Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

पूर्व विवो उम्र से संबंधित मैकुलर अपघटन में अनुसंधान के लिए मानव दाता आंखों की ओसीटी-आधारित मल्टीमॉडल इमेजिंग

Published: May 26, 2023 doi: 10.3791/65240
Automatic Translation
1, 2, 1, 1, 3,4, 5, *6, *1
1Department of Ophthalmology and Visual Sciences, University of Alabama at Birmingham Heersink School of Medicine, 2Department of Ophthalmology, University Hospital of Zurich, 3Vitreous Retina Macula Consultants of New York, 4Department of Ophthalmology, New York University Grossman School of Medicine, 5Advancing Sight Network, 6Department of Ophthalmology, University Hospital Bonn
* These authors contributed equally

Summary

प्रयोगशाला परख उम्र से संबंधित मैकुलर अपघटन (एएमडी) के अनुदैर्ध्य ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी (ओसीटी) आधारित मल्टीमॉडल इमेजिंग से रोगसूचक मूल्य का लाभ उठा सकती है। एएमडी के साथ और बिना मानव दाता आंखों को ऊतक सेक्शनिंग से पहले दो उत्तेजना तरंग दैर्ध्य पर ओसीटी, रंग, निकट-अवरक्त प्रतिबिंब स्कैनिंग लेजर ऑप्थाल्मोस्कोपी और ऑटोफ्लोरेसेंस का उपयोग करके चित्रित किया जाता है।

Abstract

ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी (ओसीटी) आधारित मल्टीमॉडल (एमएमआई) नैदानिक इमेजिंग से सीखे गए उम्र से संबंधित मैकुलर अपघटन (एएमडी) के लिए एक प्रगति अनुक्रम प्रयोगशाला निष्कर्षों में रोगसूचक मूल्य जोड़ सकता है। इस काम में, रेटिना ऊतक सेक्शनिंग से पहले मानव दाता आंखों पर पूर्व विवो ओसीटी और एमएमआई लागू किया गया था। आंखों को ≥80 वर्ष की आयु के गैर-मधुमेह सफेद दाताओं से बरामद किया गया था, जिसमें ≤6 घंटे का मृत्यु-से-संरक्षण समय (डीटीओपी) था। ग्लोब को साइट पर बरामद किया गया था, कॉर्निया हटाने की सुविधा के लिए 18 मिमी ट्रेफिन के साथ स्कोर किया गया था, और बफर 4% पैराफॉर्मलडिहाइड में डुबोया गया था। कलर फंडस छवियों को एक विच्छेदन दायरे के साथ पूर्वकाल खंड हटाने के बाद प्राप्त किया गया था और तीन आवर्धन पर ट्रांस-, एपि-और फ्लैश रोशनी का उपयोग करके एक एसएलआर कैमरा लगाया गया था। ग्लोब को 60 डायप्टर लेंस के साथ एक कस्टम-डिज़ाइन किए गए कक्ष के भीतर एक बफर में रखा गया था। उन्हें वर्णक्रमीय डोमेन ओसीटी (30 ° मैक्यूला क्यूब, 30 μm स्पेसिंग, औसत = 25), निकट-अवरक्त परावर्तन, 488 एनएम ऑटोफ्लोरेसेंस और 787 एनएम ऑटोफ्लोरेसेंस के साथ चित्रित किया गया था। एएमडी आंखों ने रेटिना वर्णक उपकला (आरपीई) में बदलाव दिखाया, ड्रूसन या सबरेटिनल ड्रुसेनोइड जमा (एसडीडी) के साथ, नियोवैस्कुलराइजेशन के साथ या बिना, और अन्य कारणों के सबूत के बिना। जून 2016 और सितंबर 2017 के बीच, 94 दाईं आंखें और 90 बाईं आंखें बरामद की गईं (डीटीओपी: 3.9 ± 1.0 घंटे)। 184 आंखों में से, 40.2% में एएमडी था, जिसमें प्रारंभिक मध्यवर्ती (22.8%), एट्रोफिक (7.6%), और नियोवास्कुलर (9.8%) एएमडी शामिल थे, और 39.7% में असाधारण मैक्यूलस था। ओसीटी का उपयोग करके ड्रूसन, एसडीडी, हाइपर-रिफ्लेक्टिव फॉसी, शोष और फाइब्रोवास्कुलर निशान की पहचान की गई थी। कलाकृतियों में ऊतक ओपेसिफिकेशन, डिटेचमेंट (बेसिलरी, रेटिना, आरपीई, कोरॉयडल), फोवियल सिस्टिक परिवर्तन, एक लहरदार आरपीई और यांत्रिक क्षति शामिल थी। क्रायो-सेक्शनिंग का मार्गदर्शन करने के लिए, ओसीटी वॉल्यूम का उपयोग फोवा और ऑप्टिक तंत्रिका सिर स्थलों और विशिष्ट विकृति को खोजने के लिए किया गया था। आंखों की ट्रैकिंग के लिए संदर्भ फ़ंक्शन का चयन करके पूर्व विवो वॉल्यूम को विवो वॉल्यूम के साथ पंजीकृत किया गया था। विवो में देखी गई पैथोलॉजी की पूर्व विवो दृश्यता संरक्षण गुणवत्ता पर निर्भर करती है। 16 महीनों के भीतर, एएमडी के सभी चरणों में 75 रैपिड डीटीओपी दाता आंखों को पुनर्प्राप्त किया गया और नैदानिक एमएमआई विधियों का उपयोग करके मंचन किया गया।

Introduction

ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी (ओसीटी) के मार्गदर्शन में एंटी-वीईजीएफ थेरेपी के साथ नियोवास्कुलर उम्र से संबंधित मैकुलर अपघटन (एएमडी) के प्रबंधन के पंद्रह वर्षों ने दृष्टि हानि के इस प्रचलित कारण की प्रगति अनुक्रम और माइक्रोआर्किटेक्चर में नई अंतर्दृष्टि प्रदान की है। एक महत्वपूर्ण मान्यता यह है कि एएमडी एक त्रि-आयामी बीमारी है जिसमें न्यूरोसेंसरी रेटिना, रेटिना वर्णक उपकला (आरपीई), और कोरॉइड शामिल हैं। परीक्षण रोगियों और इलाज किए गए क्लिनिक रोगियों की साथी आंखों की ओसीटी इमेजिंग के परिणामस्वरूप, दशकों से एक नैदानिक मानक, कलर फंडस फोटोग्राफी द्वारा देखे गए पैथोलॉजी की विशेषताओं को अब मान्यता प्राप्त है। इनमें इंट्रारेटिनल नियोवैस्कुलराइजेशन (टाइप 3 मैकुलर नियोवैस्कुलराइजेशन1, पूर्व में एंजियोमैटस प्रसार), सबरेटिनल ड्रुसेनॉइड डिपॉजिट (एसडीडी, जिसे रेटिकुलर स्यूडोड्रसेन भी कहा जाता है) 2, आरपीई भाग्य3,4 के कई मार्ग, और एट्रोफी 5,6 में तीव्रता से ग्लिओटिक मुलर कोशिकाएं शामिल हैं।

मैक्यूला (कोशिकाओं और जानवरों) की कमी वाले मॉडल सिस्टम इस जटिल बीमारी 7,8,9 के कुछ स्लाइस को फिर से बनाते हैं। एएमडी के बोझ को कम करने में आगे की सफलता मानव आंखों में प्राथमिक विकृति की खोज और अन्वेषण से आ सकती है, मैक्युला की अनूठी सेलुलर संरचना को समझती है, इसके बाद मॉडल सिस्टम में अनुवाद होता है। यह रिपोर्ट एक अकादमिक अनुसंधान प्रयोगशाला और एक नेत्र बैंक के बीच तीन दशक के सहयोग को चित्रित करती है। यहां वर्णित ऊतक लक्षण वर्णन विधियों के लक्ष्य दो-गुना हैं: 1) माइक्रोस्कोपी के साथ फंडस उपस्थिति और इमेजिंग सिग्नल स्रोतों के आधार का प्रदर्शन करके विकसित नैदानिक तकनीक को सूचित करना, और 2) लक्षित (इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री) और अलक्षित आणविक खोज तकनीकों (इमेजिंग मास स्पेक्ट्रोमेट्री, आईएमएस और स्थानिक ट्रांसस्क्रिप्टोमिक्स) के लिए एएमडी नमूनों को वर्गीकृत करना जो शंकु-केवल फोवे और रॉड-समृद्ध पैरा- और पेरिफोवा को संरक्षित करते हैं। इस तरह के अध्ययन नैदानिक ओसीटी में अनुवाद में तेजी ला सकते हैं, जिसके लिए आंख-ट्रैकिंग के माध्यम से एक प्रगति अनुक्रम और अनुदैर्ध्य अनुवर्ती संभव है। यह तकनीक, जिसे उपचार प्रभावों की निगरानी के लिए डिज़ाइन किया गया है, रेटिना वाहिकाओं का उपयोग करके एक क्लिनिक यात्रा से दूसरे तक स्कैन पंजीकृत करता है। विनाशकारी तकनीकों के साथ प्राप्त प्रयोगशाला परिणामों के लिए आंख-ट्रैक ओसीटी को जोड़ना आणविक निष्कर्षों के लिए पूर्वानुमान मूल्य का एक नया स्तर प्रदान कर सकता है।

1993 में, अनुसंधान प्रयोगशाला ने फिल्म10 पर पोस्टमॉर्टम फंडस की रंगीन तस्वीरें लीं। यह प्रयास फॉस और सहकर्मियों11,12,13 द्वारा मानव परिधीय रेटिना की शानदार फोटोमाइक्रोस्कोपी और हिस्टोलॉजी और सर्क्स एट अल.14,15 द्वारा व्यापक एएमडी क्लिनिकोपैथोलॉजिकल सहसंबंधों से प्रेरित था। 2009 में, स्पेक्ट्रल डोमेन ओसीटी पर लंगर डाले गए पूर्व विवो मल्टीमॉडल इमेजिंग (एमएमआई) को अपनाया गया था। यह संक्रमण अन्य 16,17 के समान प्रयासों से प्रेरित था और विशेष रूप से इस एहसास से कि सरक्स द्वारा वर्णित अल्ट्रास्ट्रक्चर का इतना हिस्सा क्लिनिक 18,19 में समय के साथ तीन आयामों में उपलब्ध था। लक्ष्य रेटिना, आरपीई और कोरॉइड में सेलुलर-स्तरीय फेनोटाइप ्स के अच्छी तरह से संचालित अध्ययन के लिए उचित समय सीमा में संलग्न मैक्यूलस के साथ आंखों का अधिग्रहण करना था। इरादा "प्रति आंख" आंकड़ों से "प्रति घाव प्रकार" तक आगे बढ़ना था, जो कार्डियोवैस्कुलर बीमारी20,21 से "कमजोर पट्टिका" अवधारणाओं से प्रभावित एक मानक था।

इस रिपोर्ट में प्रोटोकॉल कई धाराओं में लगभग 400 जोड़े दाता आंखों के साथ अनुभव को दर्शाता है। 2011-2014 में, एएमडी हिस्टोपैथोलॉजी की प्रोजेक्ट मैक्युला वेबसाइट बनाई गई थी, जिसमें 142 संग्रहीत नमूनों से परत मोटाई और एनोटेशन शामिल हैं। इन आंखों को 1996-2012 से उच्च-रिज़ॉल्यूशन एपॉक्सी-राल हिस्टोलॉजी और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए ग्लूटार्ल्डिहाइड-पैराफॉर्मलडिहाइड फिक्सेटिव में संरक्षित किया गया था। प्राप्त होने पर सभी फंडी को रंग में चित्रित किया गया था और हिस्टोलॉजी से ठीक पहले ओसीटी द्वारा फिर से चित्रित किया गया था। मूल रूप से ऑप्टिक तंत्रिका अध्ययन22 के लिए डिज़ाइन किए गए एक आंख धारक का उपयोग फोवे पर केंद्रित 8 मिमी व्यास पूर्ण मोटाई वाले ऊतक पंच को समायोजित करने के लिए किया गया था। फोवियल सेंटर के माध्यम से ओसीटी बी-स्कैन और एक साइट 2 मिमी सुपीरियर, समान स्तरों पर हिस्टोलॉजी के अनुरूप, वेबसाइट पर अपलोड किए गए थे, साथ ही एक रंगीन फंडस फोटोग्राफ भी था। ओसीटी विमानों की पसंद फोवा23 के तहत एएमडी पैथोलॉजी की प्रमुखता और24,25 से बेहतर रॉड-समृद्ध क्षेत्रों में एसडीडी की प्रमुखता से तय की गई थी।

2013 से, जीवन के दौरान ओसीटी-लंगर वाले एमएमआई के साथ चित्रित आंखें प्रत्यक्ष क्लिनिकोपैथोलॉजिक सहसंबंधों के लिए उपलब्ध थीं। अधिकांश (10 दाताओं में से 7) में रेटिना रेफरल प्रैक्टिस (लेखक: केबीएफ) में रोगियों को शामिल किया गया था, जिसने अनुसंधान उद्देश्यों के लिए मृत्यु के बाद अपनी आंखें दान करने में रुचि रखने वाले रोगियों के लिए एक उन्नत निर्देश रजिस्ट्री की पेशकश की। आंखों को स्थानीय नेत्र बैंक द्वारा पुनर्प्राप्त और संरक्षित किया गया था, प्रयोगशाला में स्थानांतरित किया गया था, और प्रोजेक्ट मैक्युला आंखों के समान तैयार किया गया था। प्री-मॉर्टम क्लिनिकल ओसीटी वॉल्यूम को प्रयोगशाला में मूल रूप से पढ़ा गया था, इस प्रकार माइक्रोस्कोप26 के तहत देखी गई विशेषताओं के साथ जीवन के दौरान देखी गई पैथोलॉजी विशेषताओं को संरेखित किया गया था।

2014 में शुरू, संभावित आंख संग्रह नैदानिक इतिहास के बिना दाता आंखों में एएमडी के लिए स्क्रीनिंग द्वारा शुरू हुआ, लेकिन एक परिभाषित समय सीमा (6 घंटे) के दौरान संरक्षित किया गया। इस उद्देश्य के लिए, आंख धारक को पूरे ग्लोब को समायोजित करने के लिए संशोधित किया गया था। इसने पहले इस्तेमाल किए गए 8 मिमी पंच के कटे हुए किनारों के आसपास अलगाव की संभावना को कम कर दिया। आंखों को इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के लिए 4% बफर पैराफॉर्मलडिहाइड में संरक्षित किया गया था और अगले दिन दीर्घकालिक भंडारण के लिए 1% में स्थानांतरित कर दिया गया था। 2016-2017 (महामारी से पहले) में, 90 दाताओं से 184 आंखें बरामद की गईं। इस रिपोर्ट के आंकड़े और छवियां इस श्रृंखला से उत्पन्न होती हैं। महामारी के दौर (2020 के लॉकडाउन और उसके बाद) के दौरान, ट्रांसस्क्रिप्टोमिक्स और आईएमएस सहयोग के लिए संभावित संग्रह कम गति से जारी रहा, अनिवार्य रूप से 2014 के तरीकों का उपयोग करते हुए।

दाता आंख मूल्यांकन के लिए अन्य तरीके उपलब्ध हैं। मिनेसोटा ग्रेडिंग सिस्टम (एमजीएस) 27,28 कलर फंडस फोटोग्राफी29 के लिए एआरडीएस नैदानिक प्रणाली पर आधारित है। इस पद्धति की सीमाओं में "लेट एएमडी" के एक चरण में एट्रोफिक और नियोवास्कुलर एएमडी का संयोजन शामिल है। इसके अलावा, एमजीएस आरपीई कोरॉइड के फोटो-प्रलेखन से पहले न्यूरोसेंसरी रेटिना को हटाने पर जोर देता है। यह कदम एसडीडी को अलग-अलग डिग्री30,31 तक हटा देता है और बाहरी रेटिना और इसकी समर्थन प्रणाली के स्थानिक पत्राचार को हटा देता है। इस प्रकार, आरपीई-कोरॉयड में रेटिना से पैथोलॉजी तक चयापचय की मांग और सिग्नलिंग को जोड़ने के प्रयास बाधित हो सकते हैं। यूटा सिस्टम ने आरएनए और प्रोटीन निष्कर्षण के लिए क्षेत्रों में विच्छेदनके लिए नियत आंखों को वर्गीकृत करने के लिए एक्स विवो कलर फोटोग्राफी और ओसीटी का उपयोग करके एमएमआई को लागू किया। हालांकि पूरे आईकप निष्कर्षण के लिए बेहतर है, एएमडी प्रगति के लिए उच्चतम जोखिम पर 3 मिमी व्यास क्षेत्र33,34 6 मिमी व्यास फोवा-केंद्रित पंच का केवल 25% का प्रतिनिधित्व करता है। इस प्रकार, ऐसी तकनीकें जो फोवा के संदर्भ में निष्कर्षों को स्थानीयकृत कर सकती हैं, जैसे कि इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के लिए सीरियल सेक्शनिंग, फायदेमंद हैं।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

बर्मिंघम में अलबामा विश्वविद्यालय में संस्थागत समीक्षा बोर्ड ने प्रयोगशाला अध्ययनों को मंजूरी दी, जिसने अच्छी प्रयोगशाला प्रथाओं और जैव सुरक्षा स्तर 2/2 + का पालन किया। सभी अमेरिकी नेत्र बैंक 2006 के समान शारीरिक उपहार अधिनियम और अमेरिकी खाद्य और औषधि प्रशासन के अनुरूप हैं। एडवांसिंग साइट नेटवर्क सहित अधिकांश अमेरिकी आंख बैंक, आई बैंक एसोसिएशन ऑफ अमेरिका के चिकित्सा मानकों के अनुरूप हैं।

सामग्री की तालिका आपूर्ति और उपकरणों को सूचीबद्ध करती है। पूरक सामग्री 1 विच्छेदन, रंग फंडस फोटोग्राफी और ओसीटी-आधारित एमएमआई का अवलोकन प्रदान करता है। पूरक सामग्री 2 ओसीटी-आधारित एमएमआई का विवरण प्रदान करती है।

1. ऊतक संग्रह के लिए मानदंड

  1. अनिर्दिष्ट दाताओं की स्क्रीन में एएमडी आंखों की उपज को अधिकतम करने के लिए, स्वीकार्य दाताओं के लिए निम्नलिखित मानदंड निर्धारित करें: आयु ≥80 वर्ष, सफेद, गैर-मधुमेह, और ≤6 घंटे मृत्यु-से-संरक्षण (डीटीओपी)।
    नोट: डीटीओपी को मृत्यु के बीच के समय के रूप में परिभाषित किया गया है और जब आंख को अस्पताल या प्रयोगशाला में प्रदान किए गए संरक्षक में रखा जाता है।

2. संरक्षण माध्यम और अन्य तैयारी (प्रयोगशाला)

  1. 20% स्टॉक (खरीदे गए) से 4% फॉस्फेट-बफर्ड पैराफॉर्मलडिहाइड बनाएं। 0.1 एम सोरेनसन के फॉस्फेट बफर के 800 एमएल में 20% पैराफॉर्मलडिहाइड (5 का कमजोर पड़ने वाला कारक) के 200 एमएल को जोड़कर 1 एल तैयार करें। यदि आवश्यक हो, तो पीएच 7.2 सुनिश्चित करने के लिए परीक्षण और समायोजित करें। 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
  2. 4% फॉस्फेट-बफर्ड पैराफॉर्मलडिहाइड के 30 एमएल को 40 एमएल जार में वितरित करें।
  3. नेत्र बैंक में संरक्षक के 40 एमएल कंटेनर ों को लेबल किया गया ताकि ऊतक को किसी भी समय और किसी भी दिन पुनर्प्राप्त किया जा सके।
  4. संरक्षित आंखों के भंडारण के लिए, 4% समाधान से 1% पैराफॉर्मलडिहाइड बनाएं। 0.1 एम सोरेनसन के फॉस्फेट बफर के 750 एमएल में 4% पैराफॉर्मलडिहाइड (4 का कमजोर पड़ने वाला कारक) के 250 मिलीलीटर को जोड़कर 1 एल तैयार करें। यदि आवश्यक हो तो पीएच का परीक्षण और समायोजन करें। 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
    1. सोरेनसन के फॉस्फेट बफर, पीएच 7.2 के 0.2 एम समाधान से 1 एल का 1 एल आसुत जल और 500 एमएल आसुत जल और 500 मिलीलीटर सोरेनसन के बफर को मिलाकर।
    2. 1 एन हाइड्रोक्लोरिक एसिड या 1 एन सोडियम हाइड्रॉक्साइड का उपयोग करके बूंद द्वारा पीएच ड्रॉप को समायोजित करें। 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
  5. विच्छेदन के दौरान आंखों को स्थिर करने के लिए एक धारक बनाएं। तरल होने तक गर्म किए गए दंत मोम के साथ एक पेट्री डिश भरें। जब यह थोड़ा ठंडा हो जाता है, तो इसमें एक बड़ी गेंद असर के साथ एक अर्धगोलाकार छाप बनाएं, और फिर गेंद के असर को हटाने की सुविधा के लिए डिश को फ्रीज करें।

3. नेत्र बैंक के तरीके

  1. अनुसंधान ऊतकों की तेजी से वसूली सुनिश्चित करने के लिए, सभी ऊतकों को तेजी से पुनर्प्राप्त करें, जिनमें प्रत्यारोपण के लिए अभिप्रेत भी शामिल है।
  2. मृत्यु के 1 घंटे के भीतर, कानून द्वारा आवश्यक मृत्यु रेफरल प्राप्त करें, और प्रत्येक दाता को एक रेफरल अनुक्रम संख्या के साथ ट्रैक करें जो ऊतक का अनुसरण करता है।
  3. संभावित नैदानिक प्रलेखन वाले मामलों को खोजने के लिए, अनुसंधान दाता जोखिम मूल्यांकन साक्षात्कार में एएमडी- और नेत्र रोग-विशिष्ट प्रश्न पूछें।
  4. यात्रा के समय को कम करने के लिए, एक कॉम्पैक्ट क्षेत्र (यानी, शहर और आसन्न उपनगरीय काउंटी) के भीतर पूरे ग्लोब (प्रत्यारोपण के लिए केवल कॉर्निया से अलग) को पुनर्प्राप्त करें।
  5. ऊतक वसूली के लिए संरक्षक (बफर 4% पैराफॉर्मलडिहाइड) के दो जार को डिकेडेंट के अस्पताल के कमरे में लाएं (शरीर को मुर्दाघर में ले जाने की प्रतीक्षा करने के विपरीत)।
  6. वसूली से पहले और दौरान, डिलीवरी और समय की पुष्टि करने के लिए जांचकर्ताओं के साथ संवाद करें।
  7. अस्पताल में साइट पर ग्लोब को पुनर्प्राप्त करें, उन्हें लगातार हैंडलिंग विधियों द्वारा खोलें, और खुली आंख को संरक्षक में डुबोएं (चित्रा 1)।
    1. हेमोस्टैट द्वारा स्थिर धुंध के एक म्यान का उपयोग करके उत्पादित दाता आंख को जगह पर रखें।
    2. स्क्लेरा के 2 मिमी चौड़े रिम के साथ कॉर्निया को हटाने की सुविधा के लिए, ग्लोब को स्कोर करने के लिए 18 मिमी व्यास ट्रेफिन का उपयोग करें।
    3. कॉर्निया को श्वेतपटल के साथ मुक्त करने के लिए, घुमावदार युक्तियों के साथ स्प्रिंग-लोडेड कैंची का उपयोग करके स्कोर किए गए सर्कल को काट लें, जबकि हेमोस्टैट-स्लिप्ड धुंध के साथ ग्लोब को स्थिर करें।
    4. कॉर्निया को श्वेतपटल से उठाएं, आईरिस और सिलिअरी बॉडी को उजागर करें।
    5. विट्रियस कक्ष में संरक्षक के प्रवेश को सुविधाजनक बनाने के लिए, पुपिलरी मार्जिन के लंबवत आईरिस में 2 मिमी लंबी स्लिट बनाएं। आंखों को 4 डिग्री सेल्सियस पर 30 एमएल संरक्षक के साथ नमूना जार में रखें, और गीली बर्फ पर प्रयोगशाला में स्थानांतरित करें।
  8. डी-आइडेंटिफाइड डोनर जानकारी को इलेक्ट्रॉनिक रूप से आई बैंक से अनुसंधान प्रयोगशाला डेटाबेस में प्रेषित करें।
    नोट: डेटाबेस रेफरल नंबर, आंख बैंक ऊतक संख्या, और ट्रैकिंग के लिए प्रयोगशाला आईडी नंबर, साथ ही अन्य प्रासंगिक जानकारी रखता है।

4. पूर्व विवो रंग फंडस फोटोग्राफी के लिए ऊतक तैयारी

  1. दो स्टीरियो माइक्रोस्कोप का उपयोग करें, एक विच्छेदन के लिए और एक रंग फंडस फोटोग्राफी के लिए।
    नोट: वर्णक परिवर्तनों की कल्पना करने के लिए ट्रांसइल्यूमिनेशन के लिए, डार्क-फील्ड माइक्रोस्कोपी के लिए एक आधार का उपयोग करें।
  2. पूर्वकाल खंड अवशेषों (आईरिस और लेंस) को हटा दें। विच्छेदन के दौरान आंख को स्थिर करने के लिए, इसे मोम से भरे पेट्री डिश में रखें (पूरक सामग्री 1, स्लाइड 7-8)। सिलिअरी बॉडी और संलग्न रेटिना को विट्रस कैविटी में गिरने से रोकने के लिए, सिलिअरी बॉडी (विट्रस बेस) से जुड़ी मोटी विट्रस की अंगूठी के क्षोभ को कम करें।
  3. अभिविन्यास के लिए बेहतर ध्रुव को चिह्नित करें। पकवान में ग्लोब को पूर्ववर्ती पक्ष नीचे रखें। बेहतर रेक्टस और बेहतर तिरछी मांसपेशियों के सम्मिलन टेंडन ज्ञात कीजिए। लकड़ी के एप्लिकेटर का उपयोग करके, पूर्ववर्ती से पीछे की दिशा में 10 मिमी रेखा में एक अंकन स्याही को कम से कम लागू करें (यानी, बेहतर रेक्टस मांसपेशी के टेंडिनस सम्मिलन के लंबवत)।
  4. फोटोग्राफी से पहले, फंडस को ठंडे सोरेनसेन के फॉस्फेट बफर से भरें।
  5. प्रत्येक छवि27 में दिखाई देने के लिए एक आंतरिक स्केल बार के रूप में फंडस में 1 मिमी रूबी मोती डालें।
  6. रिंग फ्लैश के साथ लगे स्टीरियो माइक्रोस्कोप पर लगाए गए सिंगल-लेंस रिफ्लेक्स कैमरे के साथ रंगीन छवियां प्राप्त करें। विशिष्ट क्षेत्रों को उजागर करने के उद्देश्य से छवियों को कैप्चर करने के लिए तीन मानक आवर्धन में से प्रत्येक पर ट्रांस-, एपि-और फ्लैश रोशनी का उपयोग करें (पूरक सामग्री 1, स्लाइड 11): 1) भूमध्य रेखा के लिए फंडस, 2) पीछे का ध्रुव (संवहनी आर्केड, ऑप्टिक तंत्रिका सिर, फोवे), और 3) मैक्यूला ल्यूटिया (पीला स्थान) के भीतर फोवा।

5. पूर्व विवो कलर फंडस फोटोग्राफी के लिए तैयारी

  1. कैमरा चालू करें और मॉनिटर चालू करें। रिमोट शटर में प्लग करें, और एक्ट्यूएटर को हाई-डेफिनिशन मल्टीमीडिया इंटरफेस (एचडीएमआई) कैमरा / टेलीविजन (टीवी) मॉनिटर और डिस्प्ले केबल में जारी करें।
  2. कैमरा सेटिंग्स को मैन्युअल आईएसओ फ़ंक्शन और मिरर लॉक-अप स्थिति (कंपन को कम करने के लिए लॉक इन) पर सेट करें।
    नोट: उपयोग किए गए कैमरे पर सेटिंग्स के लिए निर्माता के उपयोगकर्ता मैनुअल को देखें। कैमरा डिस्प्ले से हिस्टोग्राम और एक्सपोज़र रीडआउट के सापेक्ष ओवर/अंडरएक्सपोज़र सेटिंग्स को प्रदर्शित करें।
  3. माइक्रोस्कोप चरण पर चार कार्डिनल दिशाओं में रोशनी के लिए दो प्रकाश स्रोतों को व्यवस्थित करें, जिनमें से प्रत्येक में एक दूसरे के लंबवत दो लचीले प्रकाश गाइड हैं (पूरक सामग्री 1, पृष्ठ 10)।
  4. एपि-रोशनी प्रकाश स्रोतों को पूर्ण शक्ति में चालू करें।
    नोट: फोटोग्राफर के लिए प्रकाश / फ्लैश स्कैटर को सीमित करने के लिए मंच के चारों ओर एक काला महसूस किया गया कफन होना उपयोगी है लेकिन आवश्यक नहीं है।
  5. विच्छेदन माइक्रोस्कोप पर, बफर से भरे 30 एमएल क्वार्ट्ज क्रूसिबल में पीछे के ध्रुव को डालने के लिए बल का उपयोग करें। ऊतक को नीचे तक डूबने दें। आंदोलन को रोकने के लिए आंख और क्रूसिबल की दीवार के बीच एक ब्रेसिंग, जैसे कि एक ऊतक स्पंज डालें। 1 मिमी रूबी मोती को पीछे के ध्रुव में डालें।
    नोट: मोती ऑप्टिक तंत्रिका कप में गिर सकता है।
  6. स्टीरियो माइक्रोस्कोप चरण पर क्रूसिबल में ग्लोब को ध्यान से रखें, और माइक्रोस्कोप आईपीस के माध्यम से आंतरिक ओकुलर फंडस का निरीक्षण करें। सबसे कम आवर्धन का उपयोग करके, 12 बजे की स्थिति में ऊतक के निशान, ऑप्टिक तंत्रिका सिर (ओएनएच), और ओएनएच से 5 डिग्री नीचे फोवा की पहचान करके आंख को उन्मुख करें। आंख को घुमाएं ताकि फोवा ओएनएच के माध्यम से एक रेखा के नीचे 5 ° तक गिर जाए।
    नोट: यदि यह एक दाहिनी आंख है, तो ओएनएच फोविया के दाईं ओर है, जैसा कि माइक्रोस्कोप के ओकुलर के माध्यम से देखा जाता है। यदि यह बाईं आंख है, तो ओएनएच फोवे के बाईं ओर है।
  7. कैमरे से रिमोट मॉनिटर देखने को चालू करें। सुनिश्चित करें कि माइक्रोस्कोप बीम-स्प्लिटर स्लाइडर फोटो पोर्ट के माध्यम से निरीक्षण करने के लिए सेट किया गया है, न कि ओकुलर के लिए पोर्ट के माध्यम से। प्रकाश और दर्पण पथ के आधार पर, उचित अभिविन्यास के लिए मंच पर ऊतक को 180 ° घुमाने के लिए तैयार रहें।

6. पूर्व विवो रंग फंडस फोटोग्राफी का उपयोग कर छवि अधिग्रहण

  1. एपि-रोशनी चालू करने के साथ, आवर्धन सेट करें ताकि पूरे 18 मिमी ट्रेफिन चीरा दृश्य के पूरे क्षेत्र पर कब्जा कर ले। आवर्धन बढ़ाएं ताकि फोवियल गड्ढे के तल पर ध्यान केंद्रित करना संभव हो। आवर्धन को पिछली सेटिंग में कम करें.
  2. आईएसओ सेटिंग्स को 1,600-3,000 की सीमा में समायोजित करें ताकि एक्सपोज़र समय कैमरे पर मीटर की केंद्र सीमा में गिर जाए।
  3. रिमोट शटर ट्रिगर दबाएँ। ऊपर की स्थिति में लॉक करने के लिए दर्पण को सुनें। एक्सपोजर के लिए ट्रिगर को फिर से दबाएं।
  4. मॉनिटर पर छवि का निरीक्षण करें, जिसमें पूर्व निर्धारित मेटाडेटा लाल, हरा, नीला (आरजीबी), और सही प्रदर्शन के लिए एक रंग हिस्टोग्राम दिखा रहा है। यदि एक्सपोजर स्वीकार्य है, तो आगे बढ़ें; यदि नहीं, तो हटाएं, पैरामीटर का पुनर्मूल्यांकन करें, और फिर से छवि बनाएं।
  5. ड्रूसन को हाइलाइट करने के लिए एपि-रोशनी के लिए हंसनेक लैंप बंद करें, और फ्लैश को चालू करें, 1/4 सेकंड एक्सपोज़र, 1/250 सेकंड की कैमरा शटर गति और 100-320 के आईएसओ के साथ। फ्लैश गति को डिफ़ॉल्ट पर सेट करें, या कैमरे के प्रारंभिक सेटअप के दौरान इसे संशोधित करें। एक छवि प्राप्त करें, और उचित प्रदर्शन के लिए हिस्टोग्राम की जांच करें।
  6. फ्लैश बंद करें, और ट्रांस-रोशनी प्रकाश स्रोत चालू करें। आईएसओ को 5,000 से ऊपर रीसेट करें, और सुनिश्चित करें कि फोटोग्राफिक सिस्टम में संभावित कंपन के कारण एक्सपोज़र समय 1/30 सेकंड से नीचे नहीं जाता है। एक छवि प्राप्त करें, और उचित प्रदर्शन के लिए हिस्टोग्राम की जांच करें।
  7. दृश्य के क्षेत्र में ओएनएच और फोवा दोनों को देखने के लिए आवर्धन बढ़ाएं। एपि-रोशनी लैंप चालू करें। आईएसओ रेंज को 1,600-3,000 पर सेट करें। सुनिश्चित करें कि एक्सपोज़र समय कैमरे की केंद्र सीमा में आता है।
  8. एपि-रोशनी लैंप बंद करें, और फ्लैश चालू करें, 1/4 सेकंड एक्सपोजर के साथ, प्रीसेट कैमरा शटर गति 1/250 एस पर सेट करें, और आईएसओ 400-800 पर सेट हो। एक छवि प्राप्त करें, और उचित प्रदर्शन के लिए हिस्टोग्राम की जांच करें।
  9. फ्लैश को बंद करें, और डार्क-फील्ड बेस का उपयोग करके ट्रांस-रोशनी चालू करें। ISO को 5,000 से ऊपर रीसेट करें। सुनिश्चित करें कि फोटोग्राफिक सिस्टम में संभावित कंपन के कारण एक्सपोजर समय 1/30 सेकंड से धीमा नहीं है। एक छवि प्राप्त करें, और एक उचित हिस्टोग्राम की जांच करें।
  10. ट्रांसइल्यूमिनेशन बंद करें, और एपि-इल्यूमिनेशन लैंप को फिर से चालू करें।
  11. चरण 6.7 में उपयोग किए जाने वाले आवर्धन को बढ़ाएँ। यदि आवश्यक हो तो पुन: ध्यान केंद्रित करें।
  12. 3,000-6,000 की सीमा के भीतर आईएसओ बढ़ाएं, और कैमरे की उचित एक्सपोज़र रेंज के भीतर आने के लिए एक्सपोज़र समय को समायोजित करें। एक छवि प्राप्त करें।
    नोट: रूबी मोती अब दृश्य के क्षेत्र में प्रकट नहीं हो सकता है। यदि हां, तो संदर्भ के लिए इस आवर्धन पर मोती की अलग-अलग छवियों को कैप्चर करें।
  13. एपि-रोशनी लैंप बंद करें। 1/4 सेकंड के एक्सपोज़र के साथ फ्लैश चालू करें और कैमरा शटर गति के साथ 1/250 सेकंड तक। फ्लैश गति को डिफ़ॉल्ट पर सेट करें, या कैमरे के प्रारंभिक सेटअप के दौरान इसे बदलें, और आईएसओ को 500-1,000 पर सेट करें। छवि प्राप्त करें। उचित प्रदर्शन के लिए हिस्टोग्राम की जांच करें।
  14. फ्लैश बंद करें, और ट्रांस-रोशनी लैंप चालू करें। अधिक संवेदनशील छवि सेंसर के साथ तेजी से एक्सपोज़र समय की अनुमति देने के लिए आईएसओ को 8,000 से ऊपर रीसेट करें। सुनिश्चित करें कि फोटोग्राफिक सिस्टम में संभावित कंपन के कारण एक्सपोजर समय 1/30 सेकंड से नीचे नहीं जाता है। एक छवि प्राप्त करें।
  15. छवियों को कैमरे से कंप्यूटर पर निर्यात करें। माइक्रोस्कोप चरण से नमूना हटाने से पहले छवियों की समीक्षा करें यदि कुछ को फिर से कैप्चर करने की आवश्यकता है।

7. पूर्व विवो ओसीटी और स्कैनिंग लेजर ऑप्थाल्मोस्कोपी (एसएलओ) के लिए छवि अधिग्रहण अवलोकन।

  1. स्पेक्ट्रल डोमेन ओसीटी के लिए, ग्लोब को फॉस्फेट बफर में एक कस्टम आई होल्डर में 60 डायप्टर लेंस35 के साथ एक कक्ष के साथ रखें। नैदानिक ओसीटी इमेजिंग डिवाइस पर आंख धारक को एक ब्रैकेट में माउंट करें, और इसे संलग्न करें जहां एक रोगी अपने माथे को आराम देगा। OCT डिवाइस स्वचालित रूप से प्रत्येक छवि में एक स्केल बार सम्मिलित करता है।
  2. उसी समय, एक ही उपकरण का उपयोग करके और धारक में अभी भी आंख के साथ, निकट-अवरक्त परावर्तन (एनआईआर, निवास सॉफ्टवेयर द्वारा लोकेटर छवि के रूप में उपयोग किया जाता है), 488 एनएम उत्तेजना फंडस ऑटोफ्लोरेसेंस (एफएएफ), और लाल-मुक्त (आरएफ) प्रतिबिंब का उपयोग करके स्कैनिंग लेजर ऑप्थाल्मोस्कोप (एसएलओ) के साथ ग्लोब की छवि बनाएं।
    नोट: इस डिवाइस में 787 एनएम उत्तेजना एफएएफ केवल कभी-कभी उपयुक्त होता है क्योंकि बीम-स्प्लिटर एसएलओ को प्रकाश संप्रेषण को कम करता है। इस कारण से, 787 एनएम एफएएफ छवियों (अगला बिंदु देखें) के लिए एक दूसरा उपकरण उपयोग किया जाता है।
  3. अलग से, लेकिन आंख धारक में अभी भी आंख के साथ, आरपीई गड़बड़ी36 का पता लगाने के लिए 787 एनएम एफएएफ के साथ ग्लोब को एक अलग डिवाइस का उपयोग करके छवि दें जो इस साधन को अच्छी तरह से प्रदर्शित करता है।

8. पूर्व विवो ओसीटी / एसएलओ के लिए छवि अधिग्रहण प्रोटोकॉल (पूरक सामग्री 2 में स्लाइड देखें)।

  1. ऊतक अंकन डाई के साथ बेहतर रेक्टस मांसपेशी को इंगित करें। लेजर चालू करें (नीला तीर, पूरक सामग्री 2, पृष्ठ 1)।
  2. पूरक सामग्री 2 के पृष्ठ 2 का उल्लेख करते हुए, ओसीटी हेड को आधार (हरे तीर) के संबंध में दो अक्षों में पूरी इकाई को घुमाकर और फिर जॉयस्टिक को क्लॉकवाइज/काउंटरक्लॉकवाइज (सीडब्ल्यू / सीसीडब्ल्यू, ब्लू एरो) घुमाकर ऊंचाई (वाई) बढ़ाएं। नॉब (नारंगी तीर) को घुमाकर छवि पर ध्यान केंद्रित करें, जिसमें काले लीवर को स्थिति आर (*) में रखा गया है। अंगूठे के पेंच (बैंगनी तीर) को सुरक्षित करके यूनिट को लॉक करें।
  3. आंख को धारक में डालें, और स्पेसर्स के साथ पीछे के पहलू से स्थिर करें (पूरक सामग्री 1, पृष्ठ 13)। श्वेतपटल में सेंध लगाने से बचने के लिए जितना संभव हो उतना कम दबाव डालें। बेहतर रेक्टस मांसपेशी के लिए ऊतक चिह्न के साथ उन्मुख करें।
    नोट: आंख धारक के सामने से ओसीटी डिवाइस तक की अनुमानित दूरी 25 मिमी है।
  4. OCT डिवाइस के लिए मालिकाना विज़ुअलाइज़ेशन और विश्लेषण सॉफ़्टवेयर खोलें। बाएं कॉलम में एक रोगी सूची दिखाई देगी। एक आंतरिक कोड संख्या द्वारा अनुक्रमित नेत्र दाता "रोगी" हैं। निर्माता से उपयोगकर्ता मैनुअल देखें।
  5. नए रोगी चिह्न का चयन करें। आवश्यकतानुसार रोगी डेटा जानकारी को पूरा करें। OK का चयन करें. व्यक्तिगत आंखों के लिए तार्किक रूप से क्रमबद्ध नंबरिंग सिस्टम का उपयोग करें, जैसे कि YYYYNNNL, R_agesex। उदाहरण के लिए, यह 2017016R_97F हो सकता है।
  6. निम्न विंडो पर डेटा प्रविष्टि जारी रखने के बाद, OK दबाएँ। ऑपरेटर का चयन करें और ड्रॉप-डाउन मेनू से अध्ययन करें।
    नोट:: दर्ज की गई जानकारी निर्यात योग्य मेटा-डेटा में दिखाई देगी।
  7. एक रिक्त स्क्रीन देखने के बाद, छवि अधिग्रहण शुरू करने के लिए पीले बटन को स्पर्श करें।
  8. आईआर + ओसीटी दबाएं (अवरक्त प्रतिबिंब + ओसीटी के पास)। लेजर को फंडस और ओसीटी बी-स्कैन की लाइव एसएलओ छवि प्राप्त करने की अनुमति दें।
    1. ओएनएच और फोविया के आधार पर सही शारीरिक स्थिति को अंतिम रूप दें, और धारक में आंख की स्थिति को समायोजित करने के लिए लकड़ी के एप्लिकेटर का उपयोग करें। नियंत्रण कक्ष पर, तीव्रता को समायोजित करने के लिए काले गोल बटन को घुमाएं।
    2. औसत 9-100 फ्रेम के लिए एक ही बटन दबाएं (लाल तीर; 9 पर्याप्त है, 100 मलाईदार दिखता है)। यदि इकाई सही ढंग से उन्मुख है, तो फंडस फोकस में होना चाहिए, और ओसीटी बी-स्कैन प्रदर्शन के शीर्ष तीसरे में दिखाई देना चाहिए (पूरक सामग्री 2, पृष्ठ 9, डबल लाल तीर)।
    3. फंडस छवि पर, फोवे को केंद्र में नीली रेखा को स्थानांतरित करने के लिए कर्सर का उपयोग करें (पूरक सामग्री 2, पृष्ठ 9, सफेद तीर)। प्रेस अधिग्रहण करें.
      नोट: अन्य डिफ़ॉल्ट बटन रेटिना, ईडीआई (बंद) और लाइन स्कैन हैं।
  9. अगले अधिग्रहण के लिए RF + OCT दबाएँ। यह सुनिश्चित करने के लिए स्थिति को फिर से जांचें कि छवि स्थानांतरित या अवक्रमित नहीं हुई है। औसत के लिए काला बटन दबाएं। प्रेस अधिग्रहण करें.
  10. ऑटोफ्लोरेसेंस इमेजिंग के लिए आंतरिक क्यूब को 488 एनएम और 787 एनएम उत्तेजना तरंग दैर्ध्य (पूरक सामग्री 2, पृष्ठ 10) पर स्विच करें।
    नोट: स्विच के बाद घन स्थिति दिखाया गया है।
  11. ऑटोफ्लोरेसेंस मोड का चयन करें। संरेखण को पुन: जाँचें। प्रेस अधिग्रहण करें.
  12. आरपीई व्यवधान और शोष के संदिग्ध मामलों के लिए, 787 एनएम ऑटोफ्लोरेसेंस के लिए आईसीजीए (इंडोसाइनिन ग्रीन एंजियोग्राफी) का चयन करें। आंख की स्थिति को फिर से जांचें, और उसके बाद अधिग्रहण दबाएं।
    नोट: एक फंडस छवि अक्सर इस साधन में दिखाई नहीं देती है क्योंकि आंतरिक घन बीम को क्षीण करता है।
  13. आईआर के लिए आंतरिक क्यूब को वापस आर पर स्विच करें और वॉल्यूम अधिग्रहण के लिए रेड फ्री इमेजिंग।
    नोट: स्विच के बाद घन स्थिति पूरक सामग्री 2 के पृष्ठ 13 पर दिखाया गया है।
  14. OCT वॉल्यूम प्राप्त करने के लिए, IR और वॉल्यूम सेटिंग का चयन करें. नियंत्रण मॉड्यूल (30 ° मैक्यूला क्यूब, 30 μm स्पेसिंग, प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के आधार पर औसत) पर उपयुक्त बटन दबाकर पूरक सामग्री 2 के पृष्ठ 14 पर सभी सेटिंग्स का मिलान करें।
  15. ध्यान दें कि निकट-अवरक्त प्रतिबिंब फंडस दृश्य नीले बी-स्कैन लाइनों में कवर किया गया है। दाईं विंडो के ऊपरी तीसरे में ओसीटी स्थिति को फिर से जांचें। नियंत्रण मॉड्यूल पर अधिग्रहण दबाएँ, और वॉल्यूम स्कैन पूरा होने के लिए 5 मिनट प्रतीक्षा करें। जब इमेजिंग अधिग्रहण पूरा हो जाता है, तो बाहर निकलने का चयन करें। छवियों को सहेजा जाएगा (लाल तीर)।
    नोट: नीली रेखाएं माइक्रोमीटर में पिछले दृश्य में दिखाई गई दूरी को सीमांकित करती हैं। स्कैन नीचे (हीन) से शुरू होता है और ऊपर की ओर बढ़ता है। लाल रेखा की प्रगति पर ध्यान दें।
  16. कंप्यूटर को अधिग्रहित छवियों को संसाधित करने की अनुमति दें, जो स्क्रीन पर दिखाई देगा (पूरक सामग्री 2, पृष्ठ 16)।
  17. एक दाता की साथी आंखों की इमेजिंग करते समय, आंखों के बीच बढ़ते ब्रैकेट की स्थिति को न बदलें। यदि बाईं आंख को पहले चित्रित किया गया है, तो परिणाम ओडी (दाईं आंख) कॉलम में दिखाई देंगे। सभी छवियों का चयन करने के लिए राइट-क्लिक करें, और उसके बाद Exchange OS/OD का चयन करें। छवियां ओएस कॉलम में स्थानांतरित हो जाएंगी।
  18. डेटाबेस > विंडो > चयन दबाएँ। स्क्रीन दाएं कॉलम (पूरक सामग्री 2, पृष्ठ 18) में चित्रित दाता आंख को जोड़ने के साथ पैनल 6 में डिफ़ॉल्ट है। ड्रॉपडाउन मेनू में रोगी पर राइट-क्लिक करें, बैच चुनें, और ई 2 ई फ़ाइल निर्यात करें।
  19. फ़ाइल स्थानांतरण के लिए डेस्कटॉप पर बनाए गए पूर्व-निर्धारित फ़ोल्डर के लिए ब्राउज़ करें। OK का चयन करें. फ़ोल्डर में E2E फ़ाइलें हैं जिन्हें बाहरी हार्ड ड्राइव पर कॉपी किया जाना है और संग्रहीत किया जाना है।
  20. आंख को इसके धारक में स्कैनिंग लेजर ऑप्थाल्मोस्कोप में लाएं, जिसका उपयोग मुख्य रूप से 787 एनएम ऑटोफ्लोरेसेंस के लिए किया जाता है।
    नोट: छवियों के अधिग्रहण और संग्रह के लिए निर्माता के उपयोगकर्ता गाइड को देखें।
  21. कंप्यूटर और लेजर चालू करें।
  22. नए रोगी आइकन का चयन करें। आवश्यकतानुसार रोगी डेटा पूरा करें।
  23. आंख डेटापत्रक को समान रखने के लिए, OK दबाएँ. चूंकि सी-कर्व समान रहता है, इसलिए जारी रखें।
  24. अध्ययन मोड का चयन करें, और यदि आवश्यक हो तो पासवर्ड दर्ज करें। सी-कर्व को 7.7 मिमी पर रखें।
  25. C-वक्र सत्यापित करने के लिए जारी रखें का चयन करें. कैमरा शुरू करने के लिए पीले संकेतक का चयन करें।
  26. R स्थिति का चयन करें। दुनिया को संरेखित और उन्मुख करें। ऊपर के रूप में फोकस और उन्मुख करने के लिए आईआर मोड का चयन करें।
  27. आधार (पूरक सामग्री 2, पृष्ठ 28, हरा तीर) के संबंध में पूरी इकाई को दो अक्षों में स्थानांतरित करके कैमरा हेड को उन्मुख करें और फिर यूनिट (नीले तीर) की ऊंचाई (वाई) बढ़ाएं। नॉब (नारंगी तीर) को घुमाकर छवि पर ध्यान केंद्रित करें। काला लीवर स्थिति R (*) में है। इस सिर के स्थिति में होने के बाद, अंगूठे के स्क्रू (बैंगनी तीर) को घुमाकर यूनिट को लॉक करें।
  28. ध्यान दें कि स्क्रीन अनुपूरक सामग्री 2 के पृष्ठ 29 पर दिखाए गए अनुसार दिखाई देती है।
  29. चयनकर्ता नॉब को R से A में ले जाएं। नीले, 100% तीव्रता, 30 डिग्री क्षेत्र और एकल-चरण इमेजिंग में आईसीजीए (787 एनएम ऑटोफ्लोरेसेंस प्राप्त करने के लिए) का चयन करें।
    नोट: डाई इंडोसाइनिन हरे रंग की तरह, मेलेनिन 787 एनएम तरंग दैर्ध्य प्रकाश से उत्तेजित होता है।
  30. ध्यान दें कि स्क्रीन पूरक सामग्री 2 के पृष्ठ 31 पर दिखाए गए अनुसार दिखाई देती है। औसत के लिए काली डिस्क दबाएँ, और तब अधिग्रहण करें का चयन करें.
  31. डेटाबेस > विंडो चुनें. SLO डिवाइस से E2E फ़ाइलें आयात करें का चयन करें; ये फ़ाइलें किसी बाह्य हार्ड ड्राइव पर संग्रहीत की जाती हैं और डेस्कटॉप पर अपलोड की जाती हैं.
  32. खोलें का चयन करें. जाँचें कि चिह्न डिफ़ॉल्ट हैं, और OK का चयन करें।
  33. ध्यान दें कि रोगी के पास अब दो टैब हैं: एक एसएलओ (नीला तीर) से प्राप्त छवियों को दिखाता है, और दूसरा टैब ओसीटी डिवाइस (लाल तीर) से प्राप्त छवियों को दिखाता है (पूरक सामग्री 2, पृष्ठ 34)।
  34. 786 nm (ICGA) छवि पर राइट-क्लिक करें, और चित्र को डेस्कटॉप पर SLO 786 लेबल वाली फ़ाइल में निर्यात करें।
  35. 786 nm ऑटोफ्लोरेसेंस SLO छवि को सहेजने के लिए, रोगी का चयन करें, और छवियों को RAW फ़ाइलों (.vol फ़ाइलों के लिए) के रूप में डेस्कटॉप पर एक फ़ोल्डर में निर्यात करने के लिए राइट-क्लिक करें।
  36. संग्रह कंप्यूटर पर स्थानांतरण के लिए OCT डिवाइस से छवियों को निर्यात करने के लिए, RAWEXPORT से RAW लेबल वाले फ़ोल्डर में कॉपी/पेस्ट करें.

9. इमेजिंग की समीक्षा

  1. प्रत्येक आंख के लिए सबफ़ोल्डर ्स के साथ प्रत्येक दाता के लिए फ़ोल्डरों में छवियों (रंग, .vol फ़ाइल, SLO छवियों) को इकट्ठा करें, और फ़ोल्डरों को प्रयोगशाला आईडी द्वारा लगातार अनुक्रमित करें।
  2. एक मानकीकृत रिपोर्ट के लिए डेटाबेस में ऊतक इंप्रेशन (गुणवत्ता, पैथोलॉजी) रिकॉर्ड करें।
  3. इन-हाउस इमेजजे प्लगइन के साथ निर्यात किए गए ओसीटी वॉल्यूम की समीक्षा करें।
    1. फोविया केंद्र का पता लगाएं, जिसे फोवियल डिप के केंद्र, बाहरी रेटिना बैंड के अंदरूनी उदय, या सबसे पतले बिंदु से पहचाना जा सकता है। ज्यादातर मामलों में, ये मेल खाएंगे, लेकिन हमेशा नहीं, क्योंकि यह फोवियल संरक्षण, व्यक्तिगत परिवर्तनशीलता और पैथोलॉजी की उपस्थिति पर निर्भर करता है।
    2. बेहतर पेरिफोवा में एक मानक स्कैन खोजें (बेहतर दिशा में 2 मिमी / 67 बी-स्कैन दूर; यानी, स्कैन संख्या में वृद्धि)।
    3. भविष्य में त्वरित संदर्भ के लिए पूरे वॉल्यूम का एक .tif स्टैक सहेजें।
    4. स्कैन 1 (अवर) से शुरू करते हुए, ओसीटी वॉल्यूम को पूरी तरह से स्क्रॉल करें, जबकि स्कैन संख्याओं को रिकॉर्ड करें जिसमें सुविधाओं को पहचाना जाता है।
    5. मैक्युला के अलावा पेरिपैपिलरी क्षेत्र की जांच करें।
      नोट: पुरानी आंखों में पेरिपैपिलरी कोरियोरेटिनल शोष में एक विशिष्ट बेसल लैमिनर जमा और नियोवैस्कुलराइजेशन शामिल है। यह मायोपिक आंखों और ग्लूकोमा में वर्णक परिवर्तन का एक सामान्य क्षेत्र है, साथ ही उम्र बढ़ने और एएमडी37 में भी।
  4. रंगीन तस्वीरों का निरीक्षण करें, और यदि संभव हो तो ओसीटी द्वारा देखे गए किसी भी निष्कर्ष को लिंक करें।
    नोट: सामान्य तौर पर, पहले ओसीटी द्वारा अधिकांश निष्कर्षों को देखना आसान है। रंगीन तस्वीरें एसएलओ पर क्षेत्र के बाहर के क्षेत्र का एक बड़ा दृश्य प्रदान करती हैं, नेवी सहित कोरॉइडल पिग्मेंटेशन, हीम और हार्ड एक्स्यूडेट्स की उपस्थिति, और नियोवास्कुलर एएमडी में काला वर्णक। फोवा में गहरे रंग का वर्णक पूर्ववर्ती खंड से ढीले मेलानोसोम का प्रतिनिधित्व कर सकता है और इसे पिपेट का उपयोग करके बफर के साथ धीरे से धोया जाना चाहिए।
  5. एसएलओ छवियों का निरीक्षण करें, और यदि संभव हो तो ओसीटी द्वारा देखे गए किसी भी निष्कर्ष को लिंक करें।
  6. फोवा और पेरिफोवा में मानक बी-स्कैन, उल्लेखनीय पैथोलॉजी या अन्य विशेषताओं के साथ अतिरिक्त बी-स्कैन, और पैथोलॉजी रिपोर्ट में एसएलओ छवियों को सहेजें।
  7. आंखों को निम्नानुसार वर्गीकृत करें: अविश्वसनीय, संदिग्ध, प्रारंभिक-मध्यवर्ती एएमडी, एट्रोफिक एएमडी, नियोवास्कुलर एएमडी, अन्य, अज्ञात, ग्रेडेबल नहीं, दर्ज नहीं। "संदिग्ध" का उपयोग तब किया जाता है जब यह स्पष्ट नहीं है कि परिवर्तन किसी अन्य वर्गीकरण के लिए पर्याप्त गंभीर हैं या नहीं। "ग्रेडेबल नहीं" उपयोगी ओसीटी स्कैन की कमी वाली आंखों के लिए आरक्षित है, जैसे कि गंभीर रूप से अलग रेटिना वाले। "रिकॉर्ड नहीं किया गया" उन आंखों के लिए आरक्षित है जो फोटोग्राफी के बिना प्राप्ति पर तुरंत संसाधित होती हैं।
  8. एएमडी के लिए इन मानदंडों का उपयोग करें: गंभीर आरपीई परिवर्तन या तो ड्रुसेन या सबरेटिनल ड्रुसेनॉइड जमा के साथ, नियोवैस्कुलराइजेशन के संकेतों के साथ या बिना, जैसे द्रव या फाइब्रोसिस, और अन्य कारणों के सबूत के बिना (एसडीडी को समायोजित करने के लिए कर्सियो एट अल.10 से अपडेट किया गया)।
    नोट: अंतिम निदान की पुष्टि हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण द्वारा की जाती है।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

तालिका 1 से पता चलता है कि 2016-2017 के दौरान, 94 सफेद गैर-मधुमेह दाताओं >80 वर्ष की आयु के 184 आंखें बरामद की गईं। औसत मृत्यु-से-संरक्षण समय 3.9 घंटे (सीमा: 2.0-6.4 घंटे) था। समीक्षा की गई 184 आंखों में से, 75 (40.2%) में कुछ एएमडी थे। निम्नलिखित श्रेणियों की पहचान की गई: उल्लेखनीय (39.7%), संदिग्ध (11.4%), प्रारंभिक-मध्यवर्ती एएमडी (22.8%), एट्रोफिक (7.6%), नियोवास्कुलर (9.8%), अन्य (8.7%), और अज्ञात / दर्ज नहीं / ग्रेडेबल (<1%)। चित्रा 2, चित्रा 3, चित्रा 4, और चित्रा 5 इस श्रृंखला से असाधारण रूप से अच्छी तरह से संरक्षित आंखों के मल्टीस्केल, मल्टीमॉडल एक्स विवो इमेजिंग दिखाते हैं। रेटिना रोग (जेएके) में विशेषज्ञता वाले नेत्र रोग विशेषज्ञ के सहयोग से आंखों की समीक्षा की गई। जबकि कुछ आंखों ने व्यक्तिगत विशेषताओं को दूसरों की तुलना में बेहतर दिखाया, इन मामलों को उच्च गुणवत्ता के लिए चुना गया था।

जैसा कि38 में वर्णित है, पूर्व विवो रंग फोटोग्राफी विवो फोटोग्राफी में संबंधित से भिन्न है। रेटिना एडिमा और / या डिटेचमेंट पीछे के पिगमेंटेड ऊतकों की दृश्यता को कम कर सकता है। ताजा आंखों में अवलोकन से संकेत मिलता है कि ये परिवर्तन पोस्टमॉर्टम होते हैं और शीघ्र निर्धारण के साथ स्पष्ट रूप से खराब नहीं होते हैं। इसके अलावा, मृत्यु के बाद कोरॉयडल वाहिकाएं खाली हो जाती हैं। पीला वाहिकाओं और गहरे अंतरालीय ऊतक की एक लहरदार पृष्ठभूमि के कारण, आरपीई के विमान में वर्णक विविधताओं के आकलन को रंग के अलावा अन्य तौर-तरीकों से सहायता दी जानी चाहिए। पूर्व विवो ओसीटी में, रंगीन फोटोग्राफी की तुलना में अधिक जानकारी उपलब्ध है। Ex vivo ओसीटी भी विवो ओसीटी से काफी भिन्न है। प्रमुख अंतरों में ऊतक की समग्र बढ़ी हुई परावर्तकता शामिल है, विशेष रूप से आंतरिक रेटिना में, कुछ बैंड (तंत्रिका फाइबर परत, आंतरिक और बाहरी प्लेक्सीफॉर्म परत, आरपीई) की लगातार परावर्तकता, कोरॉयड विवरण की कम दृश्यता, विशेष रूप से एडिमेटस रेटिना के तहत, और ऊतक परत टुकड़ियों की दृश्यता (नीचे देखें)। फोटोरिसेप्टर और आरपीई (दीर्घवृत्त क्षेत्र, ईजेड; इंटरडिजिटेशन जोन, आईजेड) को शामिल करने वाले बाहरी रेटिना हाइपररिफ्लेक्टिव बैंड विवो में असंगत रूप से दिखाई देते हैं और इस संदर्भ में लैंडमार्क के रूप में उपयोग नहीं किए जाते हैं। वर्णक्रमीय डोमेन ओसीटी के लिए नैदानिक सहमति आरपीई-ब्रुच की झिल्ली (बीआरएम) बैंड शब्द का उपयोग करती है। हालांकि, आरपीई-बेसल लैमिना (बीएल)-बीआरएम बैंड शब्द को प्राथमिकता दी जाती है क्योंकि यह एएमडी24 में बेसल लामिनर जमा की उपस्थिति को समायोजित करता है।

चित्रा 2 एक असाधारण मैक्युला और हाइपोरिफ्लेक्टिव बड़े कोरॉइडल वाहिकाओं को दर्शाता है, जिसमें दोनों के बीच एक प्रतिबिंबित आरपीई-बीएल-बीआरएम बैंड होता है। आंतरिक रेटिना में एक बड़ा पोत पीछे की परतों पर एक छाया डालता है। आईपीएल और ओपीएल मामूली रूप से प्रतिबिंबित होते हैं। एनआईआर एसएलओ में, रेटिना और कोरॉइडल वास्कुलचर दोनों दिखाई देते हैं। लाल-मुक्त परावर्तनीयता एसएलओ आंतरिक रेटिना और विट्रियोरेटिनल इंटरफेस की विशेषताओं के लिए सबसे अच्छा काम करता है जैसे कि आर्क्यूट फाइबर और एनएफएल के पैपिलोमैकुलर बंडल के लिए। सामान्य आंखों में, 488 एनएम ऑटोफ्लोरेसेंस एसएलओ मोटे पैराफोवे के कारण केंद्रीय मैक्युला में समग्र रूप से कम संकेत का एक क्षेत्र दिखाता है और, कुछ मामलों में, पीले ज़ैंथोफिल वर्णक द्वारा अवशोषण, साथ ही साथ बड़े रेटिना वाहिकाओं को हाइपरऑटोफ्लोरेसेंस अस्तर, जो संयोजी ऊतक म्यान का संकेत देता है। 787 एनएम पर ऑटोफ्लोरेसेंस आरपीई से केंद्रीय मैक्युला में बढ़े हुए संकेत का एक छोटा सा क्षेत्र दिखाता है, कोरॉयडल स्ट्रोमा में एक संकेत, और कोरॉयडल वाहिकाओं के अनुरूप हाइपोऑटोफ्लोरोसेंट धारियां।

चित्रा 3 प्रारंभिक-मध्यवर्ती एएमडी के साथ एक मैक्यूला दिखाता है। दिखाई देने वाली विशेषताओं में एक नरम ड्रूसेन (फोवे के पास गुंबद के आकार का आरपीई ऊंचाई), एसडीडी (आरपीई-बीएल-बीआरएम बैंड के आंतरिक डेंटेट उपस्थिति के साथ आंतरायिक परावर्तकता), हाइपर-रिफ्लेक्टिव फॉसी (एचआरएफ, रेटिना में स्थित इन-लेयर आरपीई के समान परावर्तकता के साथ चिंतनशील सामग्री), और विटेलिफॉर्म परिवर्तन (आरपीई ऑर्गेनेल का एक आंतरिक विस्तार, इंट्रासेल्युलर और बाह्य कोशिकीय दोनों) शामिल हैं। बेसल लैमिनर जमा के साथ संयोजनमें 39)। रंग फोटोग्राफी विटेलिफॉर्म घाव के अनुरूप मजबूत रंजकता दिखाती है, जो कम रंजकता से घिरी होती है। न तो ड्रूसन और न ही एसडीडी रंग से स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं। एनआईआर परावर्तनीयता फोवे में परावर्तकता को दर्शाती है। 488 एनएम उत्तेजना पर ऑटोफ्लोरेसेंस फोवे में एक मोटा संकेत दिखाता है। एसडीडी कभी-कभी एसएलओ तौर-तरीकों पर दिखाई देते हैं; यह अधिक संभावना है यदि एसडीडी प्रचुर मात्रा में हैं, और एसडीडी को सबसे आसानी से नियमित रूप से स्पेसकिए गए पंक्टेट पैटर्न के रूप में देखा जाता है (देखें स्पेड और कर्सियो19, चित्रा 6)। चित्रा 3 आई में फोवा से बेहतर और अस्थायी पैटर्न एसडीडी नहीं है, क्योंकि यह अनियमित है और सतही फोकल प्लेन के लिए स्थानीयकृत है। चेहरे के सभी तौर-तरीके फोवे से निकलने वाली बारीक परतों को दिखाते हैं। कम अच्छी तरह से संरक्षित आंखों में, इसी तरह की परतें इतनी बड़ी हो सकती हैं कि सबसे कम देखने वाले आवर्धन पर दिखाई दे सकती हैं।

चित्रा 4 एट्रोफिक एएमडी के साथ एक मैक्यूला दिखाता है। कलर फंडस फोटोग्राफी पैराफोवा में गोलाकार एट्रोफिक क्षेत्रों, केंद्रीय हाइपरपिग्मेंटेशन और छोटे हाइपरपिगमेंटेड डॉट्स को दिखाती है जो ओसीटी में हेनले फाइबर परत-बाहरी परमाणु परत (एचएफएल-ओएनएल) के स्तर पर एचआरएफ के अनुरूप होते हैं। इसके अतिरिक्त, ओसीटी में, एक कम फ्लैट आरपीई ऊंचाई एक बेसल लैमिनर जमा, गैर-एक्सुडेटिव टाइप 1 नियोवैस्कुलराइजेशन या दोनों का प्रतिनिधित्व कर सकती है। फोवियल बी-स्कैन में शोष एचएफएल-ओएनएल के धंसने से पहचाना जा सकता है, हाइपरट्रांसमिशन का एक क्षेत्र (कोरॉयड के माध्यम से चमकने वाला प्रकाश), फोवियल केंद्र में बढ़ी हुई छाया के साथ एक विटेलिफॉर्म परिवर्तन, और एचआरएफ जो छाया डालता है। इस आंख में, एनआईआर प्रतिबिंब फोवे में हाइपर-रिफ्लेक्टिव स्पॉट दिखाता है। 787 एनएम उत्तेजना पर ऑटोफ्लोरेसेंस प्रभावी रूप से फोवियल हाइपरपिग्मेंटेशन और गोलाकार एट्रोफिक क्षेत्रों में सिग्नल की अनुपस्थिति के अनुरूप एक संकेत दिखाता है। लाल-मुक्त और 488 एनएम ऑटोफ्लोरेसेंस आंतरिक रेटिना विशेषताओं को दिखाते हैं।

चित्रा 5 मैकुलर एट्रोफी के साथ एक मैक्युला दिखाता है जो नियोवास्कुलर एएमडी से द्वितीयक है। कलर फंडस फोटोग्राफी एट्रोफिक क्षेत्र के भीतर काले रंजकता को दिखाती है। ओसीटी एचएफएल-ओएनएल के सिकुड़ने (धंसने) और बढ़े हुए हाइपरट्रांसमिशन से शोष दिखाता है। फोवियल बी-स्कैन सबफोवियल हाइपररिफ्लेक्टिव सामग्री और इंट्रारेटिनल सिस्ट का एक टीला दिखाता है। निकट-अवरक्त परावर्तनीयता आरपीई और कोरॉइडल वाहिकाओं के नुकसान के कारण एट्रोफिक क्षेत्र में परावर्तकता दिखाती है। फोवे में एक छोटा, तीव्रता से प्रतिबिंबित क्षेत्र रंग पर दिखाई नहीं देता है। लाल-मुक्त परावर्तनीयता रेटिना वाहिकाओं को दिखाती है और, एक कुंडलाकार क्षेत्र के भीतर, कोरॉयडल वाहिकाएं। ऑटोफ्लोरेसेंस (488 एनएम) स्पष्ट रूप से एक गोलाकार एट्रोफिक सीमा और प्रारंभिक शोष के द्वीपों को दर्शाता है। सिग्नल से रहित एक केंद्रीय क्षेत्र मध्यम संकेत और दृश्यमान कोरॉयडल वाहिकाओं की वार्षिकी से घिरा हुआ है।

चित्रा 6 पूर्व विवो ओसीटी इमेजिंग में सामान्य कलाकृतियों को दर्शाता है। एडिमा आंतरिक रेटिना में प्रमुख हो सकती है, जिससे फोवे के माध्यम से उभार और सिलवटें पैदा होती हैं (चित्रा 6 ए, आई)। यांत्रिक क्षति विट्रस पर कर्षण के साथ या विच्छेदन उपकरणों के साथ रेटिना के सीधे संपर्क से हो सकती है, जिसके परिणामस्वरूप सामग्री का विस्थापन होता है और कभी-कभी, उस सामग्री का नुकसान होता है (चित्रा 6 एफ, जी)। टुकड़ी कई ऊतक विमानों के साथ हो सकती है और विवो में भी होने वाली परतों के बीच सापेक्ष तन्यता बलों का प्रतिनिधित्व कर सकती है। बाद में प्रसंस्करण पर कोई भी टुकड़ी और चौड़ी हो सकती है। सबसे आम अलगाव रेटिना है (यानी, फोटोरिसेप्टर बाहरी खंडों और आरपीई की एपिकल प्रक्रियाओं के बीच) (चित्रा 6 बी-डी, एफ-आई)। एपिकल प्रक्रियाएं या तो बाहरी खंडों से अलग हो सकती हैं या आरपीई सेल निकायों के साथ रह सकती हैं, जैसा कि हिस्टोलॉजी द्वारा निर्धारित किया गया है। रेटिना टुकड़ियां बड़ी और घुमावदार हो सकती हैं (चित्रा 6 बी, डी, आई) या संकीर्ण और मुश्किल से समझ में आती हैं (चित्रा 6 सी, एफ, जी)। बेसिलरी लेयर डिटेचमेंट (BALAD40) को पहली बार प्रयोगशाला में देखा गया था और फिर बाद में नैदानिक OCT में पाया गया। BALAD को फोटोरिसेप्टर आंतरिक खंडों के मायोइड भाग के माध्यम से एक विभाजन के लिए जिम्मेदार ठहराया जाता है, जो आंतरिक खंड के दीर्घवृत्त भाग और आरपीई से जुड़े बाहरी खंड को छोड़ देता है (चित्रा 6A, D, I)। पूर्व विवो ओसीटी में बीएडीएलडी को एसडीडी के रूप में गलत नहीं माना जाना चाहिए। एक तीसरा डिटेचमेंट प्लेन आंतरिक सीमित झिल्ली (आईएलएम) है, और आईएलएम और शेष रेटिना परतों (चित्रा 6 ए, बी, आई) के बीच अक्सर अवशिष्ट चिंतनशील तरल पदार्थ होता है। कम से कम आम अलगाव कोरॉयड और श्वेतपटल (चित्रा 6 सी) के बीच है। फोवा अक्सर सिस्टोइड रिक्त स्थान प्रदर्शित करता है जिसे समर्थन साक्ष्य के बिना पैथोलॉजिकल नहीं माना जाना चाहिए, जैसे कि नियोवैस्कुलराइजेशन के संकेत (चित्रा 6 एच)। एकल बी-स्कैन में, आरपीई के उतार-चढ़ाव ड्रूसन का आभास दे सकते हैं। ओसीटी वॉल्यूम का 3 डी दृश्य स्पष्ट करता है कि ये कोरॉयडल जहाजों के साथ यात्रा करते हैं (चित्रा 6 ई, जे)। लहरों का कारण वाहिकाओं के बीच अंतर मात्रा में परिवर्तन और मृत्यु के बाद और निर्धारण के दौरान हस्तक्षेप करने वाले स्ट्रोमा हो सकते हैं।

गुणवत्ता के लिए अपेक्षाओं को जांचने और एक्स विवो ओसीटी की सीमाओं का पता लगाने के लिए, चित्रा 7 एएमडी के साथ तीन नैदानिक रूप से प्रलेखित आंखों की विवो इमेजिंग, एक्स विवो इमेजिंग और हिस्टोलॉजी की तुलना करता है। इन तीन आंखों को चित्रा 2, चित्रा 3, चित्रा 4 और चित्रा 5 से अलग तरीके से संरक्षित किया गया था। संरचनात्मक ओसीटी परावर्तकता स्रोतों की पुष्टि करने के लिए, जो उपकोशिकीय41 हैं, चित्रा 7 में आंखों को 2.5% ग्लूटाराल्डिहाइड और 1% ग्लूटाराल्डिहाइड में संरक्षित किया गया था ताकि उच्च-रिज़ॉल्यूशन एपॉक्सी राल हिस्टोलॉजी और कोररिलेटिव इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी की अनुमति मिल सके। ग्लूटार्ल्डिहाइड चित्रा 2, चित्रा 3, चित्रा 4 और चित्रा 5 में उन लोगों के सापेक्ष इन नमूनों में अस्पष्टता जोड़ता है। एक छोटे बनाम लंबे डीटीओपी का प्रभाव स्पष्ट है (चित्रा 7 ए-एफ, 2.1 एच बनाम चित्रा 7 जी-आई, 8.9 एच)। एक लंबे डीटीओपी के साथ आंख में, पोस्टमॉर्टम एडिमा ने रेटिना कंटूर को बदल दिया, और आईएलएम को अलग कर दिया गया। पूर्व विवो इमेजिंग में रुचि की विकृति (बाहरी रेटिना ट्यूबलेशन) सूक्ष्म थी। यह पाया गया क्योंकि विवो ओसीटी में आंख-ट्रैक ने प्रासंगिक बी-स्कैन को इंगित किया, और कोरॉयडल वाहिकाओं का मिलान किया जा सकता था। एक छोटे डीटीओपी के साथ दो आंखों में, कुछ प्रमुख विकृति (टाइप 3 मैकुलर नियोवैस्कुलराइजेशन) तुरंत स्पष्ट थे (चित्रा 7 ए-सी)। अन्य को आंखों की ट्रैकिंग (चित्रा 7 डी-एफ) की सहायता से पाया गया था।

Figure 1
चित्रा 1: रेटिना के विसर्जन निर्धारण के लिए मानव दाता आंख से कॉर्नियल एक्सिशन। ऊपर बाईं ओर, उत्पादित दाता आंख को हेमोस्टैट द्वारा स्थिर धुंध के एक आवरण द्वारा रखा जाता है; ऊपर दाईं ओर, कॉर्निया और 2 मिमी चौड़े रिम स्क्लेरा सहित एक गोलाकार स्कोर बनाने के लिए एक 18 मिमी ट्रेफिन का उपयोग किया जाता है; बीच में, स्कोर किए गए सर्कल को स्प्रिंग-लोडेड घुमावदार टिंप कैंची के साथ एक कट द्वारा समाप्त किया जाता है, जबकि ग्लोब को स्थिर किया जाता है; नीचे बाईं ओर, कॉर्निया और स्क्लेरल रिम उठाए जाते हैं, जिससे आईरिस (नीला) और सिलिअरी बॉडी (टैन-ब्राउन) उजागर होता है; नीचे के मध्य में, रिम के साथ कॉर्निया पूरी तरह से उठा दिया जाता है; नीचे दाईं ओर, आईरिस को विट्रियस कक्ष में संरक्षक के प्रवेश को सुविधाजनक बनाने के लिए प्यूपिलरी मार्जिन के लंबवत झुकाया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: एक असाधारण मैक्यूला की मल्टीमॉडल एक्स विवो इमेजिंग। 1.97 घंटे के मृत्यु-से-संरक्षण अंतराल के साथ एक 82 वर्षीय महिला दाता से एक मैक्यूला। (ए) पूर्वकाल खंड के साथ देखी गई दाईं आंख का फंडस हटा दिया गया (एपि-रोशनी)। (बी) मैक्यूला (एपि-रोशनी) का क्लोज-अप। (सी) फोवे (एपि-रोशनी) का क्लोज-अप दृश्य। हरी रेखाएं पैनल डी और ई में ओसीटी बी-स्कैन के स्थानों को इंगित करती हैं। (D, E) ओसीटी बी-स्कैन (डी) बेहतर पेरिफोवा (ई) और फोविया के माध्यम से। रेटिना (आर), हाइपोरिफ्लेक्टिव बड़े वाहिकाओं के साथ कोरॉयड (सी), और हस्तक्षेप करने वाले हाइपर-रिफ्लेक्टिव आरपीई-बीएल-बीआरएम बैंड दिखाई देते हैं। इस असाधारण रूप से अच्छी तरह से संरक्षित आंख में, मध्यम चिंतनशील आईपीएल और ओपीएल भी दिखाई देते हैं। (डी) आंतरिक रेटिना में एक बड़ा पोत पीछे की परतों पर छाया डालता है। (ई) पैनल ई (पीला तीर) में रेटिना और आरपीई के बीच अलगाव कलात्मक है। (एफ) निकट-अवरक्त परावर्तनीयता रेटिना और कोरॉइडल वास्कुलचर दोनों के विवरण को दर्शाती है। (जी) लाल-मुक्त प्रतिबिंब तंत्रिका फाइबर परत के आर्क्यूट फाइबर (बाएं हरे घुमावदार तीर) और पैपिलोमैकुलर बंडल (हरे तीर) को दर्शाता है। (एच) 488 एनएम तरंग दैर्ध्य ऑटोफ्लोरेसेंस एक मोटी एडिमेटस पैराफोविया के कारण केंद्रीय मैक्यूला में समग्र रूप से कम सिग्नल का एक क्षेत्र दिखाता है, साथ ही फोवियल सेंटर में कम सिग्नल का एक बिंदु और बड़े रेटिना वाहिकाओं को हाइपरऑटोफ्लोरेसेंस अस्तर करता है, जो संयोजी ऊतक म्यान का संकेत देता है। (I) 787 एनएम पर ऑटोफ्लोरेसेंस आरपीई से केंद्रीय मैक्युला में बढ़े हुए सिग्नल का एक छोटा सा क्षेत्र, कोरॉयडल स्ट्रोमा में एक संकेत और कोरॉयडल वाहिकाओं के अनुरूप हाइपोऑटोफ्लोरोसेंट धारियों को दर्शाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्र 3. प्रारंभिक मध्यवर्ती एएमडी के साथ दाता आंख की मल्टीमॉडल एक्स विवो इमेजिंग। 3.1 घंटे के मृत्यु-से-संरक्षण अंतराल के साथ एक 97 वर्षीय महिला दाता से दाता आंख। (ए) दाईं आंख के फंडस को पूर्वकाल खंड के साथ देखा गया (एपि-रोशनी)। (बी) मैक्यूला (एपि-रोशनी) का क्लोज-अप। हरी रेखाएं पैनल डी, ई और एफ में ओसीटी बी-स्कैन के स्थानों को इंगित करती हैं। (सी) हाइपरपिग्मेंटेशन (तीर, फ्लैश रोशनी) दिखाने वाले फोवे का क्लोज-अप व्यू। (डी) ओसीटी पर बेहतर पेरिफोवा (नारंगी तीर) में एक एसडीडी देखा जाता है। आई विटेलिफॉर्म फोवा (सफेद तीर) के नीचे आरपीई में बदलता है। (एफ) फोवे से नीच एक नरम ड्रूसेन है जिसमें आधार (पीला तीर) पर एक हाइपोरिफ्लेक्टिव लाइन और ऊपर एक हाइपर-रिफ्लेक्टिव फोकस (हल्का नीला तीर) होता है। (G-I) स्कैनिंग लेजर ऑप्थेल्मोस्कोप छवियां फोवे में बहुत महीन स्टेलेट सिलवटों को दिखाती हैं (सी में भी देखा जाता है)। (छ) निकट-अवरक्त परावर्तनीयता विटेलीफॉर्म सामग्री के अनुरूप फोवे में परावर्तकता सामग्री को दर्शाती है। (एच) लाल-मुक्त परावर्तनीयता रेटिना सतह को दर्शाती है। (I) 488 एनएम तरंगदैर्ध्य ऑटोफ्लोरेसेंस थोड़ा गाढ़ा पैराफोवा के कारण केंद्रीय मैक्युला में समग्र कम सिग्नल का एक क्षेत्र दिखाता है। एसडीडी स्पष्ट रूप से दिखाई नहीं दे रहे हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: उम्र से संबंधित मैकुलर अपघटन में एक पूर्ण आरपीई और रेटिना शोष की मल्टीमॉडल एक्स विवो इमेजिंग। 2.33 घंटे के मृत्यु-से-संरक्षण अंतराल के साथ एक 97 वर्षीय महिला से दाता आंख। (बी) मैक्यूला (एपि-रोशनी) का क्लोज-अप। हरी रेखाएं पैनल डी और ई में ओसीटी बी-स्कैन के स्थानों को इंगित करती हैं। (सी) फोवे (एपि-रोशनी) का क्लोज-अप जो केंद्रीय हाइपरपिग्मेंटेशन (हरे तीर) और छोटे हाइपरपिगमेंटेड डॉट्स (पीले तीर) को दर्शाता है। केंद्रीय बिंदु तीव्र भूरा होता है क्योंकि ऊपरी रेटिना बहुत पतला होता है। बिंदु असंतृप्त दिखाई देते हैं क्योंकि ऊपरी रेटिना मोटी होती है। गोलाकार एट्रोफिक क्षेत्रों को इंगित किया जाता है (सफेद तीर)। (D, E) ओसीटी बी-स्कैन (डी) पेरिफोवा (ई) और फोविया के माध्यम से। रेटिना (आर) और पतले कोरॉयड (सी) दिखाई देते हैं। (डी) एचएफएल-ओएनएल के स्तर पर हाइपर-रिफ्लेक्टिव फॉसी (पीले तीर) सी में हाइपरपिगमेंटेड डॉट्स के अनुरूप हैं। उनके तहत कम फ्लैट आरपीई ऊंचाई एक बेसल लैमिनर जमा, गैर-एक्सुडेटिव टाइप 1 नियोवैस्कुलराइजेशन या दोनों का प्रतिनिधित्व कर सकती है। (ई) फोवे के माध्यम से बी-स्कैन एचएफएल-ओएनएल (लाल तीर) के धंसने, हाइपरट्रांसमिशन का एक क्षेत्र, फोवियल सेंटर (हरे तारांकन) में बढ़ी हुई छाया के साथ एक विटेलिफॉर्म परिवर्तन, और छायांकन के साथ हाइपर-रिफ्लेक्टिव फॉसी (टील एरोहेड) द्वारा पहचानने योग्य शोष दिखाता है। रेटिना और आरपीई बैंड के बीच हाइपोरिफ्लेक्टिव स्पेस सबरेटिनल द्रव का प्रतिनिधित्व कर सकता है। (एफ) निकट-अवरक्त परावर्तनीयता फोवे में हाइपर-रिफ्लेक्टिव स्पॉट दिखाती है। (जी) लाल-मुक्त छवि एनएफएल के आर्क्यूट फाइबर को दिखाती है और रेटिना सतह पर प्रतिबिंबित खिलती है। (एच) रेटिना पर केंद्रित 488 एनएम ऑटोफ्लोरेसेंस रेटिना वाहिकाओं से जुड़ा एक संकेत दिखाता है, आरपीई से जुड़ा कोई संकेत नहीं है, और केंद्रीय मैकुलर क्षेत्र में बेहोश ऑटोफ्लोरोसेंट धब्बे हैं। (I) 787 एनएम ऑटोफ्लोरेसेंस सी में रंजकता के अनुरूप एक संकेत दिखाता है। वृत्ताकार एट्रोफिक क्षेत्र स्पष्ट हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 5
चित्रा 5: उम्र से संबंधित मैकुलर अपघटन में टाइप 1 नियोवैस्कुलराइजेशन और मैकुलर शोष की मल्टीमॉडल एक्स विवो इमेजिंग। 3.5 घंटे के मृत्यु-से-संरक्षण अंतराल के साथ एक 86 वर्षीय महिला दाता की एक दाता आंख। (ए) पूर्वकाल खंड के साथ देखी गई बाईं आंख का फंडस हटा दिया गया (ट्रांस-रोशनी)। (बी) एट्रोफिक सीमाओं (पीले तीर) का विवरण देने वाले मैक्यूला का क्लोज-अप। हरी रेखाएं पैनल डी और ई में ओसीटी बी-स्कैन के स्थानों को इंगित करती हैं। (सी) फोवे के बंद होने से एट्रोफिक क्षेत्र के भीतर काले रंजकता (हरे तीर) दिखाई देते हैं। (D, E) ओसीटी बी-स्कैन (डी) पेरिफोवा (ई) और फोविया के माध्यम से। रेटिना I और पतली कोरॉयड (C) दिखाई दे रही हैं। इस असाधारण रूप से अच्छी तरह से संरक्षित आंख में, मध्यम चिंतनशील आईपीएल और ओपीएल भी दिखाई देते हैं। (डी) पेरिफोवियल बी-स्कैन एट्रोफिक क्षेत्र के बेहतर किनारे को चरता है। शोष एचएफएल-ओएनएल के सैगिंग और बढ़े हुए हाइपरट्रांसमिशन (लाल तीर) से स्पष्ट है। संभावित सबरेटिनल ड्रुसेनोइड जमा का संकेत दिया जाता है (फ्यूशिया एरोहेड्स)। (ई) फोवियल बी-स्कैन सबफोवियल हाइपर-रिफ्लेक्टिव सामग्री और इंट्रारेटिनल सिस्ट (तारांकन) का एक टीला दिखाता है। ओ = ऑप्टिक तंत्रिका सिर। (एफ) निकट-अवरक्त परावर्तनीयता शोष और कोरॉयडल वाहिकाओं (टील तीर) का एक प्रतिबिंबित क्षेत्र दिखाती है, जिसमें केंद्रीय मैक्यूला (नारंगी तीर) में एक छोटा तीव्र क्षेत्र शामिल है जो रंग इमेजिंग द्वारा दिखाई नहीं देता है। (जी) लाल-मुक्त परावर्तनीयता रेटिना वाहिकाओं को दर्शाती है और, एक कुंडलाकार क्षेत्र के भीतर, कोरॉयडल वाहिकाएं। (एच) 488 एनएम ऑटोफ्लोरेसेंस एक मोटे तौर पर गोलाकार एट्रोफिक सीमा (पीले तीर) और प्रारंभिक शोष के द्वीपों को दर्शाता है। ऑटोफ्लोरेसेंस से रहित एक केंद्रीय क्षेत्र मध्यम ऑटोफ्लोरेसेंस और दृश्यमान कोरॉयडल वाहिकाओं (सफेद तीर) की वार्षिकी से घिरा हुआ है। इस आंख में 787 एनएम ऑटोफ्लोरेसेंस संभव नहीं था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 6
चित्रा 6: दाता आंखों के पूर्व विवो ओसीटी इमेजिंग में देखी गई सामान्य कलाकृतियां। ये आंखें आंखों की 2016-2017 श्रृंखला से आती हैं। अधिकांश रेटिना विवो में चित्रित रेटिना के सापेक्ष हाइपर-रिफ्लेक्टिव होते हैं, और आंतरिक रेटिना परतें बाहरी रेटिना परतों की तुलना में अधिक प्रतिबिंबित होती हैं। बेसिलरी डिटेचमेंट (पैनल ए, डी, जी, और आई में पीले तीर) को फोटोरिसेप्टर इनर सेगमेंट मायोइड के स्तर पर विभाजन के रूप में परिभाषित किया गया है, जो एक विशिष्ट इंट्रारेटिनल कैविटी40 बनाता है। रेटिना डिटेचमेंट (पैनल बी, सी, डी, एफ, जी और आई में हरे तीर) अंतर्निहित आरपीई42 से पूरे न्यूरोसेंसरी रेटिना के अलगाव का वर्णन करता है। आंतरिक सीमित झिल्ली (आईएलएम) की टुकड़ियां आईएलएम और तंत्रिका फाइबर परत (पैनल ए, बी और आई में लाल तीर) को अलग करती हैं। एक कोरॉइडल डिटेचमेंट (पैनल सी में नीला तीर) कोरॉयड के भीतर या कोरॉयड और स्क्लेरा के बीच एक अलगाव है। यांत्रिक क्षति (पैनल एफ और जी में बैंगनी तीर) किसी भी स्तर पर और किसी भी आयाम के साथ दिखाई दे सकती है, जैसा कि लापता सामग्री (पैनल जी में हरा तीर) और अव्यवस्थित सामग्री (पैनल जी में पीला तीर) पर लागू होता है। रेटिना एडिमा (पैनल ए और आई में बैंगनी सितारे) अलग-अलग रेटिना परतों के बीच खराब परिभाषित सीमाओं के साथ रेटिना ऊतक के मोटे होने के रूप में दिखाई देता है। एक लहरदार आरपीई (पैनल ई और जे में नीले तीर) एक असमान, लहरदार आरपीई परत के रूप में दिखाई देता है। सिस्टोइड घाव (पैनल एच में लाल वर्ग) रेटिना ऊतक के भीतर हाइपोरिफ्लेक्टिव चैंबर जैसे परिवर्तनों से संबंधित होते हैं, आमतौर पर फोवे में। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 7
चित्र 7: विवो में देखी गई पैथोलॉजी की पूर्व विवो दृश्यता संरक्षण गुणवत्ता पर निर्भर करती है।(एक-मैं) पैनल एक, Bऔर Cपैनलों D, Eऔर F, और पैनल G, Hऔर मैं दो दाताओं से तीन नैदानिक रूप से प्रलेखित आंखों का प्रतिनिधित्व करते हैं, प्रत्येक को आंख-ट्रैकिंग द्वारा देखा जाता है। in vivo (एक1-एक2,D1-D2,G1-G2) और ex vivo (B1-B2,E1-E2,H1-H2) इमेजिंग, उसके बाद हिस्टोलॉजी (C,F,मैं). निकट-अवरक्त परावर्तनीयता (एनआईआर) पर हरी रेखाएं, एक1,B1,D1,E1,G1,H1) ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी (ओसीटी) बी-स्कैन और पैनोरमिक हिस्टोलॉजी के स्तर का प्रतिनिधित्व करते हैं। पैनलों एक, Bऔर C और पैनल। D, Eऔर F90 के दशक में एक महिला दाता की क्रमशः दाईं और बाईं आंख प्रस्तुत करें। पैनलों G, Hऔर मैं एक दूसरी महिला दाता की दाहिनी आंख दिखाएं, जो उसके 90 के दशक में भी है।एक-C) अच्छी तरह से संरक्षित ओकुलर ऊतक (डीटीओपी: 2.1 एच) प्रमुख विकृति की अच्छी दृश्यता को सक्षम बनाता है। (एक) एक हाइपर-रिफ्लेक्टिव इंट्रारेटिनल मैकुलर नियोवैस्कुलराइजेशन (टाइप 3 एमएनवी, ग्रीन एरोहेड) मृत्यु से 17 महीने पहले इंट्रारेटिनल तरल पदार्थ से घिरा होता है (एक2). ब्रूच के झिल्ली परिसर को हाइपोरिफ्लेक्टिव सामग्री द्वारा विभाजित किया जाता है और एक "डबल परत" संकेत (एक2). बाईं ओर कोरॉयड (नारंगी तीर) में बारकोड हाइपरट्रांसमिशन के साथ एक और डबल लेयर संकेत है। पर ex vivo OCT (B2), टाइप 3 एमएनवी और बारकोड हाइपरट्रांसमिशन स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं और चित्रित होते हैं। रेटिना को कृत्रिम रूप से अलग किया जाता है, जैसा कि सफेद तीर द्वारा दिखाया गया है। पैनोरमिक हिस्टोलॉजी एक लंबवत उन्मुख टाइप 3 एमएनवी घाव (हरा तीर, C1). पिछले शोध देखें43,44 मूल मामले के विवरण के लिए। (D-F) अच्छी तरह से संरक्षित ओकुलर ऊतक (डीटीओपी: 2.1 एच) के परिणामस्वरूप पारदर्शिता हो सकती है जो कम हो जाती है लेकिन अभी भी प्रमुख विकृति का पता लगाने के लिए पर्याप्त है। ओसीटी (D2) एक आंख में इंट्रारेटिनल हाइपर-रिफ्लेक्टिव फॉसी (एचआरएफ, फ्यूशिया एरोहेड) का एक ढेर दिखाता है, जिसके बाद एक्सड्यूडेटिव टाइप 3 एमएनवी होता है। मृत्यु से 11 महीने पहले कोई इंट्रारेटिनल सिस्ट दिखाई नहीं देते हैं। पर ex vivo OCT (E2), एचआरएफ का ढेर लंबवत रूप से संपीड़ित है (फ्यूशिया एरोहेड) लेकिन स्पष्ट रूप से चित्रित है। पैनोरमिक हिस्टोलॉजी पर (F1), एक रेटिना वर्णक उपकला टॉवर (फ्यूशिया एरोहेड) एक नरम ड्रूस से ऊपर की ओर उठता है। (G-मैं) कम अच्छी तरह से संरक्षित ओकुलर ऊतक (डीटीओपी: 8.9 एच) के परिणामस्वरूप प्रमुख विकृति की दृश्यता कम हो जाती है। ओसीटी मृत्यु से 48 महीने पहले एक बाहरी रेटिना ट्यूबलेशन (ओआरटी, पीला तीर) इंगित करता है (G2). पर ex vivo ओसीटी, ओआरटी एक सूक्ष्म गड़बड़ी के रूप में प्रकट होता है, और यह पूर्व ज्ञान (H2). आंतरिक सीमित झिल्ली कृत्रिम रूप से अलग होती है (सफेद तीर)। एडिमा ने रेटिना कंटूर को विकृत कर दिया है। हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण बाहरी सीमित झिल्ली द्वारा सीमांकित ओआरटी लुमेन और इसमें उभरे हुए फोटोरिसेप्टर (मैं1). पिछले शोध देखें26,45 मूल मामले के विवरण के लिए। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

नंबर प्रतिशत
नैदानिक श्रेणी दाहिनी आँखें बाईं आँखें कुल दाहिनी आँखें बाईं आँखें कुल
साधारण 39 34 73 41.50% 37.80% 39.70%
संदिग्ध एएमडी 10 11 21 10.60% 12.20% 11.40%
प्रारंभिक एएमडी 20 22 42 21.30% 24.40% 22.80%
एट्रोफिक एएमडी 6 8 14 6.40% 8.90% 7.60%
नियोवास्कुलर एएमडी 11 7 18 11.70% 7.80% 9.80%
अन्य __________ 7 8 15 7.40% 8.90% 8.20%
अज्ञात 0 0 0 0.00% 0.00% 0.00%
रिकॉर्ड नहीं किया गया 1 0 1 1.10% 0.00% 0.50%
कुल 94 90 184 100.00% 100.00% 100.00%
निश्चित एएमडी 37 37 75 39.40% 41.10% 40.20%
संभावित AMD 47 48 95 50.00% 53.30% 51.60%
6/17/16 - 9/14/17 की अवधि के दौरान आंखें परिग्रहण की गईं। मानदंड: ≥ 80 वर्ष, सफेद, गैर-मधुमेह, ≤6 घंटे मृत्यु-से-संरक्षण। लक्ष्य: 184 आंखें (90 दाताओं की 180 आंखें, संरक्षित; 4 दाताओं की 4 आंखें, संरक्षित) मृत्यु-से-संरक्षण समय (औसत, अधिकतम, न्यूनतम): 3.9 घंटे, 6.4 घंटे, 2.0 घंटे

तालिका 1: 2016-2017 से दाता आंख वसूली।

पूरक सामग्री 1: विच्छेदन, रंग फंडस फोटोग्राफी, और ओसीटी-आधारित मल्टीमॉडल इमेजिंग का अवलोकन। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक सामग्री 2: खंड 5-8 में चरणों को चित्रित करने के लिए ओसीटी-आधारित मल्टीमॉडल इमेजिंग का विवरण। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

कोविड-19 से पहले के दौर में 16 महीने की अवधि के दौरान जनसंख्या-आधारित स्क्रीनिंग दृष्टिकोण का उपयोग करते हुए, एएमडी के साथ 75 दाता आंखें खरीदना संभव था। सभी को एक छोटे डीटीओपी के साथ बरामद किया गया और ओसीटी-एंकर एमएमआई का उपयोग करके मंचन किया गया। आयु मानदंड (>80 वर्ष) प्रत्यारोपण योग्य कॉर्निया के लिए लक्षित ऊतक वसूली के लिए विशिष्ट आयु सीमा से बाहर है। उन्नत उम्र के बावजूद, हमारे मानदंडों के परिणामस्वरूप एएमडी के सभी चरणों में आंखें थीं। कई आरपीई फेनोटाइप सभी एएमडी चरणों के लिए आम हैं, और कुछ नियोवास्कुलर एएमडी 3,46 के लिए अनन्य हैं। एक्स विवो और विवो इमेजिंग (चित्रा 7) की प्रत्यक्ष तुलना ने पुष्टि की कि लघु डीटीओपी विशेषज्ञ हैंडलिंग (चित्रा 1) के साथ एक महत्वपूर्ण कारक है, जो शीर्ष-स्तरीय नैदानिक वर्गीकरण के लिए पर्याप्त बाहरी रेटिना की पूर्व विवो छवियों का उत्पादन करता है, और इनमें से कुछ नमूने इमेजिंग और हिस्टोलॉजी 4,35 के बीच प्रत्यक्ष सहसंबंध के लिए उपयुक्त थे। 47. सभी पैथोलॉजी विवो में दिखाई नहीं देती है। हालांकि, कलर फोटोग्राफी-आधारित विधियों10 की तुलना में ओसीटी का उपयोग करते समय कहीं अधिक दिखाई देता है, विशेष रूप से वे जो रेटिना को आरपीई / कोरॉयड27 से अलग करना शामिल करते हैं। इसके अलावा, नैदानिक ओसीटी से आंखों की ट्रैकिंग फोकल और कभी-कभी छोटी विशेषताओं पर ध्यान केंद्रित करती है (चित्रा 7)।

इस संरक्षण प्रणाली में कॉर्निया हटाने के लिए विशिष्ट नेत्र बैंकिंग प्रक्रियाएं और उपकरण शामिल हैं, इसके बाद पहले से प्रदान किए गए संरक्षक में एक खुली आंख का विसर्जन होता है। इस तरह, नेत्र बैंक कर्मी अनुसंधान ऊतकों को लगातार ठीक कर सकते हैं (24/7)। उत्तरार्द्ध विशेषता महत्वपूर्ण है, क्योंकि तत्काल जटिल विच्छेदन के लिए नियत ऊतकोंको जांचकर्ताओं, नेत्र बैंक या दोनों द्वारा चौबीसों घंटे कर्मचारियों की आवश्यकता होती है। अन्य स्टेबलाइजर्स जो किसी भी समय ऊतक वसूली को सक्षम करेंगे, जिसके बाद काम के घंटों के दौरान विशेष विच्छेदन और निष्कर्षण होगा, जैसे कि पैक्सजीन ऊतक प्रणाली और हाइबरनेट-ए, भविष्य में सहायक हो सकते हैं यदि ये ओसीटी इमेजिंग के साथ संगत हैं।

यह दृष्टिकोण रेटिना उत्पन्न करता है जो काफी हद तक आरपीई से जुड़ा रहता है और इस प्रकार, ओसीटी इमेजिंग के लिए ट्रांसलेटेबल डेटा उत्पन्न करने में सक्षम होता है। सटीक स्थानीयकरण आवश्यक है क्योंकि मैक्यूला छोटा है (रेटिना क्षेत्र का <3%)। इसके अलावा, जमा-संचालित एएमडी प्रगति शंकु और छड़48 की स्थलाकृति के साथ संरेखित होती है, और सबसे शुरुआती शुरुआत और सबसे लगातार दृश्य दोष एक विशिष्ट स्थान पर होते हैं (यानी, ऑल-कोन फोवे के बगल में रॉड युक्त पैराफोवा)49। ओसीटी की तुलना के लिए, कलरमेट्रिक रंगों के साथ इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री व्यापक माइक्रोस्कोपी (जैसे, उज्ज्वल-क्षेत्र) के साथ सभी ऊतक तत्वों के लिए संगत है, दोनों लेबल और अनलेबल4। नमूना सरणियों के आधार पर अलक्षित आणविक परख रिज़ॉल्यूशन को प्रभावी ढंग से बढ़ाने के लिए लंबवत रूप से कंपार्टमेंटल फोटोरिसेप्टर और आरपीई के क्षैतिज संरेखण का लाभ उठा सकते हैं। 8 μm व्यास और 10-15 μm के आयनीकरण लेजर दालों के साथ इमेजिंग मास स्पेक्ट्रोमेट्री बाहरी रेटिना कोशिकाओंके उपकोशिकीय डिब्बों में दर्जनों लिपिड का स्थानीयकरण कर सकती है। स्थानिक रूप से हल किए गए ट्रांसस्क्रिप्टोमिक्स ग्लास स्लाइड पर बारकोडेड रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्राइमरों के पूर्व-व्यवस्थित सेट का उपयोग करते हैं, जिस पर ऊतकअनुभाग लागू होते हैं। यह तकनीक वर्तमान में 55 μm व्यास कैप्चर और 100 μm रिक्ति तक सीमित है; संकल्प में सुधार जो इस तकनीक को एएमडी अनुसंधान के लिए उपयुक्त बना देगा, अपेक्षित है।

इस प्रोटोकॉल की सीमाएँ हैं. रिकवरी मानदंड मधुमेह के निदान को छोड़ देता है (अलबामा में मेडिकेयर प्राप्तकर्ताओं के बीच 30%) दोनों बीमारियों में कोरॉयड के महत्व के कारण। यह बहिष्करण समग्र दाता पूल को कम करता है और एक अध्ययन के लिए पर्याप्त आंखें एकत्र करने के लिए आवश्यक समय को लंबा करता है। ऐतिहासिक कारणों से, 2016-2017 के मानदंडों ने काले दाताओं को छोड़ दिया, जो अब राज्यव्यापी नेत्र दाताओं के 14% का प्रतिनिधित्व करते हैं, और काले दाताओं को अब वर्तमान संभावित परियोजनाओं में शामिल किया गया है। नेत्र दाता बनने के इच्छुक व्यक्तियों के लिए अग्रिम निर्देश रजिस्ट्री व्यापक है, लेकिन अभी तक स्थानीय रेटिना विशेषता प्रथाओं में सुविधाजनक पंजीकरण शामिल नहीं है जो एएमडी रोगियों की देखभाल करते हैं; यह परियोजना वर्तमान में विकास में है। इस तरह की जनसंख्या-आधारित स्क्रीन के दौरान, एएमडी के साथ फेनोटाइप में अतिव्यापी स्थितियों वाली आंखें दिखाई देंगी और विकसित नैदानिक साहित्य और रेटिना रोगों में विशेषज्ञता वाले नेत्र रोग विशेषज्ञ के परामर्श से मान्यता प्राप्त होनी चाहिए। उदाहरण के लिए, आंखों की इस श्रृंखला में ड्रूसन53 के साथ नेवी और एक पचीवेसल (आंतरिक कोरॉयड में एक मोटी पोत) 54 पर आरपीई गड़बड़ी की एक रेखा शामिल थी। अंत में, एएमडी के लिए ओसीटी-आधारित ग्रेडिंग सिस्टम की कमी के कारण प्रारंभिक और मध्यवर्ती एएमडी को जोड़ा गया था, जो एट्रोफी मीटिंग समूह55 के वर्गीकरण द्वारा विकास के अधीन है। फिर भी, ऊतक वसूली और ओसीटी-आधारित लक्षण वर्णन का अनुकूलन एएमडी अनुसंधान को फंडिंग अनुप्रयोगों में नियोजित, संचालित, निर्धारित और बजट ति करने के लिए आंख-ट्रैक ओसीटी-एंकर एमएमआई के समय तत्व का लाभ उठाने पर ध्यान केंद्रित करने की अनुमति देता है।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

सी.ए.सी. हीडलबर्ग इंजीनियरिंग से अनुसंधान समर्थन प्राप्त करता है और एपेलिस, एस्टेलास, बोहरिंगर इंगेलहेम, चरित्र बायोसाइंस और ओसानी के लिए परामर्श करता है। टीए नोवार्टिस से अनुसंधान समर्थन प्राप्त करता है और रोश, नोवार्टिस, बेयर, निडेक और एपेलिस के लिए परामर्श करता है। के.बी.एफ. जेनेन्टेक, ज़ीस, हीडलबर्ग इंजीनियरिंग, एलर्गन, बेयर और नोवार्टिस के सलाहकार हैं।

Acknowledgments

हम इंस्ट्रूमेंटेशन और मूल आंख धारक के डिजाइन के लिए हीडलबर्ग इंजीनियरिंग, ओसीटी-आधारित मल्टीमॉडल इमेजिंग की शुरूआत के लिए रिचर्ड एफ स्पेड एमडी, नैदानिक इमेजिंग उपकरणों तक पहुंच की सुविधा के लिए क्रिस्टोफर गिरकिन एमडी और चित्रा 1 के लिए डेविड फिशर को धन्यवाद देते हैं। अनुसंधान के लिए मानव दाता आंखों की वसूली को राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) अनुदान R01EY06019 (सीएसी), पी 30 EY003039 (पिटलर), R01EY015520 (स्मिथ), R01EY027948 (सीएसी, टीए) द्वारा समर्थित किया गया था। R01EY030192 (ली), R01EY031209 (स्टैम्बोलियन), और U54EY032442 (स्प्रगिन्स), IZKF वुर्जबर्ग (N-304, T.A.), अलबामा की आईसाइट फाउंडेशन, इंटरनेशनल रेटिना रिसर्च फाउंडेशन (C.A.C.), अर्नोल्ड और मैबेल बेकमैन इनिशिएटिव फॉर मैकुलर रिसर्च (C.A.C.), और अंधापन को रोकने के लिए अनुसंधान AMD उत्प्रेरक (SCHE)।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Beakers, 250 mL Fisher # 02-540K
Bottles, 1 L, Pyrex  Fisher # 10-462-719 storage for preservative
Bunsen burner or heat source Eisco # 17-12-818 To melt wax
Camera, digital Nikon D7200 D7200
Computer and storage Apple iMac Pro; 14 TB external hard drive Image storage
Container, insulated Fisher # 02-591-45 For wet ice
Containers, 2 per donor, 40 mL Fisher Sameco Bio-Tite  40 mL # 13-711-86 For preservative
Crucible, quartz 30 mL Fisher # 08-072D Hold globe for photography
Cylinder, graduate, 250 mL Fisher # 08-549G
Disinfectant cleaning supplies   https://www.cardinalhealth.com/en/product-solutions/medical/infection-control/antiseptics.html
Eye holder with lens and mounting bracket contact J. Messinger jeffreymessinger@uabmc.edu custom modification of Heidelberg Engineering original design
Face Protection Masks Fisher # 19-910-667
Forceps, Harmon Fix Roboz  # RS-8247
Forceps, Micro Adson Roboz  # RS-5232
Forceps, Tissue Roboz # RS-5172
Glass petri dish, Kimax Fisher # 23064
Gloves Diamond Grip Fisher # MF-300
Gowns GenPro Fisher # 19-166-116
Image editing software Adobe Photoshop 2021, Creative Suite
KimWipes Fisher # 06-666
Lamps, 3 goosenecks Schott Imaging # A20800
Microscope, stereo Nikon SMZ 1000 for dissection
Microscope, stereo Olympus  SZX9 color fundus photography
Paraformaldehyde, 20%  EMS # 15713-S for preservative; dilute for storage
pH meter Fisher  # 01-913-806
Phosphate buffer, Sorenson’s, 0.2 M pH 7.2  EMS # 11600-10
Ring flash B & H Photo Video Sigma EM-140 DG 
Ruby bead, 1 mm diameter Meller Optics # MRB10MD
Safety Glasses 3M Fisher # 19-070-940
Scanning laser ophthalmoscope Heidelberg Engineering HRA2
Scissors, curved spring Roboz # RS-5681
Sharps container Fisher # 1482763
Shutter cord, remote Nikon MC-DC2
Spectral Domain OCT device Heidelberg Engineering Spectralis HRA&OCT https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf
Stainless steel ball bearing, 25.4 mm diameter McMaster-Carr # 9529K31
Tissue marking dye, black Cancer Diagnostics Inc # 0727-1
Tissue slicer blades Thomas Scientific # 6767C18
Trephine, 18-mm diameter Stratis Healthcare # 6718L
TV monitor (HDMI) and cord for digital camera B&H Photo Video BH # COHD18G6PROB for live viewing and remote camera display features
Wax, pink dental EMS  # 72670
Wooden applicators Puritan # 807-12

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Spaide, R. F., et al. Consensus nomenclature for reporting neovascular age-related macular degeneration data: Consensus on neovascular age-related macular degeneration nomenclature study group. Ophthalmology. 127 (5), 616-636 (2020).
  2. Spaide, R. F., Ooto, S., Curcio, C. A. Subretinal drusenoid deposits a.k.a. pseudodrusen. Survey of Ophthalmology. 63 (6), 782-815 (2018).
  3. Curcio, C. A., Zanzottera, E. C., Ach, T., Balaratnasingam, C., Freund, K. B. Activated retinal pigment epithelium, an optical coherence tomography biomarker for progression in age-related macular degeneration. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (6), 211-226 (2017).
  4. Cao, D., et al. Hyperreflective foci, OCT progression indicators in age-related macular degeneration, include transdifferentiated retinal pigment epithelium. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 62 (10), 34 (2021).
  5. Zanzottera, E. C., et al. Visualizing retinal pigment epithelium phenotypes in the transition to geographic atrophy in age-related macular degeneration. Retina. 36, S12-S25 (2016).
  6. Edwards, M. M., et al. Subretinal glial membranes in eyes with geographic atrophy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (3), 1352-1367 (2017).
  7. Zhang, Z., Shen, M. M., Fu, Y. Combination of AIBP, apoA-I, and aflibercept overcomes anti-VEGF resistance in neovascular AMD by inhibiting arteriolar choroidal neovascularization. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 63 (12), 2 (2022).
  8. Jiang, M., et al. Microtubule motors transport phagosomes in the RPE, and lack of KLC1 leads to AMD-like pathogenesis. Journal of Cell Biology. 210 (4), 595-611 (2015).
  9. Collin, G. B., et al. Disruption of murine Adamtsl4 results in zonular fiber detachment from the lens and in retinal pigment epithelium dedifferentiation. Human Molecular Genetics. 24 (24), 6958-6974 (2015).
  10. Curcio, C. A., Medeiros, N. E., Millican, C. L. The Alabama Age-related Macular Degeneration Grading System for donor eyes. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 39 (7), 1085-1096 (1998).
  11. Bastek, J. V., Siegel, E. B., Straatsma, B. R., Foos, R. Y. Chorioretinal juncture. Pigmentary patterns of the peripheral fundus. Ophthalmology. 89 (12), 1455-1463 (1982).
  12. Lewis, H., Straatsma, B. R., Foos, R. Y., Lightfoot, D. O. Reticular degeneration of the pigment epithelium. Ophthalmology. 92 (11), 1485-1495 (1985).
  13. Lewis, H., Straatsma, B. R., Foos, R. Y. Chorioretinal juncture. Multiple extramacular drusen. Ophthalmology. 93 (8), 1098-1112 (1986).
  14. Sarks, J. P., Sarks, S. H., Killingsworth, M. C. Evolution of geographic atrophy of the retinal pigment epithelium. Eye. 2 (5), 552-577 (1988).
  15. Sarks, J. P., Sarks, S. H., Killingsworth, M. C. Evolution of soft drusen in age-related macular degeneration. Eye. 8 (3), 269-283 (1994).
  16. Ghazi, N. G., Dibernardo, C., Ying, H. S., Mori, K., Gehlbach, P. L. Optical coherence tomography of enucleated human eye specimens with histological correlation: Origin of the outer "red line". American Journal of Ophthalmology. 141 (4), 719-726 (2006).
  17. Brown, N. H., et al. Developing SDOCT to assess donor human eyes prior to tissue sectioning for research. Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 247 (8), 1069-1080 (2009).
  18. Helb, H. M., et al. Clinical evaluation of simultaneous confocal scanning laser ophthalmoscopy imaging combined with high-resolution, spectral-domain optical coherence tomography. Acta Ophthalmologica. 88 (8), 842-849 (2010).
  19. Spaide, R. F., Curcio, C. A. Drusen characterization with multimodal imaging. Retina. 30 (9), 1441-1454 (2010).
  20. Naghavi, M., et al. From vulnerable plaque to vulnerable patient: a call for new definitions and risk assessment strategies: Part 1. Circulation. 108 (14), 1664-1672 (2003).
  21. Garcia-Garcia, H. M., Gonzalo, N., Regar, E., Serruys, P. W. Virtual histology and optical coherence tomography: from research to a broad clinical application. Heart. 95 (16), 1362-1374 (2009).
  22. Strouthidis, N. G., et al. Comparison of clinical and spectral domain optical coherence tomography optic disc margin anatomy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 50 (10), 4709-4718 (2009).
  23. Sarks, S. H. Ageing and degeneration in the macular region: A clinico-pathological study. British Journal of Ophthalmology. 60 (5), 324-341 (1976).
  24. Sura, A. A., et al. Measuring the contributions of basal laminar deposit and Bruch's membrane in age-related macular degeneration. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 61 (13), 19 (2020).
  25. Chen, L., Messinger, J. D., Kar, D., Duncan, J. L., Curcio, C. A. Biometrics, impact, and significance of basal linear deposit and subretinal drusenoid deposit in age-related macular degeneration. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 62 (1), 33 (2021).
  26. Litts, K. M., et al. Clinicopathological correlation of outer retinal tubulation in age-related macular degeneration. JAMA Ophthalmology. 133 (5), 609-612 (2015).
  27. Olsen, T. W., Feng, X. The Minnesota grading system of eye bank eyes for age-related macular degeneration. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 45 (12), 4484-4490 (2004).
  28. Mano, F., Sprehe, N., Olsen, T. W. Association of drusen phenotype in age-related macular degeneration from human eye-bank eyes to disease stage and cause of death. Ophthalmology Retina. 5 (8), 743-749 (2021).
  29. Age-related eye disease study research group. The Age-Related Eye Disease Study system for classifying age-related macular degeneration from stereoscopic color fundus photographs: The Age-Related Eye Disease Study Report Number 6. American Journal of Ophthalmology. 132 (5), 668-681 (2001).
  30. Arnold, J. J., Sarks, S. H., Killingsworth, M. C., Sarks, J. P. Reticular pseudodrusen. A risk factor in age-related maculopathy. Retina. 15 (3), 183-191 (1995).
  31. Olsen, T. W., Bottini, A. R., Mendoza, P., Grossniklausk, H. E. The age-related macular degeneration complex: linking epidemiology and histopathology using the Minnesota grading system (the inaugural Frederick C. Blodi Lecture). Transactions of the American Ophthalmological Society. 113, (2015).
  32. Owen, L. A., et al. The Utah protocol for postmortem eye phenotyping and molecular biochemical analysis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 60 (4), 1204-1212 (2019).
  33. Wang, J. J., et al. Ten-year incidence and progression of age-related maculopathy: The Blue Mountains Eye Study. Ophthalmology. 114 (1), 92-98 (2007).
  34. Joachim, N., Mitchell, P., Burlutsky, G., Kifley, A., Wang, J. J. The incidence and progression of age-related macular degeneration over 15 years: The Blue Mountains Eye Study. Ophthalmology. 122 (12), 2482-2489 (2015).
  35. Pang, C., Messinger, J. D., Zanzottera, E. C., Freund, K. B., Curcio, C. A. The onion sign in neovascular age-related macular degeneration represents cholesterol crystals. Ophthalmology. 122 (11), 2316-2326 (2015).
  36. Keilhauer, C. N., Delori, F. C. Near-infrared autofluorescence imaging of the fundus: Visualization of ocular melanin. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 47 (8), 3556-3564 (2006).
  37. Curcio, C. A., Saunders, P. L., Younger, P. W., Malek, G. Peripapillary chorioretinal atrophy: Bruch's membrane changes and photoreceptor loss. Ophthalmology. 107 (2), 334-343 (2000).
  38. Curcio, C. A. Imaging maculopathy in the post-mortem human retina. Vision Research. 45 (28), 3496-3503 (2005).
  39. Brinkmann, M., et al. Histology and clinical lifecycle of acquired vitelliform lesion, a pathway to advanced age-related macular degeneration. American Journal of Ophthalmology. 240, 99-114 (2022).
  40. Ramtohul, P., et al. Bacillary layer detachment: Multimodal imaging and histologic evidence of a novel optical coherence tomography terminology. Literature review and proposed theory. Retina. 41 (11), 2193-2207 (2021).
  41. Wilson, J. D., Foster, T. H. Mie theory interpretations of light scattering from intact cells. Optics Letters. 30 (18), 2442-2444 (2005).
  42. Ghazi, N. G., Green, W. R. Pathology and pathogenesis of retinal detachment. Eye. 16 (4), 411-421 (2002).
  43. Berlin, A., et al. Correlation of optical coherence tomography angiography of type 3 macular neovascularization with corresponding histology. JAMA Ophthalmology. 140 (6), 628-633 (2022).
  44. Berlin, A., et al. Histology of type 3 macular neovascularization and microvascular anomalies in anti-VEGF treated age-related macular degeneration. Ophthalmology Science. 3 (3), 100280 (2023).
  45. Schaal, K. B., et al. Outer retinal tubulation in advanced age-related macular degeneration: optical coherence tomographic findings correspond to histology. Retina. 35 (7), 1339-1350 (2015).
  46. Chen, L., et al. Histology and clinical imaging lifecycle of black pigment in fibrosis secondary to neovascular age-related macular degeneration. Experimental Eye Research. 214, 108882 (2022).
  47. Balaratnasingam, C., et al. Histologic and optical coherence tomographic correlations in drusenoid pigment epithelium detachment in age-related macular degeneration. Ophthalmology. 124 (1), 644-656 (2017).
  48. Curcio, C. A., et al. Subretinal drusenoid deposits in non-neovascular age-related macular degeneration: Morphology, prevalence, topography, and biogenesis model. Retina. 33 (2), 265-276 (2013).
  49. Owsley, C., et al. Biologically guided optimization of test target location for rod-mediated dark adaptation in age-related macular degeneration: ALSTAR2 baseline. Ophthalmology Science. 3 (2), 100274 (2023).
  50. Anderson, D. M. G., et al. The molecular landscape of the human retina and supporting tissues by high resolution imaging mass spectrometry. Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 31 (12), 2426-2436 (2020).
  51. Lee, J., Yoo, M., Choi, J. Recent advances in spatially resolved transcriptomics: challenges and opportunities. BMB Reports. 55 (3), 113-124 (2022).
  52. Diabetes. Alabama Public Health. , Available from: https://www.alabamapublichealth.gov/healthrankings/diabetes.html (2022).
  53. Francis, J. H., et al. Swept-source optical coherence tomography features of choroidal nevi. American Journal of Ophthalmology. 159 (1), 169-176 (2015).
  54. Inoue, M., Dansingani, K. K., Freund, K. B. Progression of age-related macular degeneration overlying a large choroidal vessel. Retina Cases Brief Reports. 10 (1), 22-25 (2016).
  55. Jaffe, G. J., et al. Imaging features associated with progression to geographic atrophy in age-related macular degeneration: CAM Report 5. Ophthalmology Retina. 5 (9), 855-867 (2021).

Tags

तंत्रिका विज्ञान अंक 195 नेत्र बैंकिंग बायोबैंकिंग ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी मल्टीमॉडल इमेजिंग उम्र से संबंधित मैकुलर अपघटन
<em>पूर्व विवो</em> उम्र से संबंधित मैकुलर अपघटन में अनुसंधान के लिए मानव दाता आंखों की ओसीटी-आधारित मल्टीमॉडल इमेजिंग
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Messinger, J. D., Brinkmann, M.,… More

Messinger, J. D., Brinkmann, M., Kimble, J. A., Berlin, A., Freund, K. B., Grossman, G. H., Ach, T., Curcio, C. A. Ex Vivo OCT-Based Multimodal Imaging of Human Donor Eyes for Research into Age-Related Macular Degeneration. J. Vis. Exp. (195), e65240, doi:10.3791/65240 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter