Лабораторные анализы могут использовать прогностическую ценность мультимодальной визуализации возрастной макулярной дегенерации (ВМД) на основе продольной оптической когерентной томографии (ОКТ). Донорские глаза человека с ВМД и без нее визуализируются с помощью ОКТ, цветной, сканирующей лазерной офтальмоскопии ближнего инфракрасного диапазона с отражением и аутофлуоресценции на двух длинах волн возбуждения перед разделением ткани.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Ex Vivo Мультимодальная визуализация донорских глаз человека на основе ОКТ для исследования возрастной макулярной дегенерации
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Последовательность прогрессирования возрастной макулярной дегенерации (ВМД), полученная с помощью мультимодальной (MMI) клинической визуализации на основе оптической когерентной томографии (ОКТ), может повысить прогностическую ценность лабораторных результатов. В этой работе ex vivo OCT и MMI применялись к человеческим донорским глазам перед рассечением ткани сетчатки. Глаза были извлечены у белых доноров в возрасте ≥80 лет, не страдающих диабетом, со временем от смерти до сохранения (DtoP) ≤6 ч. Глобусы были извлечены на месте, забиты 18-миллиметровым трепаном для облегчения удаления роговицы и погружены в буферный 4% параформальдегид. Цветные изображения глазного дна были получены после удаления переднего сегмента с помощью препарирующего прицела и зеркальной камеры с использованием транс-, эпи- и вспышки освещения при трех увеличениях. Глобусы были помещены в буфер в специально разработанной камере с линзой 60 диоптрий. Они были изображены с помощью ОКТ в спектральной области (куб макулы 30°, расстояние 30 мкм, среднее значение = 25), коэффициент отражения в ближнем инфракрасном диапазоне, автофлуоресценцию 488 нм и автофлуоресценцию 787 нм. Глаза ВМД показали изменение пигментного эпителия сетчатки (RPE) с друзами или субретинальными друзеноидными отложениями (SDD), с неоваскуляризацией или без нее и без признаков других причин. В период с июня 2016 г. по сентябрь 2017 г. было восстановлено 94 правых глаза и 90 левых глаз (DtoP: 3,9 ± 1,0 ч). Из 184 глаз у 40,2% была ВМД, в том числе ранняя промежуточная (22,8%), атрофическая (7,6%) и неоваскулярная (9,8%) ВМД, а у 39,7% были ничем не примечательные макулы. Друзены, SDD, гиперрефлективные очаги, атрофия и фиброваскулярные рубцы были идентифицированы с помощью ОКТ. Артефакты включали помутнение тканей, отслоения (бациллярные, ретинальные, RPE, хориоидальные), фовеальные кистозные изменения, волнообразный RPE и механические повреждения. Для проведения криосекций использовались объемы ОКТ для определения ориентиров головки ямки и зрительного нерва и специфических патологий. Объемы ex vivo регистрировались вместе с объемами in vivo путем выбора эталонной функции для отслеживания взгляда. Видимость патологии , наблюдаемой in vivo , зависит от качества сохранности. В течение 16 месяцев было восстановлено и поставлено 75 быстрых донорских глаз DtoP на всех стадиях ВМД с использованием клинических методов MMI.
Введение
Пятнадцать лет лечения неоваскулярной возрастной макулярной дегенерации (ВМД) с помощью анти-VEGF-терапии под руководством оптической когерентной томографии (ОКТ) позволили по-новому взглянуть на последовательность прогрессирования и микроархитектуру этой распространенной причины потери зрения. Ключевым признанием является то, что ВМД является трехмерным заболеванием, поражающим нейросенсорную сетчатку, пигментный эпителий сетчатки (RPE) и сосудистую оболочку. В результате ОКТ-визуализации исследуемых пациентов и других глаз пациентов клиники, прошедших лечение, в настоящее время признаны особенности патологии, выходящие за рамки тех, которые видны при цветной фотогра....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Институциональный наблюдательный совет Университета Алабамы в Бирмингеме одобрил лабораторные исследования, которые соответствовали надлежащей лабораторной практике и уровню биобезопасности 2/2+. Все офтальмологические банки США соответствуют Единому закону об анатомических подарках 2006 года и Управлению по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Большинство офтальмологических банков США, в том числе Advancing Sight Network, соответствуют медицинским стандартам Американской ассоциации глазных банков.
В таблице материалов перечислены расходные материалы и оборудование. В дополнительном....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Из таблицы 1 видно, что в течение 2016-2017 гг. было восстановлено 184 глаза от 94 белых доноров, не страдающих диабетом, > возрасте 80 лет. Среднее время от смерти до сохранения составило 3,9 ч (диапазон: 2,0-6,4 ч). Из 184 обследованных глаз у 75 (40,2%) была определенная ВМД. Были выявлены следующие категории: непримечательные (39,7%), сомнительные (11,4%), ранние-средние ВМД (22,8%), атрофические (7,6%), неоваскулярные (9,8%), другие (8,7%) и неизвестные/не регистрируемые/не поддающиеся градации (.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Используя популяционный подход к скринингу в течение 16-месячного периода в доковидную эпоху, удалось получить 75 донорских глаз с ВМД. Все они были восстановлены с помощью короткого DtoP и поставлены с использованием MMI с привязкой к OCT. Возрастной критерий (>80 лет) выходит за рамки типичного возрастного диапазона для восстановления тканей, предназначенных для трансплантируемой роговицы. Несмотря на преклонный возраст, наши критерии привели к появлению глаз на всех стадиях ВМД. Многие фенотипы RPE являются общими для.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
C.A.C. получает исследовательскую поддержку от Heidelberg Engineering и консультирует Apellis, Astellas, Boehringer Ingelheim, Character Bioscience и Osanni. Т.А. получает исследовательскую поддержку от Novartis и консультирует Roche, Novartis, Bayer, Nidek и Apellis. K.B.F. является консультантом Genentech, Zeiss, Heidelberg Engineering, Allergan, Bayer и Novartis.
Благодарности
Мы благодарим Heidelberg Engineering за приборы и дизайн оригинального держателя для глаз, Ричарда Ф. Спайда, доктора медицины, за введение в мультимодальную визуализацию на основе ОКТ, Кристофера Гиркина, доктора медицины, за облегчение доступа к устройствам клинической визуализации и Дэвида Фишера за рисунок 1. Восстановление человеческих донорских глаз для исследований было поддержано грантами Национальных институтов здравоохранения (NIH) R01EY06019 (C.A.C.), P30 EY003039 (Питтлер), R01EY015520 (Смит), R01EY027948 (C.A.C., T.A.) R01EY030192 (Li), R01EY031209 (Stambolian) и U54EY032442 (Spraggins), IZKF Würzburg (N-304, T.A.), Фонд ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Мензурки, 250 мл | Fisher | # 02-540K | |
| Бутылки, 1 л, Pyrex | Fisher | # 10-462-719 | Хранение для консерванта |
| Горелка Бунзена или источник тепла | Eisco | # 17-12-818 | Для плавления воска |
| Фотоаппарат, цифровой | Nikon D7200 | D7200 | |
| Компьютер и хранилище | Apple | iMac Pro; внешний жесткий диск 14 ТБ | Контейнер для хранения изображений |
| , изолированный | Fisher | # 02-591-45 | Для мокрого льда |
| Контейнеры, 2 на донора, 40 мл | Fisher | Sameco Bio-Tite 40 мл # 13-711-86 | Для консерванта |
| Тигель, кварцевый 30 мл | Fisher | # 08-072D | Держите глобус для фотографии |
| Цилиндр, градующий, 250 мл | Fisher | # 08-549G | |
| Дезинфицирующее чистящее средство | https://www.cardinalhealth.com/en/product-solutions/medical/infection-control/antiseptics.html | ||
| Держатель для глаз с линзой и монтажным кронштейном | контакта J. Messinger | jeffreymessinger@uabmc.edu | кастомной модификации Heidelberg Engineering оригинального дизайна |
| Маски для защиты лица | Fisher | # 19-910-667 | |
| Щипцы, Harmon Fix | Roboz | # RS-8247 | |
| Щипцы, Micro Adson | Roboz | # RS-5232 | |
| Щипцы, ткань | Roboz | # RS-5172 | |
| Стеклянная чашка Петри, Kimax | Fisher | # 23064 | |
| Перчатки Diamond Grip | Fisher | # MF-300 | |
| Платья GenPro | Fisher | # 19-166-116 | |
| Программное обеспечение для редактирования изображений | Adobe | Photoshop 2021, Creative Suite | |
| KimWipes | Fisher | # 06-666 | |
| Лампы, 3 гусиных шеи | Schott Imaging | # A20800 | |
| Микроскоп, стерео | Nikon | SMZ 1000 | для диссекционного |
| микроскопа, стерео | Olympus | SZX9 | цветной фундус фотография |
| параформальдегид, 20% | EMS | # 15713-S | для консерванта; разбавленный для хранения |
| рН-метр | Fisher | # 01-913-806 | |
| Фосфатный буфер, Соренсон s, 0,2 M pH 7,2 | EMS | # 11600-10 | |
| Кольцо вспышки | B & H Фото видео | Sigma EM-140 DG | |
| Рубиновая бусина, диаметр 1 мм | Meller Optics | # MRB10MD | |
| Защитные очки 3M | Fisher | # 19-070-940 | |
| Сканирующий лазерный офтальмоскоп | Heidelberg Engineering | HRA2 | |
| Ножницы, изогнутая пружина | Roboz | # RS-5681 | |
| Контейнер для острых предметов | Fisher | # 1482763 | |
| Шнур затвора, дистанционное устройство | Nikon | MC-DC2 | |
| Spectral Domain OCT | Heidelberg Engineering | Spectralis HRA& OCT | https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf |
| Шарикоподшипник из нержавеющей стали, диаметр 25,4 мм | McMaster-Carr | # 9529K31 | |
| Краситель для маркировки тканей, черный | Cancer Diagnostics Inc | # 0727-1 | |
| Лезвия для слайсера | тканей Thomas Scientific | # 6767C18 | |
| Трепан, | Телевизионный монитор Stratis Healthcare | # 6718L | |
| (HDMI) диаметром 18 мм и шнур для цифровой камеры | B& H Photo Video | BH # COHD18G6PROB | для просмотра в реальном времени и удаленного отображения с камеры |
| : воск, розовый стоматологический | EMS | # 72670 | |
| Деревянные аппликаторы | Puritan | # 807-12 |
Ссылки
- Spaide, R. F., et al. Consensus nomenclature for reporting neovascular age-related macular degeneration data: Consensus on neovascular age-related macular degeneration nomenclature study group. Ophthalmology. 127 (5), 616-636 (2020).
- Spaide, R. F., Ooto, S., Curcio, C. A.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
