Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Acinetobacter Biyofilmleri için Miktar Tayini, Canlılık Değerlendirmesi ve Görselleştirme Stratejileri

Published: August 4, 2023 doi: 10.3791/65517
Automatic Translation
1,2, 3
1Korea Food Research Institute, 2Department of Food Biotechnology, Korea University of Science and Technology, 3Advanced Radiation Technology Institute, Korea Atomic Energy Research Institute

Summary

Bu protokol, aşının hazırlanmasını, kristal viyole boya kullanılarak mikrotitre plakalar üzerinde biyofilm miktarının belirlenmesini, biyofilmlerdeki canlı sayımı ve Acinetobacter biyofilmlerinin görselleştirilmesini açıklar.

Abstract

Acinetobacter hastane enfeksiyonlarına neden olur ve biyofilm oluşumu hastane ortamları gibi kuru yüzeylerde sağkalıma katkıda bulunabilir. Bu nedenle, biyofilm ölçümü ve görselleştirme, Acinetobacter suşlarının hastane enfeksiyonlarına neden olma potansiyelini değerlendirmek için önemli yöntemlerdir. Mikroplakanın yüzeyinde oluşan biyofilmler, hacim ve hücre sayıları açısından ölçülebilir. Biyofilm hacimleri, kristal viyole kullanılarak boyanarak, yıkanarak, etanol kullanılarak leke çıkarılarak ve ardından bir mikroplaka okuyucu kullanılarak çözündürülmüş boyanın ölçülmesiyle ölçülebilir. Biyofilmlere gömülü hücrelerin sayısını ölçmek için, biyofilmler hücre sıyırıcılar kullanılarak sıyrılır, tuzlu suda hasat edilir, cam boncukların varlığında kuvvetlice çalkalanır ve Acinetobacter agar üzerine yayılır. Daha sonra plakalar 30 °C'de 24-42 saat inkübe edilir. İnkübasyondan sonra, biyofilmlerdeki hücre sayısını tahmin etmek için kırmızı koloniler numaralandırılır. Bu uygulanabilir sayım yöntemi, karışık tür biyofilmlerdeki Acinetobacter hücrelerini saymak için de yararlı olabilir. Acinetobacter biyofilmleri, floresan boyalar kullanılarak görselleştirilebilir. Biyofilm oluşturmak için mikroskobik analiz için tasarlanmış ticari olarak temin edilebilen bir mikroplaka kullanılır. Daha sonra, alt yüzeye yapıştırılan biyofilmler SYTO9 ve propidyum iyodür boyaları ile boyanır, yıkanır ve daha sonra konfokal lazer tarama mikroskobu ile görselleştirilir.

Introduction

Acinetobacter'in hastane enfeksiyonlarına neden olduğu bilinmektedir ve özellikle sağlık tesislerinde insan enfeksiyonu giderek daha fazla bildirilmektedir1. Hastanelerde, sağlık tesislerinde ve gıda ile ilişkili ortamlarda yaygındır 2,3,4. Yatak korkulukları, komodinler, vantilatörlerin yüzeyleri ve lavabolar gibi hastane yüzeyleri dahil ortamlarda uzun süre hayatta kalabilir4. Çevresel yüzeylerde bu tür bir kalıcılık, Acinetobacter4'ün hastane enfeksiyonlarına katkıda bulunan önemli faktörlerden biri olabilir.

Biyofilm, mikrobiyal yaşamın bir şeklidir ve canlı mikrobiyal hücrelerden ve hücrelerden hücre dışı polimerik maddelerden (EPS) oluşan mikrobiyal bir matristir5. Mikrobiyal hücreler matrise gömülüdür ve genellikle ısı, tuzlar, kuruluk, antibiyotikler, dezenfektanlar ve kesme kuvvetlerigibi çevresel streslere karşı oldukça dirençlidir 6,7.

Acinetobacter yüzeylerde biyofilmler oluşturabilir, bu da hastane yüzeyleri de dahil olmak üzere çevresel yüzeylerde uzun süreli sağkalıma ve antibiyotik tedavisinekarşı direncin artmasına katkıda bulunabileceğini düşündürmektedir 8,9. Ek olarak, Acinetobacter'in biyofilm oluşumu, insan klinik sonuçlarıyla yüksek oranda ilişkili olabilir8. Bu nedenle, Acinetobacter suşlarının biyofilm şekillendirilebilirliği, çevresel sağkalımı ve insan enfeksiyonlarını tahmin etmede göstergelerden biri olabilir 8,10.

Yüzeye bağlı biyofilmler, biyofilm şekillendirilebilirliğini değerlendirmek için ölçülebilir ve görselleştirilebilir. Yüzeye bağlı biyofilmleri ölçmek için, biyofilmler normalde kristal viyole gibi biyofilm boyama boyaları ile boyanır ve boyalar çözelti içinde ayrıştırılır ve optik yoğunluk11 için ölçülür. Biyofilmlerin görselleştirilmesi, biyofilm şekillendirilebilirliğini değerlendirmek için başka bir iyi yaklaşımdır11. Floresan boyalar kullanılarak özgüllüğü kullanan konfokal Lazer Tarama Mikroskobu (CLSM) görselleştirme yöntemi, SEM12,13 gibi diğer tekniklere kıyasla biyofilm morfolojisini karakterize etmek için daha yararlı olabilir.

Biyofilmlerdeki canlı hücreler, biyofilmlerdeki canlı hücrelerin sayısını tahmin etmek için sayılabilir11. Biyofilmlere gömülü canlı hücreler ayrılır, seyreltilir, agar plakalarına yayılır, inkübe edilir ve numaralandırılır. Daha fazla sayıda hücrenin enfeksiyöz dozu karşılaması muhtemel olduğundan, hücre sayısı13,14 ile ilişkili enfeksiyon potansiyelleri gibi biyofilmler hakkında daha ayrıntılı bilgi sağlayabilir.

Bu makale, (1) yüzeye bağlı biyofilmleri ölçmek, (2) biyofilmlerdeki canlı hücreleri saymak ve (3) Acinetobacter'in CLSM'sini kullanarak biyofilmleri görselleştirmek için adım adım protokoller sunmaktadır. Sunulan protokoller, Acinetobacter izolatlarının biyofilm şekillendirilebilirliğini değerlendirme ve biyofilmlerini karakterize etme yöntemlerini açıklamaktadır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Bakteri aşısının hazırlanması

  1. -80 °C'de saklanan gliserol stok şişesini çıkarın.
  2. Steril bir pipet ucu kullanarak bakteri suşunu (2-10 μL) flakondan çıkarın.
    NOT: Bu protokolde Acinetobacter suşları, A. bouvetii (13-1-1), A. junii (13-1-2), A. pittii (13-2-5), A. baumannii (13-2-9), A. radioresistens (20-1) ve A. ursingii (24-1) kullanılmaktadır.
  3. Piyasada bulunan bir kanlı agar plakasını (% 5 koyun kanı ile desteklenmiş triptik soya agarı, Malzeme Tablosuna bakınız) bakterilerle aşılayın.
    NOT: Besleyici agar veya MacConkey agar gibi diğer ortamlar da kullanılabilir.
  4. Agar yüzeyini inceltmek için aralıklı alevli steril bir halka kullanarak çizin.
  5. Agar plakasını bir inkübatöre baş aşağı yerleştirin ve gece boyunca 30 °C'de 20-24 saat inkübe edin.
  6. Steril bir iğne ile bakteri kültürünün tek bir kolonisini seçin ve kültürle birlikte 5 mL steril beyin kalp infüzyon suyunu (BHI, Malzeme Tablosuna bakınız) aşılayın.
  7. Aşılanmış suyu 30 °C'de çalkalayan bir inkübatörde gece boyunca 20-24 saat yaklaşık 150 rpm'de inkübe edin.
  8. Gece kültürünün 1 mL'sini steril bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın ve gece kültürünü oda sıcaklığında (RT) 10 dakika boyunca 6.000 × g'da santrifüjleyin.
  9. Süpernatanı bir pipetle çıkarın.
  10. Bir girdap kullanarak, peleti 1 mL steril fosfat tamponlu salin (PBS) içinde yeniden süspanse edin.
  11. RT'de 10 dakika boyunca 6.000 × g'da santrifüjleyin ve süpernatanı çıkarın.
  12. Pelet, 600 nm'de yaklaşık 0.1'lik bir optik yoğunluğa kadar vorteks kullanarak steril on kat seyreltilmiş BHI'de yeniden süspanse edin.
    NOT: Yaklaşık 0.1'lik optik yoğunluk yaklaşık 107 CFU/mL'ye eşdeğerdir.

2. Kristal viyole kullanarak biyofilm ölçümü

  1. Steril polistiren 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna 200 μL inokulum ekleyin (Malzeme Tablosuna bakınız) ve iç kuyucukların kurumasını önlemek için en dıştaki kuyucukların her birine 200 μL deiyonize su ekleyin15.
  2. Negatif kontrol olarak aynı plakanın her bir oyuğuna 200 μL on kat seyreltilmiş BHI ekleyin.
  3. Plakayı 25 °C'de 24 saat inkübe edin.
  4. Süpernatanı bir pipetle çıkarın.
    NOT: Çok kanallı pipet genellikle birden fazla numune için daha uygundur.
  5. Her bir oyuğa dikkatlice 300 μL PBS ekleyin ve süpernatanı bir pipetle çıkarın.
    NOT: Çok kanallı pipet genellikle birden fazla numune için daha uygundur.
  6. Adım 2.5'i iki kez daha tekrarlayın.
  7. Her bir oyuğa 200 μL kristal viyole çözeltisi (% 1) ekleyin ( Malzeme Tablosuna bakınız) ve RT'de 30 dakika inkübe edin.
  8. 2.4-2.6 arasındaki adımları tekrarlayın.
  9. Her oyuğa 200 μL mutlak etanol ekleyin ve RT'de 15 dakika inkübe edin.
  10. Her kuyucuktan 100 μL elüsyon yeni bir 96 oyuklu plakaya aktarın.
  11. Bir mikroplaka okuyucu kullanarak absorbansı 595 nm'de ölçün (bkz.
  12. Absorbans 2.0'ı aştığında, numunenin mutlak etanolde absorbansın 2.0'ın altına kadar uygun bir şekilde seyreltilmesini sağlayın ve adım 2.11'deki gibi ölçün. Ardından, gözlemlenen değeri seyreltme faktörü ile çarparak numunenin absorbansını (nihai değer) hesaplayın.
  13. Negatif kontrolün ortalama değerini, aynı kuyu plakasındaki test numunelerinin her bir oyuğunun değerinden çıkararak numunelerin gerçek absorbansını hesaplayın.

3. Biyofilm canlılık sayımı

  1. Steril polistiren 12 oyuklu plakanın15 her bir oyuğuna 1 mL inokulum (adım 1) ekleyin. Plakayı 25 °C'de 24 saat inkübe edin. Süpernatanı bir pipetle çıkarın.
  2. Her bir oyuğa dikkatlice 1.5 mL steril PBS ekleyin ve süpernatanı bir pipetle çıkarın. Her kuyucuğa 1 mL steril PBS ekleyin.
  3. Takılı hücre sıyırıcıları kullanarak kuyunun alt ve duvar yüzeylerini kazıyın.
  4. Hasat edilen hücre süspansiyonunu 9 mL salin (%0.85 NaCl) ve 10-20 cam boncuk içeren steril bir plastik tüpe (10-1) aktarın (bkz.
    NOT: Kuyunun alt yüzeyinde kalan artık biyofilm kalıntılarını toplamak için, 10-1 tüpünden salin kullanılarak pipetle yeniden süspanse edilebilir ve aktarılabilir.
  5. 10-1 tüpü maksimum hızda 60 saniye boyunca vorteksleyin.
  6. 10-7'ye kadar 9 mL salin (% 0.85 NaCl) içeren bir sonraki steril tüpe (10-2) 1 mL aktararak 10 kat seri seyreltme yapın.
  7. Acinetobacter agar üzerine her seyreltmeden 100 μL yayın (Malzeme Tablosuna bakınız) ve agar plakalarını 30 °C'de 24-42 saat inkübe edin.
  8. Her plakadaki tipik kırmızı kolonilerin sayısını 10 ile 250 arasında manuel olarak sayın.
  9. Aşağıdaki denklemi kullanarak her bir kuyucuğun biyofilmindeki canlı hücre sayısını hesaplayın:
    Canlı hücreler = Koloni sayısı × Seyreltme faktörleri × 10

4. Konfokal lazer tarama mikroskobu (CLSM) kullanılarak biyofilm görselleştirme

  1. Mikroskobik analiz için amaçlanan steril 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna 200 μL inokülum ekleyin.
  2. Plakayı 25 °C'de 24 saat inkübe edin.
  3. Süpernatanı bir pipetle çıkarın.
  4. Her bir kuyucuğa dikkatlice 300 μL filtre ile sterilize edilmiş deiyonize su ekleyin ve süpernatanı bir pipetle çıkarın.
  5. Adım 4.4'ü tekrarlayın.
  6. Filtreyle sterilize edilmiş deiyonize suda sırasıyla 10 μM ve 60 μM'lik bir nihai konsantrasyona seyreltilmiş SYTO 9 ve propidyum iyodür karışımını ( Malzeme Tablosuna bakınız) hazırlayın.
  7. Karışımı her bir oyuğa 200 μL'de ekleyin ve plakayı karanlıkta RT'de 20-30 dakika inkübe edin.
  8. 4.3-4.4 arasındaki adımları tekrarlayın
  9. Sırasıyla 488 nm ve 561 nm uyarma dalga boyuna ve 499-535 nm ve 568-712 nm emisyon dalga boyu aralığına sahip CLSM kullanarak alt yüzeye bağlı biyofilmleri görselleştirin.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Protokolü takiben, orijinal olarak mutfak yüzeylerinden izole edilen Acinetobacter izolatlarının biyofilmleri, kristal viyole ile boyanmış polistiren 96 oyuklu bir plaka üzerinde oluşturuldu ve boyalar etanol içinde çözündürüldü ve biyofilm kütlesi için ölçüldü (Şekil 1). Biyofilm sayısı, OD 0.04 ila 1.69 arasında değişen suşlara bağlı olarak büyük ölçüde değişmiştir (Şekil 1). Stepanović ve ark.16 tarafından belirlenen kriterlere göre, A. bouvetii dışındaki tüm izolatlar biyofilm oluşturmuştur. A. radioresistens zayıf bir biyofilm oluşturdu. A. junii ve A. baumannii orta derecede biyofilmler oluştururken, A. pittii ve A. ursingii güçlü biyofilmler oluşturmuştur.

Biyofilmlerdeki canlı hücreleri saymak için, biyofilmler hücre sıyırıcılar kullanılarak kazındı, yüksek hızda girdaplandı, seyreltildi ve Acinetobacter seçici plakalarına yayıldı. İnkübasyondan sonra, biyofilm hücrelerinin sayısını tahmin etmek için koloni sayısı sayıldı (Şekil 2). A. bouvetii dışındaki tüm izolatların biyofilmlerinde 7-8 Log CFU'ya eşdeğer hücreler vardı. Kristal viyole tahlili ile gösterilen biyofilm oluşturmama özelliği ile tutarlı olarak, A. bouvetii 4.4 Log CFU'da çok daha düşük bir hücre sayısı seviyesine sahipti.

Alt yüzeye bağlı biyofilmler CLSM kullanılarak görüntülendi (Şekil 3). A. junii, A. baumannii ve A. ursingii'de farklı biyofilm morfolojilerine sahip önemli miktarda biyofilm bulundu. A. pittii, kristal viyole tahlilinde güçlü bir biyofilm oluşturucu iken, alt yüzeyde fazla biyofilm oluşturmadı.

Figure 1
Şekil 1: Kristal viyole testi kullanılarak polistiren 96 oyuklu bir plaka üzerinde oluşturulan Acinetobacter'in biyofilm kütlesinin ölçümü. Hata çubukları, üçlü kopyadan standart sapmayı temsil eder. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Figure 2
Şekil 2: Polistiren 12 oyuklu bir plaka üzerinde oluşturulan canlı Acinetobacter biyofilm sayıları. Hata çubukları, kopyadan standart sapmayı temsil eder. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Figure 3
Şekil 3: SYTO 9 ve propidyum iyodür boyaları kullanılarak CLSM tarafından görselleştirilen 96 oyuklu bir plaka üzerinde oluşturulan alt yüzeye bağlı Acinetobacter biyofilmleri. Ölçek çubukları: 50 μm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Açıklanan protokol kullanılarak, değişen derecelerde Acinetobacter izolatlarının biyofilm oluşumu ölçüldü, görselleştirildi ve biyofilmlerdeki canlı hücreler tahmin edildi (Şekil 1, Şekil 2 ve Şekil 3).

Bu protokolde Acinetobacter'in büyümesi için 30 °C ve biyofilm oluşumu için 25 °C olmak üzere iki farklı sıcaklık kullanılmıştır. 30 °C kullanıldı, çünkü birçok çalışma Acinetobacter'in optimal büyümesi için 30 °C'den fazla kullandı, bu da yeterli aşı12,13,14,17 elde etmek için uygun olacaktır. Bununla birlikte, bu sıcaklık genellikle hastane yüzeyleri veya gıda işleme ortamları gibi biyofilm oluşumunun meydana geleceği ortamın sıcaklıklarından daha yüksektir. Bu nedenle, bu çevresel koşulları daha fazla simüle edecek biyofilm oluşumu için 25 °C kullanılmıştır.

Bu protokol, biyofilm oluşturmak için orijinal BHI yerine 10 kat seyreltilmiş BHI kullandı (adım 1.12). Hastane yüzeyleri veya gıda işleme ortamları gibi birçok yüzeyin düşük besinli olması muhtemeldir18,19. Ayrıca kontamine yüzeylerdeki mikroorganizmalar temizlendikten sonra yüzeylerde kalmakta ve düşük besin maddesi koşullarında varlığını sürdürmektedir20. Bu nedenle, 10 kat seyreltilmiş BHI gibi düşük besinli koşullar, orijinal BHI gibi yüksek besinli koşullardan daha çok arzu edilir.

Kristal viyole testi, biyofilm kütlesini ölçmek için genel kabul görmüş ve iyi bilinen bir yöntemdir ve bu çalışma, Acinetobacter'in biyofilm şekillendirilebilirliğinin bu yöntem kullanılarak değişen seviyelerde fark edilebilir olduğunu göstermiştir.

Biyofilmdeki canlı sayım da önemlidir, çünkü biyofilmlerdeki canlı hücreler, daha fazla sayıda hücre tarafından meydana gelme olasılığı daha yüksek olan insan enfeksiyonlarından sorumludur21. Ek olarak, canlı sayım, A. bouvetii ve A. radioresistens'te gösterildiği gibi, zayıf biyofilm üreticilerini ayırt etmek için iyi bir araç olabilir (Şekil 1 ve Şekil 2). A. radioresistens'in canlı sayısı, A . bouvetii'ninkinden çok daha yüksekken, biyofilm kütlesinde çok az fark bulundu, bu da A. radioresistens tarafından daha yüksek bir enfeksiyon potansiyeli olduğunu düşündürdü (Şekil 1 ve Şekil 2). Ayrıca, bu yöntem, çevrede daha yaygın olan çok türlü biyofilmlerdeki Acinetobacter oranını tahmin etmek için kullanılabilir.

Acinetobacter sadece alt yüzeyde değil, aynı zamanda yan duvarda, özellikle tüplerdeki hava-sıvı arayüzündede biyofilm oluşturur 17,22. Bir mikrotitre plakası kullanan CLSM analizi, alt yüzeye bağlı biyofilmlerle sınırlıdır, bu da duvar yüzeyleri de dahil olmak üzere tüm batık yüzeyleri ölçen kristal viyole tahlili ile elde edilen sonuçlarla karşılaştırmayı bazen zorlaştırır. Bu izolatlarda, özellikle güçlü biyofilm üreticisi A. pittii'de hava-sıvı arayüzünde önemli miktarda biyofilm de bulundu. Alt yüzeyde diğer izolatlara kıyasla nispeten zayıf biyofilm oluşturmuştur (Şekil 3). Bu nedenle, yan duvarda oluşan biyofilmleri görselleştirmek için mikroskobik bir analiz tekniği daha da geliştirilmelidir.

Bu çalışmada, Acinetobacter'in biyofilmlerini karakterize etmek için kristal viyole, canlı sayım ve CLSM olmak üzere üç farklı test kullanıldı. Kristal viyole testi, biyofilmleri ölçmek için köklü bir yöntemdir ve biyofilm şekillendirilebilirliğini belirleme kriterleri mevcuttur16. Bununla birlikte, sadece canlı hücreleri ve EPS'yi değil, aynı zamanda insan enfeksiyonu ve virülansı açısından daha az anlamlı olan ölü hücreleri de ölçer. Biyofilmlerdeki canlı hücreler canlı sayım yöntemi ile ölçülebilir. Bununla birlikte, biyofilm şekillendirilebilirliği, canlı sayım yöntemi ile belirlenemez, çünkü bu yöntem, biyofilm yapısında kritik bir bileşen olan EPS'yi ölçmez. Bu nedenle, bu yöntem biyofilm şekillendirilebilirliğini belirleyecek kriterlere veya kesme değerine sahip değildir. Ek olarak, canlı sayım yöntemi sadece hücrelerin kültürlenebilirliğini ölçer ve hücreleri 'canlı ancak kültürlenemez durum' altında ölçmez11. Biyofilmlerin varlığı, biyofilmleri etkili bir şekilde görselleştiren CLSM yöntemi ile doğrulanabilir. Bununla birlikte, biyofilmler genellikle yan duvarlarda da oluşmasına rağmen, yalnızca alt yüzeye bağlı biyofilmleri ölçer. Bu nedenle, biyofilm şekillendirilebilirliğini belirlemek için kristal viyole tahlili kullanılması önerilir. Daha sonra, biyofilmlerdeki canlı ve kültürlenebilir hücreler, canlı sayım yöntemi ile ölçülebilir ve alt yüzeye bağlı biyofilmler, CLSM yöntemi ile doğrulanabilir veya karakterize edilebilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Acknowledgments

Bu araştırma, Bilim ve BİT Bakanlığı tarafından finanse edilen Kore Gıda Araştırma Enstitüsü'nün (KFRI) Ana Araştırma Programı (E0210702-03) tarafından desteklenmiştir.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
96-well cell culture plate SPL 30096 Polystyrene 96-well plate
BHI (Brain Heart Infusion) broth Merck KGaA 1.10493.0500
Blood Agar Base Plate KisanBio MB-B1005-P50 Growth media for Acinetobacter
CHROMagar Acinetobacter CHROMagar AC092 Selective plate for Acinetobacter
Crystal violet solution Sigma-Aldrich V5265
Filmtracer LIVE/DEAD biofilm viability kit Invitrogen L10316 SYTO9 and propidium iodide
Microplate reader Tecan Infinite M200 PRO NanoQuant Biofilm measurement
RBC Glass Plating Beads RBC RG001 Glass beads
μ-Plate 96 Well Black ibidi 89621 Microplate intended for CLSM

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Wong, D., et al. Clinical and pathophysiological overview of Acinetobacter infections: a century of challenges. Clinical Microbiology Reviews. 30 (1), 409-447 (2017).
  2. Carvalheira, A., Silva, J., Teixeira, P. Acinetobacter spp. in food and drinking water - A review. Food Microbiology. 95, 103675 (2021).
  3. Towner, K. J. Acinetobacter: an old friend, but a new enemy. Journal of Hospital Infection. 73 (4), 355-363 (2009).
  4. Weber, D. J., Rutala, W. A., Miller, M. B., Huslage, K., Sickbert-Bennett, E. Role of hospital surfaces in the transmission of emerging health care-associated pathogens: Norovirus, Clostridium difficile, and Acinetobacter species. American Journal of Infection Control. 38 (5), S25-S33 (2010).
  5. Flemming, H. C., et al. The biofilm matrix: multitasking in a shared space. Nature Reviews Microbiology. 21 (2), 70-86 (2023).
  6. Flemming, H. C., et al. Biofilms: an emergent form of bacterial life. Nature Reviews Microbiology. 14 (9), 563-575 (2016).
  7. Yin, W., Wang, Y., Liu, L., He, J. Biofilms: the microbial "protective clothing" in extreme environments. International Journal of Molecular Sciences. 20 (14), 3423 (2019).
  8. Gedefie, A., et al. Acinetobacter baumannii biofilm formation and its role in disease pathogenesis: a review. Infection and drug resistance. 14, 3711-3719 (2021).
  9. Whiteway, C., Breine, A., Philippe, C., Van der Henst, C. Acinetobacter baumannii. Trends in Microbiology. 30 (2), 199-200 (2022).
  10. Longo, F., Vuotto, C., Donelli, G. Biofilm formation in Acinetobacter baumannii. New Microbiologica. 37 (2), 119-127 (2014).
  11. Azeredo, J., et al. Critical review on biofilm methods. Critical Reviews in Microbiology. 43 (3), 313-351 (2017).
  12. Jia, J., Xue, X., Guan, Y., Fan, X., Wang, Z. Biofilm characteristics and transcriptomic profiling of Acinetobacter johnsonii defines signatures for planktonic and biofilm cells. Environmental Research. 213, 113714 (2022).
  13. Yang, C., Su, P., Moi, S., Chuang, L. Biofilm formation in Acinetobacter baumannii: genotype-phenotype correlation. Molecules. 24 (10), 1849 (2019).
  14. Alamri, A. M., Alsultan, A. A., Ansari, M. A., Alnimr, A. M. Biofilm-formation in clonally unrelated multidrug-resistant Acinetobacter baumannii isolates. Pathogens. 9 (8), 630 (2020).
  15. Lim, E. S., Nam, S. J., Koo, O. K., Kim, J. S. Protective role of Acinetobacter and Bacillus for Escherichia coli O157:H7 in biofilms against sodium hypochlorite and extracellular matrix-degrading enzymes. Food Microbiology. 109, 104125 (2023).
  16. Stepanović, S., Ćirković, I., Ranin, L., Svabić-Vlahović, M. Biofilm formation by Salmonella spp. and Listeria monocytogenes on plastic surface. Letters in Applied Microbiology. 38 (5), 428-432 (2004).
  17. Boone, R. L., et al. Analysis of virulence phenotypes and antibiotic resistance in clinical strains of Acinetobacter baumannii isolated in Nashville, Tennessee. BMC Microbiology. 21 (1), 21 (2021).
  18. Otter, J. A., et al. Surface-attached cells, biofilms and biocide susceptibility: implications for hospital cleaning and disinfection. Journal of Hospital Infection. 89 (1), 16-27 (2015).
  19. Ravishankar, S., Juneja, V. K. Adaptation or resistance responses of microorganisms to stresses in the food processing environment. Microbial Stress Adaptation and Food Safety. Yousef, A. E., Juneja, V. K. , (2003).
  20. Dewanti, R., Wong, A. C. L. Influence of culture conditions on biofilm formation by Escherichia coli O157:H7. International Journal of Food Microbiology. 26 (2), 147-164 (1995).
  21. McConnell, M. J., Actis, L., Pachón, J. Acinetobacter baumannii: human infections, factors contributing to pathogenesis and animal models. FEMS Microbiology Reviews. 37 (2), 130-155 (2013).
  22. McQueary, C. N., Actis, L. A. Acinetobacter baumannii biofilms: variations among strains and correlations with other cell properties. The Journal of Microbiology. 49 (2), 243-250 (2011).

Tags

Miktar Tayini Canlılık Değerlendirmesi Görselleştirme Acinetobacter Biyofilmleri Hastane Enfeksiyonları Kuru Yüzeyler Hastane Ortamları Biyofilm Oluşumu Boyama Kristal Menekşe Mikroplaka Okuyucu Hücre Sayıları Hücre Sıyırıcılar Salin Cam Boncuklar Acinetobacter Agar Canlı Sayım Yöntemi Kırmızı Koloniler Karışık Tür Biyofilmler Floresan Boyalar Mikroskobik Analiz SYTO9 Boya Propidyum İyodür Boya Konfokal Lazer Tarama Mikroskobu
<em>Acinetobacter</em> Biyofilmleri için Miktar Tayini, Canlılık Değerlendirmesi ve Görselleştirme Stratejileri
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Kim, J. S., Lim, J. Quantification,… More

Kim, J. S., Lim, J. Quantification, Viability Assessment, and Visualization Strategies for Acinetobacter Biofilms. J. Vis. Exp. (198), e65517, doi:10.3791/65517 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter