Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

אסטרטגיות כימות, הערכת כדאיות והדמיה עבור ביופילמים של Acinetobacter

Published: August 4, 2023 doi: 10.3791/65517
Automatic Translation
1,2, 3
1Korea Food Research Institute, 2Department of Food Biotechnology, Korea University of Science and Technology, 3Advanced Radiation Technology Institute, Korea Atomic Energy Research Institute

Summary

פרוטוקול זה מתאר את הכנת החיסון, כימות הביופילם על לוחות מיקרוטיטר באמצעות צבע סגול גבישי, הספירה בת קיימא בביופילמים והדמיה של ביופילמים של אסינטובקטר.

Abstract

Acinetobacter גורם זיהומים nosocomial היווצרות biofilm שלה יכול לתרום להישרדות על משטחים יבשים כגון סביבות בית חולים. לפיכך, כימות ביופילם והדמיה הן שיטות חשובות להערכת הפוטנציאל של זני Acinetobacter לגרום לזיהומים nosocomial. ניתן לכמת את הביופילמים הנוצרים על פני השטח של המיקרו-צלחת במונחים של נפח ומספרי תאים. נפחי ביופילם ניתנים לכימות על ידי צביעה באמצעות סגול קריסטל, שטיפה, עיכוב באמצעות אתנול, ולאחר מכן מדידת הצבע המסיס באמצעות קורא microplate. כדי לכמת את מספר התאים המשובצים בביופילמים, מגרדים את הביופילמים באמצעות מגרדי תאים, קוצרים במי מלח, נסערים במרץ בנוכחות חרוזי זכוכית, ומפוזרים על אגר Acinetobacter. לאחר מכן, הצלחות מודגרות ב 30 ° C במשך 24-42 שעות. לאחר הדגירה, המושבות האדומות נמנות כדי להעריך את מספר התאים בביופילמים. שיטת ספירה בת קיימא זו יכולה להיות שימושית גם לספירת תאי Acinetobacter בביופילמים של מינים מעורבים. ניתן להמחיש ביופילמים של Acinetobacter באמצעות צבעים פלואורסצנטיים. מיקרו-צלחת זמינה מסחרית המיועדת לניתוח מיקרוסקופי משמשת ליצירת ביופילמים. לאחר מכן, הביופילמים המחוברים לפני השטח התחתונים מוכתמים בצבעי יודיד SYTO9 ופרופידיום, נשטפים, ואז מוצגים באמצעות מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי.

Introduction

Acinetobacter ידוע לגרום זיהומים nosocomial, זיהום אנושי שלה, במיוחד במתקני בריאות, מדווח יותר ויותר1. היא נפוצה בבתי חולים, מתקני בריאות וסביבות הקשורות למזון 2,3,4. הוא יכול לשרוד תקופה ארוכה בסביבות הכוללות משטחי בית חולים כגון מעקות מיטה, שולחנות ליד המיטה, משטח של מכונות הנשמה וכיורים4. התמדה כזו על משטחים סביבתיים עשויה להיות אחד הגורמים המשמעותיים התורמים לזיהומים נוסוקומיאליים של Acinetobacter4.

ביופילם הוא צורה של חיים מיקרוביאליים והוא מטריצה מיקרוביאלית המורכבת מתאים מיקרוביאליים חיים וחומרים פולימריים חוץ-תאיים (EPS) מהתאים5. התאים המיקרוביאליים מוטמעים במטריצה ולעתים קרובות עמידים מאוד לעקות סביבתיות כגון חום, מלחים, יובש, אנטיביוטיקה, חומרי חיטוי וכוחות גזירה 6,7.

Acinetobacter יכול ליצור ביופילמים על משטחים, דבר המצביע על כך שהוא עשוי לתרום להישרדות ממושכת על משטחים סביבתיים, כולל משטחי בתי חולים, ועמידות משופרת לטיפול אנטיביוטי 8,9. בנוסף, היווצרות ביופילם של Acinetobacter יכול להיות קשור מאוד עם תוצאות קליניות אנושיות8. לכן, היווצרות הביופילם של זני Acinetobacter יכולה להיות אחד המדדים בניבוי הישרדות סביבתית וזיהומים אנושיים 8,10.

ניתן לכמת ולהמחיש את הביופילמים המחוברים לפני השטח כדי להעריך את היווצרות הביופילם. כדי לכמת ביופילמים המחוברים לפני השטח, הביופילמים מוכתמים בדרך כלל על ידי צבעים מכתימי ביופילם כגון סגול גבישי, והצבעים מדוללים בתמיסה ונמדדים עבור צפיפות אופטית11. הדמיה של ביופילמים היא גישה טובה נוספת להערכת היווצרות ביופילם11. שיטת הדמיה של מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי (CLSM) המשתמשת בספציפיות באמצעות צבעים פלואורסצנטיים יכולה להיות שימושית יותר לאפיון מורפולוגיית ביופילם בהשוואה לטכניקות אחרות כגון SEM12,13.

ניתן לספור את התאים הקיימים בביופילמים כדי להעריך את מספר התאים הקיימים בביופילמים11. התאים בני הקיימא המשובצים בביופילמים מנותקים, מדוללים, מפוזרים על לוחות אגר, מודגרים וממוספרים. מכיוון שמספר התאים הגבוה יותר צפוי לעמוד במינון הזיהומי, הוא יכול לספק מידע מפורט יותר על ביופילמים, כגון פוטנציאלי זיהום הקשורים למספר התאים13,14.

מאמר זה מציג פרוטוקולים שלב אחר שלב כדי (1) לכמת ביופילמים המחוברים לפני השטח, (2) לספור תאים ברי קיימא בביופילמים, ו-(3) לדמיין את הביופילמים באמצעות CLSM של Acinetobacter. הפרוטוקולים המוצגים מתארים את השיטות להעריך את כושר הביופילם של מבודדי Acinetobacter ולאפיין את הביופילמים שלהם.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. הכנת חיסון חיידקי

  1. הסר את בקבוקון מלאי הגליצרול המאוחסן ב -80 ° C.
  2. מוציאים את זן החיידק (2-10 μL) מהבקבוקון בעזרת קצה פיפטה סטרילי.
    הערה: זני Acinetobacter , A. bouvetii (13-1-1), A. junii (13-1-2), A. pittii (13-2-5), A. baumannii (13-2-9), A. radioresistens (20-1) ו- A. ursingii (24-1 ) משמשים בפרוטוקול זה.
  3. יש לחסן צלחת אגר דם מסחרית (אגר סויה טריפטי בתוספת דם כבשים 5%, ראו טבלת חומרים) עם החיידקים.
    הערה: ניתן להשתמש גם במדיה אחרת, כגון אגר מזין או אגר MacConkey.
  4. פזרו את משטח האגר באמצעות לולאה סטרילית עם להבה לסירוגין כדי לדלל אותו.
  5. מניחים את צלחת האגר הפוכה באינקובטור ודגרים בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס למשך לילה למשך 20-24 שעות.
  6. בחר מושבה אחת של תרבית חיידקים עם מחט סטרילית וחסן 5 מ"ל סטרילי של מרק עירוי לב במוח (BHI, ראה טבלת חומרים) עם התרבית.
  7. לדגור על המרק המחוסן באינקובטור רועד ב 30 מעלות צלזיוס במשך הלילה במשך 20-24 שעות בסביבות 150 סל"ד.
  8. העבירו 1 מ"ל של תרבית הלילה לצינור מיקרוצנטריפוגה סטרילי וצנטריפוגה את תרבית הלילה ב 6,000 × גרם למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר (RT).
  9. מוציאים את הסופרנאטנט עם פיפטה.
  10. באמצעות מערבולת, להשהות מחדש את הגלולה במי מלח סטריליים חוצצים פוספט (PBS) 1 מ"ל.
  11. צנטריפוגה ב 6,000 × גרם למשך 10 דקות ב RT ולהסיר את supernatant.
  12. יש להשהות מחדש את הגלולה ב-BHI סטרילי מדולל פי עשרה באמצעות מערבולת לצפיפות אופטית של כ-0.1 ב-600 ננומטר.
    הערה: הצפיפות האופטית של כ-0.1 שקולה לכ-107 CFU/מ"ל.

2. כימות ביופילם באמצעות סגול קריסטלי

  1. הוסף 200 μL inoculum לכל באר של צלחת פוליסטירן סטרילית 96 בארות (ראה טבלת חומרים) והוסף 200 μL מים deionized לכל אחת הבארות החיצוניות ביותר כדי למנוע את הבארות הפנימיות להתייבש15.
  2. הוסף 200 μL BHI מדולל פי עשרה לכל באר של אותה צלחת כמו בקרה שלילית.
  3. לדגור את הצלחת ב 25 ° C במשך 24 שעות.
  4. מוציאים את הסופרנאטנט עם פיפטה.
    הערה: פיפטה רב-ערוצית היא לעתים קרובות נוחה יותר עבור דגימות מרובות.
  5. בזהירות להוסיף 300 μL PBS לכל באר ולהסיר את supernatant עם פיפטה.
    הערה: פיפטה רב-ערוצית היא לעתים קרובות נוחה יותר עבור דגימות מרובות.
  6. חזור על שלב 2.5 פעמיים נוספות.
  7. הוסיפו 200 μL תמיסה סגולה קריסטלית (1%) (ראו טבלת חומרים) לכל באר ודגרו ב-RT במשך 30 דקות.
  8. חזור על שלבים 2.4-2.6.
  9. מוסיפים 200 μL של אתנול מוחלט לכל באר ודגרים במשך 15 דקות ב-RT. מערבבים היטב על ידי פיטום למעלה ולמטה מספר פעמים.
  10. מעבירים 100 μL elution מכל באר לצלחת חדשה של 96 בארות.
  11. מדוד את הספיגה ב- 595 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-צלחות (ראה טבלת חומרים).
  12. כאשר הספיגה עולה על 2.0, בצע דילול תקין של הדגימה לספיגה מתחת ל-2.0 באתנול מוחלט ומדוד אותה כמו בשלב 2.11. לאחר מכן, חשב את ספיגת המדגם (הערך הסופי) על ידי הכפלת הערך הנצפה בגורם הדילול.
  13. חישוב הספיגה האמיתית של הדגימות על ידי הפחתת הערך הממוצע של הבקרה השלילית מהערך של כל באר של דגימות הבדיקה על אותה צלחת באר.

3. ספירת כדאיות ביופילם

  1. מוסיפים 1 מ"ל אינוקולום (שלב 1) לכל באר של צלחת פוליסטירן סטרילית 12 בארות15. לדגור את הצלחת ב 25 ° C במשך 24 שעות. מוציאים את הסופרנאטנט עם פיפטה.
  2. בזהירות להוסיף 1.5 מ"ל PBS סטרילי לכל באר ולהסיר את supernatant עם פיפטה. הוסף 1 מ"ל PBS סטרילי לכל באר.
  3. יש לגרד את משטחי הקיר התחתונים והקירות של הבאר באמצעות מגרדי תאים מותאמים.
  4. העבירו את תרחיף התאים שנקטף לצינור פלסטיק סטרילי (10-1) המכיל 9 מ"ל מלוחים (0.85% NaCl) ו-10-20 חרוזי זכוכית (ראו טבלת חומרים).
    הערה: כדי לאסוף שאריות פסולת ביופילם שנותרו על פני השטח התחתונים של הבאר, ניתן להשהות אותה מחדש ולהעביר אותה באמצעות פיפטה באמצעות מי מלח מצינור 10-1 .
  5. מערבל את הצינור 10-1 במשך 60 שניות במהירות מקסימלית.
  6. בצע דילול סדרתי פי 10 על ידי העברת 1 מ"ל לצינור הסטרילי הבא (10-2) המכיל 9 מ"ל מלח (0.85% NaCl) עד 10-7.
  7. מורחים 100 μL מכל דילול על אגר Acinetobacter (ראה טבלת חומרים) ודגרים על צלחות האגר בטמפרטורה של 30°C למשך 24-42 שעות.
  8. ספור את מספר המושבות האדומות הטיפוסיות על כל לוח באופן ידני בטווח שבין 10 ל- 250.
  9. חשב את מספר התאים בני קיימא בביופילם של כל באר באמצעות המשוואה הבאה:
    תאים בני קיימא = מספר מושבות × גורמי דילול × 10

4. הדמיית ביופילם באמצעות מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי (CLSM)

  1. הוסף 200 μL inoculum לכל באר של צלחת סטרילית 96 בארות המיועדת לניתוח מיקרוסקופי.
  2. לדגור את הצלחת ב 25 ° C במשך 24 שעות.
  3. מוציאים את הסופרנאטנט עם פיפטה.
  4. מוסיפים בזהירות 300 μL מים מעוקרים בסינון לכל באר ומסירים את הסופרנאטנט עם פיפטה.
  5. חזור על שלב 4.4.
  6. הכינו את התערובת של SYTO 9 ופרופידיום יודיד (ראו טבלת חומרים) מדוללים במים מעוקרים בסינון לריכוז סופי של 10 מיקרומטר ו-60 מיקרומטר, בהתאמה.
  7. מוסיפים את התערובת לכל באר ב 200 μL ודגרים על הצלחת במשך 20-30 דקות ב RT בחושך.
  8. חזור על שלבים 4.3-4.4
  9. דמיינו את הביופילמים המחוברים לפני השטח התחתונים באמצעות CLSM עם אורך גל עירור של 488 ננומטר ו-561 ננומטר וטווח אורכי גל הפליטה של 499-535 ננומטר ו-568-712 ננומטר, בהתאמה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

בעקבות הפרוטוקול, הביופילמים של Acinetobacter isolates, שבודדו במקור ממשטחי מטבח, נוצרו על צלחת פוליסטירן בעלת 96 בארות, מוכתמת בסגול קריסטל, והצבעים היו מסיסים באתנול ונמדדו למסת ביופילם (איור 1). מספר הביופילמים השתנה מאוד בהתאם לזנים שנעו בין OD 0.04 ל-1.69 (איור 1). בהתבסס על הקריטריונים שנקבעו על ידי סטפנוביץ' ואחרים 16, כל המבודדים למעט A. bouvetii יצרו ביופילמים. A. radioresistens יצר ביופילם חלש. A. junii ו- A. baumannii יצרו ביופילמים מתונים, בעוד A. pittii ו- A. ursingii יצרו ביופילמים חזקים.

כדי לספור תאים בני קיימא בביופילמים, הביופילמים נגרדו באמצעות מגרדי תאים, מערבלים במהירות גבוהה, מדוללים ומתפשטים על לוחות הסלקטיביים של Acinetobacter . לאחר הדגירה ספרו את מספר המושבות כדי להעריך את מספר תאי הביופילם (איור 2). לכל המבודדים, למעט A. bouvetii , היו תאים שווי ערך ל-7-8 Log CFU בביופילמים שלהם. בהתאם לתכונה הלא יוצרת של ביופילם שהוצגה על ידי בדיקת קריסטל סגול, A. bouvetii היה בעל רמה נמוכה בהרבה של מספר התא ב 4.4 Log CFU.

הביופילמים המחוברים לפני השטח התחתונים הודגמו באמצעות CLSM (איור 3). כמות משמעותית של ביופילם נמצאה ב- A. junii, A. baumannii ו- A. ursingii עם מורפולוגיות ביופילם שונות. בעוד A. pittii היה ביופילם חזק לשעבר בבדיקה סגולה קריסטלית, הוא לא יצר הרבה ביופילם על פני השטח התחתונים.

Figure 1
איור 1: מדידת מסת ביופילם של Acinetobacter שנוצר על צלחת פוליסטירן 96 בארות באמצעות בדיקה סגולה קריסטלית. קווי השגיאה מייצגים את סטיית התקן משילוש. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 2
איור 2: ספירות בנות קיימא של ביופילמים של Acinetobacter שנוצרו על צלחת פוליסטירן בעלת 12 בארות. קווי השגיאה מייצגים את סטיית התקן מהכפול. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 3
איור 3: ביופילמים של Acinetobacter המחוברים לפני השטח התחתונים שנוצרו על צלחת של 96 בארות שהודמיינו על-ידי CLSM באמצעות צבעי SYTO 9 ו-propidium iodide. פסי קנה מידה: 50 מיקרומטר. לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

באמצעות הפרוטוקול המתואר, היווצרות הביופילם של מבודדי Acinetobacter בדרגות שונות נמדדה, הודגמה, והוערכו התאים הקיימים בביופילמים (איור 1, איור 2 ואיור 3).

בפרוטוקול זה נעשה שימוש בשתי טמפרטורות שונות, 30 מעלות צלזיוס לגידול ו-25 מעלות צלזיוס ליצירת ביופילם של אצינטובקטר. 30 ° C שימש כי מחקרים רבים השתמשו יותר מ 30 ° C עבור הצמיחה האופטימלית של Acinetobacter, אשר יהיה מתאים כדי לקבל מספיק חיסון12,13,14,17. עם זאת, טמפרטורה זו בדרך כלל גבוהה יותר מהטמפרטורות של הסביבה שבה תתרחש היווצרות ביופילם, כגון משטחי בתי חולים או סביבות עיבוד מזון. לכן, 25 מעלות צלזיוס שימשו ליצירת ביופילם, אשר ידמה את התנאים הסביבתיים האלה יותר.

פרוטוקול זה השתמש ב-BHI מדולל פי 10 במקום BHI המקורי ליצירת ביופילמים (שלב 1.12). משטחים רבים, כגון משטחי בתי חולים או סביבות עיבוד מזון, צפויים להיות דלי חומרים מזינים18,19. בנוסף, מיקרואורגניזמים על המשטחים המזוהמים נשארים על המשטחים לאחר הניקוי ומתמידים בתנאים התזונתיים הנמוכים20. לכן, תנאים דלי חומרים מזינים כגון BHI מדולל פי 10 רצויים יותר מתנאים עתירי חומרים מזינים כגון BHI המקורי.

בדיקת סגול קריסטלי היא שיטה מקובלת ומבוססת היטב למדידת מסת ביופילם, ומחקר זה הראה כי ניתן להבחין ביכולת הביופילם של Acinetobacter ברמות שונות באמצעות שיטה זו.

ספירה בת-קיימא בביופילם חשובה גם משום שהתאים הקיימים בביופילמים אחראים לזיהומים אנושיים שסביר יותר שיתרחשו על ידי מספר גבוה יותר של תאים21. נוסף על כך, ספירה בת-קיימא עשויה להיות כלי טוב להבחין בין יצרני ביופילמים גרועים, כפי שהודגם ב-A. bouvetii וב-A. radioresistens (איור 1 ואיור 2). הספירה המעשית של A. radioresistens הייתה גבוהה בהרבה מזו של A. bouvetii, בעוד שהבדל קטן נמצא במסת הביופילם, מה שמרמז על פוטנציאל גבוה יותר של זיהום על-ידי A. radioresistens (איור 1 ואיור 2). כמו כן, שיטה זו יכולה לשמש כדי להעריך את חלקם של Acinetobacter בביופילמים מרובי מינים, אשר נפוץ יותר בסביבה.

Acinetobacter יוצר ביופילם לא רק על פני השטח התחתונים אלא גם על דופן הצד, במיוחד בממשק אוויר-נוזל בצינורות17,22. ניתוח CLSM באמצעות לוח מיקרוטיטר מוגבל לביופילמים המחוברים למשטח התחתון, מה שמקשה לפעמים להשוות לתוצאות על ידי בדיקת קריסטל סגול, המודד את כל המשטחים השקועים, כולל משטחי הקיר. כמות משמעותית של ביופילם בממשק אוויר-נוזל נמצאה גם במבודדים אלה, במיוחד במפיק הביופילם החזק, A. pittii. הוא יצר ביופילם דל יחסית על פני השטח התחתונים בהשוואה למבודדים אחרים (איור 3). לכן, יש לפתח עוד יותר טכניקת ניתוח מיקרוסקופית כדי לדמיין את הביופילמים שנוצרו בדופן הצד.

במחקר זה, שלוש בדיקות שונות, סגול גבישי, ספירה בת קיימא ו- CLSM, שימשו לאפיון הביופילמים של Acinetobacter. בדיקת קריסטל סגול היא השיטה המבוססת לכימות ביופילמים, והקריטריונים לקביעת היווצרות ביופילם קיימים16. עם זאת, הוא מודד לא רק תאים חיים ו- EPS אלא גם תאים מתים, שהם פחות משמעותיים במונחים של זיהום אנושי ואלימות. התאים החיים בביופילמים ניתנים למדידה בשיטת הספירה בת קיימא. עם זאת, לא ניתן לקבוע את יכולת היצירה של ביופילם באמצעות שיטת הספירה הבת קיימא מכיוון ששיטה זו אינה מודדת EPS, מרכיב קריטי במבנה הביופילם. לכן, לשיטה זו אין את הקריטריונים או ערך החיתוך כדי לקבוע את יכולת היצירה של ביופילם. בנוסף, שיטת הספירה הבת קיימא מודדת רק את יכולת הטיפוח של התאים ואינה מודדת את התאים תחת "מצב בר-קיימא אך לא ניתן לטיפוח"11. נוכחותם של ביופילמים יכולה להיות מאושרת על ידי שיטת CLSM, אשר מדמיין ביופילמים ביעילות. עם זאת, הוא מודד רק ביופילמים המחוברים לפני השטח התחתונים, אם כי ביופילמים נוצרים לעתים קרובות גם על הדפנות. לכן, מומלץ להשתמש בבדיקת קריסטל סגול כדי לקבוע את כושר הביופילם. לאחר מכן, ניתן לכמת את התאים החיים והתרבותיים בביופילמים באמצעות שיטת הספירה בת הקיימא, וניתן לאשר או לאפיין את הביופילמים המחוברים לפני השטח התחתונים באמצעות שיטת CLSM.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgments

מחקר זה נתמך על ידי תוכנית המחקר העיקרית (E0210702-03) של המכון לחקר המזון של קוריאה (KFRI), במימון משרד המדע והתקשוב.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
96-well cell culture plate SPL 30096 Polystyrene 96-well plate
BHI (Brain Heart Infusion) broth Merck KGaA 1.10493.0500
Blood Agar Base Plate KisanBio MB-B1005-P50 Growth media for Acinetobacter
CHROMagar Acinetobacter CHROMagar AC092 Selective plate for Acinetobacter
Crystal violet solution Sigma-Aldrich V5265
Filmtracer LIVE/DEAD biofilm viability kit Invitrogen L10316 SYTO9 and propidium iodide
Microplate reader Tecan Infinite M200 PRO NanoQuant Biofilm measurement
RBC Glass Plating Beads RBC RG001 Glass beads
μ-Plate 96 Well Black ibidi 89621 Microplate intended for CLSM

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Wong, D., et al. Clinical and pathophysiological overview of Acinetobacter infections: a century of challenges. Clinical Microbiology Reviews. 30 (1), 409-447 (2017).
  2. Carvalheira, A., Silva, J., Teixeira, P. Acinetobacter spp. in food and drinking water - A review. Food Microbiology. 95, 103675 (2021).
  3. Towner, K. J. Acinetobacter: an old friend, but a new enemy. Journal of Hospital Infection. 73 (4), 355-363 (2009).
  4. Weber, D. J., Rutala, W. A., Miller, M. B., Huslage, K., Sickbert-Bennett, E. Role of hospital surfaces in the transmission of emerging health care-associated pathogens: Norovirus, Clostridium difficile, and Acinetobacter species. American Journal of Infection Control. 38 (5), S25-S33 (2010).
  5. Flemming, H. C., et al. The biofilm matrix: multitasking in a shared space. Nature Reviews Microbiology. 21 (2), 70-86 (2023).
  6. Flemming, H. C., et al. Biofilms: an emergent form of bacterial life. Nature Reviews Microbiology. 14 (9), 563-575 (2016).
  7. Yin, W., Wang, Y., Liu, L., He, J. Biofilms: the microbial "protective clothing" in extreme environments. International Journal of Molecular Sciences. 20 (14), 3423 (2019).
  8. Gedefie, A., et al. Acinetobacter baumannii biofilm formation and its role in disease pathogenesis: a review. Infection and drug resistance. 14, 3711-3719 (2021).
  9. Whiteway, C., Breine, A., Philippe, C., Van der Henst, C. Acinetobacter baumannii. Trends in Microbiology. 30 (2), 199-200 (2022).
  10. Longo, F., Vuotto, C., Donelli, G. Biofilm formation in Acinetobacter baumannii. New Microbiologica. 37 (2), 119-127 (2014).
  11. Azeredo, J., et al. Critical review on biofilm methods. Critical Reviews in Microbiology. 43 (3), 313-351 (2017).
  12. Jia, J., Xue, X., Guan, Y., Fan, X., Wang, Z. Biofilm characteristics and transcriptomic profiling of Acinetobacter johnsonii defines signatures for planktonic and biofilm cells. Environmental Research. 213, 113714 (2022).
  13. Yang, C., Su, P., Moi, S., Chuang, L. Biofilm formation in Acinetobacter baumannii: genotype-phenotype correlation. Molecules. 24 (10), 1849 (2019).
  14. Alamri, A. M., Alsultan, A. A., Ansari, M. A., Alnimr, A. M. Biofilm-formation in clonally unrelated multidrug-resistant Acinetobacter baumannii isolates. Pathogens. 9 (8), 630 (2020).
  15. Lim, E. S., Nam, S. J., Koo, O. K., Kim, J. S. Protective role of Acinetobacter and Bacillus for Escherichia coli O157:H7 in biofilms against sodium hypochlorite and extracellular matrix-degrading enzymes. Food Microbiology. 109, 104125 (2023).
  16. Stepanović, S., Ćirković, I., Ranin, L., Svabić-Vlahović, M. Biofilm formation by Salmonella spp. and Listeria monocytogenes on plastic surface. Letters in Applied Microbiology. 38 (5), 428-432 (2004).
  17. Boone, R. L., et al. Analysis of virulence phenotypes and antibiotic resistance in clinical strains of Acinetobacter baumannii isolated in Nashville, Tennessee. BMC Microbiology. 21 (1), 21 (2021).
  18. Otter, J. A., et al. Surface-attached cells, biofilms and biocide susceptibility: implications for hospital cleaning and disinfection. Journal of Hospital Infection. 89 (1), 16-27 (2015).
  19. Ravishankar, S., Juneja, V. K. Adaptation or resistance responses of microorganisms to stresses in the food processing environment. Microbial Stress Adaptation and Food Safety. Yousef, A. E., Juneja, V. K. , (2003).
  20. Dewanti, R., Wong, A. C. L. Influence of culture conditions on biofilm formation by Escherichia coli O157:H7. International Journal of Food Microbiology. 26 (2), 147-164 (1995).
  21. McConnell, M. J., Actis, L., Pachón, J. Acinetobacter baumannii: human infections, factors contributing to pathogenesis and animal models. FEMS Microbiology Reviews. 37 (2), 130-155 (2013).
  22. McQueary, C. N., Actis, L. A. Acinetobacter baumannii biofilms: variations among strains and correlations with other cell properties. The Journal of Microbiology. 49 (2), 243-250 (2011).

Tags

כימות הערכת כדאיות ויזואליזציה ביופילמים של אצינטובקטר זיהומים נוסוקומיאליים משטחים יבשים סביבות בתי חולים היווצרות ביופילם צביעה סיגלית קריסטל קורא מיקרופלטות מספרי תאים מגרדי תאים מלח חרוזי זכוכית אגר אסינטובקטר שיטת ספירה בת קיימא מושבות אדומות ביופילמים של מינים מעורבים צבעים פלואורסצנטיים אנליזה מיקרוסקופית צבע SYTO9 צבע יודיד פרופידיום מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי
אסטרטגיות כימות, הערכת כדאיות והדמיה עבור ביופילמים של <em>Acinetobacter</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Kim, J. S., Lim, J. Quantification,… More

Kim, J. S., Lim, J. Quantification, Viability Assessment, and Visualization Strategies for Acinetobacter Biofilms. J. Vis. Exp. (198), e65517, doi:10.3791/65517 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter