Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Kvantifisering, levedyktighetsvurdering og visualiseringsstrategier for Acinetobacter biofilmer

Published: August 4, 2023 doi: 10.3791/65517
Automatic Translation
1,2, 3
1Korea Food Research Institute, 2Department of Food Biotechnology, Korea University of Science and Technology, 3Advanced Radiation Technology Institute, Korea Atomic Energy Research Institute

Summary

Denne protokollen beskriver fremstillingen av inokulumet, biofilmkvantifiseringen på mikrotiterplater ved bruk av krystallfiolett fargestoff, levedyktig telling i biofilmer og visualisering av biofilmer av Acinetobacter.

Abstract

Acinetobacter forårsaker nosokomiale infeksjoner, og biofilmdannelsen kan bidra til overlevelse på tørre overflater som sykehusmiljøer. Dermed er biofilmkvantifisering og visualisering viktige metoder for å vurdere potensialet til Acinetobacter-stammer for å forårsake nosokomiale infeksjoner. Biofilmene som dannes på overflaten av mikroplaten kan kvantifiseres når det gjelder volum og cellenummer. Biofilmvolumer kan kvantifiseres ved farging med krystallfiolett, vasking, avfarging ved bruk av etanol, og deretter måle det oppløselige fargestoffet ved hjelp av en mikroplateleser. For å kvantifisere antall celler som er innebygd i biofilmene, blir biofilmene skrapt av ved hjelp av celleskrapere, høstet i saltvannet, kraftig omrørt i nærvær av glassperler og spredt på Acinetobacter-agar. Deretter inkuberes platene ved 30 °C i 24-42 timer. Etter inkubering er de røde koloniene oppregnet for å estimere antall celler i biofilmer. Denne levedyktige tellemetoden kan også være nyttig for å telle Acinetobacter-celler i biofilm med blandede arter. Acinetobacter biofilmer kan visualiseres ved hjelp av fluorescerende fargestoffer. En kommersielt tilgjengelig mikroplate designet for mikroskopisk analyse brukes til å danne biofilmer. Deretter blir de bunnflatefestede biofilmene farget med SYTO9 og propidiumjodidfarger, vasket og deretter visualisert med konfokal laserskanningsmikroskopi.

Introduction

Acinetobacter er kjent for å forårsake nosokomiale infeksjoner, og dets menneskelige infeksjon, spesielt i helseinstitusjoner, rapporteres i økende grad1. Det er utbredt på sykehus, helseinstitusjoner og matassosierte miljøer 2,3,4. Den kan overleve i lang tid i miljøer, inkludert sykehusoverflater som sengeskinner, nattbord, overflaten på ventilatorer og vasker4. Slik persistens på miljøoverflater kan være en av de viktigste faktorene som bidrar til nosokomiale infeksjoner av Acinetobacter4.

Biofilm er en form for mikrobielt liv og er en mikrobiell matrise sammensatt av levende mikrobielle celler og ekstracellulære polymere stoffer (EPS) fra cellene5. De mikrobielle cellene er innebygd i matrisen og er ofte svært motstandsdyktige mot miljøbelastninger som varme, salter, tørrhet, antibiotika, desinfeksjonsmidler og skjærkrefter 6,7.

Acinetobacter kan danne biofilm på overflater, noe som tyder på at det kan bidra til utvidet overlevelse på miljøoverflater, inkludert sykehusoverflater, og økt motstand mot antibiotikabehandling 8,9. I tillegg kan biofilmdannelsen av Acinetobacter være sterkt assosiert med humane kliniske utfall8. Derfor kan biofilmformbarheten til Acinetobacter-stammer være en av indikatorene for å forutsi miljøoverlevelse og menneskelige infeksjoner 8,10.

De overflatefestede biofilmene kan kvantifiseres og visualiseres for å vurdere formbarheten av biofilm. For å kvantifisere overflatefestede biofilmer, blir biofilmene normalt farget av biofilmfargestoffer som krystallfiolett, og fargestoffene elueres i oppløsning og måles for optisk tetthet11. Visualisering av biofilm er en annen god tilnærming for å vurdere biofilmens formbarhet11. Konfokal laserskanningsmikroskopi (CLSM) visualiseringsmetode som bruker spesifisitet ved bruk av fluorescerende fargestoffer, kan være mer nyttig for å karakterisere biofilmmorfologi sammenlignet med andre teknikker som SEM12,13.

De levedyktige cellene i biofilm kan telles for å estimere antall levedyktige celler i biofilm11. De levedyktige cellene innebygd i biofilmer er frittstående, fortynnet, spredt på agarplater, inkubert og oppregnet. Fordi det høyere antall celler sannsynligvis vil møte den smittsomme dosen, kan den gi mer detaljert informasjon om biofilmer, for eksempel infeksjonspotensialer forbundet med antall celler13,14.

Denne artikkelen presenterer trinnvise protokoller for å (1) kvantifisere overflatefestede biofilmer, (2) telle levedyktige celler i biofilmene, og (3) visualisere biofilmene ved hjelp av CLSM av Acinetobacter. De presenterte protokollene beskriver metodene for å vurdere biofilmformbarheten til Acinetobacter-isolater og karakterisere deres biofilmer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Fremstilling av bakteriell inokulum

  1. Fjern hetteglasset med glyserollager som er oppbevart ved -80 °C.
  2. Fjern bakteriestammen (2-10 μL) fra hetteglasset ved hjelp av en steril pipettespiss.
    MERK: Acinetobacter-stammer , A. bouvetii (13-1-1), A. junii (13-1-2), A. pittii (13-2-5), A. baumannii (13-2-9), A. radioresistens (20-1) og A. ursingii (24-1) brukes i denne protokollen.
  3. Inokuler en kommersielt tilgjengelig blodagarplate (tryptisk soyaagar supplert med 5% saueblod, se materialtabell) med bakteriene.
    MERK: Andre medier, for eksempel næringsagar eller MacConkey agar, kan også brukes.
  4. Strek agaroverflaten med en steril sløyfe med periodisk flamming for å tynne den ut.
  5. Legg agarplaten opp ned i en kuvøse og rug ved 30 °C over natten i 20-24 timer.
  6. Velg en enkelt koloni av bakteriekulturen med en steril nål og inokuler 5 ml steril hjernehjerteinfusjonsbuljong (BHI, se materialfortegnelse) med kulturen.
  7. Inkuber den inokulerte buljongen i en ristende inkubator ved 30 °C over natten i 20-24 timer ved rundt 150 o / min.
  8. Overfør 1 ml av dyrkingen over natten til et sterilt mikrosentrifugerør og sentrifuger nattkulturen ved 6000 × g i 10 minutter ved romtemperatur (RT).
  9. Fjern supernatanten med en pipette.
  10. Bruk en virvel til å resuspendere pelleten i 1 ml sterilt fosfatbufret saltvann (PBS).
  11. Sentrifuge ved 6000 × g i 10 min ved RT og fjern supernatanten.
  12. Resuspender pelleten i steril ti ganger fortynnet BHI ved hjelp av virvel til en optisk tetthet på rundt 0,1 ved 600 nm.
    MERK: Den optiske tettheten på rundt 0,1 tilsvarer omtrent 107 CFU / ml.

2. Biofilmkvantifisering ved bruk av krystallfiolett

  1. Tilsett 200 μL inokulum til hver brønn i en steril polystyren 96-brønnsplate (se materialfortegnelse) og tilsett 200 μL avionisert vann til hver av de ytterste brønnene for å forhindre at de indre brønnene tørker ut15.
  2. Tilsett 200 μL ti ganger fortynnet BHI til hver brønn på samme plate som en negativ kontroll.
  3. Inkuber platen ved 25 °C i 24 timer.
  4. Fjern supernatanten med en pipette.
    MERK: Flerkanals pipette er ofte mer praktisk for flere prøver.
  5. Tilsett forsiktig 300 μL PBS til hver brønn og fjern supernatanten med en pipette.
    MERK: Flerkanals pipette er ofte mer praktisk for flere prøver.
  6. Gjenta trinn 2.5 to ganger til.
  7. Tilsett 200 μL krystallfiolett løsning (1%) (se materialfortegnelse) til hver brønn og inkuber ved RT i 30 min.
  8. Gjenta trinn 2.4-2.6.
  9. Tilsett 200 μL absolutt etanol til hver brønn og inkuber i 15 minutter ved RT. Bland grundig ved å pipettere opp og ned flere ganger.
  10. Overfør 100 μL eluering fra hver brønn til en ny 96-brønns plate.
  11. Mål absorbansen ved 595 nm ved hjelp av en mikroplateleser (se Materialfortegnelse).
  12. Når absorbansen overstiger 2,0, gjør en riktig fortynning av prøven til absorbansen under 2,0 i absolutt etanol og mål den som i trinn 2.11. Deretter beregner du absorbansen av prøven (sluttverdien) ved å multiplisere den observerte verdien med fortynningsfaktoren.
  13. Beregn den sanne absorbansen av prøvene ved å trekke gjennomsnittsverdien av den negative kontrollen fra verdien av hver brønn i testprøvene på samme brønnplate.

3. Biofilm levedyktighet teller

  1. Tilsett 1 ml inokulum (trinn 1) til hver brønn av en steril polystyren 12-brønnsplate15. Inkuber platen ved 25 °C i 24 timer. Fjern supernatanten med en pipette.
  2. Tilsett forsiktig 1,5 ml steril PBS til hver brønn og fjern supernatanten med en pipette. Tilsett 1 ml steril PBS til hver brønn.
  3. Skrap av bunnen og veggflatene på brønnen ved hjelp av monterte celleskrapere.
  4. Overfør den høstede cellesuspensjonen til et sterilt plastrør (10-1) inneholdende 9 ml saltvann (0,85% NaCl) og 10-20 glassperler (se materialfortegnelse).
    MERK: For å samle eventuelle gjenværende biofilmrester som er igjen på bunnen av brønnen, kan den resuspenderes og overføres med pipette ved hjelp av saltvann fra 10-1-røret .
  5. Vortex 10-1-røret i 60 s med maksimal hastighet.
  6. Lag en 10 ganger seriell fortynning ved å overføre 1 ml til neste sterile slange (10-2) inneholdende 9 ml saltvann (0,85 % NaCl) opp til 10-7.
  7. Fordel 100 μL fra hver fortynning på Acinetobacter-agar (se materialtabell) og inkuber agarplatene ved 30 °C i 24-42 timer.
  8. Tell antallet typiske røde kolonier på hver plate manuelt i området mellom 10 og 250.
  9. Beregn antall levedyktige celler i biofilmen til hver brønn ved å bruke ligningen nedenfor:
    Levedyktige celler = Antall kolonier × Fortynningsfaktorer × 10

4. Biofilmvisualisering ved hjelp av konfokal laserskanningsmikroskopi (CLSM)

  1. Tilsett 200 μL inokulum til hver brønn i en steril 96-brønnsplate beregnet for mikroskopisk analyse.
  2. Inkuber platen ved 25 °C i 24 timer.
  3. Fjern supernatanten med en pipette.
  4. Tilsett forsiktig 300 μL filtersterilisert avionisert vann til hver brønn og fjern supernatanten med en pipette.
  5. Gjenta trinn 4.4.
  6. Forbered blandingen av SYTO 9 og propidiumjodid (se materialtabell) fortynnet i filtersterilisert avionisert vann til en endelig konsentrasjon på henholdsvis 10 μM og 60 μM.
  7. Tilsett blandingen til hver brønn ved 200 μL og inkuber platen i 20-30 min ved RT i mørket.
  8. Gjenta trinn 4.3–4.4
  9. Visualiser bunnflaten vedlagte biofilmer ved hjelp av CLSM med eksitasjonsbølgelengden på 488 nm og 561 nm og utslippsbølgelengdeområdet på henholdsvis 499-535 nm og 568-712 nm.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Etter protokollen ble biofilmene av Acinetobacter-isolater , opprinnelig isolert fra kjøkkenflater, dannet på en polystyren 96-brønnsplate, farget med krystallfiolett, og fargestoffene ble solubilisert i etanol og målt for biofilmmasse (figur 1). Antall biofilmer varierte sterkt avhengig av stammene fra OD 0,04 til 1,69 (figur 1). Basert på kriteriene etablert av Stepanović et al.16, dannet alle isolatene unntatt A. bouvetii biofilmer. A. radioresistens dannet en svak biofilm. A. junii og A. baumannii dannet moderate biofilmer, mens A. pittii og A. ursingii dannet sterke biofilmer.

For å telle levedyktige celler i biofilm ble biofilmene skrapt av ved hjelp av celleskrapere, virvelløst med høy hastighet, fortynnet og spredt på Acinetobacter-selektive plater. Etter inkubasjon ble antall kolonier talt for å estimere antall biofilmceller (figur 2). Alle isolatene unntatt A. bouvetii hadde celler tilsvarende 7-8 Log CFU i sine biofilmer. I samsvar med biofilmens ikke-dannende egenskap vist ved krystallfiolett analyse, hadde A. bouvetii et mye lavere nivå av cellenummer ved 4,4 Log CFU.

Biofilm tilknyttet bunnflate ble visualisert ved hjelp av CLSM (figur 3). En betydelig mengde biofilm ble funnet i A. junii, A. baumannii og A. ursingii med distinkte biofilmmorfologier. Mens A. pittii var en sterk biofilmtidligere i krystallfiolett analyse, dannet den ikke mye biofilm på bunnflaten.

Figure 1
Figur 1: Måling av biofilmmasse av Acinetobacter dannet på en polystyren 96-brønnsplate ved bruk av krystallfiolett analyse. Feilfeltene representerer standardavviket fra triplikat. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figure 2
Figur 2: Levedyktige tellinger av Acinetobacter biofilmer dannet på en polystyren 12-brønnsplate. Feilfeltene representerer standardavviket fra duplikatet. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figure 3
Figur 3: Bunnflatefestede Acinetobacter-biofilmer dannet på en 96-brønnsplate visualisert ved CLSM ved bruk av SYTO 9 og propidiumjodidfarger. Skala barer: 50 μm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Ved hjelp av den beskrevne protokollen ble biofilmdannelsen av Acinetobacter-isolater i varierende grad målt, visualisert, og de levedyktige cellene i biofilmene ble estimert (figur 1, figur 2 og figur 3).

I denne protokollen ble det brukt to forskjellige temperaturer, 30 °C for vekst og 25 °C for biofilmdannelse av Acinetobacter. 30 °C ble brukt fordi mange studier brukte mer enn 30 °C for optimal vekst av Acinetobacter, noe som ville være hensiktsmessig for å oppnå tilstrekkelig inokulum12,13,14,17. Imidlertid er denne temperaturen generelt høyere enn temperaturene i miljøet der biofilmdannelse vil oppstå, for eksempel sykehusoverflater eller matbehandlingsmiljøer. Derfor ble 25 °C brukt til biofilmdannelse, noe som ville simulere disse miljøforholdene mer.

Denne protokollen brukte 10 ganger fortynnet BHI i stedet for den opprinnelige BHI for å danne biofilmer (trinn 1.12). Mange overflater, for eksempel sykehusoverflater eller matbehandlingsmiljøer, vil sannsynligvis være næringsfattige18,19. I tillegg forblir mikroorganismer på forurensede overflater på overflatene etter rengjøring og vedvarer i næringsfattige forhold20. Derfor er næringsfattige forhold som 10 ganger fortynnet BHI mer ønskelige enn næringsrike forhold som original BHI.

Krystallfiolett analyse er en allment akseptert og veletablert metode for å måle biofilmmasse, og denne studien viste at biofilmformbarheten til Acinetobacter er merkbar på varierende nivåer ved bruk av denne metoden.

Levedyktig telling i biofilm er også viktig fordi levedyktige celler i biofilm er ansvarlige for menneskelige infeksjoner som er mer sannsynlig å forekomme av et høyere antall celler21. I tillegg kan levedyktig telling være et godt verktøy for å skille fattige biofilmprodusenter, som vist i A. bouvetii og A. radioresistens (figur 1 og figur 2). Det levedyktige antallet av A. radioresistens var mye høyere enn det for A. bouvetii, mens liten forskjell ble funnet i biofilmmasse, noe som tyder på et høyere infeksjonspotensial av A. radioresistens (figur 1 og figur 2). Denne metoden kan også brukes til å estimere andelen Acinetobacter i biofilmer med flere arter, noe som er mer vanlig i miljøet.

Acinetobacter danner biofilm ikke bare på bunnflaten, men også på sideveggen, spesielt ved luft-væskegrensesnittet i rør17,22. CLSM-analyse ved hjelp av en mikrotiterplate er begrenset til biofilm på bunnoverflaten, noe som gjør det noen ganger vanskelig å sammenligne med resultatene ved krystallfiolett analyse, som måler alle nedsenkede overflater, inkludert veggflatene. En betydelig mengde biofilm ved luft-væske-grensesnittet ble også funnet i disse isolatene, spesielt den sterke biofilmprodusenten, A. pittii. Den dannet relativt dårlig biofilm på bunnflaten sammenlignet med andre isolater (figur 3). Derfor må en mikroskopisk analyseteknikk videreutvikles for å visualisere biofilmene som dannes ved sideveggen.

I denne studien ble tre forskjellige analyser, krystallfiolett, levedyktig telling og CLSM, brukt til å karakterisere biofilmene til Acinetobacter. Krystallfiolett analyse er den veletablerte metoden for å kvantifisere biofilm, og kriteriene for å bestemme biofilmformbarhet eksisterer16. Det måler imidlertid ikke bare levende celler og EPS, men også døde celler, som er mindre meningsfulle når det gjelder menneskelig infeksjon og virulens. De levende cellene i biofilm kan måles ved hjelp av levedyktig tellemetode. Imidlertid kan biofilmformbarhet ikke bestemmes av levedyktig tellemetode fordi denne metoden ikke måler EPS, en kritisk komponent i biofilmstruktur. Derfor har denne metoden ikke kriteriene eller grenseverdien for å bestemme formbarheten for biofilm. I tillegg måler den levedyktige tellemetoden bare dyrkbarheten til cellene og måler ikke cellene under 'levedyktig, men ikke dyrkbar tilstand'11. Tilstedeværelsen av biofilmer kan bekreftes ved CLSM-metoden, som effektivt visualiserer biofilmer. Den måler imidlertid bare biofilm festet på bunnflaten, selv om biofilm ofte også dannes på sideveggene. Derfor anbefales det å bruke krystallfiolett analyse for å bestemme biofilmens formbarhet. Deretter kan de levende og dyrkbare cellene i biofilm kvantifiseres ved levedyktig tellemetode, og de nederste overflatefestede biofilmene kan bekreftes eller karakteriseres ved CLSM-metoden.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ingenting å avsløre.

Acknowledgments

Denne forskningen ble støttet av hovedforskningsprogrammet (E0210702-03) fra Korea Food Research Institute (KFRI), finansiert av departementet for vitenskap og IKT.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
96-well cell culture plate SPL 30096 Polystyrene 96-well plate
BHI (Brain Heart Infusion) broth Merck KGaA 1.10493.0500
Blood Agar Base Plate KisanBio MB-B1005-P50 Growth media for Acinetobacter
CHROMagar Acinetobacter CHROMagar AC092 Selective plate for Acinetobacter
Crystal violet solution Sigma-Aldrich V5265
Filmtracer LIVE/DEAD biofilm viability kit Invitrogen L10316 SYTO9 and propidium iodide
Microplate reader Tecan Infinite M200 PRO NanoQuant Biofilm measurement
RBC Glass Plating Beads RBC RG001 Glass beads
μ-Plate 96 Well Black ibidi 89621 Microplate intended for CLSM

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Wong, D., et al. Clinical and pathophysiological overview of Acinetobacter infections: a century of challenges. Clinical Microbiology Reviews. 30 (1), 409-447 (2017).
  2. Carvalheira, A., Silva, J., Teixeira, P. Acinetobacter spp. in food and drinking water - A review. Food Microbiology. 95, 103675 (2021).
  3. Towner, K. J. Acinetobacter: an old friend, but a new enemy. Journal of Hospital Infection. 73 (4), 355-363 (2009).
  4. Weber, D. J., Rutala, W. A., Miller, M. B., Huslage, K., Sickbert-Bennett, E. Role of hospital surfaces in the transmission of emerging health care-associated pathogens: Norovirus, Clostridium difficile, and Acinetobacter species. American Journal of Infection Control. 38 (5), S25-S33 (2010).
  5. Flemming, H. C., et al. The biofilm matrix: multitasking in a shared space. Nature Reviews Microbiology. 21 (2), 70-86 (2023).
  6. Flemming, H. C., et al. Biofilms: an emergent form of bacterial life. Nature Reviews Microbiology. 14 (9), 563-575 (2016).
  7. Yin, W., Wang, Y., Liu, L., He, J. Biofilms: the microbial "protective clothing" in extreme environments. International Journal of Molecular Sciences. 20 (14), 3423 (2019).
  8. Gedefie, A., et al. Acinetobacter baumannii biofilm formation and its role in disease pathogenesis: a review. Infection and drug resistance. 14, 3711-3719 (2021).
  9. Whiteway, C., Breine, A., Philippe, C., Van der Henst, C. Acinetobacter baumannii. Trends in Microbiology. 30 (2), 199-200 (2022).
  10. Longo, F., Vuotto, C., Donelli, G. Biofilm formation in Acinetobacter baumannii. New Microbiologica. 37 (2), 119-127 (2014).
  11. Azeredo, J., et al. Critical review on biofilm methods. Critical Reviews in Microbiology. 43 (3), 313-351 (2017).
  12. Jia, J., Xue, X., Guan, Y., Fan, X., Wang, Z. Biofilm characteristics and transcriptomic profiling of Acinetobacter johnsonii defines signatures for planktonic and biofilm cells. Environmental Research. 213, 113714 (2022).
  13. Yang, C., Su, P., Moi, S., Chuang, L. Biofilm formation in Acinetobacter baumannii: genotype-phenotype correlation. Molecules. 24 (10), 1849 (2019).
  14. Alamri, A. M., Alsultan, A. A., Ansari, M. A., Alnimr, A. M. Biofilm-formation in clonally unrelated multidrug-resistant Acinetobacter baumannii isolates. Pathogens. 9 (8), 630 (2020).
  15. Lim, E. S., Nam, S. J., Koo, O. K., Kim, J. S. Protective role of Acinetobacter and Bacillus for Escherichia coli O157:H7 in biofilms against sodium hypochlorite and extracellular matrix-degrading enzymes. Food Microbiology. 109, 104125 (2023).
  16. Stepanović, S., Ćirković, I., Ranin, L., Svabić-Vlahović, M. Biofilm formation by Salmonella spp. and Listeria monocytogenes on plastic surface. Letters in Applied Microbiology. 38 (5), 428-432 (2004).
  17. Boone, R. L., et al. Analysis of virulence phenotypes and antibiotic resistance in clinical strains of Acinetobacter baumannii isolated in Nashville, Tennessee. BMC Microbiology. 21 (1), 21 (2021).
  18. Otter, J. A., et al. Surface-attached cells, biofilms and biocide susceptibility: implications for hospital cleaning and disinfection. Journal of Hospital Infection. 89 (1), 16-27 (2015).
  19. Ravishankar, S., Juneja, V. K. Adaptation or resistance responses of microorganisms to stresses in the food processing environment. Microbial Stress Adaptation and Food Safety. Yousef, A. E., Juneja, V. K. , (2003).
  20. Dewanti, R., Wong, A. C. L. Influence of culture conditions on biofilm formation by Escherichia coli O157:H7. International Journal of Food Microbiology. 26 (2), 147-164 (1995).
  21. McConnell, M. J., Actis, L., Pachón, J. Acinetobacter baumannii: human infections, factors contributing to pathogenesis and animal models. FEMS Microbiology Reviews. 37 (2), 130-155 (2013).
  22. McQueary, C. N., Actis, L. A. Acinetobacter baumannii biofilms: variations among strains and correlations with other cell properties. The Journal of Microbiology. 49 (2), 243-250 (2011).

Tags

Kvantifisering levedyktighetsvurdering visualisering Acinetobacter biofilmer nosokomiale infeksjoner tørre overflater sykehusmiljøer biofilmdannelse farging krystallfiolett mikroplateleser celletall celleskrapere saltvann glassperler Acinetobacter agar levedyktig tellemetode røde kolonier biofilmer av blandede arter fluorescerende fargestoffer mikroskopisk analyse SYTO9 fargestoff propidiumjodidfargestoff konfokal laserskanningsmikroskopi
Kvantifisering, levedyktighetsvurdering og visualiseringsstrategier for <em>Acinetobacter</em> biofilmer
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Kim, J. S., Lim, J. Quantification,… More

Kim, J. S., Lim, J. Quantification, Viability Assessment, and Visualization Strategies for Acinetobacter Biofilms. J. Vis. Exp. (198), e65517, doi:10.3791/65517 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter