु रेटिना इमेजिंग के लिए सीएसएलओ / ओसीटी डिवाइस, 2. कंप्यूटर और मॉनिटर, 3. छोटे, निरंतर तापमान वाले पशु मंच, 4. थर्मोस्टेट, 5. प्रीसेट लेंस, 6. प्रीसेट लेंस की स्थापना। (बी) दवाएं और छोटी वस्तुएं: I. पोविडोन-आयोडीन, II. माइक्रोसिरिंज, III. एनेस्थेटिक मिश्रण समाधान, IV. टाइमर, वी. माइड्रियाटिक आई ड्रॉप्स, VI. फोर्सप्स, VII. मेडिकल सोडियम हाइलूरोनेट जेल, VIII। मेडिकल कॉटन स्वैब, IX. एंटीबायोटिक आंख मलहम, एक्स 100 डी संपर्क लेंस (दो)। (सी) डिजिटल संतुलन पर वजन माप। संक्षेप: सीएसएलओ = कॉन्फोकल स्कैनिंग लेजर ऑप्थाल्मोस्कोप; ओसीटी = ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्र 2: चूहों की ओसीटी परीक्षा से पहले तैयारी। (ए) माइड्रिआसिस आई ड्रॉप एप्लिकेशन, (बी) कॉर्निया पर सोडियम हाइलूरोनेट जेल कोटिंग, (सी, डी) 100 डी संपर्क लेंस का प्लेसमेंट, जिसमें अवतल सतह कॉर्निया से संपर्क करती है। संक्षिप्त नाम: ओसीटी = ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 3
चित्र 3: OCT परीक्षा प्रक्रियाएं. (A) माउस स्थिति प्लेसमेंट, I. प्रीसेट लेंस, II. संपर्क लेंस, III. छोटे, निरंतर तापमान वाले पशु मंच। (ख) सीएसएलओ/ओसीटी मशीन का प्रचालन, IV. ऑपरेटिंग लीवर, वी टिल्ट लीवर, वीआई। cSLO डिवाइस। संक्षेप: सीएसएलओ = कॉन्फोकल स्कैनिंग लेजर ऑप्थाल्मोस्कोप; ओसीटी = ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 4
चित्रा 4: ओसीटी इमेजिंग प्रक्रिया। ए। आईआर लेजर के लासे आर स्टार्ट करें, सी आंख चयन (सी -1-ओडी; सी-2-ओएस, डी. आईआर लेजर की रेंज, ई. डायप्टर, एफ. सीएसएलओ इमेज का ओवरले, जी. ओसीटी स्कैनिंग स्टार्ट/स्टॉप लेजर बटन एच. ओसीटी इमेज का संदर्भ, I. रेंज मिन: 0-20, जे. रेंज मैक्स: 50-60, के. इमेज की सिग्नल तीव्रता, एल स्कैनिंग दिशा (जैसे, ऊर्ध्वाधर स्कैन), एम. ग्रीन रेफरेंस लाइन को स्थानांतरित करके चुनी गई स्थिति (उदा। ऑप्टिक पैपिला के माध्यम से ऊर्ध्वाधर स्कैन, एन. ओसीटी छवि का वास्तविक समय प्रदर्शन, ओसीटी छवि का ओवरले, पी शॉट: छवि अधिग्रहण, क्यू एसएलओ-ओसीटी छवियां जो अधिग्रहित की गई हैं, आर सेव परीक्षा: परीक्षा परिणाम को सहेजना। स्केल सलाखों = 200 μm. संक्षेप: सीएसएलओ = कॉन्फोकल स्कैनिंग लेजर ऑप्थाल्मोस्कोप; ओसीटी = ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी; आईआर = इन्फ्रारेड; ओडी = दाईं आंख; ओएस = बाईं आंख। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 5
चित्र 5: OCT सिस्टम पर स्वचालित रेटिना डिलेमिनेशन इंटरफ़ेस. A. लोड परीक्षा बटन, B. मीडिया कंटेनर, सभी OCT छवियों को दिखाते हुए, C. OCT छवि को विश्लेषण के लिए चुना जा रहा है, D. स्वचालित रेटिना लेयरिंग के लिए लेयर डिटेक्शन बटन, E. विभाजित रेखा सूची, F. रेटिना पर स्वचालित डिलेमिनेशन, G. स्तरित सुधार के लिए परत बटन संपादित करें , H. परीक्षा बचाओ परिणाम सहेजने के लिए बटन. स्केल सलाखों = 200 μm. संक्षिप्त नाम: ओसीटी = ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 6
चित्रा 6: स्तरित सुधार (ए-सी) और मोटाई माप (डी-ई) (ए) स्तरित संपादन सक्रियण इंटरफ़ेस: 1. परत संपादित करें बटन, 2. विभाजित रेखा सूची (उदाहरण के लिए, सभी लाइनों का चयन करना), 3. सक्रिय विभाजन रेखाएं, 4. रिक्ति समायोजन, 5. सीमा सीमा समायोजन. (बी) एक विभाजन रेखा का सक्रियण (उदाहरण के लिए, ए में रेखा 3), 6। लाइन 3, आंतरिक प्लेक्सीफॉर्म परत और आंतरिक परमाणु परत के बीच की रेखा, 7. लेयरिंग त्रुटि का एक उदाहरण। (सी) लेयरिंग त्रुटि संशोधन, 8. संशोधन के लिए लाल वृत्त। (डी) रेटिना लैमेलर मोटाई माप का एक उदाहरण, 9. मार्कर बटन मापें , 10. बाहरी परमाणु परत की विभाजित रेखाएं, 11. परत से जुड़ें (माप विभाजन रेखाओं के अनुसार परत से जुड़ जाएगा), 12. मूव पर जुड़े रहें (माप स्थिति वह है जहां मैन्युअल क्लिक रहता है), 13. परिणाम प्रदर्शन का स्थान, 14. माप रेखा (क्षैतिज अक्ष के लंबवत)। (ई) माप परिणाम अधिग्रहण, 15. माप परिणाम (लाल आयत: वर्ट मान मोटाई परिणाम है), 16. माप रिकॉर्ड विलोपन के लिए मार्कर बटन हटाएँ , 17. पुन: माप के लिए नया मार्केआर बटन (नया परिणाम मूल रिकॉर्ड को अधिलेखित करेगा)। स्केल पट्टियाँ = 200 μm. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.

Figure 7
चित्र 7: पूर्ण रेटिना मोटाई का मापन। A. माप मार्कर बटन, B. लाइन 1 (ILM) और C. लाइन 7 (OS-RPE) पूर्ण मोटाई रेटिना की सीमाओं को दिखाने के लिए चयन, D. परत चयन से जुड़े रहें, E. मूव चयन पर जुड़े रहें, F. शासक पट्टी (ऊर्ध्वाधर और क्षैतिज शासक सलाखों, लंबाई में 200 μm दोनों), G. रेटिना पर माप रेखाएं (क्षैतिज शासक लंबाई के 200 μm के साथ 4 रेखाएं) माप परिणाम (परिणाम विभिन्न रंगों द्वारा विभेदित होते हैं और रेटिना पर माप लाइनों के रंग के अनुरूप होते हैं), I. μm (ऊतक) पंक्ति में लंबाई में वर्ट मान से डेटा निष्कर्षण। स्केल सलाखों = 200 μm. संक्षेप: आईएलएम = आंतरिक सीमित झिल्ली; ओएस-आरपीई = रेटिना वर्णक उपकला का फोटोरिसेप्टर बाहरी खंड। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 8
चित्रा 8: वीएलडीएलआर नॉकआउट और सी 57बीएल / 6 जे चूहों की सीएसएलओ और ओसीटी छवियों की तुलना। सी 57बीएल /6 जे चूहों की सीएसएलओ (सी) और ओसीटी (डी) छवियों की तुलना में वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों की सीएसएलओ (ए) और ओसीटी (बी) छवियां। वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों (बी) में ओसीटी की विशेषताएं: 1) रेटिना वाहिका (बी, हरे तीर) के आसंजन के साथ रेटिना की आंतरिक सतह पर मध्य प्रतिबिंबित रेखा (बी, लाल तीर)। 2) हाइपररिफ्लेक्टिव घाव, सबरेटिनल स्पेस पर स्थित, (बी, सफेद तीर) या बाहरी परमाणु परत की भागीदारी के बिना (बी, पीला तीर)। सीएसएलओ छवि (ए) पर तीर ओसीटी छवि (बी) पर संबंधित रंग तीरों के स्थानों का प्रतिनिधित्व करते हैं। स्केल सलाखों = 200 μm. संक्षेप: सीएसएलओ = कॉन्फोकल स्कैनिंग लेजर ऑप्थाल्मोस्कोप; ओसीटी = ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी; वीएलडीएलआर = बहुत कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन रिसेप्टर। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 9
चित्रा 9: मोड 1: वीएलडीएलआर नॉकआउट और सी 57बीएल / 6 जे माउस में हेमेटॉक्सिलिन-ईओसिन धुंधला होने के साथ रेटिना पैराफिन अनुभाग। (ए) बाहरी परमाणु परत (मोटे हरे तीर) पर हमला करने वाले सबरेटिनल नियोवैस्कुलराइजेशन का एक उदाहरण, जो वीएलडीएलआर नॉकआउट माउस के रेटिना के मध्य भाग में स्थित है। (बी) सामान्य नियंत्रण, सी 57बीएल / 6 जे माउस के रेटिना का मध्य भाग। स्केल बार = 50 μm. संक्षिप्तीकरण: Vldlr = बहुत कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन रिसेप्टर; आईएलएम = आंतरिक सीमित झिल्ली; एनएफएल = रेटिना तंत्रिका फाइबर परत; जीसीएल = रेटिना गैंग्लियन सेल परत; आईपीएल = आंतरिक प्लेक्सीफॉर्म परत; आईएनएल = आंतरिक परमाणु परत; ओपीएल = बाहरी प्लेक्सीफॉर्म परत; ओएनएल = बाहरी परमाणु परत; ईएलएम = बाहरी सीमित झिल्ली; आईएस = फोटोरिसेप्टर आंतरिक खंड; ओएस = फोटोरिसेप्टर बाहरी खंड; आरपीई = रेटिना वर्णक उपकला परत। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 10
चित्र 10: मोड 2: वीएलडीएलआर नॉकआउट और सी 57बीएल /6 जे माउस में हेमेटॉक्सिलिन-ईओसिन धुंधला होने के साथ रेटिना पैराफिन अनुभाग। (ए) बाहरी परमाणु परत (मोटी नीली तीर) की भागीदारी के बिना और बरकरार ईएलएम (पतले पीले तीर) के साथ सबरेटिनल नियोवैस्कुलराइजेशन का एक उदाहरण, जो वीएलडीएलआर नॉकआउट माउस में मध्य परिधि रेटिना में स्थित है। (बी) सामान्य नियंत्रण, सी 57बीएल / 6 जे माउस की मध्य परिधि रेटिना। स्केल सलाखों = 50 μm. संक्षेप: वीएलडीआर = बहुत कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन रिसेप्टर; आईएलएम = आंतरिक सीमित झिल्ली; एनएफएल = रेटिना तंत्रिका फाइबर परत; जीसीएल = रेटिना गैंग्लियन सेल परत; आईपीएल = आंतरिक प्लेक्सीफॉर्म परत; आईएनएल = आंतरिक परमाणु परत; ओपीएल = बाहरी प्लेक्सीफॉर्म परत; ओएनएल = बाहरी परमाणु परत; ईएलएम = बाहरी सीमित झिल्ली; आईएस = फोटोरिसेप्टर आंतरिक खंड; ओएस = बाहरी फोटोरिसेप्टर सेगमेंट; आरपीई = रेटिना वर्णक उपकला परत। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 11
चित्र 11: सी57बीएल/6जे चूहों और वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों (सभी डेटा दाईं आंख से) के बीच रेटिना मोटाई की तुलना। (बी) ओसीटी ऊर्ध्वाधर स्कैनिंग द्वारा ऑप्टिक तंत्रिका पैपिला के माध्यम से रेटिना मोटाई (μm)। क्षैतिज निर्देशांक 200 μm के अंतराल के साथ मापने की स्थिति का प्रतिनिधित्व करता है।*: P < 0.05, **: P < 0.01, ***: P < 0.001. संक्षेप: टी = लौकिक; पी = ऑप्टिक पैपिला; एन = नाक; एस = सुपीरियर; I = हीन; ओसीटी = ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी; वीएलडीआर = बहुत कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन रिसेप्टर; ओडी = दाईं आंख। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

इस अध्ययन में, वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों में रेटिना परिवर्तनों का मूल्यांकन करने के लिए एक छोटे-पशु रेटिना इमेजिंग सिस्टम का उपयोग करके ओसीटी इमेजिंग लागू की गई थी, जो अपूर्ण पश्चवर्ती विट्रीस डिटेचमेंट, सबरेटिनल नियोवैस्कुलराइजेशन और रेटिना मोटाई पतलेपन का प्रदर्शन करते हैं। ओसीटी विवो में रेटिना की स्थिति की जांच करने के लिए एक नॉनइनवेसिव इमेजिंग विधि है। अधिकांश ओसीटी उपकरण मानव आंखों की जांच के लिए डिज़ाइन किए गए हैं। हार्डवेयर उपकरण का आकार, फोकल लंबाई की सेटिंग, सिस्टम मापदंडों की सेटिंग, और परीक्षार्थी की स्थिति की आवश्यकताएं सभी मानव आंखों पर आधारित हैं। मानव-विशिष्ट ओसीटी उपकरणों के साथ छोटे जानवरों की जांच करने के लिए लेंस और सिस्टम सेटिंग्स के संशोधन की आवश्यकता होती है। यह पेपर छोटे-पशु ओसीटी परीक्षा प्रक्रियाओं को प्रस्तुत करता है।

नेत्रगोलकियों के विभिन्न आकारों के साथ विभिन्न छोटे जानवरों की छवि स्कैनिंग के दौरान फोकल लंबाई अलग-अलग होती है। फोकल लंबाई में यह अंतर महत्वपूर्ण है और स्पष्ट और सटीक फंडस छवियों को प्राप्त करने के लिए हल किया जाना चाहिए। एक प्रभावी तरीका उद्देश्य लेंस को विभिन्न वक्रता के लेंस के साथ बदल रहा है। अपनी छोटी आंखों के कारण, माउस को ओसीटी उपकरण के डबल-गोलाकार 60 डी प्रीसेट लेंस के अलावा कॉर्निया के सामने 100 डी के संपर्क लेंस की आवश्यकता होती है।

ओसीटी केवल लाइन स्कैन प्रदान कर सकता है जो केवल रेटिना के एक सीमित क्षेत्र को कवर करता है। इसलिए, विभिन्न समूहों में ओसीटी निष्कर्षों की गुणात्मक और मात्रात्मक तुलना के लिए ओसीटी स्कैन के प्रोटोकॉल को मानकीकृत करना आवश्यक है। तीन क्षैतिज स्कैन और तीन ऊर्ध्वाधर स्कैन यहां किए गए थे। यह मशीन ओसीटी स्कैन के स्थान की निगरानी के लिए एक वास्तविक समय सीएसएलओ छवि प्रदान करती है ताकि स्कैन की स्थिति को सटीक और आसानी से समायोजित किया जा सके। असामान्य प्रतिबिंब पाए जाने पर अतिरिक्त स्कैन जोड़े जा सकते हैं।

छवि अधिग्रहण के मापदंडों को सावधानीपूर्वक समायोजित करने की आवश्यकता है। यहां, यह अनुशंसा की जाती है कि रेंज मिन 0-20 और रेंज मैक्स 50-60 हो (चित्रा 4 आई, जे)। जब मापदंडों को ओवरएडजस्ट किया जाता है, तो छवि के सिग्नल कंट्रास्ट को बढ़ाया जाएगा, और कम प्रतिबिंब के साथ रेटिना का प्रतिबिंबित संकेत कम या काला हो जाता है, और कुछ रूपात्मक जानकारी खो जाएगी।

छवि की गुणवत्ता में गिरावट से बचने के लिए निम्नलिखित कुछ सुझाव दिए गए हैं: 1. मोतियाबिंद से बचने के लिए संज्ञाहरण के तुरंत बाद आंखों के सामने एक संपर्क लेंस रखें; 2. सुनिश्चित करें कि प्रीसेट लेंस और संपर्क लेंस साफ हैं; 3. कॉर्निया और संपर्क लेंस के बीच प्रवेश करने वाले बालों से बचें; 4. सुनिश्चित करें कि ओसीटी मापदंडों में डॉपलर, कंट्रास्ट और चमक उचित रूप से सेट की गई है।

ओसीटी छवियों का उपयोग गुणात्मक रूप से घावों का पता लगाने और मात्रात्मक रूप से रेटिना मोटाई जैसे मैट्रिक्स को मापने के लिए किया जा सकता है। यहां, कई स्थानों पर रेटिना मोटाई को मापने के लिए एक विधि प्रस्तावित है, और औसत की गणना औसत रेटिना मोटाई के रूप में की जा सकती है। यह ओसीटी प्रणाली के स्वचालित स्तरीकरण समारोह के माध्यम से प्राप्त किया जाता है। इसलिए, रेटिना लैमिनेशन की मोटाई को भी मापा जा सकता है। माप विधि सरल और सटीक है (चित्रा 6 और चित्रा 7)। परिणामों से पता चला कि सी 57बीएल / 6 जे चूहों की तुलना में वीएलडीएलआर नॉकआउट चूहों में रेटिना मोटाई कम थी, जो साहित्य25 के अनुरूप थी। दो समूहों के बीच रेटिना मोटाई में अंतर को कई स्थानों पर माप से उत्पन्न ग्राफ द्वारा स्पष्ट रूप से दिखाया जा सकता है (चित्रा 11)। स्टारगार्ड रोग माउस मॉडल26 में इसी तरह के रेटिनोपैथी विश्लेषण और रेटिना मोटाई माप विधियों की भी सूचना दी गई है। हालांकि, यह ध्यान देने योग्य है कि रेटिना के विट्रियस इंटरफ़ेस पर हाइपररिफ्लेक्टिव बैंड रेटिना ऊतक से संबंधित नहीं हैं और स्तरीकरण के दौरान हटा दिए जाने चाहिए। इसके अलावा, यदि सबरेटिनल घाव रेटिना पर आक्रमण करते हैं, तो मोटाई माप में आक्रमण किए गए हिस्से को शामिल किया जाना चाहिए।

इस छोटे-पशु रेटिना इमेजिंग सिस्टम की कुछ सीमाएं हैं। उदाहरण के लिए, हालांकि यह 35 ° के भीतर पीछे के ध्रुव की स्पष्ट छवियां प्रदान कर सकता है, परिधीय रेटिना का छवि अधिग्रहण अभी भी चुनौतीपूर्ण है। इसके अलावा, सीएसएलओ एक ग्रे-स्केल छवि बनाता है, जो फंडस घावों (रंजकता, रक्तस्राव, उत्सर्जन) का पता लगाने के लिए एक रंग फंडस छवि के रूप में अच्छा नहीं है। इसलिए, और सुधार की आवश्यकता है। सारांश में, सीएसएलओ मशीन द्वारा ओसीटी परीक्षा माउस मॉडल में रेटिनोपैथी की गैर-आक्रामक पहचान और माप की सुविधा प्रदान कर सकती है।

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Disclosures

लेखक ों ने हितों के संभावित टकराव की घोषणा नहीं की है।

Acknowledgments

परियोजना स्रोत: गुआंग्डोंग प्रांत के प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (2018ए0303130306)। लेखक फंडिंग और सामग्री के लिए ओप्थाल्मिक रिसर्च लेबोरेटरी, शांतोउ विश्वविद्यालय के संयुक्त शांतोउ इंटरनेशनल आई सेंटर और हांगकांग के चीनी विश्वविद्यालय को धन्यवाद देना चाहते हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
100-Dpt contact lens Volk Optical,Inc, Mentor, OH Accessory belonging to the RETImap
Double aspheric 60-Dpt glass lens Volk Optical,Inc, Mentor, OH Accessory belonging to the RETImap
Electric heating blanket POPOCOLA CW-DRT-01 50 x 35 cm
Injection syringe (1 mL) Kaile 0.45 x 16RWLB
Levofloxacin Hydrochloride Eye Gel EBE PHARMACEUTICAL Co.LTD 5 g: 0.015 g
Medical sodium hyaluronate gel Alcon 16H01E
Microliter syringes Shanghai high pigeon industry and trade co., LTD Q31/0113000236C001-2017 50 µL
Povidone iodine solution Guangdong medihealth pharmaceutical Co.,LTD 100 mL
RETImap ROLAND CONSULT 19-99_50-2.1_1.2E cSLO/ERG/VEP/FA/OCT/GFP
Small animal ear studs OSMO POCKET OT110 INS1005-1S
Tropicamide Phenylephrine Eye Drops Santen Pharmaceutical Co.,LTD 5 mg/mL
Xylazin Sigma X1251-5G 5 g
Zoletil 50 Virbac.S.A 7FRPA Tiletamine 125 mg + Zolazepam 125 mg

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References

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