キャピラリー・フィーダー(CAFE)アッセイ:ショウジョウバエの食品消費量と嗜好を追跡する方法

- キャピラリーフィーダー、またはCAFEアッセイの準備をするには、あらかじめ組み立てられた実験バイアルの上にピペットチップを通して、色付きの液体食品で満たされたグレードまたはマークされたガラス毛細血管を挿入します。

各毛細血管の半月板の開始レベルをマークします。必要に応じて毛細血管を交換しながら、実験の間、バイアルを温度、湿度、および光制御された環境に収容します。

食の消費と嗜好を一定期間追跡するために、開始マークからその期間の終わりのレベルまでのメニスカスの降下を適格な毛細血管から記録します。

- 外側の開口部の1つを閉じているピペットチップを慎重に取り外し、充填ガラスキャピラリーを挿入し、下端を最初に挿入します。

次に、キャピラリーの端を同じレベルのバイアルの中に配置し、蓋から3〜4センチメートル離れ、フィルターペーパーの間に距離を置いてキャピラリーが漏れるのを防ぎます。

準備したCAFEアッセイをグリッド付きのインレイ付きのプラスチックボックスに入れ、スポンジバングを使用して24時間ごとに100マイクロリットルの淡水を適用してアッセイ内の湿度を一定に保ちます。

実験中にプラスチック製の箱を覆って湿度制御環境を作り出す。実験期間の温度、光、湿度制御の気候室の安全な位置にボックスを移し、各24時間間隔の前に、死んだハエをメモし、ライブハエの数を使用して次の期間のフライあたりの消費量を計算します。

アッセイの最後と毛細血管を交換する前に、CAFEアッセイを直立した位置に保ち、蓋を外してキャピラリーの下半月板に印を付けてください。

半月板の衰退を測って、古い毛細血管を捨て、その後慎重に分析から毛細血管を取り除き、データ収集のために保管します。

実験後、セットアップを解体し、石鹸浴でバイアル、蓋、スポンジバンを洗います。その後、室温で一晩乾燥させて、少なくとも3つの異なる日に同じ遺伝子型で実験を繰り返します。