Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Permitir que a Drosophila coloque ovos durante a noite em um prato contendo ágar suplementado com suco de uva para visualizar ovos e revestido com levedura para incentivar as moscas a acasalar e colocar ovos. Para remover os ovos, adicione água destilada ao prato e limpe suavemente a superfície com um pincel. Em seguida, despeje a mistura através de uma malha de nylon colocada em uma bucha de plástico para coletar os ovos. Mergulhe os ovos em duas rodadas de alvejante de 7% para remover o acorde, ou camada externa protetora, do embrião. Este processo é chamado de descorção.
Os ovos estão agora presos ao lado da bucha. Lave-os três vezes com água para remover o alvejante. Por fim, use um pincel para transferir os ovos da bucha para os frascos para continuar o desenvolvimento ou para uso imediato em um experimento. No protocolo de exemplo, coletaremos e descorionatoremos ovos de Drosophila em condições estéreis para rearjar moscas com microbiota definida.
- Coloque a malha de nylon em uma bucha de plástico para preparar a peneira para a coleta de ovos. Se as mesmas moscas serão usadas no dia seguinte, transfira-as imediatamente para uma nova gaiola contendo pratos de ágar de suco de uva recém-levemente levemente. A placa de suco de uva na gaiola anterior contém os ovos de mosca de frutas. Remova moscas mortas com uma escova de tinta limpa, e tome cuidado para não quebrar o ágar. Enxágüe a placa de ágar com água destilada e escove suavemente os ovos da superfície do ágar e despeje o chorume sobre a malha para coletar os ovos.
Esterilize o armário de biossegurança com 70% de etanol e depois ligue a luz UV. Pulsame todos os suprimentos não biológicos com 70% de etanol e coloque-os imediatamente no armário de biossegurança, em seguida, esterilize-os com luz UV.
- É fundamental garantir que uma boa técnica asséptica seja praticada ao trabalhar dentro ou ao adicionar ou remover novos materiais ao armário de biossegurança.
- Transfira a bucha com os ovos em um copo de espécime de 120 mililitros e despeje lentamente 90 mililitros de solução de hipoclorito de sódio de 0,6%, ou 7% de alvejante, para a bucha, logo abaixo da borda. Usando fórceps, mova periodicamente a bucha para cima e para baixo na solução para resuspensar os ovos. Transfira a bucha diretamente para um segundo copo de espécime pré-preenchido com 90 mililitros de alvejante.
Ao final do segundo tratamento alvejante, os ovos devem começar a aderir aos lados da bucha. Descarte a alvejante e enxágue completamente a bucha com água estéril. Novamente, use fórceps para resuspensar o ovo várias vezes durante cada lavagem. No final da terceira lavagem, a maioria dos ovos deve ser anexada ao lado da bucha.
Usando um pincel estéril, transfira os ovos do lado da bucha para a dieta estéril. Deixe as tampas soltas para permitir a entrada de oxigênio no tubo.
