Summary
요통의 예방 및 관리를 위한 새로운 치료적 개입을 개발하기 위해 동물 모델은 번역 관점에서 이러한 치료법의 메커니즘과 효과를 조사해야 합니다. 현재 프로토콜은 쥐의 기계적 민감도를 평가하기 위한 표준화된 방법인 BMS 테스트를 설명합니다.
Abstract
요통은 전 세계적으로 장애의 주요 원인이며 극적인 개인적, 경제적, 사회적 결과를 초래합니다. 새로운 치료법을 개발하기 위해서는 번역 관점에서 새로운 치료법의 메커니즘과 효과를 조사하기 위한 동물 모델이 필요합니다. 허리 통증의 여러 설치류 모델이 현재 조사에 사용됩니다. 그러나 놀랍게도 요통 모델에서 기계적 민감도를 평가하기 위한 표준화된 행동 테스트는 검증되지 않았습니다. 이는 요통이 추정되는 동물이 통각 수용 자극에 국소 과민증을 나타내는지 확인하고 요통을 완화하기 위해 고안된 중재 중 민감도를 모니터링하는 데 중요합니다. 이 연구의 목적은 쥐 등의 기계적 민감도를 평가하기 위한 간단하고 접근 가능한 테스트를 마련하는 것입니다. 이 방법을 위해 특별히 테스트 케이지를 제작했습니다. 세로 x 너비 x 높이: 50 x 20 x 7cm, 상단에 스테인레스 스틸 메쉬가 있습니다. 이 테스트 케이지를 사용하면 등에 기계적 자극을 가할 수 있습니다. 테스트를 수행하기 위해 관심 영역에서 동물의 등을 면도하고 필요에 따라 다른 날에 테스트를 반복하도록 테스트 영역을 표시합니다. 기계적 역치는 앞에서 설명한 상하 방법을 사용하여 척수주위 근육에 적용된 Von Frey 필라멘트로 결정됩니다. 긍정적인 반응에는 (1) 근육 경련, (2) 아치형(등 신전), (3) 목 회전, (4) 등을 긁거나 핥기, (5) 탈출이 포함됩니다. 이 행동 테스트(BMS(Back Mechanical Sensitivity) 테스트)는 요통의 예방 및 관리를 위한 치료적 개입 개발을 위한 요통의 설치류 모델을 사용한 기계론적 연구에 유용합니다.
Introduction
요통(low back pain, LBP)은 전 세계적으로 장애의 주요 원인이며, 이는 개인적, 경제적, 사회적으로 극적인 결과를 초래한다 1,2,3,4. 매년 인구의 약 37%가 요통의 영향을 받습니다5. 요통은 보통 몇 주 이내에 해결되지만 개인의 24%-33%에서 재발하고 사례의 5%-10%에서 만성화된다2. 요통의 메커니즘과 영향 및 다양한 치료적 중재의 효과를 이해하기 위해 요통의 여러 동물 모델을 사용하여 요통의 임상 상태 또는 요통의 일부 구성 요소를 모방했습니다6. 이들 마우스 및 래트 모델은 다음 범주 중 하나 이상으로 분류될 수 있다: (1) 추간판 요통 7,8,, (2) 신경근성 요통 8,9,10,11, (3) 후관절 골관절염 12, 및 (4) 근육-유도성 요통 13,14 . 인간이 아닌 종에서는 통증을 직접 측정할 수 없기 때문에, 이러한 모델에서 통증과 유사한 행동을 정량화하기 위한 수많은 실험이 개발되었다8. 이 테스트는 유해한 자극 (기계적 힘 15,16,17, 열 자극18,19,20,21,22,23,24,25)에 의해 유발되거나 자발적으로 생성 된 행동 26,27,28,29를 평가합니다.
기계적 자극을 사용하는 방법에는 Von Frey 테스트 15,16 및 Randall-Selitto 테스트17이 포함됩니다. 열 자극을 사용하는 방법에는 테일 플릭 테스트(18), 핫 플레이트 테스트(19), 하그리브스 테스트(20) 및 열 프로브 테스트(21)가 있습니다. 저온 자극을 사용하는 방법에는 냉판 시험(cold plate test)22, 아세톤 증발 시험(acetone evaporation test) 23 및 저온 발바닥 분석(cold plantar assay)24가 포함된다. 자발적인 행동을 위한 방법으로는 찡그린 얼굴 척도(grimace scales)26, 굴을 파는 방법(burrowing)27, 체중부하 및 보행 분석(weight-bearing and a-pathit analysis)28, 자동화된 행동 분석(automated behavioral analysis)29 등이 있다. 이러한 수많은 테스트에도 불구하고 그 중 어느 것도 허리 통증 모델을 위해 특별히 설계되지 않았습니다.
이 연구의 목적은 쥐 등의 기계적 민감도를 평가하기 위한 간단하고 접근 가능한 테스트를 마련하는 것입니다. 이 기술은 주로 뒷발15,16의 발바닥 표면에 적용된 Von Frey 테스트를 기반으로합니다. Von Frey 테스트의 기본 원리는 관심 영역에 일련의 모노필라멘트를 사용하여 미리 결정된 일정한 힘을 전달하는 것입니다. 쥐가 통각 행동을 보이는 경우 반응은 양성으로 간주됩니다. 그런 다음 반응을 유발한 필라멘트를 기반으로 기계적 임계값을 계산할 수 있습니다. 본 연구에서는 쥐 등의 기계적 민감도를 결정하기 위해 Von Frey 테스트에서 채택한 간단하고 접근 가능한 방법이 제공됩니다.
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Protocol
실험 프로토콜은 Université du Québec à Trois-Rivières의 동물 관리위원회의 승인을 받았으며 캐나다 동물 관리위원회의 지침과 국제 통증 연구 협회 (IASP)의 연구 및 윤리 문제위원회의 지침을 준수했습니다. 본 연구에서는 6마리의 수컷 Wistar 쥐(체중: 320-450g, 연령: 18-22주)를 사용했습니다. 동물들은 상업적 공급원으로부터 입수하였다 ( 재료의 표 참조). 이 쥐의 데이터는 이전 연구30의 더 큰 샘플에서 나온 것입니다.
1. 실험 준비
- 음식과 물을 임의 로 이용할 수 있고 14시간에서 10시간의 명암 주기가 있는 표준 동물 시설의 온도 조절실에 동물을 수용합니다. 실험 당일 모든 동물의 건강 상태가 양호한지 확인하십시오.
- 아래 단계에 따라 만성 요통 동물 모델을 생성합니다.
- 만성 요통을 유발하기 위해, 이전 보고에 따라 등 근육에 완전 프로인트 보조제(CFA)를 근육내 주사한다 14,30,31.
- 이소플루란(유도 4%, 유지 관리 2%-2.5%)을 사용하여 동물을 마취합니다.
- 27G 바늘을 사용하여 프로토콜 요구 사항에 따라 즉시 사용할 수 있는 CFA의 유중수 에멀젼 150μL( 재료 표 참조)를 척추주위 근육에 일방적으로 또는 양측으로 주입합니다.
- 주사 완료 후 최소 3분 동안 주사 바늘을 제자리에 두십시오. 대조군의 동물에 대해서는 동일한 과정을 사용하되 30, CFA 대신 멸균 생리식염수 용액(150 μL, 0.9%)을 주입한다.
- 테스트 케이지를 제작합니다.
- 각 동물에 대해 하나의 챔버로 구성된 두 동물에 대한 테스트 케이지를 만듭니다.
참고: 본 연구의 경우 각 챔버의 치수는 길이 x 너비 x 높이: 50 x 20 x 7cm입니다( 재료 표 참조). - 33cm 길이의 플렉시 유리 다리 4개에 인접한 두 개의 챔버를 장착합니다. 챔버 벽에는 투명한 플렉시 유리를 사용하되 검은색 플렉시 유리를 사용하여 챔버를 분리하여 동물이 서로 못하도록 합니다.
- 와이어 간 거리가 8mm인 1mm 와이어로 만든 스테인리스 스틸 메쉬를 사용하여 테스트 케이지의 바닥과 천장을 만듭니다(그림 1).
- 각 동물에 대해 하나의 챔버로 구성된 두 동물에 대한 테스트 케이지를 만듭니다.
2. 뒤 기계적인 감도 (BMS) 시험
- 첫 번째 테스트 전에 연속 5-7일 동안 하루 30분 동안 테스트 케이지에 동물을 익숙하게 하십시오. 필요에 따라 테스트를 반복합니다.
- 2% 이소플루란31 을 사용하여 동물을 마취시킨다( 재료 표 참조).
- 이소플루란 마취 하에 엎드린 자세에서 동물의 모발 트리머를 사용하여 관심 부위(T6에서 L6 척추 수준까지)의 뒷머리를 면도합니다( 재료 표 참조). 반복 측정의 경우 행동 평가 없이 하루에 3일마다 뒷머리를 면도하여 자극이 항상 피부에 직접 적용되도록 합니다. 영구 마커로 피부에 블랙 마크를 그려 다른 날에 테스트를 반복 할 때 필라멘트가 항상 같은 부위에 적용되도록합니다.
- 시험 당일, 동물이 진정될 때까지 시험 전 15-30분 동안 동물을 시험 케이지에 넣습니다.
- 테스트하는 동안 Von Frey 필라멘트(0.07, 0.16, 0.4, 0.6, 1, 2, 4, 6, 10, 15 및 26g)를 뒤쪽에 수직으로 도포하고 항상 2g 필라멘트로 시작하여 상하 방법15 를 사용합니다( 재료 표 참조). 동물 뒤에서 필라멘트로 동물의 뒤쪽에 천천히 접근하십시오.
- 동물이 깨어 있고 네 발에 서서 움직이지 않을 때만 필라멘트를 바르십시오. 15-30초마다 가시돌기(그림 2)에서 10mm 떨어진 관심 영역에 양측으로 2초 동안 필라멘트를 적용합니다.
참고: 동물이 필라멘트를 바르는 동안 또는 그 직후에 다음 행동 중 하나 이상을 나타내면 반응이 양성으로 간주됩니다: (1) 근육 경련, (2) 아치형(등 신전), (3) 등을 보기 위해 목을 돌리기, (4) 등을 긁거나 핥기, (5) 탈출.
- 동물이 깨어 있고 네 발에 서서 움직이지 않을 때만 필라멘트를 바르십시오. 15-30초마다 가시돌기(그림 2)에서 10mm 떨어진 관심 영역에 양측으로 2초 동안 필라멘트를 적용합니다.
- 앞서도 15에서 설명한 바와 같이, 필라멘트의 적용으로 반응이 관찰되지 않으면, 직렬에서 더 높은 힘으로 다음 필라멘트를 인가한다. 응답이 관찰되면 계열에서 더 낮은 힘의 다음 필라멘트를 사용하십시오. 첫 번째 행동 변화 후 4개의 판독값을 얻을 때까지 이 절차를 계속합니다(일련의 "응답 없음" 후 응답 또는 일련의 "응답" 후 응답 없음).
- 데이터 수집이 완료되면 다음 공식을 사용하여 Chaplan et al.15에 설명된 대로 기계적 임계값의 50%를 나타내는 값을 계산합니다.
50% 임계값(g) = 10(Xf+kδ)/10,000
알림: 이 공식에서 "Xf"는 마지막으로 사용된 폰 프레이 필라멘트의 핸들 마크입니다. "k"는 동물의 반응 패턴15에 기초한 표 형식 값이고, "δ"는 폰 프레이 필라멘트 사이의 핸들 마크 증분의 평균이다. 실험 설계 및 실험 요구에 따라 척추의 한쪽만 평가하여 하나의 임계값을 보고하거나 두 측면을 평가하고 임계값을 별도로 또는 평균으로 보고할 수 있습니다. 계산 템플릿32에 대해서는 보충 표 1을 참조하십시오.
3. 동물 회복
- 근육 주사가 완료된 후 마취를 중단하고 회복을 위해 동물을 표준 하우징 케이지에 단독으로 두십시오.
- 회복 기간 동안 동물의 행동을 검사하고 방치하지 마십시오.
- 동물이 마취에서 회복되고 5 분 이내에 정상적으로 움직이는지 확인하십시오. 그런 다음 동물을 다른 동물과 함께 일반적인 하우징 케이지로 되돌립니다.
참고: 실험이 끝나면 동물은 깊은 이소플루란 마취(5%) 하에 10% 포르말린 용액으로 심장을 통해 관류됩니다. 그런 다음 주입된 부위의 등 근육을 추출하여 조직학 및 염증 변화 확인을 수행합니다.
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Representative Results
이 방법은 CFA와 대조군 쥐 사이의 기계적 민감도를 비교하기 위해 전체 데이터와 통계가 제시된 이전 연구에서 사용되었습니다30. 이전 연구에 포함된 6마리의 래트로부터의 대표적인 개별 데이터(좌측 및 우측 역치의 평균)가 도 3 및 표 1에 제시되어 있다. 기준선에서 기계적 민감도는 그룹 간에 유사했습니다. 요추 근육에 CFA를 근육 주사하면 CFA 주사 후 7일에서 28일까지 기계적 민감도(역치 감소)가 현저히 증가했습니다. 대조적으로, 대조군(CTL) 쥐는 이러한 변화를 나타내지 않았습니다. 그림 3에서 볼 수 있듯이 이러한 유형의 행동 평가에서 예상한 대로 동물 내 및 동물 간의 변동성이 관찰되었습니다. 그러나 과민성 CFA 쥐는 변동성이 감소한 것으로 나타났습니다. 이전 연구 30에 기초하여, 16마리의 동물 (8 CFA 및 8 CTL)은 5 시점 동안 시간 경과에 따른 집단 간의 유의한 효과를 검출하기에 충분하였다 (η 2p =0.38).
이 연구에서 CFA를 주입한 근육의 만성 염증 변화의 존재는 조직학적 검사를 통해 확인되었습니다(그림 4)30. 또한 등뿐만 아니라 표준 Von Frey 테스트를 통해 뒷발에서 기계적 과민증이 관찰되었습니다(그림 5)30. 동일한 요통 모델을 사용한 이전 연구에서 우리는 자발적인 통증 행동과 신경 염증 및 신경 생리학적 변화가 증가한 것으로 나타났습니다14,31. 실제로, 포르말린 테스트 동안 대조군 쥐에 비해 CFA에서 핥는 행동이 증가했으며, 좌골 신경의 유해한 자극에 대한 단일 단위 반응이 오른쪽 편도체에서 변경되었습니다31. 또한, NF-kB 단백질 발현은 대조군 래트에 비해 척수에서 CFA가 증가하였다14. 함께, 이러한 연구의 결과는 이 만성 요통 모델을 검증하고, 본 연구는 이 쥐 모델의 등에서 기계적 과민증의 존재를 확인하는 방법을 시각적으로 보여줍니다.
그림 1: BMS(Back Mechanical Sensitivity ) 테스트 케이지. (A) 테스트 케이지의 개략도. (B) 각 동물에 대해 하나씩 두 개의 챔버로 구성된 맞춤형 테스트 케이지. (C) 챔버 중 하나에 쥐가 있는 테스트 케이지의 측면도. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2: 후면 기계적 감도 평가. 실험자는 뒤에서 동물에게 접근하여 Von Frey 필라멘트를 가시 돌기에서 측면으로 10mm 떨어진 관심 영역에 적용합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3: 역기계적 감도의 개별 예. 기준선 및 CFA 또는 식염수의 근육내 주사 후 각각 7, 14, 21 및 28일에 CFA 및 대조군(CTL) 쥐의 등 기계적 민감도. 개별 데이터는 회색(CTL) 및 검은색(CFA)으로 채워진 원으로 표시됩니다. 가로 막대는 평균을 나타냅니다. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 4: 만성 근육 염증의 조직학적 확인. CFA 쥐 및 대조군의 등 근육의 개별 예 30. (A) 식염수 근육 주사 후 14일 동안 대조군 쥐의 건강한 등 근육. (비씨) CFA 처리된 두 쥐의 등 근육은 근육 내 CFA 주사 후 14일 후에 명확한 백혈구 침윤과 함께 만성 염증을 보였습니다. 헤마톡실린-에오신 착색은 근육 절편을 염색하기 위해 사용되었다. 스케일 바 = 250 μm. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 5: CFA 쥐의 기계적 과민증30. 등 근육에 CFA(n = 8) 또는 식염수(n = 8) 주사(L5-L6 수준) 후 4주 동안 기계적 민감도의 시간 경과. (ᄀ-비) 왼쪽과 오른쪽 뒷발 아래의 기계적 감도. 기계적 역치는 시간이 지남에 따라 대조군 쥐(P < 0.01)에 비해 CFA에서 유의하게 감소했습니다. 이 효과는 왼쪽 뒷발과 오른쪽 뒷발 간에 유의한 차이가 없었습니다(P = 0.7). 두 뒷발을 합친 경우, Tukey HSD 테스트는 주사 후 1주에서 4주까지 대조군 쥐에 비해 CFA의 기계적 역치가 더 낮은 것으로 나타났습니다(모든 P < 0.03). 별도의 뒷발에 대한 시간 코스는 설명 목적으로만 표시됩니다(상호 작용은 중요하지 않음, 자세한 내용은 결과 참조). (C-D) 뒷면의 기계적 감도. 기계적 역치는 시간이 지남에 따라 대조군 쥐(P < 0.001)에 비해 CFA에서 유의하게 감소했습니다. 이 효과는 좌측 평가부위와 우측 평가부위 간에 유의한 차이가 없었다(P=0.3). 왼쪽 및 오른쪽 평가 부위를 결합한 경우, Tukey HSD 테스트는 주사 후 1주에서 4주까지 대조군 쥐에 비해 CFA에서 더 낮은 기계적 역치를 나타냈습니다(모든 P의 < 0.05). 별도의 뒷발에 대한 시간 코스는 설명 목적으로만 표시됩니다(상호 작용은 중요하지 않음, 자세한 내용은 결과 참조). 패널 (D)에서, 하나의 CFA 래트의 개별 데이터는 예시 목적으로 기준선 (9.6 g)에 도시되지 않는다. 음영 영역은 기준 평가를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
| 쥐 | 그룹 | 기준선 | 7일차 | 14일차 | 21일 | 28일 |
| 1 | 2.34 | 0.29 | 0.12 | 0.29 | 0.29 | |
| 2 | 증권 시세 표시기 | 1 | 0.48 | 0.05 | 0.48 | 0.08 |
| 3 | 1.26 | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.19 | |
| SD 평균 ± | 1.53 ± 0.58 | 0.27 ± 0.18 | 0.07 ± 0.03 | 0.27 ± 0.18 | 0.19 ± 0.09 | |
| 4 | 1.59 | 2.61 | 0.64 | 3.26 | 2.45 | |
| 5 | 증권 시세 표시기 | 1.15 | 0.63 | 3.41 | 2.3 | 1.29 |
| 6 | 0.43 | 1.26 | 0.77 | 0.32 | 2.09 | |
| SD 평균 ± | 1.06 ± 0.48 | 1.50 ± 0.83 | 1.61 ± 1.28 | 1.96 ± 1.22 | 1.94 ± 0.48 |
표 1: CFA 및 대조군 쥐의 기계적 민감도의 개별 예.
보충 표 1: 기계적 임계값 결정. 이 템플릿 테이블은 기계적 임계값을 계산하는 데 사용됩니다. 응답 패턴(X/O)이 기록되고 계산에 필요한 값은 테스트에 사용된 마지막 필라멘트의 핸들 마킹 및 응답 패턴과 관련된 k-값(이 경우 XX 다음에 OOXXO가 오는)에 해당하는 Xf 및 k에 대해서만 입력됩니다. 이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
중요 단계
BMS 테스트는 변화가 발생할 것으로 예상되는 시점 (통증 모델) 또는 약리학 적 또는 비 약리학 적 개입 후에 한 시점 또는 며칠 또는 몇 주에 걸쳐 반복적으로 쥐의 등에서 기계적 민감도를 평가하는 간단한 방법입니다. 이 방법의 중요한 문제에는 테스트 케이지가 포함되며, 그 치수는 쥐가 편안하지만 너무 많이 움직이지 않도록 보장해야 합니다. 동물의 등은 재현 가능한 기계적 자극을 위해 메쉬 천장을 통해 접근할 수 있어야 합니다. 역치 평가의 변동성을 제한하려면 기계적 자극이 피부에 직접 적용되도록 조사 중인 등 부위를 면도해야 합니다. 또한 동일한 부위에 기계적 자극을 가하기 위해 피부를 표시해야 합니다. 마지막으로, 실험자는 동물에게 보이지 않도록 동물 뒤에서 피부에 필라멘트에 접근해야 합니다.
뒷발15,16에서 기계적 감도를 평가하는 데 사용되는 Von Frey 테스트와 비교하여 BMS 테스트에서 양성 반응을 생성하는 데 필요한 기계적 힘은 더 낮습니다. 테스트에 사용되는 필라멘트는 신중하게 선택해야 합니다. 다음 필라멘트를 사용하면 대부분의 실험 요구 사항(0.07, 0.16, 0.4, 0.6, 1, 2, 4, 6, 10, 15 및 26g)을 충족하고 천장이나 바닥 효과에 직면하는 것을 방지해야 합니다. 이 경우 2g 필라멘트가 첫 번째 적용에 사용됩니다. 계산이 적절하게 조정되는 한 실험 요구 사항에 맞게 조정할 수 있습니다.
수정 및 문제 해결
파일럿 실험 중에 테스트에 이상적인 영역이 결정되었습니다. 쥐의 몸 모양 때문에 흉요추 부위는 테스트 케이지에서 가장 접근하기 쉬운 부위입니다. 척추의 다른 부위에서 검사를 수행 할 이유가 없다면, 이것은 기계적 자극을 적용하기위한 선택 영역입니다. 요추 부위도 쉽게 접근할 수 있습니다. 테스트할 영역을 결정할 때 필라멘트가 표면에 수직으로 적용되어야 하고 미리 결정된 보정된 힘을 전달하기 위해 적절하게 구부러져야 한다는 점을 염두에 두어야 합니다.
제한
실험자는 테스트와 관련된 동작을 관찰하도록 교육을 받아야 합니다. 5가지 긍정적인 반응에는 근육 경련, 아치형, 등을 보기 위한 목 회전, 등을 핥거나 긁기, 탈출30이 포함됩니다. 이러한 반응의 대부분은 쉽게 관찰할 수 있지만 근육 경련은 때때로 더 낮은 힘의 자극에 대해 미묘합니다. 또한 쥐는 케이지에서 자발적으로 움직일 수 있으므로 특히 필라멘트를 적용 할 때 발생하는 탈출과 혼동해서는 안됩니다. 두 가지 행동을 혼동하지 않으려면 실험자는 동물이 적어도 몇 초 동안 진정 될 때까지 기다려야합니다.
의의 및 잠재적 응용 분야
허리 통증의 여러 설치류 모델이 현재 조사에 사용된다8. 그러나 놀랍게도 요통 모델에서 기계적 민감도를 평가하기 위한 표준화된 행동 테스트는 검증되지 않았습니다. 이는 요통이 추정되는 동물이 통각 수용 자극에 국소 과민증을 나타내는지 확인하고 요통을 완화하기 위해 고안된 중재 중 민감도를 모니터링하는 데 중요합니다. 여기에 제시된 BMS 테스트는 이러한 목적을 위해 간단하고 접근 가능한 솔루션을 제공합니다. 쥐30마리를 위해 개발되었지만 향후 다른 실험실 동물에도 적용될 수 있습니다.
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Disclosures
저자는 이해 상충으로 이어질 수 있는 경쟁적인 이해 관계나 관계를 선언하지 않습니다.
Acknowledgments
이 연구는 Fondation Chiropratique du Québec과 캐나다 자연 과학 및 공학 연구 위원회(MP: 보조금 #06659)의 보조금으로 지원되었습니다. 홍콩의 기여는 Université du Québec à Trois-Rivières (PAIR 프로그램)의 지원을 받았습니다. BP의 기여는 Fonds de recherche du Québec en Santé (FRQS)와 Fondation Chiropratique du Québec의 지원을 받았습니다. TP의 기여는 캐나다 자연 과학 및 공학 연구 위원회(Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada)의 지원을 받았습니다. NE와 EK의 기여는 Fondation Chiropratique du Québec의 지원을 받았습니다. MP의 기여는 FRQS에 의해 지원되었습니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Aerrane (isoflurane, USP) - Veterinary Use Only | Baxter | NDC 10019-773-60 | Inhalation Anaesthetic ; DIN 02225875, for inducing anasthesia |
| Complete Freund Adjuvant (CFA) | Fisher Scientific | #77140 | Water-in-oil emulsion of Complete Freund Adjuvant (CFA) with killed cells of Mycobacterium butyricum. |
| Male Wistar Rats | Charles River Laboratories | body weight: 320–450 g; age: 18-22 weeks. | |
| Penlon Sigma Delta Vaporizer | Penlon | 990-VI5K-SVEEK | Penlon Sigma Delta Vaporizer used for anasthesia |
| Sharpie Permanent Marker | Sharpie | BC23636 | Permanent Marker, Fine Point, Black |
| Test cage | Custom-made | Width: 20 cm; Length: 50 cm; Height from the bottom to the top: 40 cm; Height from the bottom mesh to the top of the cage: 7 cm; Wall thickness: 5 mm; Mesh: 1 mm wire with an 8 mm inter-wire distance | |
| Von Frey Filaments | Aesthesio, Precise Tactile Sensory Evaluator | 514000-20C | Filaments from 0.07 g to 26 g |
| Wahl Professional Animal, ARCO Cordless Pet Clipper, Trimmer Grooming | Wahl | Kit #8786-1201 | Animal hair trimmer, for shaving purposes, zero blade |
References
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