C. elegans喂养的 RNAI 电镀：一种在大肠杆菌中诱导靶 dsRNA 表达的技术

-在 C. elegans 中，RNAi 可以通过喂养蠕虫细菌来诱导，这些细菌从重组的DNA质粒中表达双链RNA 或 dsRNA。

首先，在含有四环素和氨基青霉素的选择性LB agar板上生长四环素耐药性HT115大肠杆菌，或其功能模拟苯丙林。 除了目标DNA，质粒还含有抗氨基林的基因。 只有继承质粒的细菌菌落才能在这些抗生素的存在下生长。

接下来，收获细菌菌落，并将它们以液体LB介质扩展到所需的浓度。为了诱导dsRNA表达，将细菌溶液转移到准备好的线虫生长介质（NGM）上，即含有IPTG的阿加板块。

在这个表达系统中，IPTG模仿乳糖来激活乳糖抑制剂，从而产生T7RNA聚合酶的表达。在质粒上，目标DNA表达由两个收敛的T7促进者调节。因此，感官和抗感序列被转录，导致dsRNA的表达。

最后，蠕虫使用从摄入的dsRNA到具有互补序列的内源性mRNA的序列信息。在这个实验中，我们将用转基因大肠杆菌准备RNAi板，供C.elegans喂养。

- 对于 RNAi 板，用含有IPTG和卡苯丙林的NGM agar 装载6 厘米板。在黑暗中的室温下，让它们干燥 24 到 48 小时。然后，将它们转移到 4 摄氏度，长达 14 天。

接下来，含有苯甲酸素和四环素的条纹选择性板与RNAi细菌克隆与L4440质粒携带林-53基因。 使用三相条纹模式，并确保板一个空向量控制。 然后，在37摄氏度的温度下连夜生长板。

第二天，挑选至少三个单一的菌落，并给每个殖民地接种一个单独的文化管，用2毫升的LB补充卡本西林，但不是四环素。计划每个条件有三种健康的培养物。

其次，在37摄氏度的温度下一夜之间培养，直到它们达到0.6到0.8的600纳米的光学密度。然后，在6厘米的NGM agar RNAi板中加入每个细菌培养物的500微升。在黑暗中的室温下连夜孵化板。