Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- For å forberede kapillærmateren, eller CAFE-analysen, sett inn graderte eller merkede glasskapillærer fylt med farget, flytende mat, bunnfôr først, gjennom pipettespissene på toppen av et forhåndsmontert eksperimentelt hetteglass.
Merk startnivået til menisken i hver kapillær. Deretter huser hetteglassene i et temperatur-, fuktighets- og lyskontrollert miljø i løpet av eksperimentet mens du erstatter kapillærer etter behov. Under CAFE-analysen er mobile fluer uhemmet og har fri tilgang til den nederste åpne enden av mikropipetten. Fluer spiser frivillig når de forlenger sin proboscis og inntar væsken, og reduserer mediet inne i kapillæren.
For å spore matforbruk og preferanse for en bestemt tidsperiode, registrer nedstigningen av menisken fra startmerket til nivået på slutten av den perioden fra kvalifiserende kapillærer. I eksempelprotokollen vil vi se CAFE-analysen med forsamlingen modifisert for å oppnå redusert fordampning fra de væskefylte kapillærene.
- Fjern pipettespissen som lukker en av de ytre åpningene forsiktig, og sett inn en fylt glasskapillær, den nederste enden først. Fest kapillæren ved å plassere pipettespissen tilbake ved siden av kapillæren. Gjenta dette trinnet for alle matløsninger som er testet.
Deretter plasserer du kapillærendene inne i alle hetteglassene på samme nivå, 3 til 4 centimeter fra lokket. La det være litt avstand mellom filterpapiret for å hindre at kapillæren lekker. Bruk en markørpenn til å merke den øvre enden av den fargede væsken. Merk dem individuelt ved hjelp av en stripekode for å sikre at de forskjellige kapillærene kan identifiseres.
Plasser preparerte CAFE-analyser i en plastboks med et rutenettinnlegg. Bruk en svampslynge til å påføre 100 mikroliter ferskvann hver 24.
Dekk plastboksen for å skape et fuktighetskontrollert miljø under eksperimentet. Overfør esken til en sikker posisjon i et temperatur-, lys- og fuktighetskontrollert klimakammer for den eksperimentelle perioden. Før hvert 24-timers intervall noterer du de døde fluene, og bruker antall levende fluer til å beregne forbruket per flue for følgende periode.
På slutten av analysen og før kapillæren skiftes ut, må du oppbevare CAFE-analysen i oppreist stilling. Ikke fjern lokket, og merk den nedre kapillærens karisk. Kast dataene hvis markeringsenden ikke er under startmerket. Bytt ut de brukte kapillærene med nyfylte kapillærer for langsiktige eksperimenter hver 24.
Mål deretter nedgangen i menisken. Kast deretter de gamle kapillærene. Fjern deretter kapillærene forsiktig fra analysen, og lagre dem for datainnsamling. Kontroller om væsken inne i kapillæren nådde den nedre enden. Hvis væsken inne i kapillæren ikke nådde den nedre enden, kast dataene.
Etter eksperimentet demonterer du oppsettet og vasker hetteglassene, lokkene og svampbollene i et såpebad. Tørk dem deretter over natten ved romtemperatur for videre bruk. Gjenta eksperimenter med samme genotyper på minst tre forskjellige dager. Bruk en kaliper, mål avstanden mellom mark-beginning og mark-end på kapillæren. Til slutt, kast kapillærene etter målingen.
