Les tests de laboratoire peuvent tirer parti de la valeur pronostique de l’imagerie multimodale longitudinale de la dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA) basée sur la tomographie longitudinale par cohérence optique (OCT). Les yeux des donneurs humains avec et sans DMLA sont imagés à l’aide de l’OCT, de la couleur, de l’ophtalmoscopie laser à balayage dans le proche infrarouge et de l’autofluorescence à deux longueurs d’onde d’excitation avant la section des tissus.
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Article de méthode
Ex Vivo Imagerie multimodale basée sur l’OCT des yeux de donneurs humains pour la recherche sur la dégénérescence maculaire liée à l’âge
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Dans cet article
Résumé
Résumé
Une séquence de progression pour la dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA) apprise à partir de l’imagerie clinique multimodale (MMI) basée sur la tomographie par cohérence optique (OCT) pourrait ajouter une valeur pronostique aux résultats de laboratoire. Dans ce travail, l’OCT ex vivo et le MMI ont été appliqués aux yeux de donneurs humains avant la section du tissu rétinien. Les yeux ont été récupérés sur des donneurs blancs non diabétiques âgés de ≥80 ans, avec un temps de décès à la préservation (DtoP) de ≤6 h. Les globes ont été récupérés sur place, marqués avec une tréphine de 18 mm pour faciliter l’élimination de la cornée, et immergés dans du paraformaldéhyde tamponné à 4%. Les images du fond d’œil couleur ont été acquises après le retrait du segment antérieur avec une lunette de dissection et un appareil photo reflex utilisant un éclairage trans, épi- et flash à trois grossissements. Les globes ont été placés dans un tampon dans une chambre conçue sur mesure avec une lentille de 60 dioptries. Ils ont été imagés avec le domaine spectral OCT (cube de macula de 30°, espacement de 30 μm, moyenne = 25), la réflectance dans le proche infrarouge, l’autofluorescence de 488 nm et l’autofluorescence de 787 nm. Les yeux de la DMLA ont montré un changement dans l’épithélium pigmentaire rétinien (EPR), avec des dépôts drusen ou drusenoïdes sous-rétiniens (SDD), avec ou sans néovascularisation, et sans preuve d’autres causes. Entre juin 2016 et septembre 2017, 94 yeux droits et 90 yeux gauches ont été récupérés (DtoP : 3,9 ± 1,0 h). Sur les 184 yeux, 40,2 % avaient une DMLA, y compris une DMLA intermédiaire précoce (22,8 %), atrophique (7,6 %) et néovasculaire (9,8 %), et 39,7 % avaient des macules banales. Drusen, SDD, foyers hyperréfléchissants, atrophie et cicatrices fibrovasculaires ont été identifiés à l’aide de l’OCT. Les artefacts comprenaient une opacification des tissus, des décollements (bacillaires, rétiniens, EPR, choroïdiens), un changement kystique fovéal, un EPR ondulant et des dommages mécaniques. Pour guider la cryosection, des volumes OCT ont été utilisés pour trouver les repères de la fovéa et de la tête du nerf optique et des pathologies spécifiques. Les volumes ex vivo ont été enregistrés avec les volumes in vivo en sélectionnant la fonction de référence pour le suivi oculaire. La visibilité ex vivo de la pathologie observée in vivo dépend de la qualité de conservation. En 16 mois, 75 yeux de donneurs DtoP rapides à tous les stades de la DMLA ont été récupérés et stadifiés à l’aide de méthodes cliniques MMI.
Introduction
Quinze années de prise en charge de la dégénérescence maculaire néovasculaire liée à l’âge (DMLA) avec un traitement anti-VEGF sous la direction de la tomographie par cohérence optique (OCT) ont offert de nouvelles perspectives sur la séquence de progression et la microarchitecture de cette cause répandue de perte de vision. Une reconnaissance clé est que la DMLA est une maladie tridimensionnelle impliquant la rétine neurosensorielle, l’épithélium pigmentaire rétinien (EPR) et la choroïde. Grâce à l’imagerie OCT des patients de l’essai et des yeux des patients traités en clinique, les caractéristiques de la pathologie au-delà de celles observées par la photographie co....
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Protocole
Le comité d’examen institutionnel de l’Université de l’Alabama à Birmingham a approuvé les études de laboratoire, qui ont adhéré aux bonnes pratiques de laboratoire et au niveau de biosécurité 2/2+. Toutes les banques ophtalmologiques américaines sont conformes à la loi de 2006 sur les cadeaux anatomiques uniformes et à la Food and Drug Administration des États-Unis. La plupart des banques ophtalmologiques américaines, y compris Advancing Sight Network, sont conformes aux normes médicales de l’Eye Bank Association of America.
Le tableau des matériaux énumère les fournitures et l’équipement. Le matériel supplémentair....
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Résultats
Le tableau 1 montre qu’en 2016-2017, 184 yeux de 94 donneurs blancs non diabétiques âgés de >80 ans ont été récupérés. Le temps moyen de décès jusqu’à la préservation était de 3,9 h (intervalle : 2,0-6,4 h). Sur les 184 yeux examinés, 75 (40,2%) avaient une certaine DMLA. Les catégories suivantes ont été identifiées : banale (39,7 %), douteuse (11,4 %), DMLA intermédiaire précoce (22,8 %), atrophique (7,6 %), néovasculaire (9,8 %), autre (8,7 %) et inconnue/non enregistrée/non graduable (<1 %).
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Discussion
En utilisant une approche de dépistage basée sur la population pendant une période de 16 mois dans l’ère pré-COVID, il a été possible d’obtenir 75 yeux de donneurs atteints de DMLA. Tous ont été récupérés avec un DtoP court et mis en scène à l’aide de MMI ancrés dans les OCT. Le critère d’âge (>80 ans) se situe en dehors de la tranche d’âge typique pour les récupérations tissulaires destinées aux cornées transplantables. Malgré l’âge avancé, nos critères ont abouti à des yeux à tous les stades de la DMLA. De nombreux phé.......
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Déclarations de divulgation
C.A.C. reçoit un soutien de recherche de Heidelberg Engineering et consulte Apellis, Astellas, Boehringer Ingelheim, Character Bioscience et Osanni. T.A. reçoit un soutien à la recherche de Novartis et consulte Roche, Novartis, Bayer, Nidek et Apellis. K.B.F. est consultant pour Genentech, Zeiss, Heidelberg Engineering, Allergan, Bayer et Novartis.
Remerciements
Nous remercions Heidelberg Engineering pour l’instrumentation et la conception du porte-œil original, Richard F. Spaide MD pour l’introduction à l’imagerie multimodale basée sur OCT, Christopher Girkin MD pour avoir facilité l’accès aux dispositifs d’imagerie clinique et David Fisher pour la figure 1. La récupération des yeux de donneurs humains pour la recherche a été soutenue par des subventions des National Institutes of Health (NIH) R01EY06019 (C.A.C.), P30 EY003039 (Pittler), R01EY015520 (Smith), R01EY027948 (C.A.C., T.A.) R01EY030192 (Li), R01EY031209 (Stambolian) et U54EY032442 (Spraggins), IZKF Würzburg (N-304, T.A.), l’EyeSig....
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Béchers, 250 mL | Fisher | # 02-540K | |
| Bouteilles, 1 L, Pyrex ; | Fisher | # 10-462-719 | Stockage pour conservateur |
| Bec Bunsen ou source de chaleur | Eisco | # 17-12-818 | Pour faire fondre la cire |
| Appareil photo, numérique | Nikon D7200 | D7200 | |
| Ordinateur et stockage | Apple | iMac Pro ; Disque dur externe de 14 To | Stockage d’images |
| Conteneur, isolé | Fisher | # 02-591-45 | Pour la glace humide |
| Contenants, 2 par donneur, 40 mL | Fisher | Sameco Bio-Tite ; 40 mL # 13-711-86 | Pour conservateur |
| Creuset, quartz 30 mL | Fisher | # 08-072D | Globe de maintien pour la photographie |
| Cylindre, gradué, 250 mL | Fisher | # 08-549G | |
| Produits de nettoyage désinfectants ; ; | https://www.cardinalhealth.com/en/product-solutions/medical/infection-control/antiseptics.html | ||
| Support d’œil avec lentille et support de montage | contact J. Messinger | jeffreymessinger@uabmc.edu | modification personnalisée de la conception originale de Heidelberg Engineering |
| Masques de protection faciale | Fisher | # 19-910-667 | |
| Pinces, Harmon Fix | Roboz ; | # RS-8247 | |
| Pince, Micro Adson | Roboz ; | # RS-5232 | |
| Pinces, Tissu | Roboz | # RS-5172 | |
| Boîte de Pétri en verre, Kimax | Fisher | # 23064 | |
| Gants Diamond Grip | Fisher | # MF-300 | |
| Blouses GenPro | Fisher | # 19-166-116 | |
| Logiciel de retouche d’image | Adobe | Photoshop 2021, Creative Suite | |
| KimWipes | Fisher | # 06-666 | |
| Lampes, 3 cols de cygne | Schott Imaging | # A20800 | |
| Microscope, stéréo | Nikon | SMZ 1000 | pour |
| dissection Microscope, stéréo | Olympus ; | SZX9 | photographie couleur |
| du fond d’œil Paraformaldéhyde, 20 % ; | EMS | # 15713-S | pour conservateur ; diluer pour stockage |
| pH-mètre | Fisher | # 01-913-806 | |
| Tampon phosphate, Sorenson' s, 0,2 M pH 7,2 ; | EMS | # 11600-10 | |
| Flash annulaire | B & H Photo Vidéo | Sigma EM-140 DG ; | |
| Perle de rubis, 1 mm de diamètre | Meller Optics | # MRB10MD | |
| Lunettes de sécurité 3M | Fisher | # 19-070-940 | |
| Ophtalmoscope laser à balayage | Heidelberg Engineering | HRA2 | |
| Ciseaux, ressort incurvé | Roboz | # RS-5681 | |
| Conteneur pour objets tranchants | Fisher | # 1482763 | |
| Cordon d’obturateur, télécommande | Nikon | MC-DC2 | |
| Spectral Domain OCT appareil | Heidelberg Engineering | Spectralis HRA& OCT | https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf |
| Roulement à billes en acier inoxydable, 25,4 mm de diamètre | McMaster-Carr | # 9529K31 | |
| Colorant de marquage tissulaire, noir | Cancer Diagnostics Inc | # 0727-1 | |
| Lames de trancheuse de tissus | Thomas Scientific | # 6767C18 | |
| Trephine, Moniteur | Stratis Healthcare | # 6718L | |
| de diamètre (HDMI) et cordon pour appareil photo numérique | B& H Photo Vidéo | BH # COHD18G6PROB | pour la visualisation en direct et l’affichage à distance de la caméra |
| Caractéristiques Cire, dentaire rose | EMS ; | # 72670 | |
| Applicateurs en bois | Puritan | # 807-12 |
Références
- Spaide, R. F., et al. Consensus nomenclature for reporting neovascular age-related macular degeneration data: Consensus on neovascular age-related macular degeneration nomenclature study group. Ophthalmology. 127 (5), 616-636 (2020).
- Spaide, R. F., Ooto, S., Curcio, C. A.
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Réimpressions et autorisations
