Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Et fireveis olfactometer er et lukket kammer med enveisporter i hvert hjørne, der det kan levere opptil fire lukt, og skape kvadranter med tydelige luktprofiler. Begynn et eksperiment ved å overføre våkne fluer inn i kammeret. Unngå anestesi, da dette kan påvirke deres oppførsel under eksperimentet.
Utsett fluene for å rense luft og observere bevegelsene deres for å sikre at ingen luktstoffer forurenser olfactometeret og påvirker flyadferd. Deretter forbereder du testluktantene i separate hetteglass og kobler dem til hovedkammeret gjennom enveisportene. Utsett fluene til luktstoffene i en forhåndsdefinert periode, fjern stimulansen etter at rettssaken er avsluttet.
Fluer har en tendens til å unngå kvadranter med avstøtende lukt mens de beveger seg mot og bosetter seg i kvadranter med attraktive lukt.
I følgende protokoll vil vi bruke et fire-kvadrant olfactometer med et luftleveringssystem for å analysere flyadferd som svar på etylprofionat, et avstøtende luktstoff og eplecidereddik, noe som er attraktivt.
- Slå på temperaturregulatoren minst fem minutter i forveien og sett den på 25 grader Celsius. Koble deretter luktkamrene til arenaen via et plastrør. Kontroller luftstrømmen i hver kvadrant på arenaen ved hjelp av en elektronisk strømningsmåler. Kontroller at både kontrollen og lukten og luftstrømmene går på 100 milliliter per minutt.
- Fluer er svært følsomme for luftstrøm, og det er kritisk at luftstrømmen for hver kvadrant verifiseres før hvert eksperiment.
- Rengjør nå arenaen og glassplatene med 70% etanol. Tørk alle delene ned to til tre ganger og la dem lufttørke før du fortsetter. Deretter klemmer du glassplatene til arenaen. Deretter overfører du fluene til arenaen uten anestesi. Bruk tyngdekraften, la dem komme inn gjennom hullet i en av glassplatene, og dekk deretter hullet med et sirkulært nett.
Plasser nå den fluebelastede arenaen inn i det lyse tette kammeret. Koble deretter de fire kontrollluftstrømmene til hvert arenahjørne. Lukk døren til kammeret og la fluene akklimatisere seg til det nye miljøet i 10 til 15 minutter.
Etter akklimatiseringsperioden, kjør et 5 til 10 minutters kontrolleksperiment der fluer blir utsatt for fire kontrollluftstrømmer. Det er viktig å analysere dataene umiddelbart. Hvis fluene ikke er jevnt fordelt i arenaen, må arenaen tilbakestilles.
- Det er viktig å teste oppførselen til kontrollfluer til bare ren luft. Dette vil raskt bekrefte at alle bakgrunnsforhold er normale. Lekkende lys, temperaturubalanse, vippet arena eller luktforurensning kan alle forårsake problemer.
- Kast om nødvendig fluene og rengjør arenaen igjen. Hvis det mistenkes luktforurensning, må du skifte ut alle slangene. Fortsett å gjenta kontrolltesten med nye kohorter til dyrene ikke viser noen preferanse for noen av de fire kvadrantene. Deretter kobler du testluktantkammeret til oppsettet ved hjelp av en treveisventil, eller kobler til slangen på nytt og kjører et testeksperiment i 5 til 10 minutter. For lengre eksperimentelle opptak, stopp raskt og start sporingsprogrammet på nytt hvert 20.
Mellom tester, kast fluene, rengjør arenaen og glassplatene med 70% etanol, og skift ut koblingsrørene. Hold tørr luftstrømmen i gang for kontinuerlig å skylle systemet. For effektivitet er det godt å ha to arenaer slik at rengjøring kan gjøres under løp.
- Hvis flere eksperimenter kjøres på samme dag, må du være svært forsiktig for å sikre at det ikke blir lukt igjen i systemet fra et tidligere løp. Dette er normalt ikke et problem med lave konsentrasjoner av luktstoff eller med CO2. Men for svært konsentrerte stimuli kan det være nødvendig med opptil 24-timers mellomrom mellom eksperimentløp.
