O Ensaio CApillary FEeder (CAFE): Um método para acompanhar o consumo e preferência dos alimentos em Drosophila

- Para preparar para o Alimentador Capilar, ou ensaio CAFE, insira capilares de vidro classificados ou marcados cheios de alimentos coloridos e líquidos, em primeiro lugar, através das pontas da pipeta em cima de um frasco experimental pré-remontado. Certifique-se de que os capilares estejam colocados com segurança na mesma altura e não estejam em contato com o aparelho.

Marque o nível inicial do menisco em cada capilar. Em seguida, abriga os frascos em um ambiente controlado pela temperatura, umidade e luz durante a duração do experimento, substituindo os capilares conforme necessário. Durante o ensaio do CAFE, as moscas móveis são despretidas e têm livre acesso à extremidade aberta inferior da micropipette.

Para acompanhar o consumo de alimentos e a preferência por um período de tempo definido, registo da descida do menisco da marca inicial para o nível no final desse período de capilares qualificados. No protocolo de exemplo, veremos o ensaio cafe com a montagem modificada para alcançar a evaporação reduzida dos capilares cheios de líquido.

- Retire cuidadosamente a ponta da pipeta que está fechando uma das aberturas externas e insira um vidro recheado, final de fundo primeiro. Fixar o capilar colocando a ponta da pipeta de volta ao lado do capilar. Repita este passo para todas as soluções alimentares testadas.

Em seguida, coloque as extremidades capilares dentro de todos os frascos no mesmo nível, 3 a 4 centímetros da tampa. Deixe alguma distância entre o papel do filtro para evitar que o capilar vaze. Use uma caneta marcadora para rotular a extremidade superior do líquido colorido. Rotule-as individualmente usando um código de listras para garantir que os diferentes capilares possam ser identificados.

Coloque ensaios de CAFÉ preparados em uma caixa de plástico com uma camada enslaada. Use uma esponja bung para aplicar 100 microliters de água doce a cada 24 horas para manter a umidade constante dentro do ensaio. Use quatro frascos separados cheios de 30 mililitros de H2O destilados duplos como dispositivos de umidade, e coloque-os ao lado dos ensaios do CAFE na caixa de plástico.

Cubra a caixa de plástico para criar um ambiente controlado pela umidade durante o experimento. Transfira a caixa para uma posição segura em uma câmara climática controlada por temperatura, luz e umidade para o período experimental. Antes de cada intervalo de 24 horas, anote as moscas mortas e use o número de moscas vivas para calcular o consumo por mosca para o período seguinte.

No final do ensaio e antes de substituir o capilar, mantenha o ensaio CAFE na posição vertical. Não remova a tampa e marque o menisco inferior do capilar. Descarte os dados se a extremidade da marca não estiver abaixo da marca inicial. Substitua os capilares usados por capilares recém-preenchidos para experimentos de longo prazo a cada 24 horas.

Meça o declínio do menisco. Em seguida, descarte os capilares antigos. Em seguida, remova cuidadosamente os capilares do ensaio e armazene-os para coleta de dados. Verifique se o líquido dentro do capilar atingiu a extremidade inferior. Se o líquido dentro do capilar não atingiu a extremidade inferior, descarte os dados.

Após o experimento, desmonte a configuração e lave os frascos, tampas e esponjas em um banho de sabão. Em seguida, seque-os durante a noite à temperatura ambiente para uso adicional. Repita experimentos com os mesmos genótipos em pelo menos três dias diferentes. Usando uma pinça, meça a distância entre o início da marcação e o mark-end no capilar.