A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:00Title
- 00:48Introduction
- 01:28Pulse-chase Labeling and Protein Extraction
- 04:34Immunoprecipitation (IP)
- 05:38Deglycosylation and Preparing the Samples for HPLCE Analysis
- 08:05Analysis of N-glycans from NIH 3T3 Glycoproteins Representative Results
- 09:24Conclusion
Мы опишем метод анализа изменения N-связанных гликанов через ранней жизни гликопротеинов после их биосинтеза в клетках млекопитающих. Это достигается методом широтно-погони анализ метаболически помечены гликанов, ферментативные освобождения из гликопротеинов и обследование с помощью ВЭЖХ.
Tags
Pulse-chase AnalysisN-linked Sugar ChainsGlycoproteinsMammalian CellsGlc3Man9GlcNAc2 Precursor OligosaccharideER ModificationSecretory ProteinsGlycoprotein Quality ControlTrafficking SignalsProteomic AnalysisDynamics Of Sugar Chain ProcessingLabeling And Pulse-chase Analysis ProtocolsMetabolically Labeled N-linked Oligosaccharides[2-3H] Mannose LabelingDenaturing LysisEnzymatic ReleaseImmunoprecipitated ProteinGeneral Glycoprotein PoolEndo H TreatmentN-glycosidase F TreatmentMolecular FiltrationHPLC Analysis
