大人のハエからのマルピギアンチューブ解剖:浸透圧と排泄器官の分離

-解剖皿で麻酔をした大人のフライから始める。鉗子で胸郭でハエを保持し、2番目の鉗子を使って腹部の後端を開く。成虫のハエは、共通の尿管を通して腸に収束する2組のマルピギ管またはMTを持っているので、後ろの腸を引っ張ってMTを解放します。

チューブを取り付けるには、ガラス棒を尿管の下にスライドさせ、その中のMTをポリL-リジンコーティングスライドに移します。 尿管を押し下げて解剖された器官を貼り付け、MTの上にロッドを慎重に掃く。スライド上のポリL-リジンは、尿細管の負に帯電した細胞が結合するために利用可能な正に帯電した部位の数を増やすことによって愛着を促進する。

-この手順を開始するには、両手が各側に1つのクランプを持つイメージング顕微鏡ステージにクランプを助ける2組のはんだ付けを置きます。次に、それぞれの曲がったガラスの毛細血管を流入ラインと真空接続された流出ラインに挿入します。

天井テープに真空グリースを広げ、粘着灌流井戸をテープに押し込んで底部にグリースを塗ります。その後、灌流井戸の仕切りを取り除き、個々の標本井戸を疎水性グリースにたどり残します。そして、それに麻酔をした女性のハエを転送します。

鉗子のセットで胸郭でハエを保持し、他の人を使って後部腹部を優しくつかむ。ハエの後端を短く引き出し、意図的な動きを引き出す。後ろの腸が見えたら、遠位の端をつかみ、後ろの腸を体から引き離して下の気管から腸と足元を解放する。

その後、2番目のセットの中のMTが腹部から解放されたら、細かい鉗子で尿管の内部の中の多くをつまみ落とします。尿管の下にロッドを滑らせて、尿管の下にロッドを滑らせて、引っ張られたガラスの棒でフリーの前部のMTを拾い上げ、その後、溶液からまっすぐに持ち上げます。

尿管をスライドの上にまっすぐ下げ、さらにガラススライドに尿管を押し付け、その後、MTの遠位レンズの順序とシールを貼り付けます。 ガラス棒の細い端を使用して、スライド面を横切って各細管を優しくスイープします。スライドにロッドをブレースして細管を押しつぶさないようにし、棒を管状の上にスライドさせ、遠位から近位まで移動して、各管状の全長をポリLリジンコーティングされたスライドの表面に取り付けます。

- この技術の成功は、正確な識別と前マルピギアン細管の慎重な取り扱いに完全に依存します。損傷した細管は矛盾した結果を生成します。

- 次に、接着剤灌流井戸をスライドに戻して、取り付けられた細管の上に小さな流体充填井戸を形成します。