Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Стратегии количественной оценки, оценки жизнеспособности и визуализации биопленок Acinetobacter

Published: August 4, 2023 doi: 10.3791/65517
Automatic Translation
1,2, 3
1Korea Food Research Institute, 2Department of Food Biotechnology, Korea University of Science and Technology, 3Advanced Radiation Technology Institute, Korea Atomic Energy Research Institute

Summary

Этот протокол описывает подготовку посевного материала, количественное определение биопленки на микротитровых планшетах с использованием кристаллического фиолетового красителя, количество жизнеспособных веществ в биопленках и визуализацию биопленок Acinetobacter.

Abstract

Acinetobacter вызывает внутрибольничные инфекции, и его образование биопленки может способствовать выживанию на сухих поверхностях, таких как больничные условия. Таким образом, количественная оценка и визуализация биопленки являются важными методами оценки способности штаммов Acinetobacter вызывать внутрибольничные инфекции. Биопленки, образующиеся на поверхности микропланшета, могут быть количественно оценены с точки зрения объема и количества клеток. Объемы биопленки могут быть количественно определены путем окрашивания с помощью кристаллического фиолетового, промывки, обесцвечивания с использованием этанола, а затем измерения солюбилизированного красителя с помощью микропланшетного ридера. Чтобы количественно определить количество клеток, встроенных в биопленки, биопленки соскребают с помощью клеточных скребков, собирают в физиологическом растворе, энергично перемешивают в присутствии стеклянных шариков и наносят на агар Acinetobacter. Затем планшеты инкубируют при 30 °C в течение 24-42 ч. После инкубации красные колонии нумеруются, чтобы оценить количество клеток в биопленках. Этот жизнеспособный метод подсчета также может быть полезен для подсчета клеток Acinetobacter в биопленках смешанных видов. Биопленки Acinetobacter можно визуализировать с помощью флуоресцентных красителей. Коммерчески доступная микропланшет, предназначенная для микроскопического анализа, используется для формирования биопленок. Затем биопленки, прикрепленные к нижней поверхности, окрашивают красителями SYTO9 и пропидидом пропидия, промывают и визуализируют с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии.

Introduction

Известно, что Acinetobacter вызывает внутрибольничные инфекции, и всечаще регистрируется заражение людей, особенно в медицинских учреждениях1. Он широко распространен в больницах, медицинских учреждениях и пищевых продуктах 2,3,4. Он может выживать в течение длительного периода времени в различных средах, включая больничные поверхности, такие как поручни кроватей, прикроватные тумбочки, поверхность аппаратов искусственной вентиляции легких и раковины4. Такая персистенция на поверхностях окружающей среды может быть одним из существенных факторов, способствующих внутрибольничным инфекциям Acinetobacter4.

Биопленка представляет собой форму микробной жизни и представляет собой микробный матрикс, состоящий из живых микробных клеток и внеклеточных полимерных веществ (ЭПС) из клеток5. Микробные клетки встроены в матрикс и часто обладают высокой устойчивостью к воздействиям окружающей среды, таким как жара, соли, сухость, антибиотики, дезинфицирующие средства и силы сдвига 6,7.

Acinetobacter может образовывать биопленки на поверхностях, что позволяет предположить, что он может способствовать увеличению выживаемости на поверхностях окружающей среды, включая больничные поверхности, и повышению устойчивости к лечению антибиотиками 8,9. Кроме того, образование биопленки Acinetobacter может быть тесно связано с клиническими исходами у человека8. Таким образом, формуемость биопленки штаммов Acinetobacter может быть одним из показателей в прогнозировании экологической выживаемости и инфекций человека 8,10.

Биопленки, прикрепленные к поверхности, могут быть количественно оценены и визуализированы для оценки формуемости биопленки. Для количественного определения прикрепленных к поверхности биопленок биопленки обычно окрашивают красителями, окрашивающими биопленку, такими как кристаллический фиолетовый, а красители элюируют в растворе и измеряют оптическую плотность11. Визуализация биопленок является еще одним хорошим подходом к оценке формуемости биопленки11. Метод визуализации с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (CLSM), использующий специфичность с использованием флуоресцентных красителей, может быть более полезным для характеристики морфологии биопленки по сравнению с другими методами, такими как SEM12,13.

Количество жизнеспособных клеток в биопленках можно подсчитать, чтобы оценить количество жизнеспособных клеток в биопленках11. Жизнеспособные клетки, встроенные в биопленки, отделяют, разбавляют, распределяют по агаровым пластинам, инкубируют и нумеруют. Поскольку большее количество клеток, вероятно, соответствует инфекционной дозе, это может предоставить более подробную информацию о биопленках, например, о потенциале инфекции, связанном с количеством клеток13,14.

В этой статье представлены пошаговые протоколы для (1) количественной оценки поверхностно-прикрепленных биопленок, (2) подсчета жизнеспособных клеток в биопленках и (3) визуализации биопленок с помощью CLSM Acinetobacter. В представленных протоколах описаны методы оценки формуемости биопленки изолятов Acinetobacter и характеристика их биопленок.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Подготовка бактериального посевного материала

  1. Снимите флакон с глицерином, хранящийся при температуре -80 °C.
  2. Удалить бактериальный штамм (2-10 мкл) из флакона с помощью стерильного наконечника пипетки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В этом протоколе используются штаммы Acinetobacter, A. bouvetii (13-1-1), A. junii (13-1-2), A. pittii (13-2-5), A. baumannii (13-2-9), A. radioresistens (20-1) и A. ursingii (24-1).
  3. Засейте бактериями коммерчески доступную пластину кровяного агара (триптический соевый агар с добавлением 5% овечьей крови, см. таблицу материалов).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Также можно использовать другие среды, такие как питательный агар или агар МакКонки.
  4. Прорисуйте поверхность агара стерильной петлей с прерывистым пламенем, чтобы разбавить ее.
  5. Поместите агаровую пластину вверх дном в инкубатор и инкубируйте при 30 °C в течение ночи в течение 20-24 ч.
  6. Стерильной иглой отбирают одну колонию бактериальной культуры и инокулируют 5 мл стерильного инфузионного бульона для мозгового сердца (BHI, см. таблицу материалов) с культурой.
  7. Инкубируйте инокулированный бульон во встряхивающем инкубаторе при температуре 30 °C в течение ночи в течение 20-24 ч при частоте вращения около 150 об/мин.
  8. Переложите 1 мл ночной культуры в стерильную микроцентрифужную пробирку и центрифугируйте ночную культуру при 6 000 × г в течение 10 мин при комнатной температуре (RT).
  9. Удалите надосадочную жидкость с помощью пипетки.
  10. С помощью вихря ресуспендируйте гранулу в 1 мл стерильного фосфатно-солевого буфера (PBS).
  11. Центрифугу при 6 000 × г в течение 10 мин при RT и удалить надосадочную жидкость.
  12. Ресуспендируйте гранулу в стерильном десятикратно разбавленном BHI с помощью вихря до оптической плотности около 0,1 при длине волны 600 нм.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Оптическая плотность около 0,1 эквивалентна примерно 10,7 КОЕ/мл.

2. Количественное определение биопленки с использованием кристаллического фиолетового

  1. Добавьте 200 мкл посевного материала в каждую лунку стерильной полистирольной 96-луночной пластины (см. таблицу материалов) и добавьте 200 мкл деионизированной воды в каждую из крайних лунок, чтобы предотвратить высыхание внутренних лунок15.
  2. Добавьте 200 мкл десятикратно разбавленного BHI в каждую лунку той же пластины в качестве отрицательного контроля.
  3. Инкубируйте планшет при температуре 25 °C в течение 24 ч.
  4. Удалите надосадочную жидкость с помощью пипетки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Многоканальная пипетка часто более удобна для нескольких образцов.
  5. Осторожно добавьте 300 мкл PBS в каждую лунку и удалите надосадочную жидкость пипеткой.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Многоканальная пипетка часто более удобна для нескольких образцов.
  6. Повторите шаг 2.5 еще два раза.
  7. Добавляют 200 мкл раствора кристаллического фиалка (1%) (см. таблицу материалов) в каждую лунку и инкубируют при RT в течение 30 мин.
  8. Повторите шаги 2.4-2.6.
  9. Добавьте 200 мкл абсолютного этанола в каждую лунку и инкубируйте в течение 15 минут при RT. Тщательно перемешайте, пипетируя вверх и вниз несколько раз.
  10. Перенесите элюирование 100 мкл из каждой лунки на новую 96-луночную планшет.
  11. Измерьте поглощение при длине волны 595 нм с помощью микропланшетного ридера (см. таблицу материалов).
  12. Когда абсорбция превысит 2,0, произведите надлежащее разбавление образца до абсорбции ниже 2,0 в абсолютном этаноле и измерьте его, как показано на этапе 2.11. Затем рассчитайте абсорбцию образца (конечное значение), умножив наблюдаемое значение на коэффициент разбавления.
  13. Рассчитайте истинное поглощение образцов путем вычитания среднего значения отрицательного контроля из значения каждой лунки испытуемых образцов на той же луночной пластине.

3. Подсчет жизнеспособности биопленки

  1. Добавляют 1 мл посевного материала (шаг 1) в каждую лунку стерильной полистирольной 12-луночной планшета15. Инкубируйте планшет при температуре 25 °C в течение 24 ч. Удалите надосадочную жидкость с помощью пипетки.
  2. Осторожно добавьте в каждую лунку по 1,5 мл стерильного ПБС и удалите надосадочную жидкость пипеткой. Добавьте 1 мл стерильного PBS в каждую лунку.
  3. Соскребите дно и стенки колодца с помощью встроенных скребков.
  4. Полученную клеточную суспензию переложить в стерильную пластиковую пробирку (10-1), содержащую 9 мл физиологического раствора (0,85% NaCl) и 10-20 стеклянных шариков (см. таблицу материалов).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы собрать любой остаточный мусор биопленки, оставшийся на нижней поверхности лунки, его можно ресуспендировать и перенести пипеткой с использованием физиологического раствора из трубки 10-1 .
  5. Вихрь трубки 10-1 в течение 60 с с максимальной скоростью.
  6. Проводят 10-кратное последовательное разведение, перенося 1 мл в следующую стерильную пробирку (10-2), содержащую 9 мл физиологического раствора (0,85 % NaCl), до 10-7.
  7. Распределите по 100 мкл из каждого разведения на агар Acinetobacter (см. таблицу материалов) и инкубируйте агаровые планшеты при 30 °C в течение 24-42 ч.
  8. Вручную подсчитайте количество типичных красных колоний на каждой пластине в диапазоне от 10 до 250.
  9. Рассчитайте количество жизнеспособных клеток в биопленке каждой лунки, используя приведенное ниже уравнение:
    Жизнеспособные клетки = Количество колоний × Коэффициенты разведения × 10

4. Визуализация биопленки с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (КЛСМ)

  1. Добавьте 200 мкл посевного материала в каждую лунку стерильной 96-луночной планшета, предназначенной для микроскопического анализа.
  2. Инкубируйте планшет при температуре 25 °C в течение 24 ч.
  3. Удалите надосадочную жидкость с помощью пипетки.
  4. Осторожно добавьте в каждую лунку 300 мкл стерилизованной фильтром деионизированной воды и удалите надосадочную жидкость пипеткой.
  5. Повторите шаг 4.4.
  6. Приготовьте смесь SYTO 9 и йодида пропидия (см. таблицу материалов), разведенную в фильтрованной деионизированной воде до конечной концентрации 10 мкМ и 60 мкМ соответственно.
  7. Добавьте смесь в каждую лунку по 200 мкл и инкубируйте планшет в течение 20-30 минут при RT в темноте.
  8. Повторите шаги 4.3-4.4
  9. Визуализируйте биопленки, прикрепленные к нижней поверхности, с помощью CLSM с длиной волны возбуждения 488 нм и 561 нм и диапазоном длин волн излучения 499-535 нм и 568-712 нм соответственно.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

В соответствии с протоколом, биопленки изолятов Acinetobacter , первоначально выделенных с кухонных поверхностей, формировали на полистирольной 96-луночной пластине, окрашивали кристаллическим фиолетовым, а красители растворяли в этаноле и измеряли по массе биопленки (рис. 1). Количество биопленок сильно варьировало в зависимости от штаммов и составляло от 0,04 до 1,69 (рис. 1). На основании критериев, установленных Stepanović et al.16, все изоляты, за исключением A. bouvetii , образовывали биопленки. A. radioresistens образует слабую биопленку. A. junii и A. baumannii образовали умеренные биопленки, в то время как A. pittii и A . ursingii сформировали сильные биопленки.

Чтобы подсчитать жизнеспособные клетки в биопленках, биопленки соскребали с помощью клеточных скребков, вихревали с высокой скоростью, разбавляли и распределяли на селективных планшетах Acinetobacter . После инкубации подсчитывали количество колоний для оценки количества клеток биопленки (рис. 2). Все изоляты, за исключением A. bouvetii , имели в своих биопленках клетки, эквивалентные 7-8 Log КОЕ. В соответствии со свойством не образовывать биопленку, показанным при анализе кристаллического фиолетового цвета, A. bouvetii имел гораздо более низкий уровень числа клеток при 4,4 логарифмических КОЕ.

Биопленки, прикрепленные к нижней поверхности, визуализировали с помощью CLSM (рис. 3). Значительное количество биопленки было обнаружено у A. junii, A. baumannii и A. ursingii с различной морфологией биопленки. Несмотря на то, что A. pittii был сильным биопленкообразователем в кристаллическом фиолетовом анализе, он не образовывал большого количества биопленки на поверхности дна.

Figure 1
Рисунок 1: Измерение массы биопленки Acinetobacter , сформированной на 96-луночном планшете из полистирола с помощью кристаллического фиолетового анализа. Столбцы погрешности представляют собой стандартное отклонение от тройного. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.

Figure 2
Рисунок 2: Количество жизнеспособных биопленок Acinetobacter , сформированных на 12-луночном планшете из полистирола. Столбцы ошибок представляют собой стандартное отклонение от дубликата. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.

Figure 3
Рисунок 3: Прикрепленные к нижней поверхности биопленки Acinetobacter , сформированные на 96-луночной планшете, визуализированные с помощью CLSM с использованием красителей SYTO 9 и йодида пропидия. Масштабные линейки: 50 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

С помощью описанного протокола измеряли, визуализировали биопленкообразование изолятов Acinetobacter в разной степени и оценивали жизнеспособные клетки в биопленках (рис. 1, рис. 2 и рис. 3).

В этом протоколе использовались две разные температуры: 30 °C для роста и 25 °C для образования биопленки Acinetobacter. 30 °C была использована потому, что во многих исследованиях использовалась более 30 °C для оптимального роста Acinetobacter, что было бы целесообразно для получения достаточного посевного материала12,13,14,17. Однако эта температура, как правило, выше, чем температура среды, в которой может происходить образование биопленки, например, больничных поверхностей или пищевых продуктов. Поэтому для формирования биопленки использовалась температура 25 °C, которая в большей степени имитировала эти условия окружающей среды.

В этом протоколе для формирования биопленок использовался 10-кратно разбавленный BHI вместо исходного BHI (шаг 1.12). Многие поверхности, такие как больничные поверхности или пищевые предприятия, вероятно, содержат мало питательных веществ18,19. Кроме того, микроорганизмы на загрязненных поверхностях остаются на поверхностях после очистки и сохраняются в условиях с низким содержанием питательных веществ20. Таким образом, условия с низким содержанием питательных веществ, такие как 10-кратно разбавленный BHI, более желательны, чем состояния с высоким содержанием питательных веществ, такие как исходный BHI.

Анализ кристаллического фиалка является общепринятым и хорошо зарекомендовавшим себя методом измерения массы биопленки, и это исследование показало, что формуемость биопленки Acinetobacter различима на различных уровнях с помощью этого метода.

Количество жизнеспособных клеток в биопленке также важно, потому что жизнеспособные клетки в биопленках ответственны за инфекции человека, которые с большей вероятностью возникают при большем количестве клеток21. Кроме того, подсчет жизнеспособности может быть хорошим инструментом для выявления плохих продуцентов биопленки, как это было продемонстрировано на примере A. bouvetii и A. radioresistens (рис. 1 и рис. 2). Количество жизнеспособных A. radioresistens было значительно выше, чем у A. bouvetii, в то время как в массе биопленки было обнаружено небольшое различие, что свидетельствует о более высокой возможности инфицирования A. radioresistens (рис. 1 и рис. 2). Также этот метод может быть использован для оценки доли Acinetobacter в многовидовых биопленках, которая более распространена в окружающей среде.

Acinetobacter образует биопленку не только на поверхности дна, но и на боковых стенках, особенно на границе раздела воздух-жидкость в пробирках17,22. Анализ CLSM с использованием микротитровой пластины ограничен биопленками, прикрепленными к нижней поверхности, что иногда затрудняет его сравнение с результатами анализа с помощью кристаллического фиолетового анализа, который измеряет все погруженные поверхности, включая поверхности стенок. Значительное количество биопленки на границе раздела воздух-жидкость также было обнаружено в этих изолятах, особенно в сильном продуценте биопленки A. pittii. Он образовывал относительно слабую биопленку на поверхности дна по сравнению с другими изолятами (рис. 3). Поэтому необходимо дальнейшее развитие метода микроскопического анализа для визуализации биопленок, образующихся на боковой стенке.

В этом исследовании для характеристики биопленок Acinetobacter были использованы три различных анализа: кристаллический фиолетовый, количество жизнеспособных сил и CLSM. Анализ кристаллического фиалка является хорошо зарекомендовавшим себя методом количественного определения биопленок, и существуют критерии для определения формуемости биопленки16. Однако он измеряет не только живые клетки и ЭПС, но и мертвые клетки, которые менее значимы с точки зрения инфекции и вирулентности человека. Живые клетки в биопленках могут быть измерены методом подсчета жизнеспособности. Тем не менее, формуемость биопленки не может быть определена методом подсчета жизнеспособности, поскольку этот метод не измеряет EPS, критически важный компонент в структуре биопленки. Таким образом, этот метод не имеет критериев или порогового значения для определения формуемости биопленки. Кроме того, метод подсчета жизнеспособности измеряет только культивируемость клеток и не измеряет клетки в «жизнеспособном, но не культивируемом состоянии»11. Наличие биопленок может быть подтверждено методом CLSM, который эффективно визуализирует биопленки. Тем не менее, он измеряет только биопленки, прикрепленные к нижней поверхности, хотя биопленки часто образуются и на боковых стенках. Поэтому для определения формуемости биопленки рекомендуется использовать анализ кристаллического фиалка. Затем живые и культивируемые клетки в биопленках могут быть количественно определены методом подсчета жизнеспособности, а биопленки, прикрепленные к нижней поверхности, могут быть подтверждены или охарактеризованы методом CLSM.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторам нечего раскрывать.

Acknowledgments

Это исследование было поддержано Основной исследовательской программой (E0210702-03) Корейского научно-исследовательского института пищевых продуктов (KFRI), финансируемой Министерством науки и ИКТ.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
96-well cell culture plate SPL 30096 Polystyrene 96-well plate
BHI (Brain Heart Infusion) broth Merck KGaA 1.10493.0500
Blood Agar Base Plate KisanBio MB-B1005-P50 Growth media for Acinetobacter
CHROMagar Acinetobacter CHROMagar AC092 Selective plate for Acinetobacter
Crystal violet solution Sigma-Aldrich V5265
Filmtracer LIVE/DEAD biofilm viability kit Invitrogen L10316 SYTO9 and propidium iodide
Microplate reader Tecan Infinite M200 PRO NanoQuant Biofilm measurement
RBC Glass Plating Beads RBC RG001 Glass beads
μ-Plate 96 Well Black ibidi 89621 Microplate intended for CLSM

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Wong, D., et al. Clinical and pathophysiological overview of Acinetobacter infections: a century of challenges. Clinical Microbiology Reviews. 30 (1), 409-447 (2017).
  2. Carvalheira, A., Silva, J., Teixeira, P. Acinetobacter spp. in food and drinking water - A review. Food Microbiology. 95, 103675 (2021).
  3. Towner, K. J. Acinetobacter: an old friend, but a new enemy. Journal of Hospital Infection. 73 (4), 355-363 (2009).
  4. Weber, D. J., Rutala, W. A., Miller, M. B., Huslage, K., Sickbert-Bennett, E. Role of hospital surfaces in the transmission of emerging health care-associated pathogens: Norovirus, Clostridium difficile, and Acinetobacter species. American Journal of Infection Control. 38 (5), S25-S33 (2010).
  5. Flemming, H. C., et al. The biofilm matrix: multitasking in a shared space. Nature Reviews Microbiology. 21 (2), 70-86 (2023).
  6. Flemming, H. C., et al. Biofilms: an emergent form of bacterial life. Nature Reviews Microbiology. 14 (9), 563-575 (2016).
  7. Yin, W., Wang, Y., Liu, L., He, J. Biofilms: the microbial "protective clothing" in extreme environments. International Journal of Molecular Sciences. 20 (14), 3423 (2019).
  8. Gedefie, A., et al. Acinetobacter baumannii biofilm formation and its role in disease pathogenesis: a review. Infection and drug resistance. 14, 3711-3719 (2021).
  9. Whiteway, C., Breine, A., Philippe, C., Van der Henst, C. Acinetobacter baumannii. Trends in Microbiology. 30 (2), 199-200 (2022).
  10. Longo, F., Vuotto, C., Donelli, G. Biofilm formation in Acinetobacter baumannii. New Microbiologica. 37 (2), 119-127 (2014).
  11. Azeredo, J., et al. Critical review on biofilm methods. Critical Reviews in Microbiology. 43 (3), 313-351 (2017).
  12. Jia, J., Xue, X., Guan, Y., Fan, X., Wang, Z. Biofilm characteristics and transcriptomic profiling of Acinetobacter johnsonii defines signatures for planktonic and biofilm cells. Environmental Research. 213, 113714 (2022).
  13. Yang, C., Su, P., Moi, S., Chuang, L. Biofilm formation in Acinetobacter baumannii: genotype-phenotype correlation. Molecules. 24 (10), 1849 (2019).
  14. Alamri, A. M., Alsultan, A. A., Ansari, M. A., Alnimr, A. M. Biofilm-formation in clonally unrelated multidrug-resistant Acinetobacter baumannii isolates. Pathogens. 9 (8), 630 (2020).
  15. Lim, E. S., Nam, S. J., Koo, O. K., Kim, J. S. Protective role of Acinetobacter and Bacillus for Escherichia coli O157:H7 in biofilms against sodium hypochlorite and extracellular matrix-degrading enzymes. Food Microbiology. 109, 104125 (2023).
  16. Stepanović, S., Ćirković, I., Ranin, L., Svabić-Vlahović, M. Biofilm formation by Salmonella spp. and Listeria monocytogenes on plastic surface. Letters in Applied Microbiology. 38 (5), 428-432 (2004).
  17. Boone, R. L., et al. Analysis of virulence phenotypes and antibiotic resistance in clinical strains of Acinetobacter baumannii isolated in Nashville, Tennessee. BMC Microbiology. 21 (1), 21 (2021).
  18. Otter, J. A., et al. Surface-attached cells, biofilms and biocide susceptibility: implications for hospital cleaning and disinfection. Journal of Hospital Infection. 89 (1), 16-27 (2015).
  19. Ravishankar, S., Juneja, V. K. Adaptation or resistance responses of microorganisms to stresses in the food processing environment. Microbial Stress Adaptation and Food Safety. Yousef, A. E., Juneja, V. K. , (2003).
  20. Dewanti, R., Wong, A. C. L. Influence of culture conditions on biofilm formation by Escherichia coli O157:H7. International Journal of Food Microbiology. 26 (2), 147-164 (1995).
  21. McConnell, M. J., Actis, L., Pachón, J. Acinetobacter baumannii: human infections, factors contributing to pathogenesis and animal models. FEMS Microbiology Reviews. 37 (2), 130-155 (2013).
  22. McQueary, C. N., Actis, L. A. Acinetobacter baumannii biofilms: variations among strains and correlations with other cell properties. The Journal of Microbiology. 49 (2), 243-250 (2011).

Tags

Количественная оценка оценка жизнеспособности визуализация биопленки Acinetobacter внутрибольничные инфекции сухие поверхности больничная среда образование биопленки окрашивание кристаллический фиолетовый считыватель микропланшетов номера клеток скребки для клеток физиологический раствор стеклянные шарики агар Acinetobacter метод подсчета жизнеспособности красные колонии смешанные биопленки флуоресцентные красители микроскопический анализ краситель SYTO9 краситель пропидина йодида конфокальная лазерная сканирующая микроскопия
Стратегии количественной оценки, оценки жизнеспособности и визуализации биопленок <em>Acinetobacter</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Kim, J. S., Lim, J. Quantification,… More

Kim, J. S., Lim, J. Quantification, Viability Assessment, and Visualization Strategies for Acinetobacter Biofilms. J. Vis. Exp. (198), e65517, doi:10.3791/65517 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter