Il saggio CApillary FEeder (CAFE): un metodo per tenere traccia del consumo e delle preferenze alimentari nella Drosophila

- Per prepararsi per l'alimentatore capillare, o saggio CAFE, inserire capillari di vetro graduati o marcati riempiti con cibo colorato e liquido, prima l'estremità inferiore, attraverso le punte delle pipette sopra un flaconcino sperimentale preassemblato. Assicurarsi che i capillari siano posizionati saldamente alla stessa altezza e non siano a contatto con l'apparecchio.

Contrassegnare il livello iniziale del menisco in ogni capillare. Quindi alloggiare le fiale in un ambiente a temperatura, umidità e controllo della luce per tutta la durata dell'esperimento sostituendo i capillari in base alle esigenze. Durante il test CAFE, le mosche mobili non sono sfrenate e hanno libero accesso all'estremità aperta inferiore della micropipetta. Le mosche si nutrono volontariamente mentre estendono la proboscide e assumono il liquido, riducendo il mezzo all'interno del capillare.

Per tenere traccia del consumo alimentare e delle preferenze per un determinato periodo di tempo, registrare la discesa del menisco dal punto di partenza al livello alla fine di quel periodo dai capillari qualificanti. Nel protocollo di esempio, vedremo il saggio CAFE con l'assemblaggio modificato per ottenere una riduzione dell'evaporazione dai capillari riempiti di liquido.

- Rimuovere con cura la punta della pipetta che sta chiudendo una delle aperture esterne e inserire prima un capillare di vetro riempito, estremità inferiore. Fissare il capillare posizionando la punta della pipetta accanto al capillare. Ripetere questo passaggio per tutte le soluzioni alimentari testate.

Quindi, posizionare le estremità capillari all'interno di tutte le fiale allo stesso livello, da 3 a 4 centimetri dal coperchio. Lasciare una certa distanza tra la carta filtrante per evitare che il capillare perda. Utilizzare una penna marcatore per etichettare l'estremità superiore del liquido colorato. Etichettarle singolarmente utilizzando un codice a strisce per garantire che i diversi capillari possano essere identificati.

Posizionare i test CAFE preparati in una scatola di plastica con un intarsio grigliato. Utilizzare un bung di spugna per applicare 100 microlitri di acqua dolce ogni 24 ore per mantenere costante l&osta all&;interno del saggio. Utilizzare quattro flaconcini separati riempiti con 30 millilitri di H2O a doppia distillazione come dispositivi di umidità e posizionarli accanto ai test CAFE nella scatola di plastica.

Coprire la scatola di plastica per creare un ambiente controllato dall'umidità durante l'esperimento. Trasferire la scatola in una posizione sicura in una camera climatica controllata da temperatura, luce e umidità per il periodo sperimentale. Prima di ogni intervallo di 24 ore, prendere nota delle mosche morte e utilizzare il numero di mosche vive per calcolare il consumo per volo per il periodo successivo.

Al termine del saggio e prima di sostituire il capillare, mantenere il saggio CAFE in posizione verticale. Non rimuovere il coperchio e contrassegnare il menisco inferiore del capillare. Scartare i dati se l'estremità del segno non è inferiore al segno iniziale. Sostituire i capillari usati con capillari appena riempiti per esperimenti a lungo termine ogni 24 ore.

Misurare il declino del menisco. Quindi scartare i vecchi capillari. Quindi rimuovere con cura i capillari dal saggio e conservarli per la raccolta dei dati. Verificare se il liquido all'interno del capillare ha raggiunto l'estremità inferiore. Se il liquido all'interno del capillare non ha raggiunto l'estremità inferiore, scartare i dati.

Dopo l'esperimento, smontare l'impostazione e lavare le fiale, i coperchi e i coniglietti di spugna in un bagno di sapone. Quindi asciugarli durante la notte a temperatura ambiente per un ulteriore utilizzo. Ripetere gli esperimenti con gli stessi genotipi in almeno tre giorni diversi. Utilizzando una pinza, misurare la distanza tra mark-beginning e mark-end sul capillare. Infine, scartare i capillari dopo la misurazione.